X bilan bog'langan epigenetik regulyator UTX NK hujayraning ichki jinsiy farqlarini boshqaradi
Dec 27, 2023
Virusli infektsiyaning natijalari jinsga bog'liq bo'lib, erkaklar odatda ayollarga qaraganda ko'proq sezgir. Ajablanarlisi shundaki, antiviral tabiiy qotil (NK) hujayralar soni erkaklarda ko'payadi. Biz ko'rsatamizki, NK hujayralari soni erkak sichqonlarda ko'paygan bo'lsa-da, ular sichqonlar va odamlarda urg'ochilarga qaraganda effektor funktsiyasini kamaytiradi. Bu farqlar faqat gonadal gormonlarga bog'liq emas edi, chunki ular gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda saqlanib qolgan. X inaktivatsiyasidan qochadigan epigenetik regulyator bo'lgan Kdm6a (UTX oqsilini kodlaydi), erkak NK hujayralarida pastroq bo'lgan, urg'ochi sichqonlarda NK hujayralarining ichki UTX etishmovchiligi NK hujayralari sonini oshirgan va effektor javoblarini kamaytiradi. Bundan tashqari, NK hujayralariga xos bo'lgan UTX etishmovchiligi bo'lgan sichqonlar sichqon sitomegalovirusiga nisbatan o'limga olib kelishini ko'rsatdi. Integral multi-omiks tahlili UTX uchun xromatinning mavjudligini va NK hujayra gomeostazi va effektor funktsiyasi uchun muhim bo'lgan gen ekspressiyasini tartibga solishda muhim rol o'ynadi. Birgalikda bu ma'lumotlar UTXni NK hujayralarida jinsiy farqlarning muhim molekulyar determinanti sifatida ko'rsatadi.
Evolyutsion tarzda saqlanib qolgan jinsiy farqlar ham tug'ma, ham adaptiv immunitet reaktsiyalarida mavjud1,2. Erkaklar otoimmunitetga kamroq moyil bo'lsa-da, ular ayollarga qaraganda kamroq kuchli antiviral immunitetga ega. Masalan, erkaklarda infektsiyadan keyin odam sitomegalovirusi (HCMV) yuki yuqori bo'lib, bu virusli tahdidlarga nisbatan sezgirlikni oshiradi4. Bu, shuningdek, yaqinda 2019-yilgi koronavirus kasalligi (COVID-19) pandemiyasi davrida ham tasvirlangan, unda erkaklarning og'ir kasallikka bo'lgan kuchli moyilligi immun javoblardagi jinsiy farqlarni aks ettirishi uchun taxmin qilingan5. Odamlar va sichqonlarda o'tkazilgan ko'plab tadqiqotlar yaqinda erkaklar va ayollardagi immunitet hujayralarining tarqalishi va / yoki funktsiyasidagi farqlar haqida xabar berdi6,7. Biroq, bu farqlarning molekulyar asoslari va bu farqlarning kasallik natijalariga ta'sir qilish mexanizmlari hali ham yaxshi tushunilmagan. Sutemizuvchilarning jinsi farqlari nafaqat jinsiy bezlarning divergent gormonlari, balki jinsiy xromosomalarning dozalari bilan ham belgilanadi1. Masalan, X-bog'langan genlar to'plamining ifodasi ayollarda (XX) erkaklarga (XY) nisbatan yuqoriroqdir8. Ayollar X-xromosomalari genlarini jinslar o'rtasida o'xshash darajada ushlab turish uchun tasodifiy X-xromosoma inaktivatsiyasiga (XCI) duchor bo'lishsa-da, XCI to'liq emas, X-xromosoma genlarining 3-7% sichqonlarda inaktivatsiyadan qochadi va 20-30% sichqonlarda inaktivatsiyadan qochadi. odamlar8,9. Shunday qilib, ayollarda erkaklarga nisbatan X-bog'langan gen ekspressiyasining differentsial darajalari asab naychalari nuqsonlari10 va otoimmün kasalliklar11,12 kabi turli xil sharoitlarda jinsiy farqlar bilan bog'liq. NK xujayralari 1-turdagi tug'ma limfotsitlar sifatida aylanib yuruvchi gerpes viruslari oilasi a'zolariga qarshi himoyaning dastlabki chizig'i bo'lib xizmat qiladi13. NK hujayralarining antiviral immunitetdagi ahamiyati, HCMV va Epstein-Barr virusi kabi gerpesviruslar tomonidan infektsiyaga juda sezgir bo'lgan NK hujayralari soni yoki funksionalligi buzilgan bemorlarda ko'rsatilgan. Sichqonlarda NK hujayralari sichqoncha sitomegalovirusi (MCMV) va boshqa virusli infektsiyalarni nazorat qilish uchun talab qilinadi15. NK hujayra funktsiyasining genetik etishmovchiligi yoki NK hujayralari sonining yo'qolishi bo'lgan sichqonlarda MCMV infektsiyasidan keyin virus titrlari va o'lim darajasi sezilarli darajada oshadi15-18. Shunday qilib, NK hujayralari sichqonlarda ham, odamlarda ham antiviral immunitetda juda muhimdir.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
NK hujayralarining kuchli antiviral funktsiyasini hisobga olgan holda, virusga sezgir bo'lgan erkaklarda NK hujayralarining ko'p sonini ko'rsatishi kutilmagan edi6,7. NK hujayralari sonidan tashqari, ilgari baholanmagan boshqa jinsiy dimorfik NK hujayra xususiyatlari (lar) virusli infektsiya paytida jinsiy farqlarni hisobga olishi mumkin. Biz shuni ko'rsatamizki, erkak NK xujayralari sichqonlarda yaxshilangan hujayrali fitnesni ko'rsatsa-da, ular sichqonlar va odamlarda effektor funktsiyasining pasayishini ko'rsatadi. NK hujayralarining tarkibi va funktsiyasidagi bu jinsiy moyillik butunlay gormonal farqlarga bog'liq emas edi, chunki ular gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda saqlanib qolgan. Differentsial ifoda skriningi orqali biz X-bog'langan epigenetik regulyatorni va ma'lum bo'lgan XCI Escapee UTXni aniqladik, bu sichqoncha va inson erkak NK hujayralarida sezilarli darajada pastroq darajada ifodalangan. UTX NK hujayralarining yaroqliligini va effektor funktsiyasini dozaga bog'liq holda tartibga soldi, chunki ayol NK hujayralarida UTX haploin etishmovchiligi sitokin ishlab chiqarish va sitotoksiklikni buzgan holda NK hujayralari sonini ko'paytirish uchun etarli edi. UTX etishmovchiligi bo'lgan ayol NK hujayralari in vivo jonli ravishda mustahkamlangan va apoptoz ex vivo qarshilik, shuningdek, MCMV infektsiyasiga nisbatan sezgirlikni oshirdi. Bu ta'sirlar UTXning ichki demetilaz faolligiga bog'liq emas edi, chunki "demetilaza o'lik" UTX mutantini ifodalovchi sichqonlarda NK hujayralari soni va interferon (IFN) ishlab chiqarilishi o'zgarmagan. Yirtqich turdagi (WT) va UTX-ning ketma-ketligi (ATAC-seq), ommaviy RNK ketma-ketligi (RNK-seq) va anti-UTX CUT&Tag (Nisadlar ostida bo'linish va tagmentatsiya tahlili) yordamida transposazaga kirish mumkin bo'lgan xromatin uchun tahlil yordamida integral tahlil. etishmayotgan NK hujayralari UTX uchun NK hujayralarining moslashuvi va effektor javoblarida ishtirok etadigan gen lokuslari ifodasini tartibga solishda muhim rol o'ynadi. Bizning topilmalarimiz UTXni gen ekspressiyasining demetilazaga bog'liq bo'lmagan modulyatsiyasi orqali NK hujayra gomeostazasi va effektor funktsiyasidagi jinsiy farqlarning asosiy omili sifatida aniqlaydi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing
【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Natijalar
NK jinsiy dimorfizmi gonadal jinsiy gormonlarga bog'liq emas
C57BL/6 sichqonlarining taloqlarini o'rganuvchi yaqinda o'tkazilgan tadqiqot erkaklarda NK hujayralari sonining urg'ochilarga nisbatan ko'payganligini ma'lum qildi19. Ushbu ma'lumotlarga muvofiq, biz taloq NK hujayralari (CD3− TCR - NK1 sifatida belgilangan. 1+; Kengaytirilgan ma'lumotlar rasm. 1a) chastotada (1a,b-rasm) va mutlaq raqamlarda (1c-rasm) ko'payganligini kuzatdik. ) erkak C57BL/6 sichqonlarida urg'ochilarga nisbatan. Ushbu topilmalar shuni ko'rsatadiki, NK hujayralari sonidan tashqari boshqa jinsiy dimorfik xususiyatlar virusli infektsiyalarga erkaklarning sezgirligini oshirishi mumkin. Virusli infektsiyaga javoban, NK hujayralari yallig'lanishga qarshi sitokinlarni, xususan, IFN- 20-22 ni erta ishlab chiqarish uchun juda muhimdir. NK hujayralarining ichki funktsiyasida jinsiy farqlar mavjudligini tekshirish uchun biz ex vivo erkak sichqon va ayoldan ajratilgan NK hujayralarida effektor sitokin ishlab chiqarishni solishtirdik. Yallig'lanishga qarshi sitokinlar interleykin (IL)-12 va IL-15 bilan stimulyatsiya erkak NK hujayralari tomonidan IFN- ishlab chiqarishning pasayishiga olib keldi (1d,e-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar-shakl 1b). Shunga o'xshash natijalar IL-12 va IL-18 (Kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm 1c,d) ga javoban kuzatildi, bu erkak NK hujayralarining sitokin stimulyatsiyasiga javob berish qobiliyatining tegishli nuqsonini ko'rsatadi. Bundan tashqari, IL-12 va K562 leykemiya hujayralari bilan faollashtirilgan periferik qon mononuklear hujayralaridan (PBMCs) ajratilgan inson NK hujayralari (TCR − CD3− CD56+) IFN ning past foiziga olib keldi- + (Fig. 1f va kengaytirilgan ma'lumotlar Fig. 1e) va IFN- o'rtacha floresan intensivligi (MFI; Fig. 1g) erkak va ayol NK hujayralarida. Shunday qilib, NK hujayralari soni ko'paygan bo'lsa-da, erkak NK hujayra effektor sitokin ishlab chiqarish virusli infektsiya paytida qo'zg'atilgan yallig'lanishga qarshi sitokinlarga javoban sichqonlarda ham, odamlarda ham doimiy ravishda kamayadi.
Ayol yoki erkak jinsi jinsiy bezlar gormonlari (masalan, estrogenlar yoki androgenlar) va jinsiy xromosomalar (masalan, 46XX yoki 46XY) birikmasiga asoslanadi. Oldingi tadqiqotlar gonadal gormonlarning NK hujayralari tomonidan IFN- ishlab chiqarishni tartibga solishga bevosita ta'sirini ko'rsatdi23, ammo NK hujayralarining jinsi farqlari ham hujayraning ichki omillariga bog'liq bo'lishi mumkin. Jinsiy gormonlar ta'sirini aniqlash uchun biz gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda NK hujayralarining ko'pligi va funktsiyasini o'rganib chiqdik. Gonadektomiya sitokin stimulyatsiyasiga javoban NK hujayra chastotasi (1h-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 1f), mutlaq sonlar (1i-rasm) va IFN- oqsil ishlab chiqarishdagi jinsiy farqlarni bartaraf eta olmadi (1j, k va kengaytirilgan ma'lumotlar shakl. 1g), NK hujayralaridagi jinsiy farqlar uchun faqat jinsiy bezlar gormonlari javobgar emasligini ko'rsatadi. CD11b va CD27 ifodasi bilan aniqlangan NK hujayra kamolotining pastki to'plamlari omon qolish va effektor funktsiyasi24 uchun differentsial imkoniyatlarga ega bo'lsa-da, WT yoki gonadektomizatsiya qilingan urg'ochi va erkak sichqonlardan olingan taloq NK hujayralari NK hujayralarining kamolotga etish chastotalarida sezilarli farqlarni ko'rsatmadi (Kengaytirilgan ma'lumotlar rasmi). 1h–k). Ushbu natijalar shuni ko'rsatdiki, NK hujayralari soni va effektor funktsiyasida kuzatilgan jinsiy aloqalar differentsial etilish holatlariga bog'liq emas. Shunday qilib, biz jinsiy xromosoma dozasi jinslar o'rtasidagi NK hujayralarining ko'pligi va funktsiyasiga hissa qo'shishi mumkinligini taxmin qildik.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
UTX X inaktivatsiyasidan qochadi va ayollarda ko'proq namoyon bo'ladi
46XX urg'ochi X-bog'langan genlarning dozalarini nazorat qilish uchun XCI dan o'tkazilsa-da, genlarning bir qismi XCIdan (XCI qochishlari deb ataladi) qochib ketadi, bu ko'pincha ayollarda erkaklarnikiga nisbatan yuqori ifodaga olib keladi25,26. Shunday qilib, erkaklarnikiga nisbatan ayollarda XCI qochish ifodasining ortishi NK hujayralarida jinsiy farqlarga vositachilik qilishi mumkin. Turli genlar odamlarda va sichqonlarda X inaktivatsiyasidan qochib qutulgan bo'lsa-da, besh gen (XIST, DDX3X, KDM6A, EIF2S3, KDM5C) ilgari ikkalasida XCI qochqinlari sifatida aniqlangan27. XIST keyingi tahlildan chiqarib tashlandi, chunki u ayol hujayralarida XCIda ma'lum roli tufayli erkak hujayralarida ifodalanmaydi1. Qolgan to'rtta genning barchasi erkak va ayol NK hujayralarida, ham odamlarda (2a-rasm) va sichqonlarda (2b-rasm) sezilarli darajada pastga tushirildi. Kdm6a (UTX ni kodlaydigan) transkript darajalari inson va sichqonchaning NK hujayralarida eng jinsiy dimorfik ifodani ko'rsatdi (2a, b-rasm). Erkak NK hujayralari, shuningdek, sichqonlardagi ayol NK hujayralari bilan solishtirganda, past UTX protein darajasini ifodaladi (2c, d-rasm). Kdm6a transkript darajalari va UTX protein darajalaridagi bu farqlar jinsiy xromosoma to'ldiruvchisi (XX yoki XY) bir-biridan ajratilgan gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda (2e-g-rasm) va To'rt yadroli genotip (FCG) sichqonlarida (kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm 2a) saqlanib qoldi. jinsiy bezlarning jinsiy a'zosi (tuxumdonlar yoki moyaklar)28. Ushbu ma'lumotlar Kdm6a (UTX) ning ifoda darajalari NK hujayralarida jinsga bog'liqligini va birinchi navbatda gonadal gormonlar emas, balki X-xromosoma dozasi bilan bog'liqligini ko'rsatadi.
UTX NK hujayralari mosligini bostiradi
UTX NK hujayralarida kuzatilgan jinsiy farqlarga vositachilik qiladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz dozaga bog'liq UTX yo'qolishi bilan bir qator sichqonlarni yaratdik. Birinchidan, biz erkaklarda ifodalangan UTX ning yagona nusxasini taqlid qilish uchun NK hujayralarida (Kdm6afl/WT Ncr1Cre+, bundan keyin UTXHet deb yuritiladi; Qo'shimcha ma'lumotlar jadvali) geterozigotali UTX o'chirilishi bilan urg'ochi sichqonlarni yaratdik. Biz ayol UTXHet va erkak WT (Kdm6afl/y Ncr1Cre-) sichqonlari o'rtasida o'xshash NK hujayra UTX oqsili ifodasini tasdiqladik (Kengaytirilgan ma'lumotlar 2b-rasm). Ayol UTXHet sichqonlari erkak WT bilan solishtirganda o'xshash taloq NK hujayralari sonini ko'rsatdi (3a, b-rasm) va ikkalasi ham ayol WT bilan solishtirganda NK hujayralari sonining ko'payishini ko'rsatdi. Ayol WT, erkak WT va urg'ochi UTXHet sichqonlarining NK hujayralari o'rtasida CD11b va CD27 ifodasi bilan kamolotda sezilarli farqlar kuzatilmadi (kengaytirilgan ma'lumotlar 2c-rasm). Shunday qilib, UTX ning bitta nusxasini yo'qotish NK hujayralari sonini kamolotga bog'liq bo'lmagan tarzda oshirish uchun etarli edi. Keyinchalik biz UTX ni gomozigotli yo'q qilish bilan sichqonchani ishlab chiqardik (Kdm6afl/flNcr1Cre+, bundan keyin UTXNKD deb yuritiladi; Qo'shimcha ma'lumotlar jadvali 1), natijada NK hujayralarida UTX ning ikkala nusxasi ham yo'qoladi. UTX oqsili ifodasi ayol UTXNKD NK hujayralarida oqim sitometriyasi bo'yicha ayol WT NK hujayralariga nisbatan sezilarli darajada past bo'lgan (Kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm 2b), shuningdek, bitta UTX nusxasi (ya'ni, erkak WT va ayol UTXHet) bo'lgan NK hujayralariga nisbatan pastroq edi. ). WT NK hujayralariga nisbatan ayol UTXNKDda prognoz qilingan hajmda (180 kD) UTX oqsilining yo'qligi western blot tomonidan tasdiqlangan (Kengaytirilgan ma'lumotlar 2d-rasm). NK hujayra chastotalari va mutlaq raqamlar UTX nusxasi sonining kamayishi bilan ortdi (3c,d-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 3a-rasm). Ushbu ma'lumotlar UTX ni NK hujayralari chastotasini va mutlaq sonlarini dozaga bog'liq holda tartibga solishda nazarda tutadi.
1-rasm|IFN ishlab chiqarish va NK hujayralari sonidagi jinsiy farqlar gonadal gormonlarga bog'liq emas. a–c, urgʻochi va erkak C57BL/6 sichqonlarida taloq NK hujayralarining (CD3− TCR − NK1.1+) vakillik nuqtalari (a), chastotasi (b) va mutlaq soni (c) (n { har bir guruh uchun {7}}). d,e, IFN- + (d) va normallashtirilgan IFN-MFI (e) taloqning umumiy NK hujayralarining urgʻochi va erkak sichqonlarning davolashsiz (NT) yoki IL{{1{47}}} } (50 ng ml−1) va IL-12 (20 ng ml−1) 4 soat davomida, ayol IL-15/IL{ ning MFI darajasiga normallashtirildi. {18}} davolash (har bir guruh uchun n=8). f,g, foiz IFN{{20}} (f) va normallashtirilgan IFN- MFI (g) CD3− CD56+ ayol (n=6) va erkak (n { {25}}) inson NK hujayralari ekilgan va 1{67}} ng ml-1 IL-12 bilan K562 hujayralari ishtirokida 16 soat davomida rag'batlantirilgan, ayol ILning MFI darajasiga normallashtirilgan-12 davolash. h, i, Gonadektomizatsiya qilingan ayol va erkak sichqonlardagi taloq NK hujayralarining chastotasi (h) va mutlaq soni (i) (har bir guruh uchun n=18). j,k, Gonadektomizatsiya qilingan urg'ochi va erkak sichqonlardan ajratilgan va NT yoki IL-15 (50 ng ml) bilan ekilgan jami taloq NK hujayralarining IFN foizi- + (j) va normallashtirilgan IFN- MFI (k) 1) va IL-12 (20 ng ml−1) 4 soat davomida (har bir guruh uchun n=12). Ma'lumotlar 2-4 mustaqil eksperimentning vakili. Namunalar ikki dumli juftlashtirilmagan Student t-testi yordamida taqqoslandi va ma'lumotlar nuqtalari o'rtacha ± sem (*P <0,05; **P <0,01; ***P <0,001; ****P) bilan individual sichqonlar sifatida taqdim etildi. < 0,0001). Maxsus P qiymatlari quyidagicha: b=0.0002; c=0.006; d=0.0036; e=0.0013; f=0.04; g=0.03; h < 0,0001; men=0.0006; j=0.0234; k=0.0019.
UTXNKD sichqonlarida (CD45.2+) NK hujayralari sonining ko'payishiga ta'sir qiluvchi mexanizmlarni aniqlash uchun WT (CD45.1+) bilan aralash suyak iligi kimerik (mBMC) sichqonlarining 1:1 nisbati ishlab chiqarildi. . Qayta tiklashdan olti hafta o'tgach, suyak iligi transplantatsiyasidan keyin ayol UTXNKD (CD45.2+) NK hujayralarining WT bilan solishtirganda sezilarli raqobatdosh ustunligini kuzatdik (CD451x2) suyak iligi transplantatsiyasidan keyin (Kengaytirilgan ma'lumotlar 3b, c). NK hujayralaridan farqli o'laroq, xuddi shu donorning T hujayralari (UTXNKD, CD45.2+), UTX ning NKga xos o'chirilishi tufayli UTX yetarli bo'lib, asl in'ektsiya nisbatini ko'rsatdi (1:1; Kengaytirilgan ma'lumotlar rasm. 3b, c). Ushbu ma'lumotlar, rivojlanish jarayonida UTX tomonidan bostirilgan NK hujayra raqamlarini hujayraga xos tarzda ko'rsatadi. Ushbu fenotip proliferatsiyadagi farqlardan kelib chiqqanligini tekshirish uchun biz WT: UTXNKD mBMC sichqonlarida taloq NK hujayralarida Ki67 hujayra bo'linish belgisini tahlil qildik, genotiplar orasidagi hujayra sonini normallashtirish uchun 4: 1 nisbatda AOK qilingan. Ajablanarlisi shundaki, UTXNKD NK hujayralari Ki67+ hujayralarining past chastotalarini ko'rsatdi va IL-15 ga javoban kamroq CFSE suyultirilishini ko'rsatdi (kengaytirilgan ma'lumotlar 3d,e-rasm). Bu natijalar shuni ko'rsatadiki, UTXNKD sichqonlarida kuzatilgan yuqori NK hujayralari soni ko'payishning ko'payishi bilan bog'liq emas. Ushbu natijalarni hisobga olgan holda, biz UTXNKD sichqonlarida NK hujayralarining ko'tarilgan chastotasi (3c, d-rasm) UTX ifodasi bo'lmaganda NK hujayralarining uyali moslashuvining kuchayishi bilan bog'liq bo'lishi mumkinligini taxmin qildik. Bu imkoniyatni sinab koʻrish uchun konjenik ravishda farq qiluvchi WT (CD451x2 ) va UTXNKD (CD45.{28}} ) taloq NK hujayralari Cell Trace Violet (CTV) bilan belgilandi va WT (CD45.1+ ) qabul qiluvchilariga oʻtkazildi. 1:1 nisbati (Kengaytirilgan ma'lumotlar 3f-rasm). O'tkazilgandan keyin 7-kuni, ko'chirilgan populyatsiya qabul qiluvchi taloqdagi UTXNKD NK hujayralariga egilib (3e, f-rasm), etuk NK hujayra gomeostazini hujayra-ichki UTX bostirishini ko'rsatdi. Bu farq o'zgargan proliferatsiya bilan bog'liq emas edi, chunki har ikkala o'tkazilgan populyatsiyalar tomonidan CTV suyultirish uzatishdan keyin 7-kuni minimal edi (kengaytirilgan ma'lumotlar 3g-rasm). UTX apoptozni tartibga solish orqali NK hujayra gomeostazini bostirganligini tekshirish uchun biz IL-15 yoki IL-15 va apoptoz induktori Nutlin bilan inkubatsiya qilingan tartiblangan NK hujayralarida ajralgan kaspaza 3 ifodasini solishtirdik. }}a29. Pastki UTX ifodasi past dozali IL-15 va Nutlin-3davolash ishtirokida parchalangan kaspaza 3+ NK hujayralarining kamayishi bilan bog'liq (3g,h-rasm). Bundan tashqari, erkak NK hujayralari, shuningdek, gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda ham saqlanib qolgan ayol NK hujayralariga nisbatan Nutlin{{50}a ga javoban NK hujayralarining bo'linib ketgan kaspaza 3+ chastotasini kamaygan, ammo sezilarli darajada kamaygan (Kengaytirilgan ma'lumotlar). 3h–k-rasm). Bundan tashqari, NK hujayralari apoptozi va omon qolishini tartibga solish Bim (apoptotik omil)31 tomonidan antagonizatsiya qilinishi mumkin bo'lgan Bcl-2 (anti-apoptotik omil)30 nisbiy ifoda darajalariga bog'liq. UTXNKD NK xujayralari Bcl-2 ning hujayra ichidagi oqsil ekspressiyasining ko'payishini va WT NK hujayralari bilan solishtirganda Bimning (3i,j-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm 3l) kamtarona o'sishini ko'rsatdi. Bu UTXNKD NK hujayralarida Bcl-2:Bim nisbatining sezilarli darajada oshishiga olib keldi (3k-rasm). Erkak NK hujayralarida ham Bcl{62}}:Bim nisbatida sezilarli o'sish kuzatildi (3l-rasm), bu gonadektomiyadan keyin ham davom etdi (3m-rasm). Birgalikda bu maʼlumotlar shuni koʻrsatadiki, oʻzgartirilgan UTX darajalari Bcl{65}} ifodasini tartibga solish orqali NK hujayralari mosligidagi jinsiy farqlarga asos boʻlishi mumkin.
2-rasm|X-bog'langan UTX jinsiy gormonlardan mustaqil jinsiy dimorf gen ekspressiyasini ko'rsatadi.a Erkaklarga nisbatan ayol (n=36) dan ajratilgan NK hujayralarining DICE ma'lumotlar bazasi RNK-seq ma'lumotlaridan foydalangan holda XCI qochish genlarining normallashtirilgan ifodasi (n {{4) }}) ayollar uchun normallashtirilgan. b, Ayol va erkak sichqonlarning taloq NK hujayralarida teskari transkripsiya (RT-qPCR) bilan miqdoriy PCR orqali XCI qochish genlarining normallashtirilgan ifodasi (C57BL/6; 8 haftalik, har bir guruh uchun n=5). Genlar urg'ochi va erkaklar o'rtasida chapdan o'ngga o'zgaruvchan katlamalarning ortishi bilan tartibga solinadi. c, d, oqim sitometriyasi orqali sodda urg'ochi va erkak sichqonlarning taloq NK hujayralarida UTX oqsili ekspressiyasining reprezentativ gistogrammasi (c) va normallashtirilgan MFI (d), urg'ochi sichqonlarning MFI siga normallashtirilgan (C57BL/6; 8 haftalik; n { har bir guruh uchun {12}}). e, Ayollarga normallashtirilgan izolyatsiya qilingan taloq NK hujayralarining RT-qPCR orqali Kdm6a (UTX) ning nisbiy ifodasi (har bir guruh uchun n=6). f,g vakil gistogrammalar (f) va nisbiy UTX MFI (g) NK hujayralari gonadektomizatsiya qilingan urg'ochi va erkak sichqonlarning taloqlaridan oqim sitometriyasi orqali (guruhda n=6) urg'ochi uchun normallashtirilgan. Namunalar juftlashtirilmagan ikki dumli Student t-testi yordamida taqqoslandi va ma'lumotlar nuqtalari o'rtacha ± sem (*P < 0.{{20}}5; **P) bilan individual sichqonlar sifatida taqdim etildi. < 0.01; ***P <0.001). Maxsus P qiymatlari quyidagicha: a < 0,001; b: Ddx3x=0.03, Kdm5c=0.0017, Eif2s3 = 0.0113, Kdm6a=0.000087; d=0.003; e=0.008; g=0.0029).
UTX NK hujayra effektor funktsiyasini kuchaytiradi
Erkak NK xujayralari gonadal gormonlarga bog'liq bo'lmagan IFN- ishlab chiqarishni (1d,e-rasm) kamayganligi sababli (1j,k-rasm) biz keyinchalik bu fenotip UTX darajalari bilan tartibga solinganligini aniqlashga harakat qildik. Sitokin stimulyatsiyasidan so'ng IFN{3}}hosil qiluvchi hujayralarning chastotalari va mutlaq soni (4a-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 4a,b-rasm), shuningdek IFN-MFI (4a-rasm) erkak WT va ayol UTXHet NK o'rtasida o'xshash edi. hujayralar. Ayol UTXHet NK hujayralari tomonidan IFN- ishlab chiqarish ayol WT va ayol UTXNKD NK hujayralari o'rtasida oraliq edi (4a-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 4a,b-rasm). Ushbu tendentsiya Elishay tomonidan NK hujayra IFN- to'planishini solishtirish orqali ham kuzatildi (4b-rasm). Bundan tashqari, bu hodisa IFN-ga xos emas edi, chunki yallig'lanishga qarshi NK effektor molekulasi bo'lgan granulotsit-makrofag koloniyasini ogohlantiruvchi omil (GM-CSF) ishlab chiqarish ham ayol NK hujayralarida UTX nusxasi sonining kamayishi bilan kamaydi (4c-rasm). ).
Sitokin ishlab chiqarishdan tashqari, NK hujayralarining sitolitik faolligi antiviral33 va antitumor himoyasi34 uchun juda muhimdir. NK hujayralarining sitotoksisitesidagi jinsiy farqlarni baholash uchun biz maqsad sifatida asosiy gistokompozitsiya kompleksi (MHC) sinf I-defisitli MC38 hujayralari bilan o'ldirish tahlillarini o'tkazdik. 4: 1 effektor: maqsad nisbatida erkak WT NK hujayralari gonadektomizatsiya qilingan sichqonlarda saqlanib qolgan ayol WT (4d-rasm) bilan solishtirganda maqsadli hujayralarning sezilarli darajada past lizisini ko'rsatdi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 4c-rasm). Erkak NK hujayralari tomonidan maqsadli hujayralarni o'ldirishning buzilishi degranulyatsiyadagi farqlarga bog'liq emas edi, chunki CD107a darajalari ayol va erkak NK hujayralari o'rtasida o'xshash edi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 4d, e-rasm). Biroq, erkaklar IL-15 va anti-NK1.1 faollashtiruvchi retseptorlari ligatsiyasiga javoban sitotoksik molekulalar perforin va granzim B ning sezilarli darajada past darajada ishlab chiqarilgan (Kengaytirilgan ma'lumotlar 4d, e). Ta'kidlash joizki, UTXHet va erkak WT NK hujayralari o'xshash o'ldirish qobiliyatini ko'rsatdi (4d-rasm), bu ayol WT va UTXNKD NK hujayralari o'rtasida oraliq edi (4d-rasm). Birgalikda, bu ma'lumotlar UTX NK hujayralarining sitotoksikligini dozaga bog'liq ravishda kuchaytirishini ko'rsatadi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
UTX yo'qolishining NK hujayra effektor funktsiyasiga kuzatilgan ta'sirini hisobga olgan holda, biz UTXNKD sichqonlarining virusli infektsiyaga nisbatan zaifroq ekanligini tekshirdik. Tez IFN- va GM-CSF ishlab chiqarish NK hujayra vositachiligida antiviral nazorat qilish uchun juda muhimdir20. Ajablanarlisi shundaki, UTXNKD sichqonlari MCMV ning subletal dozasi bilan kurashganida tezda infektsiyaga duchor bo'lishdi (n=3/8 omon qoldi) (4e-rasm). Bundan tashqari, UTX etishmovchiligi bo'lgan taloq NK hujayralari infektsiyadan keyingi 1,5-kuni jami NK hujayralarida IFN- ishlab chiqarish va granzim B ishlab chiqarishda sezilarli nuqsonni ko'rsatdi (4f-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar-shakl 4f,g). Bundan tashqari, UTXNKD tomonidan IFN- ishlab chiqarishda shunga o'xshash nuqson barcha kamolotning pastki to'plamlarida kuzatildi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 4h-rasm), bu UTX ning IFN- ishlab chiqarishni etuklikka bog'liq bo'lmagan tarzda nazorat qilishiga ta'sir qiladi. Etuk NK hujayralarida UTX ekspresyonining dozasi virusli infektsiya paytida IFN- ishlab chiqarish bilan bog'liqligini tasdiqlash uchun biz transgen sichqonchani ishlab chiqardik, bu tamoksifen bilan induktsiyalangan UTXni yo'q qilish (Kdm6afl/fl Rosa26ERT2CRE+, bundan keyin iUTX−/ deb yuritiladi). −; Qo‘shimcha ma’lumotlar jadvali 1). mBMC sichqonlari gematopoetik bo'limda UTX o'chirilishini cheklash uchun 1:1 WT (CD45.1+ ) va iUTX−/− (CD45.2+ ) aralashmasi bilan ishlab chiqarilgan. WT: iUTX−/− mBMC sichqonlari UTX ifodasini yo‘qotish uchun MCMV bilan infektsiyadan oldin darhol tamoksifen bilan davolangan (4g-rasm). IDX−/− (CD45.2+ ) NK xujayralari WT hamkasblari bilan solishtirganda kamroq IFN- ishlab chiqargan (4h-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 4i-rasm). WT:iUTX−/− mBMC sichqonlarida tamoksifenni qo‘llash UTX oqsili yo‘qotilishining differentsial darajalariga olib keldi va infektsiyadan keyingi 1,5-kuni hujayra ichidagi UTX darajalari va IFN- ishlab chiqarish o‘rtasida sezilarli ijobiy korrelyatsiyani ko‘rsatdi (4i-rasm). Ushbu natijalar etuk NK hujayralarida hujayraning ichki UTX darajalari effektor molekula ishlab chiqarishni va MCMV infektsiyasidan keyingi himoyani tartibga solishini ko'rsatadi.
3-rasm|UTX NK hujayralari mosligini bostiradi. a,b, Chastotalar (F va M WT: n=12; F UTXHet: n=16; a) va mutlaq sonlar (F WT: n=6; M VT: n {{ 4}}; F UTXHet: n=9; b) urg'ochi (F) WT, erkak (M) WT va F UTXHet sichqonlarining taloqidagi NK hujayralari. c,d, Chastota (WT: n=12; UTXHet: n=16; UTXNKD: n=6; c) va mutlaq raqamlar (WT: n=8; UTXHet: n {{10}}; UTXNKD: n=6; d) F WT, UTXHet va UTXNKD sichqonlarining taloqidagi NK hujayralari. e, in'ektsiyadan oldin 1:1 nisbatda WT (CD45.1+) qabul qiluvchilariga o'tkazilgan tug'ma farqli WT (CD451x2 ) va UTXNKD (CD45.2+ ) NK hujayralarining reprezentativ kontur chizmalari (chapda) va transferdan keyingi 7-kuni (o'ngda). f, qabul qiluvchi sichqonlarning taloqidagi WT va UTXNKD hujayralarining in'ektsiyadan oldin va transferdan keyingi 7-kun chastotasi (n=6). g,h, IL-15 (5 ng ml−1) bilan yetishtirilgan urgʻochi WT, UTXHet va UTXNKD sichqonlarining boʻlingan kaspaza 3+ NK hujayralarining reprezentativ gistogrammalari (g) va foiz (h) va dimetilsulfoksid (DMSO; F WT: n=7; F UTXHet: n=11; F UTXNKD: n=6) yoki 2,5 mM Nutlin-3a (F WT: n { {33}}; F UTXHet: n=7; F UTXNKD: n=3) 24 soat davomida. i–k, Normalized Bcl-2 MFI (i), Bim MFI (j) va Bcl-2:Bim MFI nisbati (k) urg‘ochi WT va UTXNKD sichqonlarining taloq NK hujayralarida (n {{ 39}}). l,m, Bcl{{40}}: Ayol WT va erkak WT sichqonlarining (n=6; l) va gonadektomizatsiya qilingan urg'ochi va erkak sichqonlarning (n {{) taloq NK hujayralarida Bim MFI nisbati 42}}; m). Ma'lumotlar 2-4 mustaqil eksperimentning vakili. Namunalar oddiy bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA; a-d), bir nechta taqqoslashlar uchun Tukey tuzatishi bilan ikki tomonlama ANOVA (h) yoki juftlashtirilmagan ikki dumli Student t-testi (f, i-m) yordamida taqqoslandi. Maʼlumotlar nuqtalari oʻrtacha ± sem (NS, ahamiyatli emas; *P < 0.05; **P < 0.01; * boʻlgan individual sichqonlardir. **P < 0.001; ****P < 0,0001). Maxsus P qiymatlari quyidagicha: a: F WT va M WT=0.0201, M WT va UTXHet=0.989, F WT va UTXHet=0.0327, WT va UTXNKD { {63}}.001; b: F WT va M VT=0.0320, M WT va UTXHet < 0,99, F WT va UTXHet=0,0029, WT UTXNKDga nisbatan=0,001; c: WT va UTXHet=0.0375, UTXHet va UTXNKD va WT, UTXNKDga nisbatan < 0,0001; d: WT va UTXHet=0.0191, UTXHet va UTXNKD=0,0278, WT, UTXNKD=0.001; f: Inyeksiyadan oldingi=0.3304; kun 7=0.001918; h: DMSO < 0,0001, Nutlin-3a–F WT va F UTXHet=0,0048, qolgan <0,0001; i < 0,0001; j=0.0004; k=0.0025; l=0.0115; m=0.0227.
UTX NK hujayralarini demetilazaga bog'liq bo'lmagan tarzda boshqaradi
Giston demetilazasi sifatida UTX trimetillangan giston H3 Lys27 (H3K27me3; repressiv giston belgisi) dan metil guruhini olib tashlashni katalizlash orqali NK hujayralari gomeostazini va effektor gen ekspresyon dasturlarini boshqarishi mumkin, bunda faol gen ekspresyonu uchun xromatinni sozlash35. Shu bilan birga, UTX gen ekspressiyasini muvofiqlashtirish uchun epigenetik regulyatorlar va xromatin modifikatorlari bilan o'zaro ta'sir qilish orqali demetilazaga bog'liq bo'lmagan faoliyatga ham egadir36,37. NK hujayra gomeostazini va effektor funktsiyasini modulyatsiya qilishda UTX demetilaz faolligining rolini o'rganish uchun biz p.His1146Ala va p.Gla1 ni o'z ichiga olgan katalitik faol bo'lmagan UTX (UTX "demetilaza o'lik" yoki UTXDMD sichqonlari; Qo'shimcha ma'lumotlar jadvali 1) ni ifodalovchi sichqonlardan foydalandik. katalitik sohadagi nuqta mutatsiyalari38. Qizig'i shundaki, urg'ochi UTXDMD va WT sichqonlari o'xshash chastotalarni va taloq NK hujayralarining mutlaq sonini ko'rsatdi (5a-c-rasm), UTXNKD sichqonlari esa ikkalasiga nisbatan taloq NK hujayralari sonining ko'payishini ko'rsatdi. Ushbu topilmalar UTXning NK hujayralari sonini bostirish demetilazaga bog'liq emasligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, WT va UTXDMD NK hujayralari o'rtasida sitokin stimulyatsiyasiga javoban IFN- ishlab chiqarish qobiliyatida farqlar kuzatilmadi (5d-f-rasm). Ushbu natijalar UTX ning NK hujayralari sonini cheklash va IFN ishlab chiqarishni rag'batlantirish funktsiyasi demetilazaga bog'liq emasligini ko'rsatadi. UTX ning bitta nusxasiga qo'shimcha ravishda, erkaklar katalitik faol bo'lmagan Kdm6c (UTY oqsilini kodlaydi), UTX ning Y-xromosoma bilan bog'langan homologini ifodalaydi. Biz UTY ning faqat erkaklardagi NK hujayralarida ifodalanganligini tasdiqladik (Kengaytirilgan ma'lumotlar 5a-rasm) va sichqonlar (kengaytirilgan ma'lumotlar-shakl 5b) va sichqonlarda gonadektomiya bilan o'zgartirilmagan (kengaytirilgan ma'lumotlar 5b-rasm). Yuqorida muhokama qilinganidek, erkak WT (UTX va UTY ning bir nusxasi) va urg'ochi UTXHet (UTX ning bir nusxasi) sichqonlari (3a,b va 4a,d-rasmlar) o'rtasida NK hujayra raqamlari yoki effektor funktsiyasida farqlar ko'rilmagan, bu NK hujayra gomeostazini va effektor funktsiyasini tartibga solishda UTY uchun cheklangan rol. Bundan tashqari, erkak UTXNKD (Kdm6afl/y Ncr1cre+) sichqonlari NK hujayralarining chastotasi va mutlaq sonini ko'rsatdi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 5c,d-rasm) va erkaklar WT nazorati bilan solishtirganda kamroq IFN- (kengaytirilgan ma'lumotlar 5e-h) ishlab chiqardi. NK hujayralari UTX etishmovchiligi bo'lgan ayollarda ko'rinadigan o'zgarishlarni aks ettiradi. (3a,b va 4a,b-rasmlar). Shunday qilib, NK hujayralarida UTX yo'qolishi ayollar va erkaklarda xuddi shunday ta'sirga ega.
UTX xromatinni qayta qurish orqali NK hujayra transkriptomini boshqaradi
Yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar NK hujayra faollashuvidan oldin ham tez effektor javob berish uchun tug'ma limfoid hujayralarni tashkil etuvchi NK hujayralarining tartibga soluvchi sxemasini (regulonlar) aniqladi. }. NK hujayralarida xromatin mavjudligi va gen ekspressiyasi bo'yicha UTX vositachiligidagi modifikatsiyalarni tekshirish uchun biz ATAC-seqni ommaviy RNK-seq bilan tandemda tozalangan WT (CD45.1+) va UTXNKD (CD45.{{) da amalga oshirdik. 9}} ) 4:1 WT dan NK hujayralari: UTXNKD mBMC sichqonlari (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6a-rasm). mBMC sichqonlaridan foydalanish ichki nazorat ostida tajriba o'tkazish imkonini berdi va atrof-muhitni chalkashtiruvchi omillarni minimallashtirdi. ATAC-seq va RNK-seq ma'lumotlarining asosiy komponent tahlili (PCA) genotip bo'yicha namuna klasterlanishini aniqladi (kengaytirilgan ma'lumotlar 6b-rasm). ATAC-seq WT NK xujayralari bilan solishtirganda UTXNKDda foydalanish imkoniyatining 3569 ta cho'qqi kamayganini va 2113 cho'qqi ortganini aniqladi (log2 marta o'zgarishi > ±{25}}.5, sozlangan P qiymati < 0.05 , noto'g'ri aniqlash darajasi (FDR) < 0.05; Qo'shimcha ma'lumotlar jadvali 2). Bundan tashqari, RNK-seq WTga nisbatan UTXNKDda 701 ta kamaygan va 554 ta genni aniqlagan (log2 marta o'zgarishi > ± 0,5, sozlangan P qiymati < 0,05, FDR < 0,05; Kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm 6c va qo'shimcha ma'lumotlar jadvali 3). Ushbu topilmalar UTX yo'qligida NK hujayralarining xromatin landshaftida ham, transkriptomida ham chuqur o'zgarishlarni ko'rsatadi.
cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi
ATAC-seq va RNK-seqning integral tahlili 395 ta genni aniqladi, ular har ikkala farqli ravishda kirish mumkin va o'rtacha log2 o'rtasidagi sezilarli ijobiy korrelyatsiya (Spearman korrelyatsiyasi: R=0.62, P <2,2 × 10−16) bilan ifodalanadi. ATAC-seq cho'qqilarining o'zgarishi va RNK-seq ifodasining log2 marta o'zgarishi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6d-rasm). Noaniq c - ATAC-seq va RNK-seq ma'lumotlar to'plamlarining klasterlanishini anglatadi, ular sezilarli darajada kamaygan (1, 2, 3 va 6-klasterlar) yoki ortib bo'lgan (4 va 5-klasterlar) mavjud bo'lmagan (6a-rasm) va ifodalangan oltita asosiy klasterni aniqladi. (6b-rasm) UTXNKD NK hujayralarida. Funktsional boyitish tahlili uchun g:Profiler RNK-seq tomonidan aniqlangan differentsial ifodalangan genlar klasterlarini tahlil qilish uchun ishlatilgan (6c-rasm). Immunitet tizimi jarayoni, sitokin ishlab chiqarish, IFN- ishlab chiqarish, limfotsitlarni faollashtirish va immun effektor jarayoni kabi asosiy yo'llar UTXNKDda ifodalanishning pasayishi bilan bog'liq edi (1, 2, 3 va 6-klasterlar; 6c-rasm). Ayni paytda, rivojlanish jarayoni, biosintetik jarayon va metabolik jarayon kabi yo'llar UTXNKDda ifodalanishning ortishi bilan sezilarli darajada bog'liq edi (4 va 5-klasterlar; 6c-rasm). Shunisi e'tiborga loyiqki, hujayra o'lim yo'li genlarining tahlili differentsial tarzda ifodalanadigan bir nechta genlarni aniqladi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6e-rasm). Ta'kidlash joizki, anti-apoptotik gen Bcl2 ekspressiyasi ortdi, proapoptotik gen Casp3 esa kamaydi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6e-rasm). Birgalikda, bu topilmalar UTXning yo'qolishi natijasida xromatinga kirish imkoniyatining o'zgarishi va NK hujayra gomeostazasi va effektor funktsiyasi bilan bog'liq genlarning ekspressiyasiga olib keladi.
4-rasm|UTX NK hujayra effektor funktsiyasini kuchaytiradi va virusli infektsiyaga qarshi omon qolish uchun talab qilinadi. Ayol WT (n=8), erkak WT (n=8), ayol UTXHet (n=12) va NK hujayralarining IFN- + foizi va normallashtirilgan IFN- MFI va ayol UTXNKD (n=6) davolashsiz (NT) yoki IL-15 (5{{70}} ng ml-1) va IL{{1{{8{ 4 soat davomida {82}}}}} (20 ng ml−1), ayol IL-15/IL-12 davolashning MFI darajasiga normallashtirildi. b,c, IFN- (b) va GM-CSF (c) konsentrasiyalari ELISA yordamida ayol WT (n=4), UTXHet (n=5) va UTXNKD (n {{2) supernatantlarida o'lchanadi. 0}}) NT yoki IL-12 (20 ng ml-1) va IL-18 (1{{1{{1{115}) boʻlgan NK hujayralari }8}}4}} ng ml−1) 4 soat davomida. d, Ayol WT (n {{30}}), erkak WT (n=8), ayol UTXHet (n=12) tomonidan MHCI etishmovchiligi bo'lgan MC38 (maqsadli) hujayralarning o'ziga xos lizisi ) yoki ayol UTXNKD (n=6) NK (effektor) hujayralari 16 soat davomida 4:1 effektorda: maqsad nisbati, ayol WT tomonidan lizisgacha normallashtirilgan. e, MCMV bilan kasallangan WT va UTXNKD sichqonlarining Kaplan-Meier omon qolish egri chiziqlari (n=8). Mantel-Cox testi (P = 0.0093). f, taloqdagi WT ga nisbatan IFN foizi- + (n=14), normallashtirilgan IFN- MFI (n=14) va granzim B (GzmB) MFI (n=8) 4: 1 WT: UTXNKD mBMC sichqonlarining MCMV infektsiyasidan so'ng D1.5 da NK hujayralari. g, 1:1 WT sxemasi (CD45.1+ ) va iUTX−/− (CD45.2+ ) suyak iligi (BM) busulfan kamaygan xostlarga oʻtkaziladi va 3 marta 1 mg tamoksifen bilan davolanadi. d MCMV infektsiyasidan oldin. h, MCMV infektsiyasidan so'ng D1.5 da 1:1 WT:iUTX−/− mBMC sichqonchalari dan NK hujayralarining foiz IFN{- + va normallashtirilgan IFN- MFI, WT ga normallashtirildi (n=6). i, Ikki dumli Pearson korrelyatsiyasi IFN- NK hujayralarining UTX MFIga nisbatan (n=12; r 2=0.775; P <0.0001). Ma'lumotlar 2-3 mustaqil eksperimentning vakili. Ikki tomonlama ANOVA (a-c), bir tomonlama ANOVA bir nechta taqqoslashlar uchun Tukey tuzatishi bilan (d) yoki juftlangan ikki dumli Student t-testi (f, h) ishlatilgan. Ma'lumotlar nuqtalari o'rtacha ± sem * P <0,05 bo'lgan individual sichqonlardir; **P <0,01; ***P <0,001; ****P <0,0001. Maxsus P qiymatlari: a: F WT va M WT=0,0027, F WT va F UTXHet va F WT va F UTXNKD < 0,0001, M WT va F UTXHet=0,269, F UTXHet va F UTXNKD=0.0007; b: UTXHetga nisbatan WT=0.0037, UTXHet UTXNKDga nisbatan=0,0011, WT UTXNKDga nisbatan < 0,0001; c: WT va UTXHet=0.0026, UTXHet va UTXNKD=0,0349, WT va UTXNKD < 0,0001; d: F WT va M WT=0.0005, F WT va F UTXHet va F WT qarshi F UTXNKD < 0,0001, M WT va F UTXHet=0,1616, F UTXHet va F UTXNKD {{112} }}.0439; f: %IFN- + <0,0001, IFN- MFI=0,0024, GzmB=0,0032; g: %IFN- + < 0,0001, IFN- MFI=0,0018. PI, infektsiyadan keyingi.
5-rasm|UTX NK hujayralari gomeostazini va demetilaz faolligiga bog'liq bo'lmagan IFN ishlab chiqarishni nazorat qiladi. a-c, urg'ochi WT, UTXDMD va UTXNKD sichqonlarining taloqlaridagi NK hujayralarining vakillik zichligi (a), chastotasi (b) va mutlaq soni (c) (har bir guruh uchun n=5). d–f, Vakil kontur chizmalari (d), IFN foizi- + (e) va ayol WT, UTXDMD va UTXNKD NK hujayralarining normallashtirilgan IFN-MFI (f) (har bir guruh uchun n=5) WT ga normallashtirilgan. Ma'lumotlar 2-3 mustaqil eksperimentning vakili. Namunalar bir tomonlama ANOVA yordamida bir nechta taqqoslash uchun Tukey tuzatishi bilan taqqoslandi. Ma'lumotlar nuqtalari o'rtacha ± sem *P < 0 bilan individual sichqonlar sifatida taqdim etiladi.05; **P < 0.01; ****P < 0.0001. Maxsus P qiymatlari quyidagicha: b: WT va UTXDMD=0,7353, WT, UTXNKD va UTXDMD, UTXNKD < 0,0001; c: WT va UTXDMD=0,4888, WT UTXNKD va UTXDMD qarshi UTXNKD < 0,0001; e: UTXDMDga nisbatan WT=0,855, WT UTXNKDga nisbatan=0,0030, UTXDMD UTXNKDga nisbatan=0,0380; f: WT va UTXDMD=0,1382, WT, UTXNKD=0,0079, UTXDMD va UTXNKD=0,0166.
ATAC-seq va RNK-seq tomonidan kuzatilgan mavjudlik va gen ekspresyonidagi genom bo'yicha keng tarqalgan farqlarni hisobga olgan holda, biz to'g'ridan-to'g'ri UTX vositachiligidagi ta'sirlarni ham o'rganib chiqdik. Biz antikorlarga asoslangan immunoprecipitatsiya usuli yordamida UTX bilan bog‘langan DNK hududlarini aniqlash imkonini beruvchi anti-UTX CUT&Tag, so‘ngra ketma-ketlikni amalga oshirdik41. Saralangan tozalangan WT va UTXNKD NK hujayralarida anti-UTX CUT&Tag 5746 UTX bilan bogʻlangan choʻqqilarni aniqladi (FDR < 0.01, sozlangan P qiymati < 0.05; 6d-rasm. va qo'shimcha ma'lumotlar jadvali 4). ATAC-seq va RNK-seq ma'lumotlarining PCA genotip bo'yicha namuna klasterlanishini aniqladi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6f-rasm). Biz UTX bilan bog'langan, ATAC-seq tomonidan differentsial ravishda kirish mumkin bo'lgan va RNK-seq tomonidan differentsial ravishda ifodalangan 191 genni aniqladik (6d-rasm). Ushbu 191 gen ichida UTX bilan bog'langan cho'qqilarning aksariyati promotor (20,58%), intronik (46,94%) va intergenik (27,4%) hududlarda joylashgan (6e-rasm). NK hujayra gomeostazida (Bcl2 va Thy1; 6f-rasm) 30,42 va effektor funktsiyasi (Ifng va Csf2) bilan bog'liq bo'lgan diqqatga sazovor genlar UTX bilan bog'langan, differensial ravishda mavjud va differentsial tarzda ifodalangan (6g-rasm). Bundan tashqari, UTX bilan bog'langan 191 gendan 140 tasi ekspressiyada kamaygan, qolgan 51 tasi esa ko'paygan (3-jadvalda qo'shimcha ma'lumotlar), bu T hujayralarida UTX gen transkripsiyasini faollashtirish va bostirish funktsiyasini bajaradi43. Ushbu 191 UTX bilan bog'langan genlar bo'yicha enrichr yo'li tahlili44 UTXNKD NK hujayralarida yallig'lanish reaktsiyasi, IFN-signalizatsiya va NK hujayra sitotoksiklik yo'llari pasayganligini aniqladi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6g). Aksincha, UTXNKD NK hujayralarida pro-apoptotik va anti-apoptotik genlarni (masalan, Bcl2, Bbc3 va Gadd45g) o'z ichiga olgan hujayrali katabolik jarayon va apoptoz signalizatsiya yo'llari kuchaygan. UTXga bog'liq ifoda va xromatinga kirish farqlari (191 ta noyob gen) bo'lgan 865 UTX bilan bog'langan cho'qqilar orasida chiziqli regressiya tahlili xromatin o'rtasida sezilarli ijobiy korrelyatsiyani (Pirson R=0.5165, P < 0,0001) ko'rsatdi. foydalanish imkoniyati va gen ifodasi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6h, i). Bcl2, Thy1, Ifng va Csf2 gen lokuslaridagi UTX egallagan hududlar kirish imkoniyati va gen ekspresyonidagi farqlar ham qayd etilgan hududlarga to'g'ri keldi (6f, g-rasm). Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, UTX NK hujayralari gomeostazi va funktsiyasini tartibga solishda muhim bo'lgan xromatinning mavjudligi va gen transkripsiyasi yo'llarini tartibga soladi.
UTX maqsadli gen transkripsiyasini tartibga solish uchun transkripsiya omillari (TF) bilan o'zaro ta'sir qilishi ma'lum. UTX yoʻqolishi tufayli differensial kirish imkoniyatiga ega boʻlgan taxminiy TF motivlarini aniqlash uchun biz ATAC-seq (Kengaytirilgan maʼlumotlar-rasm 6j) tomonidan aniqlangan differensial kirish mumkin boʻlgan choʻqqilarda HOMER (Hypergeometric Optimization of Motif Enrichment)45 TF motif tahlilini oʻtkazdik. NK hujayra effektor funktsiyasi bilan bog'liq TFlar (masalan, Runt (Runx1 va Runx2) 46 va T-box (Eomes, T-bet, Tbr1 va Tbx6) 47 oila a'zolari) muhimroq edi va maqsadli motivlarning yuqori foiziga ega edi. UTXNKD da foydalanish imkoniyatining pasayishi (1, 2, 3 va 6-klasterlar; Kengaytirilgan ma'lumotlar 6j-rasm). Aksincha, sink barmoq va ETS oilasi TFs48da proliferatsiya, differentsiatsiya va metabolizm bilan bog'liq bo'lgan TFlar foydalanish imkoniyatini oshirish bilan sezilarli darajada bog'liq edi (4 va 5 klasterlar; Kengaytirilgan ma'lumotlar 6j-rasm). Bundan tashqari, UTX CUT&Tag tomonidan UTX bilan bogʻlangan choʻqqilarning TF motivli tahlili bu natijalarni NK hujayra effektor jarayonlarida (T-bet, Eomes, Runx1 va Tbx5) va rivojlanish dasturlarida (ETS1 va AP-1) muhim boʻlgan TFlarni aniqlash orqali tasdiqlaydi; Kengaytirilgan ma'lumotlar 6k-rasm). Ushbu ma'lumotlar NK hujayralarining moslashuvi va effektor jarayonlarini tartibga solishda ishtirok etadigan muhim TF bog'lash motivlarining ham differentsial mavjudligini, ham to'g'ridan-to'g'ri UTX bilan bog'lanishini ko'rsatadi. Ushbu tahlillar shuni ko'rsatadiki, UTX NK hujayra gomeostazida (Bcl2 va Thy1) va effektor funktsiyasida (Ifng va Csf2) muhim genlar ifodasini nazorat qilish uchun xromatin landshaftini modulyatsiya qiladi. Oxir-oqibat, bu topilmalar NK hujayralarining fitnes va effektor funktsiyasining markaziy regulyatori sifatida NK hujayralarida jinsiy dimorfizmning asosini differentsial UTX ifoda darajalari bo'lishi mumkin bo'lgan modelni taklif qiladi (6h-rasm).
6-rasm|UTX vositachiligida NK hujayra kromatinlariga kirish va transkripsiyadagi global o'zgarishlar. a–c, 4:1 WT: UTXNKD mBMC’lar WT (CD45.1+ ) va UTXNKD (CD45. 2+ ) suyak iligini limfodizayn xossa sichqonlariga (CD451x2 ) o‘tkazish orqali hosil qilindi va ularni qayta tiklashga ruxsat berildi. 6 hafta. Splenik NK hujayralari ATAC-seq va RNK-seq kutubxonasini tayyorlash uchun saralangan (har bir guruh uchun n=3). Chiziqli grafiklar (chapda) va issiqlik xaritasi (o'ngda) loyqa c-vositalari ATAC-seq (a) tomonidan aniqlangan klasterli differensial ravishda erishish mumkin bo'lgan cho'qqilar va WT dan taloq NK hujayralarining RNK-seq (b) tomonidan aniqlangan differentsial ifodalangan genlar: UTXNKD mBMC sichqonlari (tuzatilgan P qiymati < 0.05 va aʼzolik balli > 0.5). Chiziqli grafiklar o'rtacha markazlashtirilgan normallashtirilgan log2 ahamiyatli qiymatlarining o'rtacha (qora chiziq) va standart og'ishini (qizil lenta) ko'rsatadi (FDR va sozlangan P qiymati <0,05). c, muhim loyqa c-vositalari klasterli RNK-seq genlarini yo'l tahlili g: −log10 ni ko'rsatadigan nuqta o'lchamli profiler (P qiymati; Fisherning bir dumli testi yordamida g: GOSt tomonidan hisoblangan). d–g, Anti-UTX CUT&Tag WT va UTXNKD NK hujayralarida bajarildi va 5746 ta noyob UTX bilan bog'langan cho'qqilarni aniqladi (har bir guruh uchun n=3). d, ATAC-seq tomonidan aniqlangan va RNK-seq tomonidan aniqlangan differensial ravishda ifodalangan (DE) genlar bilan bir-biriga o'xshash differensial kirish mumkin bo'lgan (DA) genlar tasvirlangan Venn diagrammasi. e, UTX bilan bog'langan cho'qqilarning joylashuvi. f,g, Anti-UTX CUT&Tag ("anti-UTX"), Bcl2 va Thy1 (f) va Ifng va Csf2 (g) ning ATAC-seq va RNK-seqlarining UCSC Integrated Genome brauzeridan reprezentativ gen izlari; y o'qi million boshiga sonni (CPM) tasvirlaydi. h, NK hujayra tarkibi va funktsiyasida jinsiy dimorfizm asosidagi UTX ifoda darajalarining differentsial sxemasi (chapda). UTX gomeostaz va virusli infektsiya paytida NK hujayralari soni va effektor funktsiyasi bilan bog'liq gen dasturlarini qanday boshqarishi mumkinligi diagrammasi (o'ngda). BioRender.com bilan yaratilgan.
Munozara
Virusli infektsiyalarning oqibatlarini aniqlashda jinsiy aloqa muhim biologik o'zgaruvchidir3. Bu yaqinda COVID-19 bilan tasvirlangan, unda erkak jinsi og'ir kasallik5 uchun asosiy xavf omili sifatida aniqlangan. Bundan tashqari, so'nggi tadqiqotlar NK hujayralari disfunktsiyasini og'ir COVID-19 kasalligi bilan bog'ladi49. NK hujayralarining antiviral immunitetdagi ahamiyatini hisobga olgan holda, NK hujayralari biologiyasidagi jinsiy farqlarning asosiy sabablarini tushunish endogen effektor javoblarini optimallashtirishda keng qamrovli ta'sirga ega bo'ladi. Ushbu tadqiqotda biz erkak NK hujayralarida past UTX ifodasi ularning sonining ko'payishiga va effektor funksiyasining pasayishiga yordam berishini ko'rsatamiz. NK xujayrasi UTX NK hujayralari mosligini nazorat qilish, TF bilan bog'lanish motivlariga kirish imkoniyatini modulyatsiya qilish, effektor gen lokuslarida xromatin mavjudligini oshirish va virusli infektsiyaga tezkor javob berish uchun NK hujayralarini sozlash uchun zarur.
NK hujayralaridan tashqari B hujayralari, monotsitlar, neytrofillar, CD4+ T hujayralari va CD{1}} T hujayralarida jinsiy dimorfizm qayd etilgan25. Ilgari immun hujayralardagi jinsiy farqlar jinsiy bezlarning jinsiy gormonlari50-52 tomonidan vositachilik qilgani haqida xabar berilgan bo'lsa-da, bu nomutanosibliklarning bir qismi UTX differensial ifodasi bilan ham bog'liq bo'lishi mumkin. Ushbu imkoniyatni qo'llab-quvvatlash uchun UTX etishmovchiligi T hujayralari va o'zgarmas NK T hujayralari sonining kamayishi bilan bog'liq 53-55; va UTX transkriptlari DICE ma'lumotlar bazasida so'ralgan bir nechta immun hujayra turlari (CD4+ T hujayralari, CD8+ T hujayralari, monotsitlar, B hujayralari) uchun erkak va ayol hujayralarida pastroqdir56. UTX ning boshqa immun hujayra turlarida jinsiy farqlarni modulyatsiya qilishdagi rolini aniqlash uchun keyingi fenotipik tadqiqotlar talab qilinadi. NK hujayra vositachiligidagi effektor funktsiyalari sitokin ishlab chiqarish va sitotoksik molekula ifodasini o'z ichiga oladi. Bizning ko'p qirrali tahlillarimiz shuni ko'rsatadiki, UTX NK hujayralarining xromatin landshaftini virusli muammolarga tezkor javob berish uchun ta'sir qiluvchi joylarning mavjudligi va transkripsiyasini oshiradi. Ushbu tadqiqotlar 191 ta genni (jumladan, Ifng va Csf2) 20,32 genini aniqladi, ular bir vaqtning o'zida UTX bilan bog'langan, farqli ravishda mavjud va ifodalangan. IFN- va GM-CSF sitokinlari ishlab chiqarishning kamayishi va UTX etishmovchiligi bo'lgan NK hujayralarining sitolitik qobiliyatining buzilishi yallig'lanish vaqtida effektor funksionalligini oshirishda UTX rolini qo'llab-quvvatlaydi. Shu bilan birga, NK hujayra effektor funktsiyasida muhim rol o'ynaydigan UTX vositachiligidagi gen regulyatsiyasining qo'shimcha bilvosita oqibatlari bo'lishi mumkin, bu differensial ravishda ifodalangan, ammo UTX bilan bog'lanmagan qo'shimcha genlar bilan tasdiqlanadi.
H3K27me3 demetilazasi sifatida UTX xromatinni faol gen ekspressiyasiga ta'sir qiladi57. Katalitik faolligiga qo'shimcha ravishda, UTX boshqa epigenetik regulyatorlar (masalan, SWI/SNF, MLL4/5 va p300) bilan multiprotein komplekslarida ishlaydi, demetilazdan mustaqil ravishda xromatinni qayta qurishda vositachilik qiladi36,57. Biz NK hujayralarida gomeostaz va effektor dasturlarini tartibga solishda UTX ning demetilazdan mustaqil funktsiyalari haqida xabar beramiz. Bu UTX ning demetilaz faolligi talab qilinadigan o'zgarmas NK T hujayralaridagi rolidan farq qiladi53. Shunday qilib, UTX funktsiyalarining molekulyar mexanizmlari naslga xos bo'lishi mumkin. Ushbu gipotezani qo'llab-quvvatlash uchun UTX 40 effektor lokuslarini nishonga olish uchun T hujayralarida naslga xos TFlar bilan o'zaro ta'sir qilishi haqida xabar berilgan. Bizning HOMER motif tahlilimiz Runx1, Runx2, Eomes va virusli infektsiya paytida NK hujayra effektor funktsiyasi uchun muhim bo'lgan boshqa TFlar bilan potentsial UTX o'zaro ta'sirini aniqladi46,47. Bundan tashqari, ushbu tahlillar KLF1, KLF5, Sp2 va NK hujayralarining ko'payishi, differentsiatsiyasi va metabolizmi bilan bog'liq bo'lgan boshqa TFlar bilan UTX o'zaro ta'sirini ham ko'rsatadi48. Bundan tashqari, bizning natijalarimiz ilgari chop etilgan tadqiqotlarni tasdiqlaydi, ularda boshqa hujayra turlaridagi UTX T-bet, Eomes va Tbx5 (ref. 40), ETS1 (ref. 48) va AP-1 (ref. 48) bilan javoblarni muvofiqlashtirishi haqida xabar berilgan. Ref.58). Nihoyat, Runx1 UTX tomonidan boshqariladigan BRG1 va SWI/SNF komplekslari bilan o'zaro ta'sir qilishi ko'rsatilgan46. Biroq, HOMER tahlilining korrelyativ tabiati tufayli, bu o'zaro ta'sirlarni in situ eksperimental tekshirish uchun koimmunoprecipitatsiya va massa spektrometriyasi bilan keyingi tadqiqotlar zarur. Bundan tashqari, konstitutsiyaviy XCI qochishi sifatida UTX ikkita imkoniyat orqali hujayra turiga xos mexanizmlarga ega bo'lishi mumkin: (i) mavjud kofaktorlar to'plami va (ii) uning epigenetik bog'lovchi sheriklarining mavjudligi. UTX o'zining fermentativ faolligi uchun muhim bo'lgan kofaktorlar (masalan, Fe (II), -ketoglutarat va kislorod) uchun metabolik yo'llarning qo'shimcha mahsulotlariga tayanadi59. Shunday qilib, metabolik holatga qarab, hujayra turiga qarab katalitik faollikning differentsial darajalarini ta'minlaydigan UTX demetilazasi funktsiyasi uchun mavjud bo'lgan kofaktorlarning alohida hovuzlari mavjud. Bundan tashqari, UTX funksionalligi uning avtosomal kodlangan majburiy sheriklarining (masalan, MLL3/4, SWI/SNF va p300) faolligi va ifoda darajasiga ham bog'liq bo'lishi mumkin.
Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi
Turli xil immunitetga ega bo'lgan bemorlarning pastki guruhlarini aniqlaydigan omillarni tortish bizga aniq tibbiyot paradigmasiga "bir o'lchamli" terapevtik yondashuvdan o'tishga imkon beradi. UTX etishmovchiligi Kabuki sindromi va Tyorner sindromi60 bilan bog'liq bo'lib, immunitetning buzilishi va infektsiyalarning kuchayishi bilan bog'liq ikkita inson holati. Bizning topilmalarimiz inson NK hujayralarida UTX etishmovchiligi ushbu bemorlarda kuzatilgan virusli immun nazorati pasayishiga hissa qo'shishi mumkinligini ko'rsatadi, ammo kelajakda bu gipotezani qo'llab-quvvatlash uchun ish kerak bo'ladi. Bundan tashqari, NK hujayralari funktsiyasidagi jinsiy farqlarni tushunish, jinsiy aloqani davolash qarorlarida biologik omil sifatida kiritish uchun talab qilinadi. Og'ir virusli kasallikka chalingan erkaklarda, masalan, NK hujayra UTX faolligini oshirish terapevtik foyda keltirishi mumkin. Biz bu tushunchalar nafaqat virusli infektsiyalar, balki NK hujayralari ham muhim rol o'ynaydigan boshqa infektsiyalar va saraton kasalliklarida ham muhim bo'lishini kutamiz. Ushbu topilmalar, shuningdek, NK hujayralari katta qiziqish mavzusi bo'lgan qabul qilingan uyali terapiya uchun muhim ta'sir ko'rsatishi mumkin61.
Ma'lumotnomalar
1. Wilkinson, NM, Chen, HC, Lechner, MG & Su, MA Immunitetdagi jinsiy farqlar. Annu Rev. Immunol. 40, 75–94 (2022).
2. Klein, SL & Flanagan, KL. Immun javoblardagi jinsiy farqlar. Nat. Rev. Immunol. 16, 626–638 (2016).
3. Pardue, M.-L. & Wizemann, TM Inson salomatligiga biologik hissalarni o'rganish: jinsiy aloqa muhimmi? Milliy Akademiyalar Matbuoti https://doi.org/10.17226/10028 (2001).
4. Gianella, S. va boshqalar. Supressiv ART paytida CMV replikatsiyasi va OIVning davom etishidagi jinsiy farqlar. Forum infektsiyasini oching. Dis. 7, ofaa289 (2020).
5. Takaxashi, T. & Ivasaki, A. Immunitet reaktsiyalarida jinsiy farqlar. Fan 371, 347–348 (2021).
6. Patin, E. va boshqalar. Tug'ma immunitet hujayralari parametrlarining tabiiy o'zgarishi asosan genetik omillarga bog'liq. Nat. Immunol. 19, 302–314 (2018).
7. Huang, Z. va boshqalar. Jinsiy aloqa va qarishning immun hujayra landshaftiga ta'siri bir hujayrali transkriptomik tahlil bilan baholanadi. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 118, e2023216118 (2021).
8. Talebizadeh, Z., Simon, SD & Butler, MG X xromosoma genining inson to'qimalarida ifodasi: erkak va ayolni taqqoslash. Genomika 88, 675–681 (2006).
9. Fang, H., Disteche, CM & Berletch, JB X inaktivatsiyasi va qochishi: epigenetik va strukturaviy xususiyatlar. Old. Hujayra Dev. Biol. 7, 219 (2019 yil).
10. Chen, X. va boshqalar. P53-null sichqonlarda nerv naychalari nuqsonlaridagi jins farqi Y genlari emas, balki X komplementidagi farqlar tufayli yuzaga keladi. Dev. Neyrobiol. 68, 265–273 (2008).
11. Smit-Bouvier, DL va boshqalar. Jinsiy xromosoma to'ldiruvchisining roli, otoimmün kasallikdagi ayol tarafkashligida. J. Exp. Med. 205, 1099–1108 (2008).
12. Souyris, M. va boshqalar. TLR7 immun hujayralarida X xromosoma inaktivatsiyasidan qochadi. Sci. Immunol. 3, eaap8855 (2018).
13. Hammer, Q., Ruckert, T. & Romagnani, C. Virusli infektsiyalar uchun tabiiy qotil hujayraning o'ziga xosligi. Nat. Immunol. 19, 800–808 (2018).
14. Orange, JS Tabiiy qotil hujayralar etishmovchiligi. J. Allergiya klinikasi. Immunol. 132, 515–525 (2013).
15. Bukowski, JF, Warner, JF, Dennert, G. & Welsh, RM In vivo jonli ravishda tabiiy qotil hujayralarning antiviral ta'sirini ko'rsatadigan qabul qilish transferi tadqiqotlari. J. Exp. Med. 161, 40–52 (1985).
16. Braun, MG va boshqalar. Virusli infektsiyaga qarshilik ko'rsatishda tabiiy qotil hujayra faollashtiruvchi retseptorlarining hayotiy ishtiroki. Fan 292, 934–937 (2001).
17. Welsh, RM, Brubaker, JO, Vargas-Cortes, M. & O'Donnell, CL. Og'ir kombinatsiyalangan immunitet tanqisligi bo'lgan sichqonlarda virus infektsiyalariga tabiiy qotil (NK) hujayra reaktsiyasi. NK hujayralarini rag'batlantirish va virus infektsiyalarining NK hujayralariga bog'liq bo'lgan nazorati T va B hujayralari funktsiyasidan mustaqil ravishda sodir bo'ladi. J. Exp. Med. 173, 1053–1063 (1991).
18. Bancroft, GJ, Shellam, GR & Chalmer, JE. Sichqoncha sitomegalovirus infektsiyasi paytida tabiiy qotil hujayralarining ko'payishiga genetik ta'sir: qarshilik naqshlari bilan korrelyatsiya. J. Immunol. 126, 988–994 (1981).
19. Menees, KB va boshqalar. C57BL/6J sichqonlarida taloq immun hujayrasi profili va NK hujayra fenotiplarining jinsga va yoshga bog'liq o'zgarishi va funktsiyasi. Immun. Yoshi 18, 3 (2021).
20. Mujal, AM, Delconte, RB & Sun, JC Tabiiy qotil hujayralar: tug'ma xususiyatlardan adaptiv xususiyatlarga. Annu. Rev. Immunol. 39, 417–447 (2021).
21. Loh, J., Chu, DT, O'Guin, AK, Yokoyama, WM & Virgin, HWT Tabiiy qotil hujayralar taloq va jigarda sitomegalovirus infektsiyasini tartibga solish uchun perforin va gamma-interferondan foydalanadi. J. Virol. 79, 661–667 (2005).
22. Orange, JS, Vang, B., Terhorst, C. va Biron, CA Sichqoncha sitomegalovirus infektsiyasidan himoya qilish uchun tabiiy qotil hujayralar tomonidan ishlab chiqarilgan interferon-gammaga bo'lgan talab va interleykin{3}} yuborish orqali ushbu himoya yo'lini kuchaytirish. J. Exp. Med. 182, 1045–1056 (1995).
23. Nakaya, M., Tachibana, H. & Yamada, K. Sichqoncha splenotsitlarining interferon-gamma ishlab chiqaruvchi hujayra populyatsiyasiga estrogenlarning ta'siri. Biosci. Biotexnologiya. Biokimyo. 70, 47–53 (2006).
24. Chiossone, L. va boshqalar. Sichqonchaning NK hujayralarining yetilishi 4-bosqichli rivojlanish dasturidir. Qon 113, 5488–5496 (2009).
25. Wainer Katsir, K. & Linial, M. X-inaktivatsiyasidan qochgan inson genlari bitta hujayrali ifoda ma'lumotlari bilan aniqlangan. BMC Genomics 20, 201 (2019).
26. Yang, F., Babak, T., Shendure, J. & Disteche, CM Sichqonchada RNK ketma-ketligi orqali X inaktivatsiyasidan qochishning global tadqiqoti. Genom Res. 20, 614–622 (2010).
27. Berletch, JB va boshqalar. Sichqoncha to'qimalarida X inaktivatsiyasidan qochish turlicha bo'ladi. PLoS Genet. 11, e1005079 (2015).
28. Arnold, AP To'rt yadroli genotip va XY * sichqoncha modellari: SABV tadqiqotiga ta'sirini yangilash. Nevrologlar. Biologik xulq. Vahiy 119, 1–8 (2020).
29. Hasegawa, H. va boshqalar. MDM2 antagonisti Nutlin{2}}a tomonidan p53 ning faollashishi kattalardagi T-hujayrali leykemiya hujayralarida apoptoz va hujayra qarishini keltirib chiqaradi. Leykemiya 23, 2090-2101 (2009).
30. Riggan, L. va boshqalar. Fli1 transkripsiya omili virusli infektsiya paytida xotira kashshof NK hujayralarining shakllanishini cheklaydi. Nat. Immunol. 23, 556–567 (2022).
31. Min-Oo, G., Bezman, NA, Madera, S., Sun, JC & Lanier, LL Proapoptotic Bim antigenga xos NK hujayra qisqarishini va sitomegalovirus infektsiyasidan so'ng xotira NK hujayra hovuzini yaratishni tartibga soladi. J. Exp. Med. 211, 1289–1296 (2014).
32. Louis, C. va boshqalar. NK hujayralaridan olingan GM-CSF yallig'lanish artritini kuchaytiradi va MDH tomonidan salbiy tartibga solinadi. J. Exp. Med. 217, e20191421 (2020).
33. Bjorkstrom, NK, Strunz, B. & Ljunggren, HG Antiviral immunitetda tabiiy qotil hujayralar. Nat. Rev. Immunol. 22, 112–123 (2022).
34. Smit, MJ va boshqalar. Perforin o'simta metastazining NK hujayralarini nazorat qilishda katta hissa qo'shadi. J. Immunol. 162, 6658–6662 (1999).
35. Van der Meulen, J., Speleman, F. & Van Vlierberghe, P. Oddiy rivojlanish va kasalliklarda H3K27me3 demetilaz UTX. Epigenetika 9, 658-668 (2014).
36. Vang, SP va boshqalar. UTX-MLL4-p300 transkripsiyani tartibga soluvchi tarmoq transkripsiyani olish uchun faol kuchaytiruvchi landshaftlarni muvofiqlashtiradi. Mol. 67-uya, 308–321 (2017).
37. Gozdecka, M. va boshqalar. UTX vositachiligidagi kuchaytirgich va xromatinni qayta qurish ETS va GATA dasturlarini katalitik bo'lmagan teskari tartibga solish orqali miyeloid leykemiyani bostiradi. Nat. Genet. 50, 883–894 (2018).
38. Vang, C. va boshqalar. UTX H3K27 demetilaz faolligidan mustaqil ravishda embrion ildiz hujayralarining mezoderma farqlanishini tartibga soladi. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 109, 15324–15329 (2012).
39. Shih, HY va boshqalar. Limfoid hujayralarning tug'ma funktsiyalari asosida regulomlarni rivojlanish yo'li bilan olish yotadi. 165-uya, 1120–1133 (2016).
40. Miller, SA, Mohn, SE & Weinmann, AS Jmjd3 va UTX T-box oilasi a'zolariga bog'liq gen ifodasini tartibga solish uchun kromatinni qayta qurishda demetilazdan mustaqil rol o'ynaydi. Mol. 40-uya, 594–605 (2010).
41. Kaya-Okur, HS va boshqalar. Kichik namunalar va bitta hujayralarni samarali epigenomik profillash uchun CUT & Tag. Nat. Kommun. 1930 yil 10 (2019 yil).
42. Kupz, A. va boshqalar. Salmonella typhimurium infektsiyalari paytida sizning1+ NK hujayralarining himoya IFN-gamma ishlab chiqarishga qo'shgan hissasi. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 110, 2252–2257 (2013).
43. Langmead, B. & Salzberg, SL. Bowtie 2 bilan tez o'qiladigan tekislash. Nat. Usullar 9, 357–359 (2012).
44. Chen, EY va boshqalar. Enrichr: interaktiv va hamkorlikdagi HTML5 genlar ro'yxatini boyitish tahlili vositasi. BMC Bioinformatika 14, 128 (2013).
45. Heinz, S. va boshqalar. Naslni belgilovchi transkripsiya omillarining oddiy kombinatsiyasi makrofag va B hujayra identifikatorlari uchun zarur bo'lgan cis-regulyatsiya elementlarini tashkil qiladi. Mol. 38-uya, 576–589 (2010).
46. Rapp, M. va boshqalar. Yadro-bog'lovchi omil-beta va Runx transkripsiya omillari adaptiv tabiiy qotil hujayra javoblarini ta'minlaydi. Sci. Immunol. 2, ean3796 (2017).
47. Simonetta, F., Pradier, A. & Roosnek, E. T-bet va eomesodermin NK hujayralarining rivojlanishi, kamoloti va funktsiyasi. Old. Immunol. 7, 241 (2016 yil).
48. Presnell, JS, Schnitzler, CE & Browne, WE KLF/SP transkripsiya omili oilasi evolyutsiyasi: eukaryotlarda kengayish, diversifikatsiya va innovatsiyalar. Genom Biol. Rivojlanish. 7, 2289–2309 (2015).
49. Kramer, B. va boshqalar. Erta IFN-alfa imzolari va doimiy disfunktsiya og'ir COVID-19da NK hujayralarini ajratib turadigan xususiyatlardir. Immunitet 54, 2650–2669 (2021).
50. D'Agostino, P. va boshqalar. Jinsiy gormonlar makrofaglar tomonidan ishlab chiqarilgan yallig'lanish mediatorlarini modulyatsiya qiladi. Ann. NY akad. Sci. 876, 426–429 (1999).
51. Lu, FX va boshqalar. Ayol rezus makakalarida B hujayra immunitetining kuchi tuxumdon steroid gormonlari ta'sirida CD8+ T hujayralari tomonidan boshqariladi. Klin. Exp. Immunol. 128, 10–20 (2002).
52. Singh, RP & Bischof, DS Jinsiy gormonlar va jins SLE bilan og'rigan bemorlarda tartibga soluvchi T hujayralarining markerlarining ifodalanishiga ta'sir qiladi. Old. Immunol. 12, 619268 (2021 yil).
53. Kuk, KD va boshqalar. Doimiy virus infektsiyasining T follikulyar yordamchi hujayraga bog'liq bo'lgan tozalanishi UTX giston demetilazasining T xujayrasi ekspressiyasini talab qiladi. Immunitet 43, 703–714 (2015).
54. Beyaz, S. va boshqalar. Giston demetilaz UTX o'zgarmas tabiiy qotil T hujayralarining naslga xos epigenetik dasturini tartibga soladi. Nat. Immunol. 18, 184–195 (2017).
55. Mitchell, JE va boshqalar. UTX CD8+ T-hujayralari vositasida virusga qarshi himoyani kuchaytiradi, lekin T hujayralarining chidamliligini pasaytiradi. Hujayra vakili 35, 108966 (2021).
56. Shmiedel, BJ va boshqalar. Genetik polimorfizmlarning inson immunitet hujayralari gen ifodasiga ta'siri. 175-uya, 1701–1715 (2018).
57. Bosselut, R. H3K27Me3 demetilazlarining immun hujayralarining differentsiatsiyasida pleiotropik funktsiyalari. Immunol tendentsiyalari. 37, 102–113 (2016).
58. Kechin, A., Boyarskikh, U., Kel, A. & Filipenko, M. cutPrimers: maqsadli keyingi avlod ketma-ketligini o'qishdan astarlarni aniq kesish uchun yangi vosita. J. Hisoblash. Biol. 24, 1138–1143 (2017).
59. Hong, S. va boshqalar. JmjC domenini o'z ichiga olgan UTX va JMJD3 ni histon H3 lizin 27 demetilazlar sifatida aniqlash. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 104, 18439–18444 (2007).
60. Van Laarxoven, PM va boshqalar. Kabuki sindromi genlari KMT2D va KDM6A: funktsional tahlillar kraniofasiyal, yurak va miya rivojlanishida muhim rollarni ko'rsatadi. Hum. Mol. Genet. 24, 4443–4453 (2015).
61. Rezvani, K. Muhandislik qilingan tabiiy qotil hujayralar yordamida qabul qiluvchi hujayra terapiyasi. Suyak iligi Transpl. 54, 785–788 (2019).