Annotatsiya:Quercetin o'zining Altsgeymer kasalligi (AD) va qarishga qarshi ta'siri uchun keng o'rganilgan. Oldingi tadqiqotlarimiz kversetin va uning glikozid shaklida rutin neyroblastoma hujayralarida proteazoma funktsiyasini modulyatsiya qilishi mumkinligini aniqladi. Biz quercetin va rutinning miyaning hujayra ichidagi redoks gomeostazasiga ta'sirini (kamaytirilgan glutation / oksidlangan glutation, GSH / GSSG), uning APP ajraladigan ferment 1 (BACE1) faolligi va amiloid prekursor oqsili (APP) bilan bog'liqligini o'rganishni maqsad qildik. transgen TgAPP sichqonlarida ifoda (inson shved mutatsiyasiga ega APP transgen, APPswe). BACE1 oqsili va APPni qayta ishlash ubiquitin-proteazoma yo'li bilan tartibga solinishi va GSH bilan qo'shilishi neyronlarni proteazoma inhibisyonidan himoya qilishiga asoslanib, biz quercetin yoki rutin (kuniga 30 mg / kg, 4 hafta) o'z ichiga olgan dietani bir necha marta kamaytiradimi yoki yo'qligini tekshirdik. ADning dastlabki belgilari. Hayvonlarning genotip tahlillari PCR yordamida o'tkazildi. Hujayra ichidagi redoks gomeostazini aniqlash uchun o-ftaaldegid yordamida GSH va GSSG darajasini aniqlash uchun spektroflorometrik usullar qabul qilindi va GSH/GSSG nisbati aniqlandi. TBARS darajasi lipid peroksidatsiyasining belgisi sifatida aniqlandi. SOD, CAT, GR va GPx ning ferment faolligi korteks va hipokampusda aniqlangan. BACE1 faolligi ikkita muxbir molekulasiga (EDANS va DABCYL) konjugatsiyalangan sekretazaga xos substrat bilan o'lchandi. Asosiy antioksidant fermentlarning gen ifodasi: APP, BACE1, disintegrin va metalloproteinaz domenini o'z ichiga olgan protein 10 (ADAM10), kaspaza-3, kaspaza-6 va yallig'lanish sitokinlari RT-PCR orqali aniqlandi. Birinchidan, TgAPP sichqonlarida APPswe ning haddan tashqari ko'payishi GSH / GSSG nisbatini pasaytirdi, malonaldegid (MDA) darajasini oshirdi va umuman, yovvoyi turdagi (WT) sichqonlarga nisbatan asosiy antioksidant ferment faolligini pasaytirdi. TgAPP sichqonlarini quercetin yoki rutin bilan davolash GSH / GSSG ni oshirdi, MDA darajasini pasaytirdi va fermentning antioksidant qobiliyatini, ayniqsa rutin bilan yaxshiladi. Ikkinchidan, TgAPP sichqonlarida quercetin yoki rutin bilan APP ifodasi va BACE1 faolligi pasaygan. ADAM10 ga kelsak, u rutin bilan davolash bilan TgAPP sichqonlarida o'sish tendentsiyasiga ega. Kaspaz{21}} ifodasiga kelsak, TgAPP rutin bilan aksincha o'sishni ko'rsatdi. Nihoyat, TgAPP sichqonlarida IL{22}} va IFN- yallig'lanish belgilarining ko'payishi quercetin va rutin tomonidan kamaytirildi. Birgalikda bu topilmalar shuni ko'rsatadiki, ikkita flavonoiddan rutin ADda yordamchi terapiya shakli sifatida kundalik ratsionga kiritilishi mumkin.

Antioksidant Cistanche kimyogar omborini bosing

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kalit so‘zlar:quercetin; rutin; glutation; APPswe; BACE1; Altsgeymer kasalligi

1.Kirish

Kognitiv funktsiyaning pasayishi yoshga qat'iy bog'liq bo'lgan asosiy klinik neyrodegeneratsiya belgisidir [1]. Oziqlanishning yoshga bog'liq kognitiv pasayishiga ta'siri tobora ortib borayotgan mavzu bo'lib qolmoqda, chunki u osonlikcha o'zgartirilishi mumkin bo'lgan muhim omildir. Kognitiv pasayish davrida kuzatilgan miyadagi patologik o'zgarishlar har qanday klinik ko'rinishdan ancha oldin sodir bo'ladi, bu asosan keksalikda sodir bo'ladi. Bu yoshga bog'liq kognitiv pasayish va demansning oldini olish strategiyasini ishlab chiqish uchun uzoqroq vaqtni ta'minlaydi, bu jamoat salomatligini tashvishga solmoqda [2]. Ko'p yillar davomida kundalik ratsionda mavjud bo'lgan tabiiy kelib chiqishi bo'lgan birikmalar bo'yicha intensiv tadqiqotlar kognitiv kuchaytiruvchi terapiya bo'yicha olib borildi [3].

Yoshga bog'liq eng keng tarqalgan neyrodegenerativ kasalliklardan biri Altsgeymer kasalligi (AD) bo'lib, u ikkita nevropatologik belgilar bilan tavsiflanadi: amiloid- (A) plitalari va neyrofibrilyar chigallar. Hayvonlar ustida olib borilgan tadqiqotlar nuqtai nazaridan, hayvonlar modellari, masalan, A prekursor oqsilini (APP) o'zgartirish orqali ADning asemptomatik bosqichini simulyatsiya qilishi mumkin, masalan [4,5].

Shunisi e'tiborga loyiqki, turli xil sog'liq uchun foydalari va ko'plab kasalliklar xavfini kamaytirish bilan bog'liq bo'lgan o'simliklardan olingan bir qancha bioaktiv fitokimyoviy moddalar amiloid- (A) peptid [3] bilan nokovalent komplekslarni hosil qilish uchun tekshirilgan.

Garchi ko'plab an'anaviy dori-darmonlar va tabiiy oziq-ovqat mahsulotlari AD patologiyasini yumshatish bo'yicha katta yutuqlarni ko'rsatgan bo'lsa-da, biz AD hayvonlari modellarining cheklovlarini to'liq bilamiz, chunki bu moddalarning istiqbolli ta'siri har doim ham insoniy tadqiqotlarda takrorlanavermaydi [6]. Biroq, odamlarda miya to'qimalarini tahlil qilish qiyinligi sababli, ayniqsa rivojlanishning juda erta bosqichlarida, kemiruvchilar modellarida tadqiqotlar zarur. Natijada, ushbu eksperimental modellar neyrodegenerativ kasalliklarning rivojlanishini kechiktirish uchun an'anaviy dori vositalaridan va xavfsiz tabiiy birikmalardan foydalanuvchi agentlarini ishlab chiqishga yordam berishi mumkin. Shunday qilib, kasallikning oldini olish va AD xavfidan himoya qilish uchun kundalik ratsionda mavjud bo'lgan tabiiy birikmalarni sinovdan o'tkazish ustuvor vazifa bo'lishi kerak.

Ushbu muhim parhez tabiiy moddalar orasida bir nechta meva va sabzavotlardagi asosiy polifenolik flavonoid bo'lgan quercetin mavjud [7]. Quercetin asosan glikozid shaklida, ya'ni rutinda mavjud. O'z navbatida, rutin (quercetin-3-O-rutinosid) turli xil hujayra funktsiyalariga chuqur ta'sir ko'rsatdi, ular bir nechta patologik sharoitlarni, xususan, mikroblarga qarshi, antikarsinogen, antitrombotik, kardioprotektiv va neyroprotektiv ta'sir ko'rsatdi. Ushbu farmakologik ta'sirlar asosan rutinning yallig'lanishga qarshi va antioksidant faoliyati bilan bog'liq. Qon-miya to'sig'ini va / yoki uning metabolitlarini kesib o'tish qobiliyati tufayli rutin neyrodegenerativ kasalliklarning kognitiv va xulq-atvor belgilarini o'zgartirishi mumkinligi ko'rsatildi [8].

Oldingi tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, flavonoidlar, quercetin va rutin neyroblastoma hujayralarida proteazoma funktsiyalarini modulyatsiya qilish bilan bog'liq bo'lgan turli signal yo'llari va molekulyar tarmoqlarga ta'sir qiladi [9]. Bundan tashqari, BACE1 ifodasi va APP-ni qayta ishlash ubiquitin-proteazoma yo'li [10] tomonidan tartibga solinishi va kamaytirilgan glutation (GSH) bilan qo'shimchalar proteazoma inhibisyonidan himoyalangan neyronlar [11] tomonidan boshqarilishi ko'rsatildi. Miyadagi GSHning kamayishi AD kabi neyrodegenerativ kasalliklari bo'lgan bemorlarda keng tarqalgan topilma bo'lib, kasallik boshlanishidan oldin neyrodegeneratsiyaga olib kelishi mumkin [12]. BACE1 ning ubiquitinatsiyasi va ubiquitin-proteazoma yo'lini blokirovka qilish BACE1 degradatsiyasini inhibe qiladi va natijada BACE1 fermentativ faolligining oshishiga olib keladi [10].

Ushbu topilmalarga asoslanib, ovqatlanish odatlari va qo'shimchalar hujayraning redoks holatiga ta'sir qilishi mumkin, biz quercetin yoki rutin o'z ichiga olgan dietaning miyaning hujayra ichidagi redoks gomeostazasiga (GSH/GSSG) ta'sirini, uning BACE1 faolligi bilan bog'liqligini o'rganishni maqsad qildik. va AD ning sichqon modellarida APP ifodasi (inson shved mutatsiyasiga ega bo'lgan Amiloid Prekursor Protein APP transgen, APPswe).

Va nihoyat, flavonoid qo'shimchalarining o'ziga xos kognitiv sohalarni yaxshilashga ta'siri va / yoki MRI topilmalari [13] bo'lganligi sababli, biz hayvonlarda o'rtacha miqdorda ma'lum bir potentsial faol moddani o'z ichiga olgan sog'lom parhezni etkazib berish orqali aralashuvga taqlid qilishga harakat qildik. AD belgilarining namoyon bo'lishini oldini olish uchun samarali strategiya sifatida ingredient (quercetin yoki rutin).

2. Natijalar

2.1. Sichqonlarning genotiplanishi

TgAPP sichqoncha koloniyasi laboratoriyamizda Tg2576 heterozigot erkaklar va yovvoyi turdagi urg'ochilardan ishlab chiqilgan. Transgen shaxslarni aniqlash uchun sichqonlarning genotipi o'tkazildi. Barcha sinovdan o'tgan sichqonlarning taxminan 40 foizi transgen (TgAPP) ekanligi aniqlandi.

Olingan PCR mahsulotlari 70 V (doimiy kuchlanish) da 0.5X TBE (Tris-Borate-EDTA) buferida 1,5 foizli agaroz jellarida elektroforez bilan ajratilgan va keyin GelRed (Millipore) bilan bo'yash orqali tasvirlangan. Transgen va WT sichqonlari uchun kuchaytirish profili 1-rasmda ko'rsatilgan.

2.2. Glutation

TgAPP sichqonlarida neyronlarda hujayra ichidagi redoks gomeostazini baholash uchun GSH va GSSG darajalari aniqlandi va GSH / GSSG nisbati erkaklarda ham, ayollarda ham hujayralarni kamaytiradigan kuchning belgisi sifatida aniqlandi (2-rasm).

Transgenning glutation tizimiga ta'sirini baholashda TgAPP sichqonlarida WT hayvonlariga nisbatan erkak va urg'ochi va miyaning ikkala sohasida ham hujayralarni kamaytiruvchi kuchning (GSH/GSSG) pasayishi kuzatildi (rasm). 2C3, H3), ayniqsa hipokampusda. WT va TgAPP sichqonlarida GSH/GSSG nisbati erkaklarda urg'ochilarga qaraganda ancha past bo'lgan (2C3, H3-rasm; p < 0.05). TgAPP ayollarida bu pasayish GSH darajasining pastligi natijasi bo'lsa (2C1, H1-rasm), TgAPP erkaklarida bu asosan GSSG darajasining oshishi bilan bog'liq (2C2, H2-rasm).

TgAPP sichqonlarining GSH va GSSG darajasidagi o'zgarishlar, mos ravishda, quercetin yoki rutin bilan davolashda, erkaklarda urg'ochilarga qaraganda ko'proq aniqlanadi. Ko'rinishidan, quercetin GSH darajasini oshirishga intiladi (2C1, H1; p < 0.05) va rutin GSSG darajasini pasaytiradi (2C2, H2, p <0,05-rasm).

Erkaklarda ham, ayollarda ham kuersetin va rutin bilan davolash hipokampusdagi GSH/GSSG nisbatining pasayishini bartaraf etishga muvaffaq bo'ldi (2H3-rasm), bu erda ishlov berilmagan TgAPP sichqonlariga nisbatan redoks quvvatining tiklanishi sezilarli edi. Erkaklarda bu indeks hipokampusdagi (H3) WT sichqonlarining ko'rsatkichlariga o'xshash qiymatlarga erishdi. Ayollarda, garchi bu nisbat WT sichqonlarinikiga ko'tarilmasa ham, kversetin va rutin bilan davolash ularning gippokampidagi TgAPP sichqonlari bilan solishtirganda sezilarli darajada yaxshilandi (H3: quercetin, p < 0.{{ 6}}01; rutin, p <0,05).

2.3. Tiobarbiturik kislota reaktiv moddalari (TBAR)

TBARlar darajasi lipid peroksidatsiyasining belgisi sifatida aniqlandi. Kalibrlash egri chiziqlari yordamida natijalar malondialdegid (MDA) kontsentratsiyasi sifatida ifodalangan (3-rasm).

APP haddan tashqari ifodalanganidan so'ng, WT sichqonlari bilan solishtirganda MDA darajasining sezilarli o'sishi ikkala korteksda (3C-rasm) va hipokampusda (3H-rasm) va erkaklar va ayollarda kuzatildi (p < 0.001) .

TgAPP ayollarida quercetin va rutin bilan davolash MDA darajasini deyarli WT sichqonlari bilan bir xil darajada tikladi (3C, H-rasm). TgAPP erkaklarida, xuddi shunday, quercetin va rutin bilan davolash MDA darajasini korteksdagi WT sichqonlari bilan bir xil darajada tiklaydi (3C-rasm) va hipokampusda yanada kamayadi (3H-rasm). WT va TgAPP sichqonlarida, ishlov berilmagan va flavonoid dietasi bilan davolash qilingan, MDA darajalari jinsga bog'liq edi (3C, H; p <{6}}.05), hipokampusdagi quercetin bilan davolash qilingan TgAPP sichqonlari bundan mustasno.

2.4. Ferment faolligi va antioksidant fermentlarning ifodasi

Enzimatik faollikni tartibga solish yoki asosiy antioksidant fermentlarning gen ekspressiyasi yoki har ikkalasi quercetin yoki rutin dietasida sodir bo'ladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun fermentativ faollik va mRNK darajasini aniqlash amalga oshirildi.

4-rasmda ayol va erkak sichqonlarda, miya yarim korteksida (4a-rasm) va hipokampusda (4b-rasm) aniqlangan SOD, CAT, GR va GPx fermentlarining faolligi ko'rsatilgan.

APP haddan tashqari ifodalanishi natijasida TgAPP sichqonlarida faqat korteksdagi WT sichqonlariga nisbatan CAT faolligining sezilarli pasayishi kuzatildi (4a-rasm (C2); p < 0.05) va hipokampus (4b-rasm (H2); p <0,05).

Quercetin bilan davolash TgAPP sichqonlari bilan solishtirganda, erkaklar yoki urg'ochilarda, o'rganilgan miya hududlarida ferment faolligida sezilarli o'zgarishlarga olib kelmadi. Bundan farqli o'laroq, rutin bilan davolash qilingan hayvonlarda korteksdagi CAT faolligi (4a-rasm (C2)) va gippokampdagi GR faolligi (4b-rasm (H3)) erkaklar va urg'ochilarda (p < 0 .05). Bundan tashqari, rutin TgAPP erkaklaridagi hipokampal CAT faolligini oshirdi (4b-rasm (H2)) va ayollarda GPx faolligini (4b (H4)-rasm).

5-rasmda ayol va erkak sichqonlarda aniqlangan asosiy antioksidant fermentlar, SOD, CAT, GR va GPx ning miya yarim korteksida (5a-rasm) va hipokampusda (5-rasm) gen ifodasi ko'rsatilgan.

Asosiy antioksidant fermentlar uchun TgAPP va WT sichqonlari o'rtasida gen ekspressiyasida farqlar kuzatilmaydi (5a,b-rasm). Rutin bilan davolash qilingan TgAPP erkaklari hipokampusdagi CAT ifodasida sezilarli o'sishni ko'rsatdi (5b-rasm (H2)). Hipokampal GPxga kelsak, o'sish sezilarli bo'lmasa-da, CATga o'xshash naqsh kuzatildi (5b (H4)-rasm).

2.5. Ilovani qayta ishlash: BACE1 va ADAM10

Erkak va urg'ochilarda miya yarim korteksida ham, gippokampida ham BACE1 fermenti faolligi natijalari 6-rasmda ko'rsatilgan bo'lib, davolanmagan TgAPP sichqonlariga nisbatan faollik foizi sifatida ifodalangan.

6-rasmda TgAPP sichqonlarida BACE1 fermenti faolligi WT sichqonlari bilan solishtirganda miyaning tekshirilayotgan sohalarida ham, har ikkala jinsda ham taxminan 10 foizga oshgani va statistik jihatdan ahamiyatli ekanligi aniqlandi (p. < 0,05).

Transgen sichqonlarda kuzatilgan faollikning oshishi korteksda ham, gippokampda ham quercetin va rutin bilan davolash bilan kamaytirildi. Shunga qaramay, shuni ta'kidlash mumkinki, rutinning ta'siri erkaklardagi quercetinga qaraganda bir oz ko'proq edi.

BACE1 faolligi ma'lum bo'lgach, biz transgen hayvon modelining asosiy xarakteristikasi bo'lgan APPning gen ekspressiyasini o'rganishga qaror qildik va uning asosiy qayta ishlash fermentlari: BACE1 va ADAM10. 7-rasmda ayol va erkak sichqonlarda korteks va hipokampusda olingan natijalar ko'rsatilgan.

Ikkala jinsda ham WT sichqonlarida APP ifodasining 85 foizdan ko'proq o'sishi kuzatildi, bu ikkala miya yarim korteksida genning haddan tashqari ifodalanganligini ko'rsatdi (7C1-rasm; p < 0.05) va hipokampusda (7H1-rasm; p < 0.05). Quercetin va rutin bilan davolash tadqiqot ostidagi miyaning ikkala sohasida ham erkak, ham urg'ochi sichqonlar uchun bu ifodani 45 foizdan ko'proq (p <0,05) kamaytirishga muvaffaq bo'ldi (7C1, H1-rasm), bu ta'sirlar hipokampusda ko'proq namoyon bo'ldi. 7H1-rasm).

BACE1 oqsilining ifodasiga kelsak, BACE1 faolligi o'zgargan bo'lsa-da, jinsi va flavonoid bilan davolashdan qat'i nazar, transgen va transgen bo'lmagan sichqonlar o'rtasida sezilarli farqlar yo'q edi.

Shunday qilib, biz APPni amiloidogen bo'lmagan qayta ishlashda ishtirok etgan ADAM10 ifodasini baholadik. WT sichqonlari bilan solishtirganda TgAPP sichqonlarida ADAM10 ifodasidagi o'zgarishlar statistik ahamiyatga ega bo'lmasa-da, biroz pasayish kuzatildi. Flavonoidlarni davolashga kelsak, rutin erkaklarda ham, ayollarda ham, miyaning ikkala sohasida ham ADAM10 ifodasida o'sish tendentsiyasini ko'rsatdi (7C3, H3-rasm).

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】