Referat
Sinergik inhibitariy ta'sirini o'rganishRojdibocollaTeri pigmentatsiyasida fignetganoid glikozidlari va gabridin (li) va glabridin (li), glaga nisbatan maqbul nisbati oldindan skriptlanganin vitrotyrosinase activity inhibition assays, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging, and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS⁺) radical scavenging experiments. Keyingi uchta baholash uchta uyali model yordamida o'tkazildi:

UBB-ASOSIY B1F10 melanogenez modeli Melanin sintezi inhibezini tirozinaz faolligi va melanin tarkibi orqali baholash uchun.

Lipopoliyacaride (LPS) - yalbichi {{{-6 {{-6 {{-6 {{{}}} {-6} va o'sma nekroz faktori (TNF -) bostirish uchun yallig'lanishga qarshi ta'sir modeli;

Asta (2,2'-Azobis ({{{{2-}}}}}}}}}}}}}} Amidinoproopeide) Gacat oksidiativ stress modelini superoksid va katalozni oshirish (mushuk) takomillashtirish.

Ushbu modellar orqali optimal fanlar / gla massasi nisbati aniqlandi. Natijalar 1: 1, 5: 1 va 10: 1 bo'lgan fosfaz-bufalli sho'rlangan sho'rlangan sho'rxonada, phbe-ni 6,8) shuni ko'rsatdiki. Tirosinaz inhibitsion stavkalari 94,37%, 92,93% va mos ravishda 88,06% tashkil etdi; DPPPhm radikal kadravering 89,44%, 88,72% va 88,10% ni tashkil etdi; Abts⁺ Scawenger stavkalari 100,13%, 100,01% va 99,87% ni tashkil etdi. DMEM / mlda dmem, fgs / gla (1: 1, 5: 1, 1). PHGS / GLA (1: 1) dmem echimini ko'rsatdiyuqori tirozinaz inhibitsiyasi(23,80% qoldiq faoliyati), sezilarli darajadaMelanin tarkibini kamaytirdi(30,90%) va Il -6}} -6} {tnf - tnf-relektsiyasi va SOD / mushuk faoliyatini kuchaytirishda boshqa nisbatlar va monfoteres. Fgs va laganlarning sinergik kombinatiMelanogenezni inhibe qilish orqali qarindosh-kin giperpigmentatsiyayallig'lanishni kamaytirish vaAntioksidant quvvatini oshirish.

Kalit so'zlar
Qadimiycho'lkachi Feniletganoid glikozidlari; grabridin; sinergik ta'sir; antikodarogenez; Antioksidant; yallig'lanishga qarshi; Farmatsevtika xom ashyosi

 

 

 

Qadimiycho'lkachi bilan ekstraktiYuqori darajadagiterini oqlash uchun feniletganoid glikozidlari

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun bizga WhatsApp

 

Eksperimental bo'lim

1.1 Materiallar, reakentlar va asboblar

Sichqoncha melanoma hujayralariB16F10 (Katalog yo'q

Inson o'lmas keratinotsitlarHacat (yo'q: yo'q. Icell-H066), iCell Bioscy Inc., Shanxay, Xitoy.

Qadiiy fenilalatanoid glikozidlari (fgs)vagrabridin (li), Shaanxi tichingjian biologik kimyoviy texnologiya Co., Ltd.

Tirozinaz, Hefei basf Biotexnologiya Co., Ltd.

Arbutin (Arb)vaL-tirozin, Aladdin biokimyoviy texnologiya Co., Ltd., Shanxay, Xitoy.

1, 1- -2- pikrylhydrazil (DPPH), Tokioda kimyo sanoat CO., Yaponiya.

2,2'-Azino-BIS ({{{{4} -6- ERMAMMMYATNI (ABTS), Shanxay Yuane Bio-Technology Co., LTD.

Askorbin kislotasi (VC), Tianjin dumao kimyoviy reagent fabrikasi.

Kaliy musodaravaanxidrous etanol, Tyyjin zhiyuan kimyoviy reagent co., ltd.

Natriy gidroksid, Chengdu Huayi farmatsevtika Axpisori Co., LTD.

Dipotassium fosfat, Shanxay Sanpu Kodir Ko., Ltd.

L-dopa, Shanxay Yuane Bio-Technology Co., LTD.

Hujayra hisoblash KIT -8 (CCK8), Pekin Sinootvitrogh bioterologiya Co., Ltd.

Triton x -100, DIMETHIL SUULFOXI (DMSO), 2,2'-Azobis ({{{}} vinchi'ypropionamidin) Dihidroxlorid (AAP)vaLipopolycaride (LPS), Pekin Solarbio fan va Texnologiya Co., Ltd.

DMEM yuqori glyukoza vositasi, Termo Fisher Ilmiy (Xitoy).

Xomilaning baquvvat zardobi (FBS), Sigma-Aldrich (Shanxay) savdo CO., LTD.

Penitsillin-streptomitsin eritmasi, Shanxay dasher bio-texnologiya Co., Ltd.

Inson il -6 ELISI KIT, Inson TNFF - ELISI KITvaOdam mushuklari eli to'plam, Wuxan Wext Biotech Co, LTD.

Jami superoksid (SOD) Assay to'plam, Nanjing Jiancheng bioionering instituti. Barcha reaktivlar tahliliy bahoga ega edi.

Ishlatilgan asboblar:

Multaqoni to'liq to'lqin uzunligi mikroplate o'quvchivaHerakell 371 CO2 inkubator, Termo Fisher Ilmiy, AQSh.

Kq -200 vdb ultrasonik tozalagich, Kunshan Ultrac Introzlar Co., Ltd.

DVKW-D -2 raqamli termostatik suv hammom, Pekin Yongguangm Tibbiy asbob-fabrika fabrikasi.

Dhg -9246 Elektr termnostatik portlash pech, Shanxay jinghong tajriba uskunalari Co., Ltd.

Kn4006b UVB ultrabinafyali nurlanish vositasi(Nurishatsiyaning intensivligi: 8 MVt / Cm²), Xuzhou Kenuo Tibbiy asbobsozlik asboblari Co., LTD.

1.2 usullari

Birinchidan, fgrs va gla fosfat-bufalli sho'rlangan sho'rmatdan (PH =6}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}{0} {4}} 0 0 {{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{0} {{{{{{0} 001} {{{0.4, 0,1, 1,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 0,8, 1,0 g / l. Keyin, fg va laganlar nisbati bilan aralashganm (fgs): m ({0}}=40=40=40=40}: 1, 20: 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1: 1, FGS / lagan echimlarini umumiy kontsentratsiya bilan tayyorlash0.4 g/L, xuddi shunday belgilanadiFgs / gla (40: 1) ~ PHGS / GLA (1:40)mos ravishda.

 

1.3 Biokimyoviy tajribalar

1.3.1 Tirosinaza faolligi inhibe

A 96- quduqli plastinkada,Sinov namunasi echimining 50 mkl, 50 mkt pspa (ph =6. 8)va50 mkl l-tirozin eritmasi (1 g / l)ketma-ket qo'shildi. Plastinka 10 daqiqa davomida 37 daraja suv hammomida inkubatsiya qilingan. Keyin5 0 mkl tirozinaz eritmasi (0,4 g / l) 200 u / ml ga teng bo'lgan 0,4 g / lYana 10 daqiqa davomida 37 daraja suv hammomida yana 37 daraja suv hammomida yana kirib bordi.

Arbutin (Arb)ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan vaPH (pH =6. 8)bo'sh nazorat sifatida ishlatilgan.

Yechimni yutish490 nmMikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi va in vitro tirosinaze inhibelash stavkasi (%) tenglama (1) yordamida hisoblab chiqilgan.

 

 

Formulada:

A _ reaktsiyaL-Tirozin eritmasi, pbs va tirozinaza echimini o'z ichiga olgan namunali eritmani singdirish.

A _ Reaksiya boshqarmasil-tirozin eritmasida va tirosinaza echimisiz bo'lgan namunali eritmani singdirish.

A _ bo'shNamunasiz l-tirozin eritmasi, pbs va tirozinaza eritmasi bo'lgan eritmani singdirish.

A _ Bo'sh nazoratL-tirozin eritmasi va funtni namuna va tirozinaza echimisiz o'z ichiga olgan eritmani singdirish.

1.3.2 DPPPH Free Radikal Scavencing faoliyatini aniqlash

Birinchidan, {0}}}}}. 0197 g dphmning 250 ml anhezli etanolida kontsentratsiya bilan 250 ml anfidli etanolda aniqlangan va eritilgan0. 2 MMOL / L.

Keyin, fg va lagan 50% etanolda fgs va glalarning ommaviy konsentratsiyalari bilan etanol echimlarini tayyorlash uchun eritib yuborilgan{0} {4}} 0 1, {8}} 1, 0,1, 0,4, 0,8, 1,6, 0,8, 1,6, 0,8, 1,6 va L. VC ning Etanolol echimlari xuddi shu tarzda tayyorlandi.

Keyinchalik, fgs va glaning etanol echimi nisbati bilan aralashtirildim (fgs eritmasi): m ({0}}}: 1, 20: 1, 1, 1, 1: 1, 1: 0, 1: 0, 1:20, 1: 0, 1:20,Baqqol bo'lgan turli xil nisbatlarga ega bo'lgan fgs / gli 9 etanol eritmasini olishFgs / gla (40: 1) ~ PHGS / GLA (1:40).

Va nihoyat,Har bir namunaviy echimning 100 mklva100 mkl dff ish eritmasia {{0} plastinkaga qo'shildi, teng ravishda aralashtirildi va 30 daqiqa davomida qorong'ida xona haroratida inkubatsiya qilindi. Yutish517 nmmikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi. VC ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan va har bir tajriba uch marta takrorlangan.

DPPP Free Radikal Squavening stavkasi (%) tenglama (2) yordamida hisoblab chiqilgan.

 

Formulada:

A1namunaviy echim + DPPPH ishchi eritmasi.

A250% etanol + DPPPH ish eritmasi.

A3Namunaviy eritma + 50% etanol.

 

1.3.3 Abts rentalli SAVAVENGENT faoliyatini aniqlash

Birinchidan,1 g (1.82 mmol) abtsYakuniy konsentratsiya bilan Abds ishchi echimini tayyorlash uchun shiddatli suvda eriydi7.4 MMOL / L. 0. 5 g kaliyning 5 g kaliykaliyning oxirgi konsentratsiyasi bilan kaliy pul ishlaydigan eritma tayyorlash uchun deikatsiyalangan suvda eriydi2.6 MMOL / L. Abts ishchi eritmasi va kaliyning teng hajmi va salbiy ishchi eritma aralashmasi aralashdi va Abts⁺ ishchi eritmasini tayyorlash uchun 12 soat davomida qorong'ilikda reaktsiyaga kirishdi.

Keyin, fgs, gla va VC-ning, shuningdek, koziklar bilan fgs / gla etanol echimlarini Ethanol echimlariFgs / gla (40: 1) ~ PHGS / GLA (1:40), 1.3.2 bo'limida tasvirlangan usul bo'yicha tayyorlangan.

Va nihoyat,Har bir namunaviy echimning 40 mklva160 mkl Abts⁺ ishchi eritmasiA 96- quduq plastinkasiga qo'shilib, bir tekis aralashtirilib, xona haroratida xona haroratida 6 daqiqagacha munosabatda bo'lishdi. Yechimni yutish734 nmmikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi.

Abts rentgen Squavening stavkasi (%) tenglama (3) yordamida hisoblab chiqilgan.

 

 

Formulada:

A1namunaviy eritma + Abts⁺ ishchi eritmasi.

A2Dialangan suv + abts ishorasi echimini yutishmi.

A3namunaviy echim êilichli suvni yutish.

1.4 hujayrali tajribalar

1.4.1 uyali madaniyat

B16F10 va Hacat hujayralarini jonlantirgandan so'ng, ular Dmitem yuqori glyukoza vositasiga (homila boovi 10 foizi va penitsillin-streptomitsin eritmasi) va madaniyatli37 daraja, 5% CO2va70% namlik24 soat davomida inkubatorda. Hujayralarning o'sishi holati mikroskop ostida kuzatildi, shuningdek, kam o'zgartirishlar yoki o'tishi kerak bo'lganda, kameraning o'sish holatiga qarab amalga oshirildi.

1.4.2 Eksperimental guruhlash

B16F10-fazali B16F10 va Gacat hujayralari {{3} ga mahkamlangan, hujayra yopishishga ruxsat berish uchun 24 soat davomida tegishli hujayra zichligi va madaniyatli plitalar ichiga ega. DMEM o'rtacha kontsentratsiyalar bilan namunaviy echimlar tayyorlandi.

Eksperimental guruhlar quyidagicha:

Oddiy guruh

Model Group

PHGS past dozali guruh(125 UG / ml)

Fglar o'rta dozasi guruhi(250 UG / ml)

Fglar yuqori dozali guruh(500 UG / ml)

Gla past dozali guruh(6.25 UG / ml)

Gla o'rta dozasi guruhi(12.5 UG / ml)

Gla yuqori dozali guruh(25 UG / ml)

Fgs / Gla (1: 1) guruh(25 UG / ml)

Fgs / Gla (5: 1) guruh

Fgs / Gla (10: 1) guruh

UchunB16F10 hujayralarida UVB-Intmentatsiya modeli, namunaviy guruh hujayralari bilan davolandi30 mkl pl (pH =7. 4)va Uvb ultrabinafsha nurlanish vositasi ostida nurlanishQurilmadan 3 sm pastgauchun110 soniya. Eksperimental guruhlar bilan birga100 mkl turli xil namunaviy echimlarQo'shishdan oldin 1 soat davomida30 mkl possva UVB qurilmasi ostida 110 soniya davomida nurlantiradi. Oddiy guruh yuqori glyukoza Dmem O'rta bilan doimiy ravishda davolandi va bo'sh guruhda hujayralar mavjud emas, lekin teng miqdordagi o'rtada almashtirildi.

UchunGACAT hujayralarida yallig'lanish modeli, namunaviy guruh bilan davolandi20 UG / ml lps pbs echimi24 soat davomida. Eksperimental guruhlar bilan birga100 mkl turli xil namunaviy echimlarQo'shishdan oldin 24 soat davomida20 UG / ml lps eritmasiyana 24 soat davomida. Oddiy guruh yuqori glyukoza Dmem O'rta bilan doimiy ravishda davolandi va bo'sh guruhda hujayralar mavjud emas, lekin teng miqdordagi o'rtada almashtirildi.

UchunAAP-intrdativ stress modeli Gacat hujayralarida, namunaviy guruh bilan davolandi25 mmol / l aaf eritmasi24 soat davomida. Eksperimental guruhlar bilan birga100 mkl turli xil namunaviy echimlarQo'shishdan oldin 24 soat davomida25 mmol / l aaf eritmasiyana 24 soat davomida. Oddiy guruh yuqori glyukoza Dmem O'rta bilan doimiy ravishda davolandi va bo'sh guruhda hujayralar mavjud emas, lekin teng miqdordagi o'rtada almashtirildi.

Har bir guruh bilan o'rnatildi3 ta ko'paytirish quduqlariva madaniyatli37 daraja, 5% CO2va70% namlikinkubatorda.

1.4.3 sitotoksiklik buzilishi

Sitotoksiklik yordamida o'lchandiCCK8 usuli. Logarifmik-fazali B16F10 va Hacat hujayralari hazm qilingan0. 25% tripsin3 daqiqa davomida. Ovqat hazm qilishdan keyin vosita bilan to'xtatilgandan so'ng, hujayralar zichligi bilan hujayralarni to'xtatib turish uchun bir necha bor quvurga uchragan1 × 10 dona hujayralar / ml. Hujayralar 96- plitalarga teng ravishda ekilgan ediHar bir quduq uchun 100 mktPeriferik quduqlarga pbalar qo'shildi. Hujayra sekisligidan so'ng, turli xil eritmalarning turli konsentratsiyasi qo'shildiBir guruhda 3 ta targ'ibotva hujayralar madaniy qismida37 daraja, 5% CO2va70% namlikuchun24, 48 va 72 soatvositani tashlab yuborishdan oldin.

Barcha guruhlar uchun100 mkl CCK8 DMM yuqori glyukoza vositasi (CCK8)qo'shildi va inkubatsiya qilindi60 daqiqa. Yechimni yutish450 nmmikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi.

(%) Tenglama yordamida hisoblangan (%) hisoblangan.

 

Formulada:

A _ muomala qilinganYaxshilangan hujayralar, CCK8 echimi va namunaviy eritmani o'z ichiga oladi.

A _ bo'shO'rta va CCK8 echimini o'z ichiga oladigan, ammo hujayralarsiz.

A0Yaxshi hujayralar va CCK8 echimini o'z ichiga oladigan, ammo namunaviy echimsiz.

1.4.4 Tirosinaza faoliyati

L-Dopa usuli tirozinaz faoliyatini o'lchash uchun ishlatilgan. Hujayralarni davolashdan keyin48 soat1.4.2 bo'limida aytilganidek, supernatant bekor qilindi va quduqlar ikki marta phbalar bilan yuvindi (ph =7. 4). Keyin50 mkl 1% triton x -100 echimhar bir quduqga qo'shildi va darhol a -80 daraja muzlatgichga joylashtirildi30 daqiqa. Lizizni qo'zg'atish uchun hujayralar xona haroratida edik.

Oldindan isinishdan keyin37 darajauchun5 daqiqa, 10 mkl 10 MMOL / L L-DOPA echimihar bir quduqqa qo'shildi va inkubatsiya qilindi37 daraja, 5% CO2 va 70% namlikuchun1 soat. Yutish475 nmmikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi. Har bir tajriba takrorlandiuch martaTirosinaza faoliyati (%) tenglama (5) yordamida hisoblab chiqilgan.

Formulada:

A _ eksperimentUVBning nurlanishida quduqni o'z ichiga olgan hujayralar va namuna yechimini yutish.

A _ normalYaxshi hujayralarni o'z ichiga olgan hujayralar va namunalarni nurlanishsiz.

A _ bo'shO'rta tarkibidagi, ammo hujayralarsiz quduqni yutish.

 

1.4.5 Melanin tarkibi o'lchash

Naohat liziz usuli melanin tarkibini o'lchash uchun ishlatilgan. Hujayralarni davolashdan keyin72 soat1.4.2 bo'limida aytilganidek, supernatant bekor qilindi va quduqlar ikki marta pbs bilan yuvildi.100% NOOH suvli eritmasi 10% dmso (1 ta mol / l)har bir quduqqa qo'shildi va plastinka a ga joylashtirildi90 daraja pechuchun1 soat. Yutish490 nmmikroplatat o'quvchi yordamida o'lchandi. Har bir tajriba takrorlandiuch martava melanin tarkibi (%) tenglama (5) yordamida hisoblab chiqilgan.

 

1.5 Yallig'lanish omillarini o'lchash va oksidlovchi stress ko'rsatkichlari

Hujayralarni davolashdan keyin48 soat1.4.2 bo'limida aytilganidek,Havasat hujayralariHar bir guruhdan keng hujayra kazıyıcı yordamida to'planib, g'ayritabiiy va g'ayritabiiy yig'ildi. Il -6 -6 -6 -6 -6 -6 -6 va tnf - Elisa to'plamlarining ko'rsatmalariga binoan o'lchandi.

Hujayralarni davolashdan keyin48 soatGacat hujayralari hujayra lizizini va sanpazlik va sanpazlik qilish uchun bir necha marta muzlatib qo'yadigan oynali kazıyıcı yordamida to'plangan12, 000 10 daqiqa davomida 10 daqiqa davomida. Supernatant yig'ildi va faoliyatiSodva konsentratsiyalarMushukElisa to'plam ko'rsatmalaridan foydalanib o'lchandi.

 

1.6 Kombinatlik indeksi o'lchovini o'lchash

BuKombinatsiya indeksi (CI) usuli[20] Tirosinaz faolligi va antioksiklashda sinergik ta'sir ko'rsatadigan fgs va bla qilingan deb baholash uchun foydalanilgan. Kombinatsiya indeksi tenglama (6) yordamida hisoblab chiqilgan.

 

Formulada:

D1vaD2Ikki giyohvand moddalarning mos konsentratsiyasini (g / l) taqdim etish kerakX% Faoliyat.

DxFaqatgina erishish uchun ishlatilganda har bir alohida moddaning kontsentratsiyasini (g / l) ifodalaydiX% Faoliyat.

BuKompozitsiya dasturihisob-kitoblar uchun foydalanilgan:

CI> 1antagonistik ta'sir ko'rsatadi.

CI=1qo'shimcha ta'sir ko'rsatadi.

CI <1sinergik ta'sir ko'rsatadi.

 

1.7 Ma'lumotni tahlil qilish

Barcha ma'lumotlar sifatida ifoda etilgan"o'rtacha ± standart og'ish (x̄ ± s)"va munozaralar o'rtacha qiymatlarga asoslangan edi.

Statistik tahlil yordamida amalga oshirildiGrafpac Prizis 9.5. 0. Bir nechta guruhlar orasida taqqoslash uchun bir tomonlama Anova ishlatiladi. AP-qiymati <{1}}. 05statistik ahamiyatga ega deb topildi.