Annotatsiya:Qarish davrida yuzaga keladigan sarkopeniya skelet mushaklari massasi va funktsiyasining asta-sekin yo'qolishi bilan tavsiflanadi, buning natijasida jismoniy qobiliyatlarning funktsional pasayishi kuzatiladi. Sarkopeniyaning paydo bo'lishiga bir qancha omillar, jumladan regenerativ qobiliyatning pasayishi, surunkali past darajadagi yallig'lanish, mitoxondriyal disfunktsiya va oksidlovchi stressning kuchayishi katabolik yo'llarning faollashishiga olib keladi. Jismoniy faollik va etarli miqdorda protein iste'mol qilish qarish davrida mushaklarning anabolik reaktsiyasini yaxshilashda foydali ta'sir ko'rsatish orqali sarkopeniya kasalligi va zo'ravonligini kamaytirishga qodir samarali strategiya hisoblanadi. Taurin muhim bo'lmagan aminokislota bo'lib, sutemizuvchilar to'qimalarida va ayniqsa, biologik jarayonlarni tartibga solishda ishtirok etadigan skelet mushaklarida yuqori darajada ifodalanadi va antioksidant va yallig'lanishga qarshi omil sifatida ishlaydi. Bu erda biz eski sichqonlarda taurinni qo'llash skelet mushaklaridagi qarishning fiziopatologik ta'siriga qarshi turishini baholadik. Biz shikastlangan mushaklarda taurin yallig'lanish reaktsiyasini pasaytirib, mushak tolasi yaxlitligini saqlab, regenerativ jarayonni kuchaytirishini ko'rsatdik. Bundan tashqari, taurin antioksidant molekula sifatida harakat qilib, to'g'ri hujayrali oksidlanish-qaytarilish muvozanatini saqlab, keksa mushaklarda ROS ishlab chiqarishni susaytiradi. Taurinning skelet mushaklari gomeostazasiga foydali ta'siri uchun javob beradigan molekulyar mexanizmlarni yaxshiroq tushuntirish uchun qo'shimcha tadqiqotlar talab qilinsa-da, bu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, taurinni qo'llash samarali regenerativ jarayon va sarkopeniya boshlanishi bilan bog'liq katabolik yo'llarni susaytirishi mumkin bo'lgan mikro muhitni yaxshilaydi.

Sistanx glikozidi, shuningdek, yurak va jigar to'qimalarida SOD faolligini oshirishi va har bir to'qimalarda lipofusin va MDA tarkibini sezilarli darajada kamaytirishi, turli xil reaktiv kislorod radikallarini (OH-, H₂O₂ va boshqalar) samarali tozalash va DNKning shikastlanishidan himoya qilishi mumkin. OH-radikallar tomonidan. Cistanche feniletanoid glikozidlari erkin radikallarni kuchli tozalash qobiliyatiga ega, S vitaminiga qaraganda yuqori darajada kamaytirish qobiliyatiga ega, sperma suspenziyasida SOD faolligini yaxshilaydi, MDA tarkibini kamaytiradi va sperma membranasi funktsiyasiga ma'lum bir himoya ta'siriga ega. Cistanche polisaxaridlari D-galaktoza sabab bo'lgan eksperimental qarigan sichqonlarning eritrotsitlari va o'pka to'qimalarida SOD va GSH-Px faolligini oshirishi, shuningdek o'pka va plazmadagi MDA va kollagen miqdorini kamaytirishi va elastin miqdorini oshirishi mumkin. DPPHga yaxshi tozalash ta'siri, qarigan sichqonlarda gipoksiya vaqtini uzaytirish, sarumdagi SOD faolligini yaxshilash va eksperimental qarigan sichqonlarda o'pkaning fiziologik degeneratsiyasini kechiktirish Hujayra morfologik degeneratsiyasi bilan tajribalar Cistanche yaxshi antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi. va terining qarish kasalliklarini oldini olish va davolash uchun dori bo'lish potentsialiga ega. Shu bilan birga, Cistanchedagi echinacoside DPPH erkin radikallarini tozalashning muhim qobiliyatiga ega va reaktiv kislorod turlarini tozalash va erkin radikallar keltirib chiqaradigan kollagen degradatsiyasini oldini olish qobiliyatiga ega, shuningdek, timin erkin radikal anionining shikastlanishiga yaxshi ta'sir ko'rsatadi.

Cistanche Tubulosa-ni bosing

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

1.Kirish

Qarish a'zolar va to'qimalarning asosiy fiziologik va biokimyoviy funktsiyalarining bosqichma-bosqich buzilishi bilan tavsiflanadi va ko'pincha skelet mushaklari massasi va kuchining progressiv yo'qolishi bilan bog'liq bo'lib, sarkopeniya deb ataladigan holat [1]. Sarkopeniya uchun mas'ul bo'lgan mexanizmlar to'liq tushunilmagan; Shunga qaramay, bu, ehtimol, buzilgan regenerativ qobiliyat [2,3], surunkali yallig'lanish [4,5], oksidlovchi stress darajasining oshishi [5,6] va mitoxondriyal disfunktsiyalar [7] kabi multifaktorli hodisalarning natijasidir.

Mushaklar regeneratsiyasi muvofiqlashtirilgan jarayon bo'lib, unda skelet mushaklarining ildiz hujayralari bo'limi bo'lgan yo'ldosh hujayralari to'qimalarning tuzilishi va funktsiyasini saqlab qolish va zararlanganda saqlab qolish uchun faollashadi [8].

Regenerativ jarayonning birinchi bosqichi miofibrillarning proteoliziga olib keladigan hujayradan tashqari kaltsiy oqimi tufayli miyofiber nekrozi bilan tavsiflanadi [9,10]. Ushbu hodisa turli xil yallig'lanish hujayralari populyatsiyalari tomonidan mushaklarning ketma-ket bostirib kirishiga olib keladigan o'ziga xos yallig'lanish reaktsiyasining faollashishiga olib keladi [11]. Yallig'lanish reaktsiyasi yo'ldosh hujayralarining faollashishi va morfologik jihatdan xarakterli markazlashtirilgan yadrolar bilan ajralib turadigan qayta tiklanadigan tolalarning shakllanishi bilan birga keladi [12,13]. Biroq, samarali regenerativ dastur qarish yoki patologik sharoitlarda jiddiy ta'sir ko'rsatishi mumkin va kengaytirilgan fibrotik to'qimalarning shakllanishi funktsional buzilishlarga yordam berishi mumkin [14,15]. Bundan tashqari, keksa skelet mushaklari muhitida yallig'lanish sitokinlari, o'sish omillari va metabolik signallardagi o'zgarishlar sun'iy yo'ldosh hujayralarining ko'payishi va / yoki miyofiber shikastlanishida faollashishiga ta'sir qilishi mumkin [16]. Ma'lumki, qarish past darajadagi yallig'lanish holati bilan bog'liq bo'lib, bu "yallig'lanish" deb nomlanuvchi holat, o'simta nekrozi omili (TNF) va interleykin 6 () kabi yallig'lanishga qarshi vositachilarning plazma darajasining biroz oshishi bilan tavsiflanadi. IL-6) va natijada NF-kB yo‘lining faollashuvi [13]. Qizig'i shundaki, NF-kB protein kontsentratsiyasi keksa odamlarning mushaklarida yoshlarnikiga nisbatan to'rt barobar yuqori ekanligi aniqlandi; bu ortib borayotgan kontsentratsiya anabolik signalizatsiya etishmovchiligi bilan birga keladi, bu esa keksa mushaklarning yo'qolishiga olib keladi [17].

Yallig'lanish darajasining oshishi oksidlovchi shikastlanish bilan chambarchas bog'liq va ikkalasi ham mushak massasi va kuchining yoshga bog'liq kamayishida ishtirok etadi. Oksidlanish stressi yuqori darajadagi reaktiv kislorod turlari (ROS) va/yoki reaktiv azot turlari (RNS) bilan tavsiflanadi. Bu antioksidant ferment faolligining buzilishi va/yoki ROS ishlab chiqarishning ko'payishi tufayli antioksidant qobiliyatining pasayishi tufayli yuzaga kelishi mumkin [18]. Bundan tashqari, yuqori darajadagi ROS va RNS ham yoshga bog'liq mitoxondriyal DNK mutatsiyalari, yo'q qilinishi va shikastlanishi natijasida kelib chiqqan mitoxondrial disfunktsiya natijasida yuzaga kelishi mumkin [19-21]. ROS to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita NF-kB ni faollashtiradigan skelet mushaklaridagi TNF- uchun ikkinchi xabarchi sifatida ishlaydi [14].

Skelet mushaklarida transkripsiyaviy koaktivator peroksisoma proliferatori tomonidan faollashtirilgan retseptor-gamma koaktivatori -1 (PGC-1) mitoxondriyal biogenezni stimulyatsiya qilishda, hujayra oksidlovchi-antioksidant gomeostazini tartibga solishda ishtirok etadigan eng muhim molekulalardan biridir. , surunkali yallig'lanishni va mushaklar katabolizmini bostirish [22]. PGC-1 yadro retseptorlari va transkripsiya omillari bilan ularning maqsadli genlarining transkripsiyasini faollashtiradi va uning faoliyati kaltsiy ionlari, ROS, insulin, qalqonsimon bez va estrogen gormonlari, gipoksiya, ATP talabi va sitokinlar kabi bir nechta stimullarga javob beradi. 23]. Xususan, mitoxondriyal biogenezning PGC-1 regulyatsiyasi uning bir qancha yadro transkripsiyasi omillari, jumladan PPAR oilasi a'zolari, yadroviy nafas olish omili (NRF)-1 va NRF-2, miotsit kuchaytiruvchi omil{ bilan o'zaro ta'sirini o'z ichiga oladi. {10}} (MEF2) va vilkalar qutisi oqsili O (FOXO) 1 [24,25]. NRF-1, 2 ning PGC{15}} faollashuvi mitoxondriyal DNK replikatsiyasi va transkripsiyasini bevosita rag'batlantiradigan ko'plab yadroviy kodlangan mitoxondrial oqsillarning ifodalanishiga yordam beradi [23,26,27]. Bundan tashqari, PGC-1, MEF2C transkripsiya faktori bilan hamkorlikda, qarish davrida tez MHC dan chidamliroq sekin MHC ga o'tishni qo'llab-quvvatlovchi miyofiber fenotipik profillariga ham ta'sir qilishi mumkin [28,29].

So'nggi o'n yillikda qarish paytida skelet mushaklarining yomonlashuvini kamaytirish uchun jismoniy faollik va ovqatlanish kabi bir nechta strategiyalar taklif qilindi. Haqiqatan ham, jismoniy mashqlar sarkopeniyani susaytirishi va tanadagi yog 'to'planishi va yallig'lanishning oldini olishi haqida xabar berilgan [30-32]. Bundan tashqari, protein yoki antioksidantlarni iste'mol qilishga qaratilgan parhez tadbirlari mushak massasi va kuchini oshirishga ijobiy ta'sir ko'rsatishi mumkin [33]. Ma'lumki, keksa odamlarda yuzaga keladigan mushak massasi va funktsiyalarining yo'qolishi oziq-ovqat iste'molining kamayishini o'z ichiga oladi, bu esa yoshlarga qaraganda mushak oqsili sintezining susayishiga olib keladi [34]. Shunday qilib, ovqatlanish, xususan, aminokislotalarni qo'shish qarish paytida mushaklarning anabolik reaktsiyasini yaxshilash uchun muhim yondashuv bo'lishi mumkin [35-39].

Taurin sutemizuvchilar to'qimalarida yuqori darajada ifodalangan sisteindan olingan yarim muhim aminokislotadir. Skelet mushaklarida uning darajasi qarish davrida pasayadi, u antioksidant va yallig'lanishga qarshi molekula sifatida muhim rol o'ynaydi [40,41]. Taurin kamaygan skelet mushaklari morfologiyasi va funktsiyasida qarish paytida paydo bo'ladiganlarga o'xshash bir nechta anormalliklarga ega bo'lgani uchun [42], taurin qo'shilishi skelet mushaklaridagi qarishning salbiy ta'siriga qarshi kurashish uchun istiqbolli strategiya bo'lishi mumkin.

Bu erda biz intraperitoneal taurinni yuborish yallig'lanishni kamaytirish orqali skelet mushaklari regeneratsiyasining qarishi bilan bog'liq bo'lgan ta'siriga qarshi turishini ko'rsatamiz. Bundan tashqari, bizning natijalarimiz taurinning mushaklarning mikro muhitini yaxshilash, degenerativ jarayonlarga qarshi turish va qarish davrida to'qimalar gomeostazini yaxshilashga qodir bo'lgan antioksidant molekula sifatida rolini qo'llab-quvvatlaydi.

2. Materiallar va usullar

2.1. Hayvonlar va davolash usullari

Yosh (8-10 hafta) va keksa (18-20 oy) erkak C57BL6J sichqonlari doimiy harorat va namlikda 12 soatlik yorug'lik / qorong'u tsikli bo'lgan muassasaga joylashtirildi. Sichqonlarga ad libitum ovqatlanish va ichishga ruxsat berildi. Sichqonlar Muqaddas Yurak Katolik Universiteti - Rim Etika qo'mitasining ko'rsatmalariga muvofiq (Italiya sog'liqni saqlash vazirligining № 150 ruxsatnomasi/2017-PR) ishlatiladigan hayvonlarni himoya qilish bo'yicha milliy qoidalarga muvofiq muomala qilindi. ilmiy maqsadlar uchun (2010/63/EU Yevropa Direktivini tan olgan Italiyaning 2014 yil 4 martdagi 26-son qarori). Taurin tuzli eritmada tayyorlangan va ketma-ket besh hafta davomida kuniga 100 mg / kg dozada qorin bo'shlig'iga in'ektsiya yo'li bilan kiritilgan [43-45] (1-sxema). Ushbu doz in vivo sichqon modellari [46,47] antioksidant ta'sirini ko'rsatadigan nashr etilgan ma'lumotlar asosida tanlangan. Nazorat qiluvchi sichqonlar faqat sho'r suv oldi. Kardiotoksin (CTX) in'ektsiyalari bilan TA zararlanishini qo'zg'atishdan oldin, hayvonlar fiziologik eritmada suyultirilgan ketamin 70 mg / kg va medetomidin 1 mg / kg aralashmasidan intraperitoneal in'ektsiya yo'li bilan anesteziya qilindi. Nazorat va taurin bilan davolash qilingan sichqonlarning chap tomonidagi tibialis anterior (TA) mushaklaridagi shikastlanish mushakning butun uzunligi bo'ylab to'rtta CTX in'ektsiyasi bilan amalga oshirildi (har bir sayt uchun 5 µL 10 µM CTX) [48,49]. O'ng tarafdagi TA nazorat hamkasbi sifatida ishlatilgan. Hayvonlar yuqorida aytib o'tilganidek, behushlikdan keyin bachadon bo'yni dislokatsiyasi orqali qurbon qilingan. Gistologik tahlillar uchun TA mushaklari OCT birikmasiga (Miles, Elkhart, IN, AQSH) kiritilgan va darhol izopentanda -80 darajada muzlatilgan.

2.2. Gistologik va gistokimyoviy tahlil

Qadimgi sichqonlarning TA mushaklari Leica kriyostati yordamida 10 mkm qalinlikda bo'lingan. Gistologik tahlil uchun bo'limlar standart usullardan foydalangan holda gematoksilin va eozin (H&E) bilan bo'yalgan [50]. Esteraza bo'yash ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga rioya qilgan holda nonspesifik esteraza bo'yash to'plami (Bio-Optica, Milan, Italiya) yordamida amalga oshirildi.

2.3. Morfometrik tahlil

TA namunalari bo'limlarida gematoksilin va eozin va esteraza bo'yalgan. Elyaf hajmini morfometrik baholash uchun tahlil har bir holat uchun butun mushak kesmalarining yuqori kattalashtirilgan tasvirlarining tasodifiy tanlangan 4 ta maydonida o'tkazildi. Tekshirilgan hayvonlarning soni har bir davolash uchun 3-4 tani tashkil etdi. Elyaflarning fotomikrografiyalari tolalarning tasavvurlar maydonini baholash uchun ImageJ, Scion Image dasturi (versiya beta 4.0.2; Scion Corporation, Frederik, MD, AQSH, 2022-yil 2-mayda kirish) yordamida tahlil qilindi. . Qayta tiklanadigan tolalar markaziy yadrolarning mavjudligi bilan ta'kidlangan.

2.4. Immunofluoresans tahlili

Muzlatilgan bo'laklar 4 foizli paraformaldegidda 1{5}} daqiqa davomida xona haroratida mahkamlangan, PBS bilan yuvilgan va 1 foiz sigir zardobi albumini (BSA) o'z ichiga olgan eritma bilan o'tkazuvchan bo'lgan (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh) , #A9418), xona haroratida 30 daqiqa davomida fosfat-buferli sho'r suvda (PBS) 0,2 foiz Triton-X va 10 foizli eshak zardobi bilan bloklanadi (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh, #D9663) 1 h xona haroratida. Bo'limlar bir kechada 4 ◦C da tegishli suyultirishda asosiy antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. Quyidagi antikorlar ishlatilgan: sekin MHC (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh, #M8421, 1:500) va 4-HNE (Alpha Diagnostics International, San Antonio, TX, #HNE{{20) }}S, 1:500). PBSda uch marta yuvilgandan so'ng, bo'limlar xona haroratida o'ziga xos ikkilamchi antikorlar bilan 60 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Xususan, quyidagilar ishlatilgan: AlexaFluor{24}}konjugatsiyalangan sichqonchaga qarshi 1:1000 (Molecular Probes, Eugene, OR, USA, #A21203) va AlexaFluor488-konjugatsiyalangan anti-quyon 1:1000 (Molekulyar) Problar, Eugene, OR, USA, #A21206) PBSda 1,5 foiz eshak zardobini o'z ichiga oladi. Bo'limlar DAPI (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh, #P36935) bilan ProLong™ Gold Antifade Mountant bilan o'rnatildi va Leica SP5 Lazer konfokal bilan tekshirildi. Eksperimental guruhlardagi 4-HNE signalidagi oʻzgarishlar miqdorini aniqlash densitometrik tahlillar orqali amalga oshirildi. Fonni olib tashlagandan so'ng, 4-HNE tolasi bilan bog'langan signallar alohida tolalarni qo'lda tasvirlash va ImageJ dasturi yordamida tola bilan bog'liq floresans intensivligini o'lchash yo'li bilan aniqlandi. F/A nisbati tolaning umumiy tasavvurlar maydoniga (A) normallashtirilgan alohida tolalarning (F) o'rtacha floresansini belgilaydi. Miqdorni aniqlash har bir guruh uchun 50 ta tolada amalga oshirildi (har bir guruh uchun n=3 sichqon).

2.5. Protein ekstraktsiyasi va Western Blot tahlili

Sichqonlardan olingan TA mushaklari ajratilgan, maydalangan va fenilmetilsulfonil ftorid (PMSF) (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSh, #8553) va to'liq proteaz inhibitori kokteyli (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSh, #5872). Bradford Protein Assay (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSH) va Varioskan™ LUX, Thermo Scientific™ SkanIt™ tomonidan boshqariladigan, Microplate Readers uchun (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh, dasturiy ta'minot versiyasi 4.1) ishlatilgan. ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq oqsillarni teng miqdorda aniqlash. Proteinlar SDS/PAGE (Mini-PROTEAN® TGX™ Prekast Protein Gels yoki Mini-PROTEAN TGX dog'siz prekast PAGE gellari; Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSH) bilan ajratildi va nitroselüloz membranasiga o'tkazildi ( Trans-Blot® Turbo™ Mini nitrotsellyuloza o'tkazish paketlari #1704158; Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSH). 0,1% Tween-20 qoʻshilgan va tarkibida 5% yogʻsiz quruq sut (Bio-Rad Laboratories Inc.) boʻlgan Tris-buferli tuz (TBS) (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSH)da nonspesifik bogʻlanish bloklandi. , Hercules, CA, USA #1706404) xona haroratida 1 soat davomida. Ishlatilgan asosiy antikorlar: sichqoncha monoklonal anti-SOD-1 (1:500, Santa Cruz Biotechnology Dallas, Texas 75220 the USA, sc-17767); quyon monoklonal anti-fosfo-mTOR (1:1000, #2971, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSH); quyon monoklonal anti-mTOR (1:1000, #2972, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSH); sichqoncha monoklonal anti-sekin-MHC (1:500, Sigma-Aldrich, # M8421); sichqoncha monoklonal anti-miyozin (Skeletal, Fast) (1:500, Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh, #M4276); quyon monoklonal anti-fosfo-NF-kB p65 (Ser468) (1:1000, #3039, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSH); quyon monoklonal anti-NF-kB p65 (1:250, #3034, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, AQSH); sichqoncha monoklonal anti-G6PD (1:300, Santa Cruz Biotechnology Dallas, Texas 75220 USA, sc-373887) va sichqoncha monoklonal anti-GP91[fox]. Keyin dog'lar Bio-Rad laboratoriyalarining quyidagi ikkilamchi antikorlari bilan inkubatsiya qilindi: Echki quyonga qarshi IgG (1:3000, HRP konjugati, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSh, №1706515) va Echki sichqonchaga qarshi. IgG (1:3000, HRP Conjugate, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSH, #1706516) xona haroratida 1 soat davomida. Signallar ChemiDoc™ Imaging System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, AQSH) tomonidan kengaytirilgan xemiluminesans tizimi (SuperSignal Chemolyuminesans Substrat, Thermo Fisher Scientific Inc. Waltham, MA, AQSh) yordamida olingan. Densitometrik tahlillar Image Lab™ Touch, Software versiyasi 5.2.1 (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, AQSh) yordamida amalga oshirildi.

2.6. Real vaqt rejimida PCR tahlili

Sichqonlardan olingan TA mushaklari ajratildi va ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq TriReagentda (Invitrogen, Carlsbad, CA, AQSH) to'qima lizer (QIAGEN) bilan umumiy RNK ekstraktsiyasi amalga oshirildi. Ikki zanjirli cDNK QuantiTect teskari transkripsiya to'plami (QIAGEN Srl, Milan, Italiya) bilan sintez qilindi. Messenger-RNK tahlillari maxsus TaqMan tahlillari (Applied Biosystems, Waltham, MA, AQSh) yordamida ABI PRISM 7500 SDS (Applied Biosystems, Waltham, MA, AQSh) da amalga oshirildi. Xususan, quyidagi tahlillar ishlatilgan: GPX1: mm_00656767_g1; MEF2C: mm_00600423_m1; PGC1- : mm_01280835_m1; SOD1: mm_01344233_m1; va CAT: mm_00437992_m1. Nisbiy miqdoriy aniqlash endogen nazorat Hprt1 (Applied Biosystems, Waltham, MA, AQSH) yordamida amalga oshirildi. Shakllarda ko'rsatilganidek, har bir guruh uchun uchdan beshgacha turli hayvonlarning RNK preparatlari yordamida real vaqtda PCR o'tkazildi. Nisbiy ifoda 2−∆∆Ct usuli yordamida hisoblangan.

2.7. Statistik tahlil

Guruhlar o'rtasida bir nechta statistik taqqoslashlar bir tomonlama ANOVA yordamida amalga oshirildi. Afsonalarda ko'rsatilgan hollarda Mann-Whitney rank-sum testi yoki unpaired Student's t-testi ishlatilgan. Har bir satr o'rtacha ± SEM (o'rtacha standart xato) ni ifodalaydi.

3. Natijalar

3.1. Taurin ma'muriyati qarish bilan bog'liq bo'lgan skelet mushaklarining tiklanishiga to'sqinlik qiladi

Taurin administratsiyasining skelet mushaklari regeneratsiyasiga ta'sirini o'rganish uchun biz nazorat (avtomobil) va taurin bilan davolash qilingan eski sichqonlarning TA mushaklarida CTX in'ektsiyalari yordamida zararni keltirib chiqardik. Morfologik va morfometrik tahlillar shuni ko'rsatdiki, shikastlanish bo'lmasa (1A, B: panellar a, b va 1C-rasm), taurin bilan davolash qilingan sichqonlarning mushak tolalari nazorat bilan solishtirganda biroz kattalashgan ko'ndalang kesim maydonini ko'rsatdi. Skelet mushaklaridagi protein gomeostazi oqsil sintezi va oqsil parchalanishi o'rtasidagi muvozanatga asoslanganligi sababli, biz protein sintezining asosiy regulyatori sifatida fosfo-mTOR va asosiy regulyatorlardan biri sifatida Atrogin{6}} darajasini tahlil qildik. ubiquitin-proteazoma tizimi orqali oqsil katabolizmida ishtirok etadi [40]. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, taurin bilan davolash qilingan sichqonlarning mushak ekstraktida fosfo-mTOR darajasi sezilarli darajada oshgan, bu holatda Atrogin-1 (FBXO32) ning sezilarli modulyatsiyasi aniqlanmagan (1D-F-rasm). Ushbu ma'lumotlar mTORga bog'liq yo'lning taurinning skelet mushaklari tolasi CSA ning kuzatilgan o'sishiga ta'sirida ishtirok etishini ko'rsatadi. Bundan tashqari, mushaklarning 1 haftalik shikastlanishidan so'ng, transport vositasi bilan davolangan sichqonlarda (CTX) tolalarning kesishishi bir vaqtning o'zida o'tkir yallig'lanish va nekroz bilan degeneratsiyani, shuningdek, markaziy yadrolar tomonidan aniqlangan kichik regeneratsiya qiluvchi tolalar mavjudligini aniqladi. Shakl 1G, H: panel c). Boshqa tomondan, taurin bilan davolash qilingan eski sichqonlarning shikastlangan mushaklarida kamroq infiltratlar bilan birga kattaroq qayta tiklanadigan miyofiberlar va kamroq nekrotik tolalar (1G, H: panel d) paydo bo'ldi. 1I-rasmdagi diagrammalarda ko'rsatilgan ushbu natijalarning tahlili shuni ko'rsatdiki, taurin qo'llanilishi nazorat ostidagi shikastlangan mushak bilan solishtirganda ko'proq qayta tiklanadigan tolalarning to'planishiga yordam berib, tolalar hajmining taqsimlanishiga ta'sir ko'rsatdi. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, bu natijalar taurin skelet mushak tolalari yaxlitligini saqlashda himoya rolini o'ynash va yangi miyofibralarning shakllanishini tezlashtirish orqali regenerativ jarayonni rag'batlantirishi mumkinligini ko'rsatadi.

3.2. Taurin qo'shimchasi keksa mushaklardagi yallig'lanish reaktsiyasini modulyatsiya qiladi

Qarish surunkali past darajadagi tizimli yallig'lanish holati bilan birga keladi [51], bu skelet mushaklarining regenerativ qobiliyatining buzilishi uchun javobgar bo'lishi mumkin [52]. Taurin bilan davolash qilingan sichqonlarning shikastlangan mushaklarida kuzatilgan regenerativ reaktsiyaning kuchayishi yallig'lanish jarayonining modulyatsiyasi bilan bog'liqligini tekshirish uchun biz esteraza bo'yash orqali makrofaglar mavjudligini tekshirdik. Shakl 2A, B shuni ko'rsatadiki, CTX in'ektsiyalari natijasida barcha mushak bo'limlarida shikastlanmagan hamkasblarga nisbatan mononukleat yallig'lanish hujayralari soni ko'paygan; ammo, eski shikastlangan mushaklarda mavjud bo'lgan esteraza-musbat makrofaglarning yuqori soni (2A-rasm: c paneli va 2B-rasm) taurin qo'shimchasi mavjudligida sezilarli darajada zaiflashdi (2A-rasm: panel d va 2B-rasm). Taurinning regenerativ jarayonda yallig'lanish darajasini pasaytirishga ta'siri NF-kB transkripsiya omilining fosforlangan izoformasi darajasini tahlil qilish orqali ham baholandi, chunki uning skelet mushaklarida faollashishi o'ziga xos mushak oqsillarining parchalanishiga olib kelishi ma'lum. , yallig'lanish va fibrozni qo'zg'atadi va jarohatlardan keyin miyofiberlarning yangilanishini bloklaydi [53-55]. 2C, D-rasmda ko'rsatilganidek, fosfo-NF-kB nazorat va taurin bilan davolash qilingan shikastlanmagan mushaklarda juda past darajada aniqlangan, CTX shikastlangan mushaklarda aniqlangan yuqori fosfo-NF-kB esa sezilarli darajada kamaydi. taurin bilan davolash qilingan eski sichqonlarning mushaklari. Umumiy NF-kB darajalari va fosfo-NF-kB va NF-kB o'rtasidagi nisbat tahlil qilindi va CTX tomonidan induktsiya qilingan zarar bilan sezilarli bo'lmasa-da, ortganligi isbotlandi, taurin esa bu ta'sirning oldini oldi (2C, E, F-rasm). . Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, taurin jami NF-kB va fosfo-NF-kB darajasini pasaytirish orqali shikastlangan mushakdagi yallig'lanish holatini susaytiradi.

3.3. Taurin keksa sichqonlarning TA mushaklarida PGC1- va MEF2C ifodasini modulyatsiya qiladi

Taurinning skelet mushaklari gomeostazasiga ijobiy ta'sirida ishtirok etadigan molekulyar mexanizmlarni yaxshiroq o'rganish uchun biz transkripsiyaviy ko-aktivator PGC-1 rolini baholadik. PGC-1 mushaklarda yallig'lanishga qarshi muhitni targ'ib qilishda muhim omil hisoblanadi. Bundan tashqari, PGC-1 nafaqat mushaklar funktsiyasini, balki miyofiber morfologiyasi va yaxlitligini ham yaxshilashi mumkin, bu esa PGC-1ning tolalarni tiklash va qayta tiklashda potentsial rolini nazarda tutadi. MEF2C transkripsiya omili bilan hamkorlikda PGC{7}} skelet mushaklari tolasi turini aniqlashni tartibga solib, glikolitik tolalardan oksidlanishga chidamliroq tolalarga oʻtishga yordam beradi [56,57].

Shunday qilib, RT-PCR tahlilidan foydalanib, biz taurin bilan davolash qilingan yosh, qari va qari sichqonlarning TA ekstraktlarida PGC -1 va MEF2C ning mRNK ifoda darajalarini baholadik, bu taurinni qabul qilish yuqorida aytib o'tilganlarning transkripsiyaviy o'zgarishlarini keltirib chiqarganligini aniqlash uchun. uning yo'qligida kuzatilgan narsalarga nisbatan omillar. Sog'lom sharoitda yosh sichqonlar ushbu omillarning ifoda darajasini baholash uchun ishlatilgan. 3A, B-rasmda ko'rsatilganidek, taurin yo'qligida, keksa sichqonlarning ekstraktida yosh sichqonlarga nisbatan PGC-1 darajasida o'zgarishlar kuzatilmagan va MEF2C darajasida bir oz pasayish kuzatilgan, mRNK darajasi esa. Intraperitoneal taurin in'ektsiyasiga duchor bo'lgan eski sichqonlarda ikkala molekula ham sezilarli darajada yuqori tartibga solingan. I-toifa sekin buraladigan oksidlovchi tolalar (miyozin og'ir zanjirining sekin izoformini ifodalovchi, sekin MHC) IIb tipidagi tez burama glikolitik tolalarga qaraganda shikastlanishga va turli atrofik sharoitlarga chidamliroq ekanligi ko'rsatildi [29]. Mushaklarning bir qancha patologiyalarida, shu jumladan sarkopeniyada, mushaklarning eng tez fenotipi sekin burama mushaklar bilan solishtirganda jiddiyroq buziladi va IIb tipidagi tolalarning yuqori sezuvchanligi ulardagi PGC-1 tarkibiga nisbatan past bo'lishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. oksidlovchi tolalarning [58,59]. Bu erda biz Western blot tahlili orqali eski sichqonlarning TA mushaklari yosh hosil bo'lgan mushak ekstrakti bilan solishtirganda sekin-MHC izoformasining juda past darajasini ifodalaganligini ko'rsatdik; ammo, taurin bilan davolash qilingan sichqonlarning mushak ekstraktlarida sekin-MHC ifodasi oshdi (3C, D-rasm). Bundan tashqari, tez-MHC izoformining Western blot tahlili shuni ko'rsatdiki, taurin mavjud bo'lganda, uning ifodasi taurinni qabul qilmagan eski sichqonlardan olingan TA ekstraktlarida kuzatilganiga nisbatan sezilarli darajada ko'tarilgan (3F-rasm). . Qadimgi sichqonlarning mushak ekstraktida aniqlangan MHC (MF20) darajasi yosh sichqonlardagiga nisbatan izchil ravishda taurinni qo'llash bilan ortdi. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, taurinning keksa sichqonlarning skelet mushaklari gomeostazasiga ijobiy ta'siri PGC1- / MEF2C yo'lini stimulyatsiya qilish orqali miyofiberlarning oksidlovchi fenotipga mumkin bo'lgan metabolik siljishini qo'llab-quvvatlaydi va ko'proq himoya qiladi. sezgir glikolitik tolalar.

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】