Abstrakt

Depressiya butun dunyoda juda keng tarqalgan va nogironlikka olib keladigan psixiatrik kasallikdir. O'sib borayotgan dalillar shuni ko'rsatadiki, hipokampus ichidagi haddan tashqari neyroinflamatuar faollashuv depressiya belgilarining boshlanishi va rivojlanishiga sezilarli darajada yordam beradi. Cistanche feniletanol glikozidlari (CPhGs), an'anaviy qutulish mumkin bo'lgan dorivor o'tlardan olingan asosiy bioaktiv tarkibiy qismlarCistanche deserticolavaCistanche tubulosa, oldingi tadqiqotlarda bir nechta neyroprotektiv farmakologik xususiyatlarni ko'rsatdi. Ushbu tadqiqot C57BL / 6 sichqonlarida surunkali oldindan aytib bo'lmaydigan engil stress (CUMS) tomonidan qo'zg'atilgan depressiyaga o'xshash xulq-atvor fenotiplariga CPhGlarning terapevtik ta'siri va molekulyar mexanizmlarini o'rganishga qaratilgan.

Oltmishta SPF darajasidagi C57BL/6 sichqonlari tasodifiy oltita eksperimental kogortaga ajratildi: nazorat guruhi, CUMS-model guruhi, yuqori dozali CPhGs guruhi (700 mg/kg), o‘rta dozali CPhGs guruhi (350 mg/kg), past dozali CPhGs guruhi (kontrol musbat CPhGs guruhi) va flux-5 mg/kg guruhi), (15 mg/kg). CUMS modellashtirishdan so'ng to'rt haftalik dori vositasi aralashuvidan so'ng, saxarozani afzal ko'rish testi (SPT), ochiq maydon testi (OFT), quyruqni to'xtatib turish testi (TST) va majburiy suzish testi (FST) kabi keng qamrovli neyroxulq-atvor baholashlari amalga oshirildi. Ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA) to'plamlari hipokampal yallig'lanishga qarshi sitokinlar va yallig'lanish mediatorlari bilan bir qatorda sarum monoamin neyrotransmitterlarining miqdorini aniqladi. Gematoksilin-eozin (HE) bo'yalishi va Nissl bo'yalishi hipokampal tishli girus mintaqalari ichidagi neyronal patologik shikastlanishlarni ko'rsatdi. Immunogistokimyo glial fibrilyar kislotali oqsil (GFAP), ionlashtirilgan kaltsiyni bog'lovchi adapter molekulasi-1 (Iba-1), NLRP3 va kaspaz-1 oqsillarining ifoda intensivligini aniqladi. Immunofluoresans bilan bo'yash yuqori oqim TLR4/NF‑kB signalizatsiya kaskadining faollashuv holatini qo'shimcha baholadi.

Bizning eksperimental natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, CPhGlarni og'iz orqali yuborish depressiya bilan bog'liq xatti-harakatlarning anormalliklarini sezilarli darajada yumshatgan. CPhGs saxaroza afzal ko'rish foizini oshirdi va umidsizlikka asoslangan xulq-atvor paradigmalarida harakatsizlik davomiyligini qisqartirdi. Bundan tashqari, CPhGs bilan davolash yo'qolgan sarum va hipokampal serotonin (5-HT), shuningdek dopamin (DA) darajasini tikladi. Biokimyoviy aniqlash hipokampal yallig'lanishga qarshi vositachilarning sezilarli darajada bostirilishini va sitokinning ortiqcha ishlab chiqarilishini aniqladi. Gistopatologik kuzatuvlar CUMS tomonidan qo'zg'atilgan hipokampal neyron shikastlanishining dozaga bog'liqligini ko'rsatdi. Immunogistokimyoviy natijalar shuni ko'rsatdiki, CPhGs GFAP tomonidan belgilangan astrositlar zichligini oshirdi, Iba-1-musbat mikrogliyaning patologik giper-aktivlashuvini inhibe qildi va NLRP3 yallig'lanishi bilan bog'liq protein ko'pligini pastga boshqaradi. Immunofloresan tahlillari CPhGlarning hipokampal to'qimalarda ortiqcha TLR4 va fosforlangan NF‑kB p65 faollashuvini cheklab qo'yganligini tasdiqladi.

Birgalikda, ushbu topilmalar CPhG'larning sichqonlarda CUMS tomonidan qo'zg'atilgan depressiyaga o'xshash ko'rinishlarga qarshi sezilarli antidepressantga o'xshash samaradorligini tasdiqlaydi. Uning farmakologik mexanizmi qisman ikki tomonlama tartibga solish funktsiyalari orqali amalga oshiriladi: monoamin neyrotransmitter gomeostazini tiklash va TLR4/NF‑kB/NLRP3 signalizatsiya o'qi vositachiligida neyroinflamatuar javoblarni cheklash. Hayvonlarning ushbu tadqiqoti depressiyaga yordam beruvchi aralashuv uchun istiqbolli tabiiy nomzod agentlar yoki funktsional oziq-ovqat tarkibiy qismlari sifatida CPhGlarning keyingi ekspluatatsiyasini qo'llab-quvvatlaydigan klinikgacha eksperimental asosni taqdim etadi.

Kalit so'zlar: Cistanche feniletanol glikozidlari (CPhGs); depressiya; surunkali oldindan aytib bo'lmaydigan engil stress; neyro-yallig'lanish; astrositlar; mikrogliya; TLR4/NF‑kB/NLRP3 yallig'lanish yo'li

1. Kirish

Depressiya ko'p qirrali affektiv psixiatrik kasallik bo'lib, uning asosiy klinik ko'rinishlari doimiy past kayfiyat, angedoniya, psixomotor sekinlashuv, uyqudan uyg'onishning buzilishi va somatik disfunktsiyani o'z ichiga oladi. Og'ir depressiv epizodlar potentsial o'z joniga qasd qilish va o'z joniga qasd qilish g'oyalariga olib keladi va butun dunyo bo'ylab sog'liqni saqlash uchun katta yuklarni keltirib chiqaradi. Xitoydan olingan epidemiologik so'rov ma'lumotlariga ko'ra, milliy depressiyaning tarqalishi 2,1% ga etgan va Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti asosiy depressiv buzuqlikni global nogironlikka moslashtirilgan hayot yillari yo'qotilishiga olib keladigan yuqori darajadagi kasalliklar qatoriga kiritdi.

Shunga qaramay, depressiya patogenezi ostida yotgan to'liq molekulyar etiologiya to'liq tushunilmagan bo'lib, mukammal klinik terapevtik echimlarga to'sqinlik qiladi. Zamonaviy patofizyologik farazlar diqqatni neyro-immun o'zaro bog'lanish mexanizmlariga qaratdi. Klinikadan oldingi va klinik tadqiqotlarni to'plash doimiy neyroinflamatsiyani depressiv kasalliklar uchun muhim patogen omil sifatida ta'kidlaydi. Surunkali psixologik yoki fiziologik stress muammolari ostida hipokampal glial hujayra populyatsiyalari g'ayritabiiy faollashuvga uchraydi. Haddan tashqari faollashtirilgan mikrogliya va disfunktsional astrositlar bir nechta yallig'lanishga qarshi vositachilarning kuchli chiqarilishini keltirib chiqaradi, bu esa yallig'lanishga qarshi sitokin kaskadlarini kuchaytirish effektlarini yaratadi. Bunday neyro-yallig'lanish neyronlarning morfologik buzilishi, neyrotransmitter almashinuvining buzilishi va sinaptik plastisiyaning buzilishiga olib keladi, natijada depressiyaga o'xshash patologik rivojlanishni osonlashtiradi.

Hozirgi asosiy klinik antidepressant aralashuvlar asosan serotoninni qayta qabul qilish inhibitori (SSRI) bo'lgan fluoksetin bilan ifodalangan sintetik kimyoviy antidepressantlarga tayanadi. Ba'zi bemorlarda simptomlarni qisman bartaraf etishiga qaramay, sintetik antidepressantlar yaxshi tan olingan kamchiliklarga ega: qoniqarsiz to'liq remissiya nisbati, tez-tez qoldiq depressiv simptomlar, dori to'xtatilgandan keyin yuqori qaytalanish ehtimoli, shuningdek, uzoq muddatli qabul qilinganida oshqozon-ichak, jigar va metabolik ta'sirlarning salbiy ta'siri. Bundan farqli o'laroq, an'anaviy o'simlik dorilari ko'p maqsadli modulyatsiya xususiyatlariga va nisbatan engil xavfsizlik profillariga ega, shuning uchun ruhiy holat buzilishining yordamchi terapiyasiga bo'lgan qiziqish ortib bormoqda.

Cistanche deserticolavaCistanche tubulosa, commonly named "desert ginseng", belong to Orobanchaceae family. Their fleshy stems serve as classic homologous medicinal‑food raw materials in traditional Asian herbal practice. Modern pharmacological investigations document multiple neuroprotective bioactivities for Cistancheekstraktlar, shu jumladan Altsgeymer kasalligi va Parkinson kasalligiga qarshi anti-neyrodegeneratsiya ta'siri. Feniletanol glikozidlari ichidagi asosiy bioaktiv fraktsiyalarni tashkil qiladiCistancheasosan echinacoside va verbascoside o'z ichiga olgan ekstraktlar. Cistanche feniletanol glikozidlari (CPhGs) bir nechta eksperimental platformalarda o'simtaga qarshi, antioksidant, immunomodulyator va neyro-himoya bioaktivligini namoyish etadi.

Oldingi dastlabki laboratoriya ishlari shuni ko'rsatdiki, CPhG'lar striatal dopamin kontsentratsiyasini oshirishi va kemiruvchilar hayvonlari modellarida menopauza bilan bog'liq depressiyaga o'xshash fenotiplarni engillashtirishi mumkin. Biroq, CPhGlar surunkali stress bilan qo'zg'atilgan depressiyaga himoya ta'sirini keltirib chiqaradimi va bunday bioaktivliklarga vositachilik qiluvchi batafsil signal uzatish kaskadlari hali ham tizimli tadqiqotlarga ega emas. Surunkali oldindan aytib bo'lmaydigan engil stress (CUMS) hayvonlar paradigmasi klinikadan oldingi depressiyaning yaxshi tasdiqlangan modelidir. Laboratoriya kemiruvchilarni ketma-ket haftalar davomida turli xil tasodifiy engil stress omillariga ta'sir qilish orqali CUMS anhedoniya, xatti-harakatlarning tushkunligi va hipokampal nevropatologik shikastlanish kabi asosiy depressiv belgilarni ishonchli tarzda takrorlaydi.

Shunga ko'ra, ushbu tadqiqot CPhGlarning uchta gradient dozasining in-vivo antidepressantga o'xshash kuchini muntazam ravishda baholash uchun CUMS tomonidan qo'zg'atilgan depressiv sichqoncha modelini yaratdi. Biz, ayniqsa, monoamin neyrotransmitterini tiklashga, hipokampal glial hujayraning fenotipik transformatsiyasiga va TLR4/NF‑kB tomonidan boshqariladigan NLRP3 yallig'lanishli neyro-yallig'lanish yo'liga e'tibor qaratdik. Ushbu tadqiqot kelajakda farmatsevtika rivojlanishini va depressiv simptomlarni yaxshilashga qaratilgan CPhGlarning funktsional-oziq-ovqat qo'llanilishini qo'llab-quvvatlash uchun ob'ektiv eksperimental dalillarni taqdim etishni maqsad qilgan.

2. Materiallar va usullar

2.1 Eksperimental materiallar, reagentlar va asboblar

Standartlashtirilgan CPhGs xom ashyosi ekstrakti Hotan Dichen Pharmaceutical Biological Co., Ltd kompaniyasidan sotib olingan (partiya № . 20231221, Shinjon, Xitoy). Jami feniletanol glikozid miqdori 85% dan ortiq yoki unga teng, tarkibida echinacoside 40% dan ortiq yoki unga teng va verbaskozid 16% dan katta yoki teng. Fluoksetin gidroxlorid kapsulalari Patheon Fransiyadan olingan. 5‑HT, DA, iNOS, COX‑2, PGE2, TNF‑, IL‑1, IL‑18, IL‑6, IFN‑ uchun tijorat Elishay tahlil to‘plamlari malakali biologik reagent yetkazib beruvchilardan olingan. Immunohistokimyo va immunofloressensiya uchun qo'llaniladigan birlamchi antikorlar qatoriga anti-GFAP, anti-Iba-1, anti-NLRP3, anti-Caspase-1, anti-TLR4 va anti-fosfo-NF-KB antikorlari kiradi p65. HE va Nissl bo'yash uchun gistologik bo'yash to'plamlari parafinli miya bo'limiga ishlov berish uchun tayyorlangan.

Asosiy laboratoriya tahlil asboblari yuqori aniqlikdagi elektron analitik tarozi, Milli‑Q o‘ta toza suvni tozalash ish stansiyasi, SpectraMax ko‘p rejimli mikroplata o‘quvchi, Leica tik floresan mikroskopi, shuningdek, kemiruvchilar xatti-harakatini tahlil qilish uchun to‘liq apparat va SMART‑harakatni kuzatish dasturini qamrab oldi.

Oltmishta erkak SPF darajasidagi C57BL/6 sichqonchalari, yetti haftalik, boshlang‘ich tana vazni diapazoni 18‑22 g, Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd kompaniyasidan sotib olindi. Sichqoncha bilan bog‘liq barcha eksperimental manipulyatsiyalar Xitoyning Shayvonlar Etikasi qo‘mitasi tomonidan rasmiy axloqiy ma’qullangan (Medicirov ID qo‘mitasining Xitoy Hayvonlar Etikasi qo‘mitasi tomonidan) olingan. SUCMDL20231015003). Sichqonlar maxsus patogensiz hayvonlar yashaydigan binolarga joylashtirilgan. Atrof-muhit parametrlari atrof-muhit haroratida (21 ± 2) daraja, nisbiy namlik 60% ± 10%, standart 12 soatlik yorug'lik-qorong'i yoritish davrlarini amalga oshirdi. Kemiruvchilar chow va ichimlik suvi ad libitumdan foydalanish mumkin edi. Rasmiy eksperimental ish oqimlarini boshlashdan oldin bir haftalik adaptiv iqlimlashtirish davri amalga oshirildi.

2.2 Hayvonlarni guruhlash, CUMS modellashtirish va dori vositalarini boshqarish

Bir haftalik adaptiv ko'paytirishdan so'ng, sukrozni afzal ko'rishni dastlabki skrining qilish, shakarni kam iste'mol qilishni afzal ko'rgan individual sichqonlarni chiqarib tashladi. Malakali eksperimental sichqonlar oltita tadqiqot guruhiga (har bir guruhda n = 10 ta hayvon) tasodifiy ajratildi:

Nazorat guruhi (Con): CUMS stressi yo'q, izovolumetrik deionizatsiyalangan suvni oshqozon ichiga yuborish;

CUMS model guruhi (Mod): to'liq CUMS stimulyatsiyasini olish, teng hajmdagi deionizatsiyalangan suv bilan gavaj;

Yuqori dozali CPhGs guruhi (CPhGs‑H): CUMS ta'siri, CPhGs 700 mg/kg tana vazniga kunlik gavaj orqali;

O'rta dozali CPhGs guruhi (CPhGs-M): CUMS ta'siri, CPhGs 350 mg/kg kunlik gavaj orqali;

Past dozali CPhGs guruhi (CPhGs-L): CUMS ta'siri, CPhGs kunlik gavaj orqali 175 mg/kg;

Fluoksetin musbat nazorat guruhi (FLX): CUMS ta'siri, kuniga bir marta fluoksetin 15 mg/kg gavaj.

CUMS modelini qurish uchun o'n xil turdagi engil stress omillari qabul qilindi: jismoniy cheklov (60 daqiqa), gorizontal chayqalish (60 daqiqa), quyruqni osib qo'yish (60 min), qafas 45 graduslik burchakka egilgan (24 soat), nam to'shak muhiti (24 soat), bo'sh qafas (24 soat), tungi yorug'lik (24 soat), issiq suv (12 soat) 41 gradusda 5 daqiqa suzish, 4 daraja sovuq suvda 5 minut suzish va dum klipini stimulyatsiya qilish 2 minut davom etadi. Har kuni tasodifiy ravishda ikkita alohida stress qo'llaniladi; bir xil stressor ikki qo'shni kunda ketma-ket paydo bo'lmaydi. CUMS modellashtirish jarayoni to'rt hafta davom etdi.

To'rt haftalik stressni modellashtirishni tugatgandan so'ng, tegishli sinov moddalari yoki erituvchi vosita yana to'rt hafta davomida kuniga bir marta oshqozonga yuborildi. Sakkizinchi eksperimental haftada neyroxulq-atvorni aniqlash bo'yicha barcha loyihalar ketma-ket amalga oshirildi.

2.3 Neyro-xulq-atvor sinovi batareyasi

2.3.1 Saxaroza afzalligi testi (SPT)

Saxaroza afzalligi testi kemiruvchilarda anhedoniyaga o'xshash asosiy depressiv fenotipni baholaydi. Rasmiy o'lchovdan oldin har bir sichqonchani alohida joylashtirdi. Uch kunlik saxaroza ichishga moslashish bosqichi amalga oshirildi. Birinchi kun: har bir qafasga 24 soat davomida ikki shisha 1% saxaroza eritmasi qo'yiladi. Ikkinchi kun: bitta saxaroza eritmasi shishasi bitta tozalangan suv bilan birlashtirilgan. Uchinchi kun: joylashuvning noto'g'ri ta'sirini bartaraf etish uchun shakar-suv va toza suv idishlarining o'rnini almashtiring. Moslashuv tsiklidan so'ng sichqonlar 24 soat davomida oziq-ovqat va suvdan och qolishdi. Keyinchalik, oldindan tortilgan 1% sukrozli suv shishasi va tozalangan suv shishasi taqdim etildi. Shishaning joylashuvi 12 soatdan keyin almashtirildi. Umumiy 24 soatlik sinovdan so'ng, ikkala shishaning qolgan suyuqlik og'irligi aniq qayd etildi. Saxarozaga afzallik darajasi (%)=(saxaroza eritmasi iste'moli)/(saxaroza eritmasi iste'moli + tozalangan suv iste'moli) × 100 %.

2.3.2 Ochiq maydon testi (OFT)

Ochiq dala apparati 50 sm × 50 sm × 50 sm ochiq kubikli quti hosil qildi. Markaziy kvadrat hududi arena ichida joylashgan 25 sm × 25 sm markaziy zona sifatida belgilangan. Har bir sichqoncha ochiq maydon qutisining markaziy yuzasiga yumshoq tarzda joylashtirilgan. Besh daqiqalik bepul moslashish vaqtiga ruxsat berildi. Xulq-atvorni qayd etish va ma'lumotlarni tahlil qilish keyingi besh daqiqalik kuzatish davriga qaratilgan. Birlamchi o'qish ko'rsatkichlari umumiy harakat masofasi, markaziy zonada o'tkazilgan vaqt va markaziy zonaga kirish chastotasini o'z ichiga oladi. Ushbu parametrlar notanish muhit sharoitida spontan tayanch-harakat faolligini va kashfiyotga tayyorlikni aks ettiradi.

2.3.3 Quyruqning to'xtatilishi testi (TST)

Sichqonchaning dumi qismi xavfsiz tarzda o'rnatildi, bu esa hayvonning yer yuzasidan teskari osilishiga imkon berdi. Yozib olishning umumiy vaqti olti daqiqa edi. Keyingi to'rt daqiqalik segmentdagi harakatsiz vaqt davomiyligi hujjatlashtirilgan. Harakatsizlik vaqtining ortishi xulq-atvori-umidsizlikning depressiv holatga o'xshashligini anglatadi.

2.3.4 Majburiy suzish testi (FST)

Shaffof silindrsimon suzish bochkasi (diametri 15 sm, balandligi 50 sm) (25 ± 2) darajada saqlanadigan suv bilan to'ldirilgan; suv chuqurligi 20 sm ga yetdi. Har bir sichqonchani jami olti daqiqalik yozib olish oralig'i uchun suzish konteyneriga yumshoq tarzda joylashtirildi. Oxirgi to'rt daqiqadagi suzuvchi harakatsizlik vaqti statistik jihatdan aniqlandi. Uzoqroq harakatsizlik davri umidsizlik bilan bog'liq xatti-harakatlarning kuchayganligini ko'rsatadi.

2.4 Namuna olish va to'qimalarni tayyorlash

8-hafta eksperimental terminal nuqtasida sichqonlarga chuqur behushlik uchun 3% pentobarbital natriy (10 ml / kg) intraperitoneal in'ektsiya qilindi. Qon namunalari ko'z olmasini olib tashlash uchun qon ketish usuli bilan olingan. Keyinchalik servikal-dislokatsiya evtanaziyasi amalga oshirildi. Sovuq oddiy sho'rlangan yurak perfuziyasi miya to'qimalarida aylanma qonni tozaladi. To'liq miya namunalari tezda ajratildi. Keyingi gistologiya uchun miya to'qimalarining yarmi 72 soat davomida 4% paraformaldegid eritmasiga botirildi. Hipokampal miya hududlari oldindan sovutilgan muz platformasida qolgan miya namunalaridan tezda ajratildi va suyuq azot saqlash muhitida saqlanib qoldi. Biyokimyasal o'lchash uchun 10 mg hipokampal to'qima namunasi 1:9 massa-hajm nisbati bo'yicha oldindan sovutilgan oddiy sho'r suv bilan aralashtiriladi, muz hammomida mexanik gomogenizatsiya qilinadi. To'qimalarning gomogenati 15 daqiqa davomida 4000 r / min ostida santrifüj qilindi va supernatant fraktsiyalari Elishay biomarker miqdorini aniqlash uchun yig'ildi.

2.5 Biokimyoviy indeksni o'lchash

Tijoriy Elishay to'plamlarining ishlab chiqaruvchisi qo'llanmalariga ko'ra, sarum va hipokampal gomogenatning supernatant namunalari monoamin neyrotransmitterlarining kontsentratsiyasini, shu jumladan 5-HT va DA ni olish uchun o'lchandi. Gipokampal gomogenat supernatanti yallig'lanish-mediator ko'rsatkichlari iNOS, COX-2, PGE2 va yallig'lanishga qarshi TNF-, IL-1, IL-18, IL-6 va IFN- bilan bir qatorda tekshirildi. Optik-zichlikdagi absorbans ko'rsatkichlari mikroplastinkali spektrofotometr orqali olingan. Namuna oqsil kontsentratsiyasi sitokinni aniqlashdan oldin BCA protein miqdorini aniqlash to'plamidan foydalangan holda sozlangan.

2.6 Hipokampal gistopatologik bo'yash

Ruxsat etilgan miya to'qimalarining namunalari kerosin mumi ichiga kiritilgan va 4 mkm qalinlikdagi gistologik bo'limlarga bo'lingan. HE bo'yash uchun: kerosin bo'laklari ksilenni dewakslash, gradient etanol hidratsiyasi, gematoksilin yadroviy bo'yash, eozin sitoplazmatik qarama-qarshi bo'yash, gidroxlorid-spirtli differentsiatsiya, gradient etanol dehidratsiyasi, ksilen shaffofligi bilan ishlov berish va neytral gum o'rnatishdan o'tdi. Mikroskopik kuzatish uyali morfologiyaga, yadro holatiga va hipokampal dentat girus mintaqasidagi sitoplazmatik strukturaviy yaxlitlikka qaratilgan.

Nissl binoni neyronal biosintetik faollik va hujayra hayotiyligini aks ettiruvchi neyron Nissl tanachalarini ko'rsatadi. Mumsizlangan kerosin bo'laklari Nissl binoni ishchi eritmasida inkubatsiya qilindi. Distillangan suv bilan yuvish bosqichlaridan so'ng, bo'limlar suvsizlanish, shaffoflik tartibi va muhrlanishni oldi. Optik mikroskop ostida hipokampal neyronlarning histomorfologik o'zgarishlari kuzatildi.

2.7 Immunogistokimyoviy tahlil

Parafin o'rnatilgan hipokampal to'qimalarning bo'limlari mumsizlangan va namlangan. Antigen olish, endogen peroksidazani blokirovka qilish va o'ziga xos bo'lmagan oqsillarni bog'lashni blokirovka qilish bosqichlari ketma-ket amalga oshirildi. To'qimalarining bo'laklari suyultirilgan birlamchi antikorlar bilan kechada 4 daraja haroratda inkubatsiya qilindi: anti-GFAP (1:400), anti-Iba-1 (1:400), anti-NLRP3 (1:300), anti-Caspase-1 (1:400). Ikkilamchi antikor inkubatsiyasidan so'ng DAB xromogen reaktsiyasi amalga oshirildi. Yadroni qarshi bo'yash, suvsizlantirish va o'rnatish jarayonlari tugallandi. Yorug'lik-mikroskop yordamida olingan raqamli ko'rish maydoni tasvirlari. Tasvir-J tasvirni qayta ishlash dasturi maqsadli oqsil ifoda intensivligini yarim miqdoriy baholash uchun o'rtacha optik-zichlik qiymatlarini hisoblab chiqdi.

2.8 Immunofluoresans bilan bo'yash

Tayyorlangan kerosinli hipokampal bo'limlar dewaxing, antigenlarni olish va blokirovkalash operatsiyalarini boshdan kechirdi. Birlamchi anti-TLR4 (1:400) va anti-fosfo-NF-KB p65 (1:200) birlamchi antikorlar qo'llanildi va to'rt daraja Selsiy sharoitida bir kechada inkubatsiya qilindi. Yorug'likdan himoyalanish holatida bir soatlik inkubatsiya uchun lyuminestsent bilan belgilangan ikkilamchi antikorlar qo'shildi. DAPI yadroviy qarshi dog 'o'rnatish muhitiga kiritilgan. Lazer-flüoresan mikroskop floresan signallarini suratga oldi. Image‑J dasturiy ta'minoti TLR4 va p‑NF‑kB p65 oqsil faollashuvi kattaligini ifodalovchi o'rtacha floresans intensivligini hisoblab chiqdi.

2.9 Statistik tahlil

Asl eksperimental ma'lumotlar SPSS 26.0 statistika dasturi va GraphPad Prism 9.0 grafik dasturi yordamida qayta ishlandi. Barcha miqdoriy natijalar ma'lumotlari o'rtacha ± standart og'ish (\\(\\ bar {x} \\ pm s \\)) sifatida ifodalangan. Guruhlararo statistik taqqoslashlar tegishli statistik testlar yordamida amalga oshirildi. P-qiymati 0,05 dan kam bo'lsa, statistik jihatdan muhim farq deb baholandi; P< 0.01 represented highly significant statistical distinction.

3. Eksperimental natijalar

3.1 CPhGs yaxshilangan anhedoniya simptomi va tiklangan monoamin neyrotransmitter darajalari

CUMS modellashtirish boshlanishidan oldin, saxarozaga ustunlik berishning asosiy stavkalari barcha eksperimental hayvonlar kogortalarida aniq statistik farqni ko'rsatmadi. To'rt haftalik CUMS stressi va to'rt haftalik aralashuv tsiklidan so'ng, CUMS modeli guruhi stressga duchor bo'lmagan nazorat hayvonlariga nisbatan sukrozni afzal ko'rish nisbatini sezilarli darajada kamaytirdi (P).< 0.01), demonstrating successful establishment of anhedonia depressive‑like phenotype. Serum and hippocampal tissue 5‑HT and DA concentrations in Mod group were significantly reduced compared with Con group (P < 0.05 or P < 0.01).

Mod modeli kohortasi bilan solishtirganda, yuqori, o'rta va past dozali CPhGs davolash guruhlari, shuningdek, fluoksetin musbat guruh saxaroza afzalligi foizi, sarum 5-HT, sarum DA, hipokampal 5-HT va hipokampal DA (P) bo'yicha sezilarli o'sishni hosil qildi.< 0.05 or P < 0.01). Pharmacological improvement effect exhibited apparent dose‑dependent tendency; high‑dose CPhGs group achieved more robust biomarker‑rescue outcome than medium‑dose and low‑dose subgroups. This set of findings illustrated CPhGs could ameliorate anhedonic behavioral performance and reverse stress‑provoked depletion of key mood‑regulating monoamine neurotransmitters inside peripheral circulation and hippocampal brain tissue.

3.2 Ochiq dala sinovida CPhGs kengaytirilgan tadqiqot faoliyati

Ochiq maydondagi xatti-harakatlarni baholashda CUMS modeli sichqonlari nazorat sichqonlariga nisbatan umumiy harakat masofasi, markaziy zonada qolish vaqti va markaziy hududga kirish chastotasining sezilarli darajada qisqarishini ko'rsatdi (P).< 0.01). Chronic unpredictable stress suppressed spontaneous exploratory behaviors. Following CPhGs or fluoxetine intervention, those three open‑field‑test indicators increased observably (P < 0.05 or P < 0.01). High‑dose CPhGs‑treated mice displayed 46.63 % increase of total travel distance, 127.92 % growth of central‑zone residence time compared against Mod group. Medium‑dose and low‑dose CPhGs also produced measurable but weaker improvement effects. It indicated CPhGs alleviated stress‑induced suppression of autonomous exploration activity.

3.3 CPhGs umidsizlikka asoslangan xulq-atvor paradigmalarida harakatsizlik vaqtini qisqartiradi

Quyruqni to'xtatib turish testi va majburiy suzish testi xulq-atvorning tushkunligini aniqlaydi, bu asosiy depressiyaga o'xshash xatti-harakatlar ko'rsatkichlarini ifodalaydi. Mod guruhi TST va FST da keskin uzaygan harakatsizlik vaqtini ko'rsatdi (P< 0.01) relative to Con group. After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M, CPhGs‑L and FLX groups generated statistically significant shortening of immobility durations (P < 0.05 or P < 0.01). For forced‑swim immobility time, high‑dose CPhGs brought 34.67 % reduction; medium‑dose 30.71 % reduction; low‑dose 20.78 % reduction. For tail‑suspension immobile time: CPhGs‑H achieved 35.91 % decrease. Results suggested CPhGs mitigated despair‑related passive coping behavioral patterns triggered by long‑term unpredictable stress stimulation.

3.4 CPhGlar haddan tashqari ifodalangan hipokampal yallig'lanishga qarshi sitokinlarni kamaytiradi

CUMS modelidagi hayvonlarda gipokampal yallig'lanishga qarshi sitokin kontsentratsiyasi (TNF-, IL-1, IL-18, IL-6, IFN-) nazorat hamkasblari bilan solishtirganda keskin oshgan (P).< 0.01). After CPhGs intervention, these pro‑inflammatory cytokine contents descended in dose‑responsive fashion. High‑dose CPhGs generated the most powerful inhibitory influence. For instance, relative to Mod group, CPhGs‑H decreased TNF‑α level by 42.93 %, lowered IL‑1β by 45.72 %, and reduced IL‑18 by 35.17 %. Medium‑dose CPhGs delivered moderate anti‑inflammatory potency, and low‑dose group exerted limited but detectable inhibitory impacts. This data demonstrated CPhGs could suppress excessive pro‑inflammatory‑cytokine release inside hippocampal tissue under chronic‑stress challenge.

3,5 CPhGs pastga tartibga solinadigan hipokampal yallig'lanish vositachisi biomarkerlari

CUMS modeli sichqonlarida hipokampal yallig'lanish vositachilari iNOS, COX-2 va PGE2 sezilarli darajada oshdi (P< 0.01). After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M markedly diminished iNOS, COX‑2 and PGE2 concentrations (P < 0.05 or P < 0.01). Low‑dose CPhGs‑L group showed limited statistical significance for partial indicators. High‑dose CPhGs treatment group exhibited iNOS reduction rate reaching 49.55 %, COX‑2 reduction 39.58 %. Collectively, CPhGs suppressed stress‑induced up‑regulation of inflammatory‑mediator molecules inside hippocampus.

3.6 CPhGs zaiflashgan CUMS bilan qo'zg'atilgan hipokampal neyronal patologik shikastlanish

HE bo'yash natijalari: Mod guruhidagi hipokampal dentat-girus neyronlari og'ir patologik lezyonlarni ko'rsatdi: hujayra tuzilishining buzilishi, yadro piknozi, sitoplazmatik vakuolyar degeneratsiya, neyronlarning sezilarli shikastlanishi. CPhGs-L guruhi faqat ahamiyatsiz yaxshilanish ta'sirini ko'rsatdi. O'rta va yuqori dozali CPhGlar bunday patologik o'zgarishlarni aniq bekor qildi; Yuqori dozali CPhGs-H guruhi qisman ko'rish sohalarida fluoksetin guruhiga nisbatan yuqori neyronal-himoya ta'sirini ko'rsatdi.

Nissl-bo'yash natijalari: Mod-guruhning hipokampal neyronlari tartibsiz joylashishni, Nissl korpuskulasi miqdorining sezilarli kamayishini ko'rsatdi, bu buzilgan neyronal sintetik funktsiyani va past hujayra hayotiyligini aks ettirdi. CPhGlarni yuborish dozaga bog'liq holda Nissl tanasining ko'pligini tikladi. CPhGs-H guruhidagi neyron morfologiyasi va Nissl-korpuskula zichligi normal nazorat guruhi darajasiga yaqinlashdi. Gistopatologik topilmalar CPhG'lar hipokampal neyronning yaxlitligini surunkali stress vositasida yo'q qilinishidan himoya qilganligini tasdiqladi.

3.7 CPhGs tartibga solinadigan hipokampal glial-hujayra faollashuvi holati

GFAP astrositlar populyatsiyasi uchun o'ziga xos biomarkerdir. Con guruhi bilan solishtirganda, Mod-guruh hipokampal GFAP musbat-signal intensivligi sezilarli darajada kamaydi (P).< 0.01), indicating massive astrocyte functional impairment induced by CUMS stress. CPhGs‑H and CPhGs‑M intervention groups distinctly elevated GFAP expression level (P < 0.05 or P < 0.01); high‑dose CPhGs‑H enhanced GFAP average optical density by 64.23 % relative to Mod group. Low‑dose CPhGs‑L generated upward trend without statistical significance.

Iba‑1 protein belgisi mikrogliyani ifodalaydi. CUMS model guruhi Iba‑1 musbat ifoda signalini keskin oshirdi (P< 0.01), implying robust microglia hyper‑activation. After CPhGs intervention, Iba‑1 expression intensity decreased dose‑dependently. CPhGs‑H produced 23.73 % reduction of Iba‑1 optical‑density value versus Mod group. It illustrated CPhGs preserved astrocyte abundance while dampening pathological microglia over‑activation inside hippocampal compartments.

3.8 CPhGs hipokampal NLRP3-yallig'lanish bilan bog'liq-protein ifodasini inhibe qiladi

Mod-guruh hipokampusidagi NLRP3 va Kaspaza-1 oqsilining ifodalanishini immunohistokimyoda aniqlash sezilarli darajada yuqori tartibga solingan (P).< 0.01). Following CPhGs treatment, NLRP3 and Caspase‑1 protein abundance declined dose‑responsively. High‑dose CPhGs‑H decreased NLRP3 expression by 50.00 %, lowered Caspase‑1 expression level by 57.65 %. It demonstrated CPhGs suppressed pathological NLRP3 inflammasome complex activation in CUMS‑damaged hippocampal tissue.

3.9 CPhGs TLR4/NF‑KB signalizatsiya yo‘lining haddan tashqari faollashuvi bostirilgan

Immunofloressensiyani aniqlash shuni ko'rsatdiki, CUMS-model sichqonlari TLR4 retseptorlari va fosforlangan NF-kB p65 subbirligining floresans intensivligini sezilarli darajada oshirgan (P).< 0.01). CPhGs intervention obviously reduced TLR4 and p‑NF‑κB p65 fluorescence signal strength (P < 0.05 or P < 0.01). Combined with above‑mentioned NLRP3 inflammasome‑protein detection results, these observations supported the inference: CPhGs inhibited TLR4/NF‑κB upstream signal‑cascade hyper‑activation, which sequentially restrained downstream NLRP3 inflammasome assembly and neuro‑inflammatory cascade amplification.

4. Munozara

Katta depressiv buzilish og'ir neyro-psixiatrik kasallikdir. So'nggi yillarda depressiyaning neyro-yallig'lanish nazariyasi keng tarqalgan tadqiqot e'tiborini tortdi. Surunkali takroriy psixologik stress markaziy asab tizimida tug'ma-immun-tizim faollashuviga olib kelishi mumkin. Hipokampus, miyaning stressga nisbatan juda zaif bo'lgan hududi, kayfiyatni modulyatsiya qilish, mukofotni qayta ishlash va xotira funktsiyasi bilan chambarchas bog'liq. Doimiy stress stimulyatsiyasi ostida hipokampal glial-hujayra gomeostazasi buziladi. Giper-faollashgan mikrogliya va shikastlangan astrositlar ko'p miqdorda yallig'lanishga qarshi sitokinlarni chiqaradi, bu esa neyronlarning strukturaviy shikastlanishiga, monoamin-neyrotransmitter metabolizmining buzilishiga olib keladi va natijada depressiyaga o'xshash xatti-harakatlarning paydo bo'lishiga yordam beradi.

An'anaviy o'simlik-tibbiyotdan olingan faol tabiiy mahsulotlar ko'p maqsadli farmakologik afzalliklarga ega bo'lib, antidepressant dori-darmonlarni kashf qilish uchun istiqbolli nomzod resurslarga aylanadi. CPhG'lar izolyatsiya qilingan bio-faol komponentlardirCistanchedorivor o't. Ushbu tadqiqot CUMS tomonidan qo'zg'atilgan surunkali stressli depressiya sichqoncha modelini yaratdi, bu gradient-dozali CPhGlarning in-vivo antidepressantga o'xshash samaradorligini har tomonlama tekshirdi. Xulq-atvor eksperimental natijalari shuni ko'rsatdiki, CPhGs bilan davolash anhedoniya simptomini sezilarli darajada yaxshilagan, kashfiyot faolligi yaxshilangan va depressiya modelidagi sichqonlarda umidsizlik bilan bog'liq harakatsizlik vaqtini qisqartirgan va aniq doza ta'siri korrelyatsiyasini ko'rsatgan.

Monoamin neyrotransmitter gipotezasi klassik depressiya-patogenez nazariyasidir. Serotonin va dopamin hissiy barqarorlikni, mukofotni idrok etishni va motivatsiya bilan bog'liq xatti-harakatlar modulyatsiyasini qamrab oladigan muhim tartibga soluvchi rollarni bajaradi. CUMS stressi bizning model hayvonlarimizda sarum va hipokampal to'qimalarda 5-HT va DA kontsentratsiyasining aniq pasayishiga olib keldi. CPhGs aralashuvi ushbu ikkita monoamin neyrotransmitter darajasini samarali ravishda tikladi. Ushbu natija ilgari chop etilgan tadqiqot hisobotlariga mos keladiCistanchemiya monoamin neyrotransmitterlarini modulyatsiya qiluvchi ekstraktlar.

Keyingi biokimyoviy biomarker testlari shuni ko'rsatdiki, CUMS ko'plab yallig'lanishga qarshi sitokinlarning (TNF‑, IL‑1, IL‑18, IL‑6, IFN‑) hamda yallig'lanish mediatorlarining (iNOS‑GE, PX. CPhGs aralashuvi bunday yallig'lanishning haddan tashqari ifoda holatini sezilarli darajada o'zgartirdi. Gistopatologik HE va Nissl bilan bo'yash intuitiv ravishda isbotladi CPhGs stressdan kelib chiqqan hipokampal-neyron shikastlanishini engillashtirdi va neyronlarning morfologik yaxlitligini himoya qildi.

Glial-hujayra populyatsiyalari neyro-yallig'lanish reaktsiyalarida vositachilik qiluvchi markaziy ishtirokchilar bo'lib xizmat qiladi. Astrositlar neyrotransmitterlarni qayta ishlashni, qon-miya to'sig'ining strukturaviy barqarorligini va neyronlarning oziqlanishini ta'minlaydi. Mikroglia miya parenximasida yashovchi tug'ma-immun effektor hujayralari sifatida ishlaydi. Surunkali stress mikrogliyaning patologik giperaktivlanishi bilan bir qatorda astrositlarning yo'qolishi yoki funktsional qobiliyatsizligini keltirib chiqaradi. Bizning immunohistokimyoviy ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, CPhGs bilan davolash GFAP-musbat astrositlar zichligini oshirdi, shu bilan birga hipokampusdagi Iba-1-belgilangan ortiqcha faollashtirilgan mikrogliya miqdorini pasaytirdi. Ushbu glial-hujayra fenotipini tartibga solish xususiyati qisman CPhG ning neyro-himoya va depressiyaga qarshi farmakologik kuchiga asoslanishi mumkin.

NLRP3 yallig'lanishi neyro-yallig'lanish kaskadi vositachiligida muhim molekulyar platformani ifodalaydi. Uning faollashishi quyi oqimdagi IL-1 va IL-18 yallig'lanishga qarshi sitokinlarning kamolotini va sekretsiyasini rag'batlantiradi. TLR4/NF‑KB signal o'qi NLRP3 yallig'lanishini faollashtirish uchun asosiy yuqori oqim signali sifatida ishlaydi. TLR4 retseptorlari stimulyatsiyasi NF‑KB subunit fosforillanishi va yadro translokatsiyasini rag'batlantiradi, NLRP3, pro-IL-1 gen transkripsiyasini yanada faollashtiradi. Bizning hozirgi tadqiqotimizda CUMS stressi TLR4, fosforlangan NF‑kB p65, NLRP3 va Kaspaz-1 protein ifodasi uchun bir vaqtda kuchayishiga olib keldi. CPhGs aralashuvi ushbu signal kaskadining faollashuvini aniq inhibe qildi. Shuning uchun biz CPhGs TLR4/NF-kB vositachiligida NLRP3 yallig'lanish faollashuvini cheklash orqali neyro-yallig'lanish shikastlanishini qisman engillashtiradi degan xulosaga keldik.

Birgalikda olib borilganda, bizning hayvonlar namunasi eksperimental dalillarimiz mexanik modelni qo'llab-quvvatlaydi: CPhG'lar ikkita asosiy o'lchov orqali CUMS tomonidan qo'zg'atilgan depressiv sichqonlarda antidepressantga o'xshash ta'sirlarni hosil qiladi: (1) kayfiyat bilan bog'liq monoamin neyrotransmitterlarining gomeostazini tiklash (5-HT, DA); (2) gipokampal glial-hujayra gomeostazini modulyatsiya qilish va TLR4/NF-kB tomonidan boshqariladigan NLRP3 yallig'lanishga bog'liq neyro-yallig'lanish patologik kaskadini bostirish.

Ushbu tadqiqotning bir nechta cheklovlari ko'rib chiqilishi kerak. Bu ish faqat hayvonlar darajasida in-vivo tajribalarni amalga oshirdi. Biz hujayra darajasida mexanik tekshiruvni ham, odamlarda ham klinik sinovlarni o'tkazmadik. Shuning uchun, inson-depressiya terapiyasiga nisbatan tarjimali xulosa ehtiyotkorlik bilan qolishi kerak. Bundan tashqari, ushbu tadqiqot aralash CPhG ekstrakti tarkibidagi individual monomer birikmalarining (echinacoside, verbascoside) hissasini aniqlamadi. Kelajakdagi tadqiqotlar asosiy e'tiborni hujayra madaniyatini mexanik tekshirishga, individual komponentlar faoliyatini taqqoslashga, shuningdek, inson va sub'ektning dastlabki uchuvchi kuzatishiga qaratishi mumkin.

5. Xulosa

Cistanche feniletanol glikozidlari (CPhGs) C57BL / 6 sichqonlarida surunkali oldindan aytib bo'lmaydigan engil stress qo'zg'atuvchi depressiyaga o'xshash fenotiplarga qarshi sezilarli antidepressantga o'xshash farmakologik ta'sir ko'rsatadi. Uning terapevtik mexanizmlari sarum va hipokampal serotonin va dopamin neyrotransmitter darajasini tiklash, hipokampal neyronal strukturaning yaxlitligini saqlash, astrosit-mikrogliya funktsional muvozanatini modulyatsiya qilish, shuningdek, TLR4/NF-meditsidlangan TLR4/NF-meditsidlarini bostirish bilan bog'liq. neyro-yallig'lanish patologik kaskadi. Ushbu klinikadan oldingi hayvonlar tadqiqoti depressiv simptomlarni yaxshilashga qaratilgan tabiiy terapevtik yordamchi moddasi yoki funktsional-oziq-ovqat ingrediyenti sifatida CPhGlarni yanada rivojlantirish uchun eksperimental ma'lumotni taqdim etadi.

Ma'lumotnomalar

Ren L, Shao YT, Qin SH. Maqsadni aniqlash va saponin A ning depressiv buzuqlikka ta'sirini o'rganish. Nat Prod Res Dev, 2024, 36:44-51.

Fan L, Peng Y, Vang JW va boshqalar. Cistanche tubulosa poyalarining umumiy glikozidlari depressiyaga o'xshash xatti-harakatlarni engillashtiradi: fitokimyoviy moddalar va ichak mikrobiotalarining ikki tomonlama o'zaro ta'siri. Fitomeditsina, 2021, 83:153471.

Fan L, Peng Y, Chen XN va boshqalar. Antidepressant faolligiga asoslangan Cistanche deserticola va C. tubulosa poyalari o'rtasidagi farqlarni tekshirish uchun fitokimyoviy tarkibi, farmakokinetikasi va tarmoq farmakologiyasining integratsiyalashgan tahlili. Oziq-ovqat va funktsiya, 2022,13:8542-8557.

Yirmiya R, Rimmerman N, Reshef R. Depressiya mikroglial kasallik sifatida. Neurosciences tendentsiyalari, 2015, 38:637-658.

Jia XN, Gao ZH, Xu HL. Depressiyadagi mikrogliya: hozirgi istiqbollar. Fan Xitoy-Hayot fanlari, 2021, 64:911-925.

Vu B, Gan AN, Vang RX va boshqalar. Alpinia oxyphylla Miq. uchuvchi yog 'depressiv xatti-harakatlarni yaxshilaydi va TLR4 vositachiligidagi MyD88/NF-kB signalizatsiya yo'lini inhibe qilish orqali CUMS ta'siriga uchragan sichqonlarda neyroinflamatsiyani inhibe qiladi. Kimyoviy neyroanatomiya jurnali, 2023,130:102270.