Qo'rquvni buzish uchun rekonsolidatsiya paytida Hipokampal vositachiligidagi xotiralarni qayta faollashtirish 2-qism

Keyinchalik, biz manipulyatsiyamizning uzoq muddatli ta'sirini baholadik. Yuqoridagi topilmalar shunga o'xshash eksperimental dizayn bilan takrorlandi.

Aytish mumkinki, uzoq muddatli effektlar va xotira o'rtasida kuchli bog'liqlik mavjud. Bir tomondan, uzoq muddatli ta'sirlar xotiraga chuqur ta'sir ko'rsatishi mumkin, boshqa tomondan, xotira bizning uzoq muddatli ta'sirimizga ta'sir qilishi mumkin.

Avvalo, xotiraga uzoq muddatli ta'sir asosan ikki jihatdan namoyon bo'ladi: biri odamlarning fiziologik funktsiyalariga ta'siri, ikkinchisi esa odamlarning psixologik holatiga ta'siri.

Uzoq muddatli ta'sirlar bizning fiziologiyamizga ta'sir qilishi mumkin, masalan, parhez, uyqu va jismoniy mashqlar kabi. Agar biz uzoq vaqt davomida nosog'lom muhitda yashasak, masalan, muvozanatsiz ovqatlanish, yomon uyqu sifati, uzoq vaqt davomida jismoniy mashqlar etishmasligi va hokazo, bu uzoq muddatli salbiy ta'sirlar tanamizda ma'lum bir xotirani qoldiradi va shu bilan miyamizga ta'sir qiladi. faoliyat va xotira.

Shu bilan birga, uzoq muddatli ta'sirlar bizning ruhiy holatimizga ham ta'sir qiladi, masalan, xotiramizga zarar etkazadigan haddan tashqari kuchlanish, tashvish va stress.

Xotiraning uzoq muddatli ta'siri ham juda muhimdir. Yaxshi xotira bizga ko'proq ravshanlik, mustaqillik va ishonch bag'ishlaydi, o'z hayotimiz va uzoq muddatli oqibatlar ustidan ko'proq nazorat qilish imkonini beradi. Bu bizga holatimizni yaxshiroq moslashtirishga yordam beradi, shu bilan stress, tashvish va boshqa salbiy omillarni kamaytiradi, umidsizlikka qarshi turish qobiliyatimizni yaxshilaydi va moslashish qobiliyatimizni oshiradi.

Shuning uchun biz kundalik hayotimizda uzoq muddatli ta'sirlarning bizga ta'siriga e'tibor qaratishimiz, salomatlik va yaxshi ruhiy holatga e'tibor berishimiz va sog'lom turmush tarzi va yaxshi moslashuvchanlikni rivojlantirishimiz, xotiramizni to'liq o'ynashimiz va bu bilan yaxshiroq kurashishimiz kerak. uzoq muddatli ta'sir, O'zining sezilarli o'sishiga erishing. Ko'rinib turibdiki, biz xotirani yaxshilashimiz kerak va Cistanche deserticola xotirani sezilarli darajada yaxshilashi mumkin, chunki Cistanche deserticola neyrotransmitterlar muvozanatini ham tartibga solishi mumkin, masalan, atsetilxolin va o'sish omillari darajasini oshirish. Ushbu moddalar xotira va o'rganish uchun juda muhimdir. Bundan tashqari, Cistanche deserticola qon oqimini yaxshilaydi va kislorod yetkazib berishni rag'batlantiradi, bu esa miyaning etarli miqdorda ozuqa va energiya olishini ta'minlaydi va shu bilan miya hayotiyligi va chidamliligini oshiradi.

Miya faoliyatini yaxshilash yo'llarini bilish tugmasini bosing

Biroq, sichqonlarga zudlik bilan zarbadan keyin qayta tiklash testini o'tkazish o'rniga, biz sichqonlarni yo'q bo'lib ketganidan keyin 2 hafta davomida ularning uy qafasida qoldirdik va keyin ularga o'z-o'zidan tiklanish qo'rquvi uchun sinov berdik (1n-rasm).

Yigirma to'rt soat qo'rquv-konditsioner so'ng (Fig.1o), eslash davomida, ham ijobiy, ham neytral-ChR2 guruhlari eYFP nazorat (Fig. 1p) nisbatan sessiyaning oxirgi yarmida kamroq muzlatib. Yo'q bo'lib ketish paytida biz hech qanday guruh farqlarini ko'rmadik (1q-rasm va qo'shimcha 1c-rasm).

Eslab qolish paytida kuzatilgan ta'sirlarga mos ravishda, o'z-o'zidan tiklanish testi ijobiy va neytral ChR2 sichqonlari eYFP nazorati bilan solishtirganda va salbiy Chr2 guruhiga nisbatan kamroq muzlatilganligini ko'rsatdi, bu bizning manipulyatsiyamiz yo'q bo'lib ketganidan ikki hafta o'tgach aniq bo'lgan qo'rquv xotirasini tiklash jarayonlariga barqaror ta'sir ko'rsatganligini ko'rsatdi (1-rasm). 1r, s).

Muhimi, biz musbat xotirani rag'batlantirish va belgilashdan keyin kuzatilgan muzlashning pasayishini faqat virusli in'ektsiya yoki yorug'lik stimulyatsiyasi bilan bog'lash mumkin emasligini ko'rsatdik. Xususan, biz sichqonlarda FC holatida bo‘lganidan so‘ng, musbat xotira (ayol ta’siri) qayta faollashishini aniqladik (qo‘shimcha 3b, c), lazer stimulyatsiyasini olgan faqat ChR2 sichqonlari kamroq muzlashiga olib keldi. .

Bu stimulyatsiya olmagan ChR2 sichqonlari, stimulyatsiya olgan eYFP sichqonlari va virussiz/lazersiz guruhi bilan solishtirganda edi. Bu eslab qolish paytida (qo'shimcha 3d-rasm), yo'q bo'lib ketishning birinchi kunida va yo'q bo'lib ketishning dastlabki 3 daqiqasida (qo'shimcha rasm 3e, f) to'g'ri edi. Kutilganidek, biz zudlik bilan zarba paytida hech qanday guruh farqlarini ko'rmadik (Qo'shimcha rasm 3g), lekin qayta tiklash paytida boshqa barcha guruhlarga nisbatan ChR2-Laser On guruhida muzlash sezilarli darajada pasayganini ko'rdik (Qo'shimcha rasm. 3h, I).

Bundan tashqari, bu ta'sir faqat sichqonlar FC kontekstida yorliqli xotiraning sun'iy qayta faollashuvini olganida paydo bo'ldi (Qo'shimcha rasm 4a). Keyinchalik, biz ijobiy xotirani (ayollarga ta'sir qilish) va keyin shokdan keyingi muzlashni ko'rsatgan FC sichqonchasini belgiladik (Qo'shimcha rasm. 4b).

Ushbu xotira yangi kontekstda qayta faollashtirilganda va sichqonlar 24 soatdan keyin konditsioner kontekstga qaytarilganda, eslab qolish paytida ChR2 guruhida muzlash kamaymadi (Qo'shimcha rasm. 4c).

Muzlatish yo'q bo'lib ketish va qayta tiklash davomida eYFP boshqaruviga o'xshash bo'lib qoldi (Qo'shimcha rasm 4d, e). Ushbu topilmalar bizning manipulyatsiyamiz rekonsolidatsiya orqali sodir bo'lishini tasdiqlaydi, chunki bu sichqonlar qo'rquv xotirasini tabiiy ravishda eslab qolishga xosdir, bu holda konditsionerlik kontekstiga ta'sir qilish natijasida paydo bo'ladi.

Valentlik masalalari: Qayta konsolidatsiya paytida neytral uy qafasini sun'iy ravishda qayta faollashtirish qo'rqinchli xotirani buzish uchun etarli emas.

Yuqoridagi natijalar shuni ko'rsatadiki, ijobiy yoki neytral engramlarning qayta faollashishi natijasida yuzaga keladigan hipokampal shovqin salbiy tajriba bilan bog'liq bo'lgan engramlarga qaraganda shartli qo'rquvni kamaytirishda samaraliroqdir.

Valentlikning ahamiyatini yanada chuqurroq aniqlash uchun, avvalo, biz toza qafasning yangi tajribasi haqiqatan ham ijobiy yoki salbiy emas, balki "neytral"mi yoki yo'qligini sinab ko'rdik, chunki yangi stimullar murakkab yondashuvni o'z ichiga olishi va yorqinlik, mukofot va neofobiya bilan bog'liq dopaminerjik yo'llardan qochishi mumkin48 -52. Shuning uchun, keyingi tajribaning neytral komponenti uchun biz sichqonlar buzilmagan holda qoldirilgan uy qafasi38 tajribasidan foydalandik.

Ikkinchidan, biz ayol ta'sirini o'z ichiga olmaydigan alohida ijobiy tajriba qo'rquvni kamaytirish uchun etarlimi yoki yo'qligini so'radik. Shunday qilib, biz keyingi ijobiy tajribamiz sifatida akutkokain ta'siridan53 foydalandik. Va nihoyat, qo'rquv xotirasini eslab qolish paytida negativ grammni qo'zg'atish orqali muzlashni kamaytirishning iloji yo'qligi bu xotiralarning bir-biriga o'xshashligi natijasidir.

Buni sinab ko'rish uchun biz sichqonlar C kontekstidaFC bo'lganida faol bo'lgan dDG hujayralarini navbatdagi salbiy tajribamiz sifatida belgiladik, chunki bu interferingengram nazariy jihatdan umumlashtirish tufayli A kontekstida olingan qo'rquv xotirasi bilan bir xil hujayralardan iborat bo'ladi. Ushbu savollarni hal qilish uchun biz yana DOX yorlig'i oynasini ochdi va dDGda ijobiy, neytral yoki salbiy xotirani belgiladi (2a-rasm).

Salbiy guruhlarga tayinlangan sichqonlar dastlab FC kontekstida C bo'lib, zarbadan keyingi sezilarli muzlashni ko'rsatdi (2b-rasm). Keyingi kun ular kontekstda avvalgidek FC edi A. Sichqoncha FC avvalgi kun shokdan oldingi va keyingi boshqa guruhlarga qaraganda yuqori muzlash ko'rsatdi (2c-rasm). Eslab qolish vaqtida manfiy ChR2 sichqonlari seans davomida kuzatilgan boshqa ChR2 guruhlariga nisbatan ko'proq muzlashda davom etdi (2d-rasm).

Biroq, ChR{1}}guruhlarining hech birida eslab qolish sessiyasining biron bir qismidagi eYFPcounterparts bilan solishtirganda, real vaqt rejimida muzlatishning pasayishi kuzatilmadi (2d-rasm). Yo'q bo'lib ketish (2e-rasm va 1d-rasm) yoki darhol zarba paytida hech qanday guruh farqlari kuzatilmadi (2f-rasm).

Uy kafesi xotirasini optik stimulyatsiya qilish qo'rquv xotirasi bilan raqobatlash uchun etarli emas edi, chunki qayta tiklash paytida biz faqat ijobiy ChR2 sichqonlari eYFP nazorati va salbiy guruhlarga nisbatan kamroq muzlashini ko'rsatdik (2g-rasm). Salbiy-ChR2 sichqonlari nazorat qilish uchun teng muzlashni ko'rsatdi (2g, h-rasm).

Ushbu natijalar bizning oldingi topilmalarimizni tasdiqlaydi, bu qo'rquvni qayta tiklashni buzish uchun neytral yoki salbiy xotira emas, balki raqobatdosh ijobiy xotiraning optik stimulyatsiyasi etarli ekanligini ko'rsatadi.

Kuzatilgan muzlashning kamayishi inlokatsiyaning kuchayishi bilan bog'liq emas

Sichqonlarning alohida kohortida akutkokain ta'sirini kodlashda ishtirok etgan dDG hujayralari DOX dan belgilandi (2i-rasm). Ertasi kuni kokain engramining faollashuvi giper lokomotor faollikni keltirib chiqaradimi yoki yo'qligini baholash uchun biz sichqonlarni ochiq maydonda sinab ko'rdik, u erda biz 10 daqiqalik testning oxirgi 5 daqiqasida kokain engramini qayta faollashtirdik.

Biz chiziqni kesib o'tishning umumiy soni (2-rasm), bosib o'tgan masofa (2k-rasm) yoki tezlik (2l-rasm) bo'yicha hech qanday guruh farqlarini topmadik, bu avvalgi tajribada kuzatilgan muzlashning pasayishi harakatning kuchayishi bilan bog'liq emas.

Bundan tashqari, markaziy mintaqada o'tkazgan vaqt noguruh farqlarini aniqladi (2m-rasm) akokain bilan bog'liq xotiraning sun'iy faollashuvi anksiyojenik ham, anksiyolitik ham emasligini ko'rsatadi.

Sichqonlar ijobiy xotirani sun'iy ravishda qayta faollashtirish uchun operant javob beradi

Gippokamp ijobiy tajribalarni qayta ishlashga jalb qilingan bo'lsa-da, buni inneyromodulyatsiya bilan bog'liq bo'lgan bir nechta mintaqalar, shu jumladan ventral tegmental soha (VTA) bilan birgalikda amalga oshirishi mumkin.

VTA miyaning mukofot tizimining muhim tarkibiy qismidir va salbiy ta'sirchan holatlar (masalan, tashvish) VTA disregulyatsiyasi bilan bog'liq. VTA ning intrakranial o'z-o'zini stimulyatsiyasi (ICSS) kemiruvchilar elektr impulslarini etkazib berishni davom ettiradigan, dopaminning ajralishiga olib keladigan 54,55 ta'sirli operant xatti-harakati ekanligi aniqlangan.

Ushbu protsedura avval VTAdagi dopaminerjik neyronlarning vivooptogenetik stimulyatsiyasini kiritish uchun moslashtirilgan56-61. Ushbu ijobiy tajriba davomida faol bo'lgan dDG hujayralarini belgilash va qayta faollashtirish uchun biz ChR2 ni dopamin tashuvchisi (DAT) nazorati ostida transgenik sichqonlardan foydalangan holda dopaminerjik VTA hujayralarida ifodaladik.

Biz AAV5-Ef1a-DIO-(hChR2-E123A)-eYFP virusli vektorlarimizni AOK qildik va VTAga bir tomonlama optik tolani joylashtirdik. Shuningdek, biz c-Fos-tTA-TRE-(ChR2)-eYFP ni in'ektsiya qildik va dDGga ikki tomonlama optik tolalarni joylashtirdik (3a-rasm). Sichqonlar dastlab operatsiya xonasiga o'rganib qolgan va g'ildirakka hech qanday oqibatlarsiz kirish huquqi berilgan, bu asosiy o'lchov bo'lib xizmat qilgan.

Ertasi kuni sichqonlar operant qutisiga qaytarildi va ikkita burun porti kiritildi, biri faol va biri nofaol. Burunning faol portga teshigi optogenetik VTA stimulyatsiyasini hosil qiladi, nofaol portga burun teshilishi esa hech qanday stimulyatsiya yaratmaydi va diskriminativ nazorat sifatida xizmat qiladi. Sichqonlarga uchta ICSS mashg'uloti berildi va keyin DOXdan olib tashlandi.

Ular to'rtinchi mashg'ulotga olib kelindi, unda VTA o'z-o'zini stimulyatsiyasiga javob beradigan dDG hujayralari belgilandi. Ertasi kuni burun portlariga kirish cheklandi va g'ildirak aylanishlari VTA o'z-o'zini stimulyatsiya qilish engrammasini qayta faollashtirish uchun optik dDG stimulyatsiyasini ishlab chiqardi. Bu sichqonlar ijobiy (VTA-ChR2, dDG-ChR2) uchun operant javob berishini baholash uchun qilingan. yoki dDG-eYFP boshqaruvlari bilan solishtirganda neytral (VTA-eYFP, dDG-ChR2) tajribasi (3a-rasm).

VTA ga ChR2 yuborilgan sichqonlar, faol portga burun teshilishlari faol bo'lmagan portga qaraganda ancha yuqori edi va ular sichqonlarning portlar o'rtasida farqlash va mukofot uchun optik stimulyatsiyani o'z-o'zidan etkazib berish qobiliyatini ko'rsatuvchi seanslar bo'ylab ko'paydi (3b-e-rasm). G'ildirakning asosiy o'lchovlarini o'qitish va sinov bilan solishtirganda, VTA va dDG ga ChR2 AOK qilingan sichqonlar ko'proq g'ildirak aylanishlarini yakunladilar, ular uzoqroq vaqt va masofalar uchun harakatda saqlangan (3f-h-rasm) va ko'proq stimulyatsiyalar hosil qilgan (3i-rasm) boshqa barcha guruhlar.

Ushbu topilma shuni ko'rsatadiki, sichqonlar ijobiy xotiraning sun'iy qayta faollashuvini, xususan VTA o'z-o'zini stimulyatsiyasi xotirasini saqlab qolish uchun operant javob beradi. Sichqonlar bu xatti-harakatni VTA stimulyatsiyasi bo'lmagan holda operant qutisi ta'sirini xotirasi uchun ko'rsatmadi. Ushbu sinovdan so'ng, sichqonlar xuddi shu tajriba protokolidan o'tdilar, ular kontekstda FC bo'lgan joyda ular zarbadan keyingi muzlashni ko'rsatdilar (3j-rasm va qo'shimcha 1e-rasm) va keyin qo'rquv xotirasini eslab qolish testi berildi.

Qayta chaqirish paytida VTA o'z-o'zini stimulyatsiya qilish dasturini (VCDC) qayta faollashtirish butun sessiya davomida muzlash darajasini pasaytiradi (3k-rasm). Yo'q bo'lib ketish (3l-rasm va qo'shimcha 1e-rasm), darhol zarba (3m-rasm) va qayta tiklash (3n-rasm) davomida darajalar pastligicha qoldi.

Qizig'i shundaki, ikki dDG-eYFP guruhlari o'rtasida, avvalroq VTA stimulyatsiyasini olgan guruh (VCDE) VCDC guruhi va EXT1dagi boshqa nazorat guruhlari bilan solishtirganda o'rta darajadagi muzlash darajasini ko'rsatadigan ushbu tajribaning foydali ta'sirini ko'rsatdi (3l-rasm). zudlik bilan zarbani qayta tiklash (3o-rasm). Birgalikda, bu natijalar foydali tajribaning aralashuvi salbiy ta'sirchan holatlarga qarshi turishi mumkinligini ko'rsatadi.

Tasodifiy belgilangan dDG neyronlarining faollashishi qo'rquvni qayta tiklash uchun etarli.

Keyinchalik, biz neyronlarning kichik to'plamini rag'batlantirishni o'z ichiga olgan ijobiy xotirani sun'iy qayta faollashtirish yoki yo'qligini so'radik (<10%)38, can update a fear memory during reconsolidation, could we circumvent the positive-valence prerequisite to achieve a similar effect if we activate a larger population of neurons not necessarily tied to memory? 

Oldingi tajribalardan farqli o'laroq, biz turli tajribalarda ishtirok etgan hujayralarni belgilash uchun cFos-inducible tagging strategiyasidan foydalanganmiz, bu erda biz dDGneyronlarni ChR2 bilan tasodifiy belgilash uchun konstitutsiyaviy promouter (CaMKIIa) bilan avirusdan foydalandik (4a-rasm).

Sichqonlarga mos ravishda dDG hujayralarining katta foizini yoki qismini belgilash uchun suyultirilmagan suyultirilgan virus yuborildi. Sichqonlar FC bo'lganidan keyin zarbadan keyingi muzlashni ko'rsatdi (4b-rasm va qo'shimcha 1f-rasm).

Ertasi kuni eslab qolish vaqtida etiketlangan neyronlar optik stimulyatsiya qilindi. Tezisning birinchi yarmida biz suyultirilmagan va suyultirilgan ChR2 guruhlarida real vaqt rejimida muzlashning pasayishini ko'rdik, ammo ikkinchi yarmida faqat suyultirilmagan guruhlar kamroq muzlashdi (4c-rasm).

Suyultirilmagan ChR2 guruhi yo'q bo'lib ketish davrida kamroq muzlashni davom ettirdi (EXT1 va EXT2) (4d-rasm) va suyultirilmagan va suyultirilgan ChR2 guruhlari EXT1 ning dastlabki 3 daqiqasida eYFP guruhlariga qaraganda kamroq muzlashdi (Qo'shimcha 1f-rasm).

Kutilmaganda, darhol zarba paytida hech qanday guruh farqlari yo'q edi (4e-rasm). Qayta tiklashda biz suyultirilgan va suyultirilgan ChR2 guruhlarida eYFP nazorati (4f-rasm) va darhol zarba bilan solishtirganda (4g-rasm) muzlashning kamayganini kuzatdik.

Bizning ta'sirlarimiz suyultirilmagan guruhda kuchliroq bo'lib, agar etarli hujayralar faollashtirilgan bo'lsa, ma'lum bir valentlik engrammasiga ulanmagan ansambllarni faollashtirish orqali rekonsolidatsiyaga asoslangan jarayonlarni potentsial ravishda jalb qilish mumkin. Ushbu xotira modulyatsiyasi strategiyasi hozirda odamlarda foydalanish uchun tasdiqlangan stimulyatsiya protokollariga o'xshash bo'lishi mumkin62,63.

For more information:1950477648nn@gmail.com