[18F]‑natriy ftoridining avtoradiografiyasi Donor buyraklaridagi nefrokalsinoz va eksplantatsiya qilingan buyrak allogreftlari.

ali.ma@wecistanche.com

Stan Benjamens 1,2*, Ines F.Antunes2, Jan-Luuk Hillebrands3, Melanie Reijrink4, Marian LC Bulthuis3, Stefan P. Berger5, Cyril Moers1, Martin H. de Borst5, Riemer HJA Slart2,6 va RobertA. Pol1

Nefrokalsinozning 43 foizigacha mavjudbuyraktransplantatsiya qilinganidan keyin bir yil o'tgach allograft biopsiyalari va transplantatsiya funktsiyasining pastligi va greftning yomon omon qolishi bilan bog'liq. Biz donor buyraklardagi (n= 7) mikrokalsifikatsiyalarning [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) tasvirini o'rgandik va eksplantatsiya qildik.buyrakallograftlar (n= 13). Kalsifikatsiyani gistologik baholash (Alizarin Red; Von Kossa bo'yash) va ex-vivo [18F]-NaF avtoradiografiyasi uchun uchta mkm parafin o'rnatilgan seriyali bo'limlardan foydalanilgan. Tasvirlar mikrokalsifikatsiya joylari [18F]-NaF qabul qilish joylariga mos kelishini baholash uchun birlashtirildi. Gistologik tahlillar asosida 19/20 va 7/20 namunalarda tubulointerstitial va glomerulyar mikrokalsifikatsiyalar mavjud edi. Avtoradiografiya yordamida 19/20 namunalarda [18F]-NaF so'rilishi aniqlandi, bunda kuzatuvchi faolligi sezilarli darajada ko'proq.buyrako'lgan donor buyrak namunalari bilan solishtirganda allogreft (p {0}}.019). Faol mikrokalsifikatsiyalarning Alizarin Qizil ranglanishi yaxshi korrelyatsiyani ko'rsatdi (Spirmanning rho 0.81, p <0.001) va="" konsolidatsiyalangan="" kalsifikatsiyalarning="" fon="" kossa="" bo'yalishi="" sezilarli,="" ammo="" zaif="" korrelyatsiyani="" ko'rsatdi="" (0.62,="" p="0.003)" [18f]-naf="" faolligi="" bilan.="" ex-vivo="" [18f]-naf="" qabul="" qilish="" va="" gistologiya="" tomonidan="" tasdiqlangan="" mikrokalsifikatsiyalar="" o'rtasidagi="" bu="" bog'liqlik="" faol="" mikrokalsifikatsiyalarni="" aniqlash="" uchun="" tasvirlash="" usuliga="" birinchi="">nefrokalsinoz. Bu mikrokalsifikatsiyalarning etiologiyasini va ularning buyrak transplantatsiyasi funktsiyasiga ta'sirini yaxshiroq tushunishga olib kelishi mumkin.

Cistanche ekstrakti buyrak kasalligi uchun foydalari uchun bosing

NefrokalsinozKaltsiy-oksalat (CaOx) yoki kaltsiy-fosfat (CaPhos) ning parenximal va quvurli cho'kmasi sifatida aniqlangan, greft funktsiyasining pasayishida muhim omil hisoblanadi.buyraktransplantatsiya 1-3. CaOx va CaPhos ning cho'kishi surunkali kasalligi bo'lgan bemorlarda qon zardobida oksalat, zardobda kaltsiy va fosfatning yuqori darajasi bilan bog'liq.buyrakkasallik va/yoki giperparatiroidizm4,5. Kasallikning tarqalishinefrokalsinoz, buyrak allogreft biopsiyalariga asoslanib, 6 oyda 6 foizni, bir yilda 25–43 foizni va 10-yildan keyin 79 foizni tashkil qiladi.buyraktransplantatsiya 5-7. Transplantatsiyadan keyingi bir yil ichida buyrak allogreft biopsiyalariga qaratilgan tadqiqotlar kaltsiy cho'kmalarining erta mavjudligi va past graf funktsiyasi va grafning yomon omon qolish darajasi o'rtasidagi bog'liqlikni ko'rsatdi4,8,9. Biroq, bu mikrokalsifikatsiyalar allogreft disfunktsiyasida faol rol o'ynaydimi yoki shunchaki tartibga solinmagan mineral metabolizmining ko'rsatkichlarimi, aniq emas.

Hozirgi kungacha,buyrakallograft biopsiyalari transplantatsiyadan keyingi mikrokalsifikatsiyani baholashning yagona diagnostik usuli hisoblanadi. Invaziv bo'lmagan va ishonchli diagnostika yondashuvi takroriy o'lchovlarni o'tkazishga imkon beradi, vaqt o'tishi bilan kalsifikatsiyani kuzatishni osonlashtiradi va buyrak transplantatsiyasidan keyin transplantatsiya funktsiyasi va transplantatsiyaning omon qolishi natijalarini potentsial yaxshilash bilan aralashuv tadqiqotlarini osonlashtiradi.

Pozitron emissiya tomografiyasi/kompyuter tomografiyasi (PET/KT) [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) bilan skelet va tomirlarni tasvirlash usuli sifatida klinik amaliyotda va eksperimental tadqiqotlarda qo'llaniladi11-15. Qon tomir mikrokalsifikatsiyalarini ishonchli vizualizatsiya qilish kompyuter tomografiyasi bilan to'sqinlik qilsa-da, ex-vivo [18F]-NaF microPET ko'rish natijalari inson va hayvonlarning qon tomirlari namunalarida gistologiya tomonidan tasdiqlangan mikrokalsifikatsiyalar bilan yaxshi bog'liq edi16,17. Bundan tashqari, bir nechta istiqbolli klinik tadqiqotlar natijalari shuni ko'rsatdiki, erta qon tomirlari [18F]-NaF faolligi KT ko'rish orqali aniqlangan ikkala mikrokalsifikatsiyaga ham yaxshi bog'liq, va eng qizig'i, bu kalsifikatsiyalar hajmining oshishi18-20.

Bu erda biz [18F]-NaF tasvirini ex-vivo foydalanish uchun kontseptsiyani avtoradiografiya tadqiqotining isboti natijalarini taqdim etamiz.nefrokalsinozdonordabuyraklarva transplantatsiya qilingan buyrak allogreftlari mikrokalsifikatsiyalarni vizualizatsiya qilish uchun diagnostik yondashuv sifatida.

1-jadval.Buyraktransplantatsiya qiluvchining xususiyatlari. Ushbu guruhda giperkalsemiya holatlari yo'q; *Allogreft patologiyasining Banf tasnifi tasnifi—201828; FSGS=Fokal segmentar glomeruloskleroz; IFTA=Interstitsial fbroz va tubulyar atrofiya; tegishli avtoradiografiya va gistologiya natijalari Qo'shimcha S1da keltirilgan.

2-jadval. Vafot etganlarbuyrakdonorlik xususiyatlari. *Serebrovaskulyar hodisa, miokard infarkti, invaziv aralashuvni talab qiluvchi qon tomir kasalligi sifatida tavsiflangan yurak-qon tomir kasalligi; ** xaridlar guruhi tomonidan qayd etilganidek; Tegishli avtoradiografiya va gistologiya natijalari Qo'shimcha S2 da keltirilgan; qandli diabet bilan kasallangan donorlar yo'q.

Natijalar

Kogorta namunasi.

O'n uchbuyraknamunalar transplantatsiya qilinganidan keyin o'rtacha 33 [IQR 9-66] oy ichida, o'rtacha yoshi 51 [IQR 30-64] bo'lgan transplantatsiya oluvchilardan olingan. Transplantektomiya ettita bemorda allograftni rad etish (Banf IIA va IIB), ikki bemorda surunkali allogreft arteriopatiya, ikkita bemorda allograft infektsiyasi, bir bemorda birlamchi funktsiyali bo'lmagan bemor va bir bemorda interstitsial fbroz va tubulyar atrofiya III darajali. 13 bemordan sakkiztasi (61,5 foiz) giperparatiroidizm, yetti nafarida (53,8 foiz) giperfosfatemiya, besh nafarida (38,5 foiz) qandli diabet bilan kasallangan va bu bemorlarning hech birida kasallik belgilari kuzatilmagan.nefrokalsinozklinik ultratovush tekshiruvi yoki buyrak toshlari tarixi (1-jadval). O'rtacha yoshi 65 [IQR 64-71] bo'lgan donorlardan yettita vafot etgan donor buyrak namunalari olindi. Har yetti donordan to‘rt nafari (57,1 foiz) yurak-qon tomir kasalliklari bilan og‘rigan, birortasida qandli diabet va olti nafar donordan olti nafarida (85,7 foiz) buyrak tomirlarining aterosklerozi kuzatilgan bo‘lib, bu donorlar sonining kamayishi uchun potentsial omillardir.buyraklar(2-jadval).

1-rasm. [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) yutilishining (A) avtoradiografiya tasviri, mikrokalsifikatsiyaning Alizarin qizil bo'yalishi (B) va kalsifikatsiyaning fon Kossa bo'yalishi bilan [18F]-NaF o'zlashtirilishining ustki tasviri (C).

Avtoradiografiya va gistologiya.

With autoradiography, [ 18F]-NaF uptake was identified in 19 out of 20 samples, with a median tracer surface area of 0.81% [IQR 0.27–5.19%]. A tracer surface area of≤5% was seen in 15 (75%) and of>20 ta namunadan 5 tasida (25 foiz) 5 foiz (1-rasm va 2A-rasm) (qo'shimcha S1 va qo'shimcha S2, barcha namunalar uchun avtoradiografiya va qo'shimcha tasvirlarni ko'rsatadi). [18F]-NaF hududlari soni sezilarli darajada yuqori edibuyrako'lgan donor bilan solishtirganda allogreft namunalaribuyraknamunalar, medianasi 7.0 [IQR 4.0–15,5] va 2.0 [IQR 1.0–6.0 ], mos ravishda (p=0.019) (Qo'shimcha S3).

Alizarin qizil bo‘yalishi bilan tasvirlangan tubulointerstitial mikrokalsifikatsiyalar 20 namunadan 19 tasida mavjud bo‘lib, har bir namunada mediana 5,5 [IQR 2–1{0.3] va glomerulyar mikrokalsifikatsiyalar yettita namunada kuzatilgan. 20 namuna, har bir namunada mediana 1 [IQR 1–3] (2B-rasm). Oʻlgan donor buyrak namunalari bilan solishtirganda buyrak allogreft namunalarida sezilarli darajada koʻp mikrokalsifikatsiyalar kuzatildi, median 9.0 [IQR 5.0–20.5] va 4.0 [IQR 1.0–4.0], mos ravishda (p=0.046) (Qoʻshimcha S3). Von Kossa binoni bilan 20 ta namunadan 18 tasida tubulointerstitial kalsifikatsiya aniqlangan, har bir namunada median 2,5 [IQR 1-5] va glomerulyar kalsifikatsiyalar 20 ta namunadan yettitasida, o'rtacha 1 [IQR 0-3] bo'lgan. ] har bir namuna (2C-rasm). Kalsifikatsiya soni o'rtasida sezilarli darajada farq qilmadibuyrakallogreft namunalari va vafot etgan donor buyrak namunalari, median 4.0 [IQR 2.0–6.0] va 2.0 [IQR 2.{ {9}}–7.0], mos ravishda (p=0.311) (Qoʻshimcha S3). Kuzatuvchilar oʻrtasida takrorlanuvchanlik kalsifikatsiyani vizual va yarim avtomatik aniqlash oʻrtasida aniqlandi, Alizarin qizil boʻyalishi uchun ICC koʻrsatkichi 0.94 (95 foiz CI 0.85–{21}}.98). va Von Kossa bo'yash uchun 0,77 (95 foiz CI 0,42–0,91) dan.

Avtoradiografiya va gistologiya natijalarining ustki tasvirlari mikrokalsifikatsiya uchun Alizarin qizil bo'yalishi bilan [18F]-NaF o'zlashtirilishining birgalikda lokalizatsiyasini ko'rsatdi (1B-rasm). Taqqoslash uchun, [18F]-NaF o'zlashtirilishi va kalsifikatsiyaning Von Kossa bo'yalgan qatlamli tasvirlari gistologiya tomonidan tasdiqlangan kalsifikatsiyasi bo'lmagan hududlarda o'zlashtirilishini ko'rsatdi (1C-rasm). Noto'g'ri salbiy [18F]-NaF so'rilishi, gistologiya tomonidan tasdiqlangan (mikro)kalsifikatsiya zonalarining qoplamadan tashqaridagi ulushi sifatida, Alizarin qizil rangli joylar uchun o'rtacha 0 foiz [IQR 0–25 foiz] edi. Von Kossa hududlari uchun median 100 foiz [65–100 foiz]. Mikrokalsifikatsiyalarning Alizarin Qizil bo'yalishi [18F]-NaF o'zlashtirilishi bilan yaxshi korrelyatsiyani ko'rsatdi (Spearman's rho 0,81 (95 foiz CI 0,57-0,92), p.< 0.001),="" whereas="" von="" kossa="" staining="" demonstrated="" weak="" correlation="" with="" [="" 18f]-naf="" uptake="" (0.62="" (95%="" ci="" 0.24–0.84),="" p="0.003)" (fig.="" 3).="" significant="" differences="" in="" the="" number="" of="" (micro)="" calcifications,="" by="" alizarin="" red="" (median="" 4.0="" [iqr="" 3.0–8.0]="" versus="" 34.0="" [iqr="" 19.0–41.0],=""><0.001) and="" von="" kossa="" (median="" 2.0="" [iqr="" 2.0–4.0]="" versus="" 6.0="" [5.5–9.5],="" p="0.004)" staining,="" were="" observed="" between="" samples="" with="" ≤5%="" and="">5 foiz [18F]-NaF qabul qilish (4-rasm).

Shakl 2. [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) o'zlashtirilishi va (Alizarin qizil) mikrokalsifikatsiyalarining (A) ustki tasviri, mikrokalsifikatsiyalar uchun Alizarin qizil bo'yoqlari (B) va kalsifikatsiyalar uchun fon Kossa bo'yalishi (C).

Transplantektomiya vaqtida qabul qiluvchining xususiyatlari.

Ular orasida hech qanday farq kuzatilmadibuyrak(n{0}}) yoki giperfosfatemiya (n=6) bo'lmagan bemorlardan olingan allograf namunalari, [18F]-NaF zonalari soni (o'rtacha 5.0 [IQR) 2.0–11,8] va 7.0 [7.0–23.0], p=0.170) , Alizarin qizil (median 7,5 [IQR 5.0–14.{27}}] ga nisbatan 12.0 [3.0–34.0], p{{3{41}}}}.390) va Von Kossa (median 5.0 [IQR 3.5–6.3] va 3.0 [2.{ {59}}–5.0], p=0.247). (n=8) yoki bo'lmagan (n=5) giperparatiroidizmi bo'lgan bemorlarning buyrak allograflari namunalarini solishtirganda [18F]-NaF zonalari soni (o'rtacha 7.0) bo'yicha farq ko'rsatmadi. [IQR 4.0–7,5] va 7,5 [4.0–23.0], p=0.459), Alizarin qizil (median 9.{{ 79}} [IQR 6.0–11.0] 1{{103}}ga ​​qarshi.0 [3,5–32,8], {{76-bet] }}.769) va Von Kossa (median 4.0 [IQR 1.5–5.0] 4.5 [2.0–6.8], p{{9{{ 131}}}}.505). Qandli diabet (n=5) yoki bo'lmagan (n=8) bo'lgan bemorlarning buyrak allograflari namunalari o'rtasida [18F]-NaF zonalari soni (o'rtacha 5,5 [IQR 2,5-) bo'yicha sezilarli farqlar aniqlanmadi. 19.3] ga nisbatan 7.0 [6.5–15.5], p=0.524), Alizarin qizil (oʻrtacha 10.0 [IQR 5.5–24.8] va 9.0 [4.0–8.5], p=0.833) va Von Kossa (o'rtacha 3,0 [IQR 2,0–5,8] ga nisbatan 4,0 [3,5–8,5], p=0,284). Transplantatsiya va transplantektomiya (oylar) o'rtasidagi vaqt davomida [18F]-NaF zonalari (p=0.586), Alizarin qizil (p=0.667) va Von soni bilan sezilarli korrelyatsiya kuzatilmadi. Kossa (p=0.459). Transplantatsiya davridagi yosh uchun [18F]-NaF maydonlari (p=0.902), Alizarin qizil (p=0.798) va Von Kossa (p) soni bilan sezilarli bogʻliqlik kuzatilmadi. =0.334). Xuddi shunday, terish davomiyligi (oylar) o'rtasida sezilarli korrelyatsiya kuzatilmadi.buyrakallograf etishmovchiligi va [18F]-NaF maydonlarining soni (p=0.481), Alizarin qizil (p=0.565) va Von Kossa (p=0.174).

Shakl 3. [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) joylari sonining Alizarin qizil rangli mikrokalsifikatsiyalari (A) va fon Kossa bo'yalgan kalsifikatsiyalari (B) bilan bog'liqligi.

Figure 4. Differences between two groups,≤5% and>5 foiz [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) izlanuvchi sirt maydoni, Alizarin qizil rangli mikrokalsifikatsiyalar (A) va fon Kossa, bo'yalgan kalsifikatsiyalar (B) soni uchun (o'rtacha, kvartil oralig'i).

Munozara

Kontseptsiyani o'rganishning ushbu isbotida insonda ex-vivo [18F]-NaF o'zlashtirilishibuyrakparenxima namunalari gistologiya tomonidan tasdiqlangan mikrokalsifikatsiyalar bilan yaxshi korrelyatsiyani ko'rsatdi. [18F]-NaF ni qabul qilish faol mikrokalsifikatsiyalar uchun Alizarin qizil bo'yalishi bilan konsolidatsiyalangan kalsifikatsiyani Von Kossa bo'yashiga nisbatan kuchliroq bog'liq bo'lib, nefrokalsinozning dastlabki bosqichlarini aniqlashda [18F]-NaF tasvirining rolini ko'rsatadi.

Taqdim etilgan namunalar donor buyraklar va eksplantatsiya qilingan buyrak allogreftlarining hol aralashmasini ifodalaydi. Bu ikki namuna turi traser bilan bog'lanish jihatidan farq qilar edi, ko'proq [18F]-NaF so'rilishi eksplantatsiya qilingan buyrak allogreft namunalarida kuzatilgan. Bu buyrak transplantatsiyasidan keyin mikrokalsifikatsiyaning ko'payishi haqida xabar beruvchi oldingi nashrlarga mos keladi5-7. assotsiatsiyasinefrokalsinozbiopsiya vaqtida va transplantatsiyadan keyin bir yil o'tgach, 258 va 149 tadan iborat ikkita buyrakning allogreft biopsiyasini o'rganishda ko'rsatilgan.buyrakmos ravishda transplantatsiya qiluvchilar8,9. Bundan tashqari, 97 nafar buyrak transplantatsiyasi qabul qiluvchisi bo'lgan uzunlamasına kogortada kaltsiy-oksalat cho'kmasi bo'lgan bemorlarda greftning omon qolish darajasi sezilarli darajada yomonroq 1-yil va 12- yil ko'rsatilgan (ya'ni, grafning omon qolish darajasi 72,5 foizga nisbatan 98,6 foiz). va 79,3 foizga nisbatan 49,7 foiz). Ko'p o'zgaruvchan logistik regressiya tahlilida kaltsiy-oksalat cho'kmalarining mavjudligi mustaqil ravishda graf yo'qolishi bilan bog'liq bo'lgan, modelda biopsiya paytida kreatinin va donor turi4. Ushbu kaskadida mikrokalsifikatsiyalarning o'ziga xos rolibuyrakallograft funktsiyasining pasayishi noaniqligicha qolmoqda. Transplantatsiyadan oldingi klinik sharoitda CaOx cho'kishi qon zardobidagi oksalatning yuqori darajasi bilan izohlanadi, bu molekula dializ paytida samarali ravishda olib tashlanmaydi4. CaPhos cho'kmalari ko'pincha giperparatiroidizm va yuqori qon zardobida kaltsiy bilan og'rigan bemorlarda kuzatiladi, chunki transplantatsiyadan oldingi va keyingi mineral almashinuvi buzilgan5. Biz gistologiya va avtoradiografiya natijalarida giperfosfatemiya, giperparatiroidizm, diabetes mellitus, transplantatsiya va transplantektomiya o'rtasidagi vaqt va buyrak allogreft etishmovchiligidan keyin dializ davomiyligi uchun hech qanday farq topmadik.

Faol mikrokalsifikatsiyalarni davolashning yangi strategiyalarini ishlab chiqish uchunnefrokalsinoz, uning (surunkali) transplantatsiya etishmovchiligi bilan bog'liq klinik ahamiyatini yanada kengroq tushunish kerak. Yuqori xavf guruhining maqsadli populyatsiyasini aniqlash bilanbuyraktransplantatsiya qiluvchilar, klinik tadqiqotlar davolash strategiyalarini o'rganish uchun mo'ljallangan bo'lishi mumkin21. Mumkin bo'lgan diqqatni osteopontinga alohida urg'u berib, endogen kalsifikatsiya inhibitörlerinin yuqori regulyatsiyasida topish mumkin.

Kasallikning yuqori bo'lishini hisobga olgan holdanefrokalsinozva uning buyrak allogreft funktsiyasi bilan bog'liqligi, mikrokalsifikatsiyalar etiologiyasini yaxshiroq tushunish kafolatlanadi. Erta nefrokalsinozda mikrokalsifikatsiyani aniqlash va miqdorini aniqlash uchun invaziv bo'lmagan va ishonchli diagnostika yondashuvi nefrokalsinozning buyrak transplantatsiyasi funktsiyasiga ta'sirini o'rganish imkonini beradi. [18F]-NaF tasviri qiziqish uyg'otadi, chunki inson va hayvonlarning qon tomirlari namunalarida [18F]-NaF so'rilishi ohaklanishning biologik faol hududlarida ko'payadi, bu hududlar mikro-kompyuter tomografiyasi orqali ko'rishdan oldin 16,17,22. Yaqinda o'tkazilgan klinik PET/KT tadkikotlarida [18F]-NaF ning qon tomirlari kalsifikatsiyasining rivojlanishi bilan bog'liqligi ko'rsatildi, bu biologik faol kalsifikatsiyalangan hududlarni aniqlash uchun [18F]-NaF dan foydalanish uchun klinik dalillarni taqdim etdi18-20. Ushbu tadqiqotdagi kuzatuvlar tomirlarni ko'rish sohasidagi oldingi topilmalarga mos keladi. [18F]-NaF ni qabul qilish va gistologiya tomonidan tasdiqlangan mikrokalsifikatsiyalar o'rtasidagi yaxshi korrelyatsiya ko'rsatildi, konsolidatsiyalangan kalsifikatsiyalar bilan korrelyatsiya aniqroq zaifroq edi.

Ta'kidlanganidek, [18F]-NaF so'rilishi va Alizarin qizil musbat mikrokalsifikatsiyalari o'rtasida birgalikda lokalizatsiya aniqlangan, [18F]-NaF qabul qilish joylari konsolidatsiyalangan kalsifikatsiyalarning Von Kossa bo'yalishi bilan birgalikda lokalizatsiya qilinmagan. Konsolidatsiyalangan kalsifikatsiyaga ega bo'lgan va [18F]-NaF so'rilmagan ohaklangan joylar, ilgari Irkle va boshqalar tomonidan tasvirlanganidek, mineralizatsiya jarayoni davom etmaydigan faol bo'lmagan kalsifikatsiya zonalari deb hisoblanishi mumkin. karotid kalsifikatsiyasining ex-vivo tadqiqotida16. Faqat qon tomir kalsifikatsiyalari uchun tasdiqlangan bo'lsa-dabuyrakparenxima kalsifikatsiyalari, u [18F]-NaF ning kalsifikatsiyaning tashqi yuzasiga bog'lash xususiyatlari va qattiq kalsifikatsiyalarda cheklangan penetratsiya bilan quvvatlanadi. Shuning uchun, [18F]-NaF qabul qilish mikrokalsifikatsiyalarda yuqori bo'ladi, katta sirt maydoni, mikrokalsifikatsiyalarga nisbatan, yuqori hajmli, lekin nisbatan kichik sirt maydoni13,16.

Kontseptsiyani o'rganishning ushbu isboti ham ba'zi cheklovlarga ega. Birinchidan, tadqiqot dizayniga xos bo'lgan natijalar kalsifikatsiyaning rivojlanishini klinik kuzatishdan mahrum bo'lgan yagona vaqt nuqtasini ifodalaydi. Ikkinchidan, kontseptsiyani o'rganishning ushbu isboti buyrak namunalarining nisbatan kam sonini o'z ichiga oladi, chunki kech transplantatsiya muvaffaqiyatsizligidan keyin transplantektomiya faqat klinik ko'rsatma va rad etilgan donor mavjudligida amalga oshiriladi.buyraklartadqiqot uchun foydalanish cheklangan23. Shuning uchun kaltsiy cho'kmalarining etiologiyasini har tomonlama tahlil qilish ushbu loyiha doirasidan tashqarida ko'rib chiqilishi kerak. Uchinchidan, natijalarning klinik tarjimasi in-vivo [18F]-NaF ning buyraklarda tarqalishi va buyrak izdoshlari klirensining ta'siri bo'yicha bilimlarning etishmasligi bilan to'sqinlik qiladi, ya'ni past maqsadli fon faolligi kalsifikatsiyani vizualizatsiya qilishni cheklashi mumkin. Ushbu muammoni hal qilish uchun [18F]-NaF PET tasvirining optimal momentini baholash kerak, ya'ni bu vaqtda [18F]-NaF haqiqatan ham chiqariladi va qolgan faollik ohaklangan joylarga bog'lanishdan kelib chiqadi. Ehtimol, bunga koronar kalsifikatsiyani baholash uchun bajarilgan uch soatdan ortiq kechiktirilgan tasvirlar bilan erishish mumkin24. Transplantatsiya qilingan bemorlarda topilgan glomerulyar filtratsiya tezligining pasayishi uzoq davom etadigan ekskretsiya fazasiga olib kelishi mumkin, bu esa izlovchi in'ektsiyasi va PET tasviri o'rtasida uzoqroq vaqtni talab qiladi, ammo joriy ko'rsatmalar [18F]-NaF izdoshining potentsial nefrotoksikligini ko'rsatmaydi11,25. Bu erda taqdim etilgan kontseptsiyani o'rganish isboti va in-vivo tasvir o'rtasidagi potentsial qadam normotermik perfuziyalangan buyraklarning ex-vivo [18F]-NaF PET tasviri yoki in-vivo [18F]-NaF microPET hayvonlarini o'rganish bo'lishi mumkin26,27. To'rtinchidan, ushbu texnikaning klinik qo'llanilishiga [18F]-NaF PET/KT protsedurasini bajarish xarajatlari va o'ziga xos radiatsiya ta'siri to'sqinlik qilishi mumkin. Biroq, yuqori sezuvchanlikka ega yangi raqamli PET kamera tizimlari skanerlash vaqtining qisqarishi va AOK qilingan faollik dozasining pastligi tufayli ikkalasini ham kamaytirishi mumkin.

Kontseptsiyani o'rganishning ushbu isbotining kuchi [18F]-NaF avtoradiografiya va gistologiya tomonidan aniqlangan mikrokalsifikatsiyalarni birma-bir batafsil taqqoslashda yotadi. Turli xil namunalardagi Te [18F]-NaF ni o'zlashtirishni qo'shimcha sozlashlarsiz solishtirish mumkin edi, chunki barcha namunalar bir xil [18F]-NaF eritmasida inkubatsiya qilingan. Bundan tashqari, ushbu tadqiqot buyrak namunalarida [18F]-NaF qabul qilish va gistologiya tomonidan tasdiqlangan mikrokalsifikatsiyalar o'rtasidagi vizual va statistik moslikni ko'rsatadigan birinchi ma'lumotlarni taqdim etadi.

Cistanche-buyrak funktsiyasi

Xulosa qilib aytganda, biz faol mikrokalsifikatsiyalarni aniqlash uchun avtoradiografiya tadqiqotida [18F]-NaF dan foydalanish bo'yicha birinchi ma'lumotlarni taqdim etamiz.nefrokalsinozkeyinbuyraktransplantatsiya. Ushbu ex-vivo [18F]-NaF kontseptsiyasini o'rganish isboti buyrak transplantatsiyasini qabul qiluvchilarda klinik [18F]-NaF PET/KTni potentsial qo'llash yo'lidagi birinchi qadamdir.

Usullari

Odambuyraknamunalar.

Buyrak to'qimasi transplantektomiyadan so'ng (n=13) va o'lgan donorlarning (n=7) tashlab yuborilgan buyragidan donorning buyragi birlashgan transplantatsiya markazlari tomonidan pasaygan taqdirda olingan. Buyrak transplantatsiyasini qabul qiluvchilar va donorlarning klinik ma'lumotlari bemorlarning tibbiy ma'lumotlaridan olingan, shu jumladan transplantektomiyadan oldin giperparatiroidizm, giperfosfatemiya va qandli diabet mavjudligi va buyrak allogreft patologiyasining Banf klassifikatsiyasidan foydalangan holda xabar qilingan buyrak allogreft namunalarining klinik patologiyasini baholash28. Tadqiqot faoliyati inson sub'ektlari ishtirokidagi tibbiy tadqiqotlar uchun Xelsinki axloqiy tamoyillari deklaratsiyasiga muvofiq amalga oshirildi va institutsional ko'rib chiqish kengashi ushbu tadqiqotni ma'qulladi (Tibbiy axloq qo'mitasi universiteti Tibbiyot markazi Groningen 2015/501). Transplantatsiya qilingan barcha oluvchilardan xabardor qilingan rozilik olindi va o'lgan donorlarning tashlab yuborilgan buyraklaridan tadqiqot maqsadlarida foydalanish uchun donorlikdan oldin rozilik berildi. Klinik va tadqiqot faoliyati "Organ savdosi va transplantatsiya turizmi bo'yicha Istanbul deklaratsiyasi"da ko'rsatilgan Istanbul deklaratsiyasining tamoyillariga mos keldi.

To'qimalardan namuna olish uchun standart operatsiya tartibi (SOP) quyidagicha edi: namunalar jarrohlik teatrida, buyrak ekstraktsiyasidan so'ng (transplantektomiya uchun) yoki tashlab yuborilgan donor kelganida olingan.buyrakbizning transplantatsiya markazimizda. Ushbu tajriba uchun ishlatiladigan namunalar 25 mm × 15 mm va 20 mm × 40 mm gacha bo'lgan o'lchamdagi kortikal va medullar buyrak to'qimalarini o'z ichiga olgan yuqori qutbning ko'ndalang tekisligida olingan. Ushbu namunalar formalin bilan mahkamlangan va kerosin bilan qoplangan. Mikrotomli nozik kesish asbobidan foydalanib, kerosin bilan o'rnatilgan uchta mkm bo'laklar qilingan. Ushbu bo'limlar yopishtiruvchi mikroskop oynasiga o'rnatilgan (TOMO, Matsunami Glass, AQSh). Ketma-ket bo'limlar, ya'ni ketma-ket qatlamlarni ochib beruvchi qo'shni bo'limlarbuyrakto'qimalar namunalari avtoradiografiya va gistologik tahlil uchun ishlatilgan. Traser inkubatsiyasi va gistologik bo'yashdan oldin bo'limlar de-parafizatsiyalangan, demineralizatsiyalangan suvda regidratlangan va vaqtincha fosfat-buferli sho'r suvda (PBS) saqlanadi.

[18F]‑NaF inkubatsiya va avtoradiografiya.

Ex-vivo eksperimenti Hop va boshqalar tomonidan oldingi tadqiqotlarda qo'llanilgan protokolga asoslangan edi. va Reijrink va boshq.22,29. Birinchi tadqiqot - bu taqqoslash sifatida KT asosidagi kalsifikatsiya ko'rsatkichi bilan operatsiya qilingan insult bilan og'rigan bemorlarning karotid plaklarida [18F]-NaF o'zlashtirilishi bo'yicha avtoradiografiya tadqiqotidir. Ikkinchi tadqiqot - bu yog 'to'qimalarining namunalarida [18F]-FDG o'zlashtirilishi bo'yicha avtoradiografiya tadqiqoti, taqqoslash sifatida ketma-ket bo'limlarning immunohistokimyosi. Har uchta ketma-ket qismdan biri xona haroratida 30 daqiqa davomida 300 ml PBS da 618 millibekkerel (MBq) konsentratsiyasida [18F]-NaF eritmasida yuvilgan. Yuvish uch marta sovuq PBS va ikki marta sovuq suv bilan chayish orqali amalga oshirildi. Namunalar ochiq havoda quritilgan va namunalar ustiga bo'sh fosforli ekran o'rnatilgan. Ekspozitsiya bir kechada, 24 soat 30 daqiqa davomida amalga oshirildi. To'qimalarning faolligini taqsimlash va intensivligini aniqlash Amersham Typhoon Biomolecular Imager (GE Healthcare, Marlborough, AQSH) yordamida fosforli ekranda amalga oshirildi.

Alizarin qizil va fon Kossa bo'yash.

Kalsifikatsiyaning dastlabki bosqichida kaltsiy to'planishini ko'rish uchun Alizarin qizil bo'yalgan. Namunalar 2% w/v Alizarin qizil (demineralizatsiyalangan suvda eritilgan) eritmasida pH 4,2 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi30. Yuvish 1:1 aseton/ksilenda 20 marta va 100 foizli ksilenda 20 marta chayish orqali amalga oshirildi. Konsolidatsiyalangan kalsifikatsiyalarda noorganik fosfat molekulalarining mavjudligini ko'rish uchun fon Kossa bo'yash amalga oshirildi. Qisqacha aytganda, namunalar 1% kumush nitrat (AgNO3) eritmasida quyosh nuri ta'sirida 1 soat davomida inkubatsiya qilindi30. Demineralizatsiyalangan suvda uch marta chayish bilan almashtirilib, inkubatsiya 5 daqiqa davomida natriy tiosulfat bilan amalga oshirildi, so'ngra yadroviy qizil rangda 3 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi.

Rasmlarni qayta ishlash va tahlil qilish.

Bo'yalgan to'qimalarning bo'laklari Hamamatsu Nanozoomer 2 bilan raqamlashtirildi.0HT (Hamamatsu Photonics, Hamamatsu, Yaponiya) va tasvirlar Aperio ImageScope dasturiy ta'minotining 12.1.0.5029 versiyasi yordamida tekshirildi (Leica Microsystems CMS GmbH, Vetslar, Germaniya). Autoradiography va miqdoriy kompyuterlashtirilgan tasvir tahlillari ImageJ dasturi, 1.51 versiyasi (NIH, Bethesda, Maryland, http://fji.sc) yordamida amalga oshirildi.

Gistologiya namunasi chegarasiga konturni kiritib, barcha gistologik tasvirlar uchun fonni olib tashlash qo'llanildi. Alizarin qizil va Von Kossa bo'yashidagi kalsifikatsiyani yarim avtomatik aniqlash ImageJ—BioVoxxel Toolbox31 yordamida amalga oshirildi. Barcha namunalar uchun chegaralar qo'llanildi va aniqlangan kalsifikatsiya joylari vizualizatsiyani optimallashtirish uchun 6 ta iteratsiya bilan kengaytirildi. Avtoradiografiya tasvirlari uchun asl gistologiya namunalari asosida aylantirish va o'lchamini o'zgartirish amalga oshirildi. Eshiklar barcha namunalar uchun qo'llanildi, natijada Irkle va boshqalar tomonidan tavsiflangan yondashuvga rioya qilgan holda, kuzatuvchini qabul qilish joylari paydo bo'ldi: tasvirlar Otsu usuli yordamida chegaralandi, keyin Gauss xiralashtirish va Li usuli bilan chegaralash amalga oshirildi16. Qo'shni gistologik tasvirlarning konturlarini, keyinchalik gistologiya va avtoradiografiya natijalarini moslashtirish orqali qo'shilgan tasvirlar olingan (1-rasm). Kalsifikatsiya va kuzatuvchi maydonining pikselga asoslangan miqdorini aniqlash (namuna maydonining foizi sifatida) ImageJ - Analyze Particles asbobi yordamida amalga oshirildi.

Cistanche-buyrak kasalligi belgilari

Statistik tahlillar.

Statistik maʼlumotlar Ijtimoiy fanlar uchun Statistik paketning 23-versiyasi (IBM Corporation, Armonk NY, AQSH), grafiklar Windows uchun GraphPad Prism 7.02 (Graph Pad Sofware, San-Diego, AQSH) yordamida tuzilgan va raqamlar Adobe Illustrator CS6 yordamida ishlab chiqarilgan. (Adobe Systems, San-Xose, AQSh). Natijalar egri ma'lumotlar uchun median va interquartile diapazon (IQR) sifatida va ma'lumotlar kategorik bo'lganda chastota va foiz sifatida taqdim etildi. Biz guruhlarni Mann-Whitney U testlaridan foydalangan holda taqqosladik (ikki dumli pvalue<0.05=signifcant) and="" correlation="" analyses="" were="" performed="" using="" the="" spearman="" rank="" test="" (two-tailed="" p-value="" and="" spearman's="" rho).="" true="" and="" false-positive="" rates="" were="" based="" on="" the="" pixel-based="" quantification="" of="" tracer="" and="" histology="" findings.="" to="" assess="" the="" interobserver="" reproducibility="" for="" semi-automated="" detection="" of="" calcifications,="" the="" intraclass="" correlation="" coefficient="" (icc)="" with="" 95%="" confidence="" intervals="" (ci)="" were="">

Ma'lumotlar mavjudligi

O'lgan donor buyragi vabuyrakTransplantatsiyani qabul qiluvchining [18F]-natriy ftorid ([18F]-NaF) oʻzlashtirilishining avtoradiografiyasi tasvirlari, mikrokalsifikatsiyalarning Alizarin qizil boʻyalishi bilan [18F]-NaF oʻzlashtirilishi va kalsifikatsiyalarning Von Kossa boʻyalgan tasvirlari Qoʻshimcha maʼlumot sifatida onlaynda mavjud. Barcha qo'shimcha ma'lumotlar Groningen universiteti tibbiyot markazining IRB qoidalariga muvofiq so'rov bo'yicha taqdim etiladi.

Ma'lumotnomalar

1. Gvinner, W. va boshqalar. Protokol biopsiyalari bilan aniqlangan buyrak allogreftlarining erta kalsifikatsiyasi: sabablari va klinik oqibatlari. Am. J. Transplantatsiya. 5, 1934–1941 (2005).

2. Shavit, L., Jaeger, P. & Unwin, RJ nimanefrokalsinoz?. Buyrak Int. 88, 35–43 (2015).

3. Paloian, NJ, Leaf, EM & Giachelli, CM Osteopontin yuqori fosfat ta'siridan himoya qiladi.nefrokalsinozva qon tomirlarining kalsifikatsiyasi. Buyrak Int. 89, 1027–1036 (2016).

4. Pinheiro, HS, Camara, NOS, Osaki, KS, De Moura, LAR & Pacheco-Silva, A. Kaltsiy oksalat cho'kmasining erta mavjudligi.buyrakgraf biopsiyalari uzoq muddatli greft omon qolishining yomonligi bilan bog'liq. Am. J. Transplantatsiya. 5, 323–329 (2005).

5. Evenepoel, P. va boshqalar. Buyrak allogreftlarida kaltsiy fosfat konlarining lokalizatsiyasi, etiologiyasi va ta'siri. Am. J. Transplantatsiya. 9, 2470–2478 (2009).

6. Nankivell, BJ va boshqalar. Surunkali allograft nefropatiyaning tabiiy tarixi. N. Engl. J. Med. 349, 2326–2333 (2003).

7. Schwarz, A. va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasidan keyin surunkali allograft nefropatiya uchun xavf omillari: protokol biopsiya tadqiqoti. Buyrak Int.67, 341-348 (2005).

8. Bagnasco, SM va boshqalar. Mahalliy va transplantatsiya qilingan buyraklar biopsiyalarida oksalat konlari va transplantatsiya funktsiyasiga ta'siri. Nefrol. Tering. Transplantatsiya. 24, 1319–1325 (2009).

9. Snijders, MLH, Hesselink, DA, Clahsen-Van Groningen, MC & Roodnat, JI Transplantatsiyadan keyin 3 oy ichida buyrak allograft biopsiyalarida oksalat yotqizilishi allograft disfunktsiyasi bilan bog'liq. PLoS ONE 14, e0214940 (2019).

10. Benjamins, S., Glaudemans, AWJM, Berger, SP, Start, RHJA & Pol, RA. Biz buyrak transplantatsiyasidan oldin va keyin tasvirlashni unutdikmi? Yevro. Radiol. 28, 3263–3267 (2018).

11. Beheshti, M. va boshqalar. 18F-NaF PET/CT: Suyakni tasvirlash uchun EANM protseduralari bo'yicha ko'rsatmalar. Yevro. J. Nucl. Med. Mol. Tasvir 42, 1767–1777 (2015).

12. Dweck, MR va boshqalar. Koronar arterial 18F-natriy ftoridni qabul qilish. J. Am. Koll. Kardiol. 59, 1539–1548 (2012).

13. Dweck, MR va boshqalar. 18F-natriy ftoridni qabul qilish aorta stenozi bo'lgan bemorlarda faol kalsifikatsiya va kasallikning rivojlanishining belgisidir. Circ. Kardiovask. Tasvir 7, 371–378 (2014).

14. Derlin, T. va boshqalar. Aterosklerotik blyashka ko'rish uchun 18F-natriy ftoridli PET/KT ning maqsadga muvofiqligi. J. Nucl. Med. 51, 862–865 (2010).

15. Bucerius, J., Dijkgraaf, I., Mottaghy, FM & Schurgers, LJ. 18F-fluorodeoksiglyukozadan tashqari zaif aterosklerotik plaklarning diagnostikasi va aralashuvi uchun maqsadli identifikatsiya: ufqni ko'tarishda pozitron emissiya tomografiyasi. Yevro. J. Nucl. Med. Mol. Tasvir 46, 251–265 (2019).

16. Irkle, A. va boshqalar. 18F-natriy ftorid pozitron emissiya tomografiyasi orqali faol tomir mikrokalsifikatsiyasini aniqlash. Nat. Kommunal 6, 7495 (2015).

17. Creager, MD va boshqalar. 18 F-ftorid signalini kuchaytirish pozitron emissiya tomografiyasi / kompyuter tomografiyasi tasvirlarida aterosklerotik blyashka beqarorligi bilan bog'liq mikrokalsifikatsiyalarni aniqlaydi. Circ. Kardiovask. Tasvir 12, e007835 (2019).18. den Harder, AM va boshqalar. 18F-natriy ftoridli pozitron emissiya tomografiyasida qon tomirlarini qabul qilish: qon tomir kalsifikatsiyasining kashshofi? J. Nucl. Kardiol. (2020).

19. Derlin, T. va boshqalar. 18F-FDG PET tomonidan baholangan yallig'lanishning korrelyatsiyasi, 18F-ftorid PET tomonidan baholangan faol mineral cho'kma va aterosklerotik blyashkadagi qon tomirlarining kalsifikatsiyasi: dual-tracer PET/CT tadqiqoti. J. Nucl. Med. 52, 1020–1027 (2011).

20. Kitagava, T. va boshqalar. Kompyuter tomografiyasi bilan birgalikda yuqori xavfli koronar arteriya kasalligini aniqlashda 18F-natriy ftorid pozitron emissiya tomografiyasining prognozli qiymati. J. Am. Yurak dots. 7, e010224 (2018).

21. Bäck, M. va boshqalar. Qon tomir kalsifikatsiyasining oldini olishda endogen kalsifikatsiya inhibitörleri: EuroSofCalcNet XARAJAT harakatidan konsensus bayonoti. Old. Kardiovask. Med. 5, (2019).

22. Hop, H. va boshqalar. 18F-natriy ftoridli pozitron emissiya tomografiyasi inson karotid plaklarida aybdor va aybdor bo'lmagan mikrokalsifikatsiyalarni baholadi. J. Nucl. Kardiol. 26, 1064–1075 (2019).

23. Jonston, O., Rose, C., Landsberg, D., Gourlay, WA & Gill, Transplantatsiya muvaffaqiyatsizligidan keyin JS Nefrektomiya: joriy amaliyot va natijalar. Am. J. Transplantatsiya. 7, 1961–1967 (2007).

24. Kwiecinski, J. va boshqalar. Uch soatlik kechiktirilgan ko'rish koronar 18F-natriy ftorid PETni baholashni yaxshilaydi. J. Nucl. Med. 60, 530–535 (2019).

25. Bucerius, J. va boshqalar. Evropa yadroviy tibbiyot assotsiatsiyasining (EANM) yurak-qon tomir qo'mitasining aterosklerozning PET tasviri bo'yicha pozitsiyasi. Yevro. J. Nucl. Med. Mol. Tasvir 43, 780–792 (2016).

26. Buchs, J.-B. va boshqalar. DCD cho'chqalarining buyraklari ex vivo hayotiyligini baholash uchun MRI tomonidan tahlil qilingan. Transplantatsiya 97, 148-153 (2014).

27. Hovuz, M. va boshqalar. Mezenximal stroma hujayralarini cho'chqaga quyishbuyraklarNormotermik mashina perfuziyasi paytida: buzilmagan MSClarni kuzatish va glomeruliyalarda lokalizatsiya qilish mumkin. Int. J. Mol. Sci. 20, 3607 (2019 yil).

28. Roufosse, C. va boshqalar. Buyrak allogreft patologiyasining Banf tasnifi bo'yicha 2018 yilgi ma'lumotnoma. Transplantatsiya 102, 1795–1814 (2018).

29. Reijrink, M. va boshqalar. [18F] Yog 'to'qimalarida FDG ning o'zlashtirilishi 2-toifa diabet mellitusda yallig'lanish bilan bog'liq emas. Mol. Imaging Biol.23, 117–126 (2020).

30. Shao, J.-S. va boshqalar. Qon tomirlarining kalsifikatsiyasi va aorta fbrozisi diabetik arteriosklerozda osteopontinning ikki funktsional roli. Arter. TrombVascBiol 31, 1821–1833 (2011).

31. Brocher, J. Ikkita yangi gistogramma cheklovchi binarizatsiya algoritmlarini sifat va miqdoriy baholash. Int. J. Tasvir jarayoni. 8, 30–48 (2014).

Minnatdorchilik

Ushbu tadqiqot loyihasi De Cock-Hadders Foundation granti (loyiha kodi 2018-03) tomonidan qo'llab-quvvatlanadi.

Muallif hissalari

SB loyihalash, sotib olish va tahlil qilishda o'z hissasini qo'shdi va qo'lyozmani tayyorladi. IFA, MR va MLCB loyihalashtirish, sotib olish va tahlil qilishda o'z hissalarini qo'shdilar va qo'lyozmani tubdan qayta ko'rib chiqdilar. SPB, CM va MHdB kontseptsiyaga hissa qo'shdilar va qo'lyozmani tubdan qayta ko'rib chiqdilar. JLH, RHJAS va RAP kontseptsiya, dizayn va tahlilga hissa qo'shdi va qo'lyozmani tubdan qayta ko'rib chiqdi.

Raqobatdosh manfaatlar

Mualliflar hech qanday raqobatdosh manfaatlar yo'qligini e'lon qiladilar.