Theaflavin bilan boshqariladigan IMD kondensatlari Drosophila ichak gomeostazini va qarishini nazorat qiladi 2-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Fon:Fibroz buyrakning qarish jarayonining eng keng tarqalgan patologik belgilaridan biri bo'lib, qarigan buyraklardagi fibroz surunkali buyrak kasalligi (KKD) jarayonini ham kuchaytiradi. Corallodiscus flabellata BLBurtt (C.flabellata, CF) xitoy folklorida keng qo'llaniladigan botanika preparati hisoblanadi. Biroq, kam sonli tadqiqotlar uning farmakologik ta'siri haqida xabar bergan. Ushbu tadqiqot SAMP8 sichqonlarida CF etanol ekstraktining buyrak fibroziga ta'sirini o'rganish va potentsial faol birikmalarni aniqlashga qaratilgan.

Usullari:Hayvon modellari sifatida qarish tezlashtirilgan sichqonchaga moyil 8 (SAMP8) ishlatilgan va bir oy davomida turli dozalarda CF gavaj orqali berilgan. -galaktosidaza bo'yash yordamida sichqonlarda buyrak qarish darajasini kuzatish uchun. Masson binoni va Col-lI, a-SMA va FN ifoda darajalari sichqonlarda buyrak fibrozini baholash uchun ishlatilgan. Buyrakdagi Nrf2 yo'li va Wnt/-katenin/RAS yo'lining protein ifoda darajalari o'lchandi. Va -galaktosidaza (-gal) NRK{11}}E hujayralarini in vitro model sifatida CF faol komponentlarini skrining qilish uchun induktsiya qildi.

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Natijalar:CF etanol ekstrakti buyrak-galaktosidaza faolligini va Coll, a-SMA va FNin SAMP8 sichqonlarining ifoda darajalarini sezilarli darajada inhibe qildi va SAMP8 sichqonlarida Masson bo'yashini yaxshiladi. CF SAMP8 sichqonlarida siydik oqsili, kreatinin, karbamid azoti va sarumdagi TNF-a va IL-1 darajasini sezilarli darajada kamaytirdi va SOD va GSH-Px darajasini sezilarli darajada oshirdi. Bundan tashqari, CF Nrf2 yo'lini faollashtirdi va sichqonlarning buyraklarida Wnt / -katenin / RAS yo'lini to'sib qo'ydi. Bundan tashqari, 3,4-digidroksifenil etanol (SDC-0-14,16) va (3,{15}}dihidroksifenil etanol-8-O-[4-O-trans -caffeoyl- -D-apiofuranosy-(1→3)- -D-glukopiranosil (1→6)]- -D-glukopiranozid (SDC-1-8) CF dan ajratilgan , bu NRK-52E hujayralarining qarishini kamaytirdi va ehtimol CF ning faol moddalari qarishga qarshi rol o'ynaydi.

Xulosa:Bizning tajribalarimiz CF etanol ekstrakti Wnt/-katenin/RAS yo'li orqali SAMP8 sichqonlarida buyrak fibrozini yaxshilashi mumkinligini aniqladi. Va SDC-0-14,16 va SDC-1-8 CF uchun buyrak qarishiga qarshi ta'sir ko'rsatish uchun moddiy asos bo'lishi mumkin.

Kalit so‘zlar:Qarish, Corallodiscus flabellata, Buyrak, Renal fibroz, SAMP8, Senescence, Wnt/ -catenin/RAS

Kirish

Surunkali buyrak kasalligi (KBH)ning global tarqalishi aholining qarishi bilan ortib bormoqda va jamiyat uchun katta yuk bo'lmoqda [1-3]. CKDning eng keng tarqalgan patologik ko'rinishi buyrak fibrozining ba'zi bir shaklidir [4]. Xuddi shunday, buyrak fibrozi ham buyrak qarishining belgilaridan biridir [2]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, oksidlovchi stress, yallig'lanish, Wnt/-katenin, renin-angiotensin-aldosteron tizimi (RAS) va rapamisin (mTOR) signallari qarilik bilan qo'zg'atilgan CKD bilan bog'liq [5]. Qarigan buyraklardagi buyrak fibrozi Wnt/-katenin va RAS signalizatsiya yo'lining faollashishi bilan chambarchas bog'liq. Wnts faollashgandan so'ng, sitoplazmadagi -katenin yadroga ko'chiriladi, u erda limfoid kuchaytiruvchi omil (LEF)/T-hujayra omili (TCF) transkripsiya faktorlari oilasiga bog'lanadi va quyi oqim maqsadli genlarning transkripsiyasini boshlaydi. Qizig'i shundaki, RAS genining promotor hududida LEF/TCF bog'lanish joylari ham mavjud bo'lib, bu -kateninga LEF{14}} ning ushbu saytlar bilan bog'lanishiga yordam beradi[7].Cistanche xolesterin,Shu sababli, Wnt/-katenin/RAS signalizatsiya yo'lini nishonga olish buyrak fibrozisi uchun potentsial terapevtik strategiya bo'lishi mumkin [8,9]. So'nggi yillarda buyrak fibrozini tabiiy mahsulotlar bilan almashtirish terapiyasi ko'plab olimlarning e'tiborini tortdi [10] . Xiaoyan Shen va boshqalar ginsenosid Rgl SAMP8 sichqonlarida NLRP3 yallig'lanishining faollashuvini inhibe qilish orqali buyrak qarishi davrida glomerulyar fibrozni yaxshilaganligini aniqladilar [11]. Ushbu tadqiqot C. flabellate (CF) ekstraktining Wnt / -catenin / RAS yo'lidan SAMP8 sichqonlarida buyrak fibroziga ta'sirini o'rganib chiqdi.

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Xitoyda dorivor o'simlik sifatida CF birinchi bo'lib "Dian Nan Ben Cao" da qayd etilgan. Butun o'simlik odatda Xitoyning etnik ozchilik hududlarida dizenteriya, erta eyakulyatsiya, seminal pufak kasalligi va buyrak kasalliklarini davolash uchun ishlatiladi [12]. Hozirgi vaqtda. , zamonaviy tadqiqotlarda CF haqida kam ma'lumot mavjud.Bizning laboratoriyamizdagi farmakologik tadqiqotlar CF ekstrakti diuretik ta'sirga ega ekanligini va kalamushlarda lipopolisakkarid/D-galaktozamin tufayli jigar etishmovchiligi va miya shikastlanishini yaxshilaganligini aniqladi [13, 14]. Va fitokimyoviy tadqiqotlar. feniletanoid glikozidlar va flavonoidlar CF ning asosiy kimyoviy komponentlari ekanligini aniqladi [15,16].Ushbu tadqiqotning maqsadi SAMP8 sichqonlarida CF ekstraktining buyrak fibroziga ta'sirini o'rganish va uning mumkin bo'lgan mexanizmini tushuntirish edi. qadimgi kitoblarda tasvirlangan CF bilan buyrak kasalligini davolash uchun eksperimental dalillar.

Materiallar va uslublar

O'simlik materialini yig'ish va qazib olish

"Yunnan Xitoy o'simlik tibbiyoti" CFni yil davomida yig'ib olish mumkinligini yozadi. Ushbu tajribada foydalanilgan CF o'simliklari sentyabr oyida Xitoyning Xenan viloyati, Xixia okrugida yig'ib olindi. Uni Henan Xitoy tibbiyot universiteti professori Suiqing Chen aniqlagan va namunalar laboratoriya namunalari kutubxonasida saqlangan.cistanche deserticola yon ta'siriO'simliklar (1 kg) 50% etanol (har 1 soatda 3 × 12 L) bilan qayta oqimlandi va aralashma 16 qatlamli doka bilan filtrlandi. Birlashtirilgan filtratlar muzlatish quritgich yordamida aylanma bug'lanish orqali quritilgan. Nihoyat, CF ning 50 foizli etanol xom ekstraktining foiz rentabelligi 15,5 foizni tashkil etdi. Quritilgan ekstrakt muzlatgichda keyingi foydalanishgacha saqlanadi. Qo'shimcha materiallarda CF ekstraktining tarkibiy belgilari bo'yicha tegishli ma'lumotlar keltirilgan.

Ilgari xabar qilingan yana bir ajratish jarayoni ushbu tadqiqotda CF dan suvni tozalash fraktsiyasini, 20 foiz etanol elutsiya fraktsiyasini, 30 foiz etanol elutsiya fraktsiyasini va 40 foiz etanol elutsiya fraktsiyasini olish uchun ishlatilgan [13]. 40 foizli etanol fraktsiyasi Sephadex LH-20 va silikagel ustuni yordamida ajratildi va SDC-0-14,16, SDC{ kabi birikmalarni olish uchun yarim tayyorlovchi yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) bilan tozalandi. {10}}, SDC-0-60(p-gidroksibenzil spirti).

Hayvonlar va boshqaruv

Ushbu tadqiqotda Tyantszin an'anaviy xitoy tibbiyot universiteti (Tyanszin, Xitoy) birinchi kasalxonasidan olti oylik erkak SAMP8 va qarilikka tezlashtirilgan sichqonchaga chidamli 1 (SAMR1) sichqonlari ishlatilgan. Hayvonlar boshqariladigan yorug'lik (12-soat yorug'lik/qorong'u davr), harorat (23-25 daraja C) va namlik (45-55 foiz) sharoitlarida joylashtirildi va standart parhez va suv reklamasi oldi. libitum. Jami 48 ta SAMP8 sichqonlari to‘rtta eksperimental guruhga bo‘lingan (n=12/guruh): SAMP8 modeli sichqonlari (M), past dozali CF etanol ekstrakti bilan ishlov berilgan SAMP8 sichqonlari (CF-L, 387,5 mg/kg, oshqozon ichiga), o'rta dozali CF etanol ekstrakti bilan ishlov berilgan SAMP8 sichqonlari (CF-M,775 mg/kg, intragastral) va yuqori dozali CF etanol ekstrakti bilan ishlov berilgan SAMP8 sichqonlari (CF-H,1550 mg/ kg, intragastrik). Barcha sichqonlar 1 oy davomida og'iz orqali davolandi. Hayvonlar ustida o‘tkazilgan barcha tajribalar Henan Xitoy Tibbiyot Universitetining axloqiy qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan va institutsional ko‘rsatmalarga muvofiq amalga oshirilgan (Xenan, Xitoyning tasdiqlash raqami: HACTCM-2018009060-19). Tajriba davomida Con va M guruhining har birida bittadan sichqonchaning o‘limi kuzatildi, CF-H guruhida esa ikkita sichqon o‘ldi.

Namuna yig'ish

Tajriba oxirida sichqonlar 12-soat siydik yig'ish uchun metabolik kataklarga alohida joylashtirildi. Keyin sichqonlar izofluran bilan behushlik qilindi va qon namunalari retro-orbital qon ketish orqali yig'ildi. Keyin har bir sichqonning buyraklari jarrohlik yo'li bilan olib tashlandi va tahlillar o'tkazilgunga qadar 80 daraja haroratda saqlanadi.

Hujayra madaniyati va in vitro tadqiqoti

NRK{0}}Xitoy Fanlar akademiyasi (Shanxay, Xitoy) Hujayra bankidan sotib olingan E hujayralari CF ekstraktining D-galaktoza (D-gal, S11050, Yuanye, Shanxay, Xitoy). NRK{4}}E xujayralari Dulbecco modifikatsiyasida Eagle's Dulbecco modifikatsiyasida (DMEM,12,100,046, Thermo Fisher, Massachusets, AQSH) 10% homila sigir zardobi bilan ta'minlangan inkubatorda 37 ° C haroratda va 55 ° C haroratda o'stirildi. foiz , CO. Hujayralar 96-quduq plastinkalarida yoki 6-quduq plastinkalarida 80-85 foiz qo‘shilish darajasigacha o‘stirildi va keyin turli dori birikmalarini o‘z ichiga olgan o‘sish muhiti bilan ishlov berildi: Media plus D-gal ( 20 mg/ml）, Media plus D-gal plus CF（10, 25,50, 100 ug/mL） yoki Media plus D-gal plyus monomer birikma（10 mM） mos ravishda 48 soat davomida. Keyinchalik metil tiazolil tetrazolium( Hujayra hayotiyligini aniqlash uchun MTT) tahlili, hujayra qarishini kuzatish uchun esa -galaktosidaza bo'yalishi ishlatilgan.

Qarish bilan bog'liq -galaktosidaza bo'yalishi

Sichqonlarning muzlatilgan buyraklari 10-mkm qalinlikdagi bo‘laklarga bo‘lingan va NRK{2}}E hujayralari qarilik bilan bog‘liq -galaktosidaza (SA- -gal, C0602, Beyotime Biotechnology, Shanxay, Xitoy) bilan bo‘yalgan. ishlab chiqaruvchining protokollariga rioya qilish.

Gistologik tahlil

Buyrak bo‘laklari 4 foizli buferlangan paraformaldegid bilan mahkamlangan va 10-mkm qalinlikdagi parafin o‘rnatilgan bo‘laklar Masson trikromi (G1006, Servis, Vuxan, Xitoy) bilan bo‘yalgan va mikroskopik tarzda kuzatilgan. Massonning trikrom bilan bo'yalgan uchastkalaridagi ko'k rangli joylar tasodifiy tanlangan oltita maydondan miqdoriy jihatdan o'lchandi va Image-Pro Plus 6.0 dasturi tomonidan tahlil qilindi.

Biokimyoviy o'lchovlar

Sarum va buyrak gomogenati namunalari xona haroratiga qadar eritildi va superoksid dismutaza (SOD, CSB-E08556m, Wuhan Huamei, Wuhan, Xitoy), glutation peroksidaza (GSH-Px, A005-1-2, Nankin Jiancheng, Nankin, Xitoy), interleykin-1 (IL-1, RK00006, ABclonal, Vuxan, Xitoy), o'simta nekrozi omili- (TNF- , RK00027, ABclonal, Vuxan, Xitoy), karbamid azoti (C{) {10}}, Nankin Jiancheng, Nankin, Xitoy), sichqon zardobidagi kreatinin (Cr, C011-2-1, Nankin Jiancheng, Nankin, Xitoy), umumiy siydik oqsili (C035-2-1, Nankin Jiancheng, Nankin , Xitoy) sichqon siydigida va I turdagi kollagenning ifoda darajalari (Col-I, MU30364, Bio-Swamp, Wuhan, Xitoy), -silliq mushak aktini (-SMA, MU30359, Bio-Swamp, Wuhan, Xitoy), fibronektin (FN, MU30179, Bio-Swamp, Wuhan, Xitoy) sichqonchaning buyrak to'qimalarida tahlil to'plamini ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq ketma-ket o'lchandi.

Immunogistokimyoviy tahlil

Immunohistokimyoviy tahlil odatiy usul yordamida amalga oshirildi [17]. Amaldagi antikorlar quyidagilardan iborat: Wnt4 (14371-1-AP, Proteintech, Chicago, AQSH), -katenin (17565-1-AP, Proteintech, Chicago, AQSH), 1-toifa angiotensin II retseptorlari (AGTR1,{{). 7}}AP, Proteintech, Chikago, AQSh), p-yadro omili eritroid 2-bog'liq 2 omil (p-Nrf2, ab76026, Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya), pc-Fos (ab27793, Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya ), biriktiruvchi to'qima o'sish omili (CTGF, GB11078, Xizmat, Wuhan, Xitoy). Bo'limlar mikroskop ostida kuzatildi (Olimp, Tokio, Yaponiya).Cistanche dozasi redditImage-Pro Plus 6.0 dasturiy taʼminotidan foydalanib, tan rang ifodasi bilan hududning maydoni va birlashgan optik zichligini (IOD) oʻlchang va yarim uchun oʻrtacha optik zichlikni (MOD, MOD=IOD/maydon) hisoblang. - miqdoriy tahlil.

Western blot tahlili

Western blot tahlili avvalgi tadqiqotda ta'riflanganidek o'tkazildi [18]. Qisqacha aytganda, buyrak to'qimalari lizis buferida homogenlashtirildi va Bradford Protein Assay Kit (AR0197, Boster Biological Technology, Wuhan, Xitoy) yordamida miqdori aniqlandi. Keyin gomogenatlar natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforeziga duchor bo'ldi, poliviniliden ftorid membranasiga o'tkazildi va blokirovka qiluvchi tamponda (4 foiz yog'siz quruq sut) 90 daqiqa davomida bloklandi. Keyin ular birlamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilindi (Wnt4; renin; AGTR1; p-Nrf2; pc-Fos; Kelchga o'xshash ECH bilan bog'liq protein 1 (Keapl, GB11847, Service-bio, Wuhan, Xitoy); -aktin (AC026, Abclonal, Vuxan, Xitoy); va glitseraldegid{17}}fosfat dehidrogenaza (GAPDH, AC033, Abclonal, Vuxan, Xitoy)) kechada 4 daraja haroratda, so'ngra xona haroratida 1 soat davomida tegishli fluo-konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor bilan inkubatsiya qilinadi. . Qiziqarli oqsillar Odyssey IR skaneri (LI-COR Biosciences, Nebraska, AQSh) yordamida skanerdan o'tkazildi va signal intensivligi Image Studio dasturi yordamida aniqlandi. Protein darajasi -aktin yoki GAPDHga nisbatan normallashtirildi.

Buyrak namunalari uchun UPLC-Q-TOF-MS tahlili

Buyrak to'qimalari tortildi va muzdek sovuq fiziologik sho'r suvda gomogenlashtirildi (w/v=1:1). Keyin 200 mL to'qima gomogenati namunalariga 1 ml asetonitril qo'shildi, so'ngra 30 daqiqa davomida ultratovush bilan ekstraktsiya qilindi. Ekstrakt 12,000 g va 4 gradusda 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Supernatant tahlil qilish uchun flakonga olindi. Xromatografik ajratish o'ta samarali suyuqlik xromatografiyasida (UPLC) (Dionex UltiMate 3000 System, Thermo Scientific, Massachusets, AQSh) amalga oshirildi, LC tizimi Acclaim RSLC 120 C18 ustunidan (2,2 mkm, 2,1 × 10 mm; Termo Scientific).Cistanche ekstraktining foydalariHarakatlanuvchi faza erituvchi A (asetonitril) va {0}},1 foiz chumoli kislotasi (B) bo'lgan suvdan iborat edi. Ajratish gradient elyusiyasi bilan quyidagicha amalga oshirildi: 10-70 foiz A 0 dan 3 daqiqagacha, 70-78 foiz A 4 dan 13 minutgacha, 78-90 foiz A 14 dan 14 gacha 15 min,90 foiz -10 foiz A 15 daqiqadan 16 minutgacha va 10 foiz A 16 daqiqadan 20 minutgacha. Sinov namunasining in'ektsiya hajmi 2 mkl edi. Mass-spektrometriya (MS) tahlili quyidagi sharoitlarda ESI manbasi yordamida amalga oshirildi: musbat rejimda kapillyar kuchlanish 3,5 kV, manfiy rejimda kapillyar kuchlanish 3,2 kV. Nebulizerning bosimi 2,0 bar, quruq gazning harorati 230 daraja va oqim tezligi 8 l / min.

Statistik tahlil

The acquired raw data from ultra-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q/TOF-MS) analysis were first preprocessed using profile analysis(version 2.1, Bruker, Germany). The"bucket table" was obtained and imported into the SIMCA-P software(version13.0 Umetrics AB, Sweden)for principal component analysis (PCA). Other results were presented as mean±stand-ard deviation(SD). The data were processed using IBM SPSS Statistics 26.0. The normal distribution of the data used the Levene test, which required the average value, P>{0}}.05; guruhlar o'rtasida taqqoslash uchun dispersiyaning bir tomonlama tahlilidan foydalanilgan. AP qiymati 0,05 dan kam bo'lsa, statistik ahamiyatga ega deb hisoblanadi.

Natijalar

CF SAMP8 sichqonlarida buyraklarning qarishini va fibrozini yaxshiladi

CF ning SAMP8 sichqonlarining buyraklariga ta'sirini o'rganish uchun buyraklardagi SA- -gal faolligi o'lchandi. La-rasmda, buyrak to'qimalarida SA{2}}gal faolligi M guruhida sezilarli darajada oshgan (ko'k o'sish). CF-L va CF-M qo'llanilishi SAMP8 sichqonlarining buyraklarida -galaktosidaza faolligini sezilarli darajada inhibe qildi, CF-H tomonidan yaxshilanish sezilarli emas edi. Shuningdek, model guruhining buyrak indeksi nazorat guruhiga qaraganda sezilarli darajada past edi (1b-rasm, P).<0.05). after="" treatment="" with="" cf-m,="" the="" kidney="" index="" of="" samp8="" mice="" was=""><0.01). next,="" the="" results="" of="" masson's="" trichrome="" staining="" (fig.="" lc,=""><0.01)and the="" expression="" of="" fibrosis="" indicators="" col-i,="" α-sma,="" and="" fn="" revealed="" that="" m-group="" mice="" had="" more="" severe="" renal="" fibrosis="" than="" con-group="" mice,="" and="" cf-l="" and="" cf-m="" significantly="" attenuated="" renal="" fibrosis="" in="" samp8="" mice(fig.leg,=""><>

CF SAMP8 sichqonlarida buyrak funktsiyasini, oksidlovchi stressni va yallig'lanish darajasini yaxshiladi

Bundan tashqari, sichqonlarning har bir guruhining buyrak funktsiyasi ko'rsatkichlari sinovdan o'tkazildi, ular sichqonlarda 12 soat davomida siydik miqdori, zardobdagi Cr va karbamid azot darajalari va siydik oqsillari darajasini o'z ichiga oladi. Shakl 2a-d da ko'rsatilganidek, namuna guruhidagi siydik oqsili, sarum Cr va sarum karbamid azot darajasi nazorat guruhiga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (2a, P-rasm).<0.01), while="" the="" urine="" volume="" of="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group(fig.2b-d,=""><0.01). cf="" supplementation="" down-regulated="" the="" levels="" of="" urine="" protein,="" serum="" cr="" and="" urea="" nitrogen="" in="" the="" model="" group(fig.2b-d,=""><0.05 or=""><0.01) while="" increasing="" the="" urine="" output="" of="" model="" mice.="" collectively,="" the="" results="" indicated="" that="" samp8="" mice="" had="" kidney="" damage="" associated="" with="" aging,="" and="" treatment="" with="" cf="" effectively="" ameliorated="" this="" injury.="">cistanche ChingizxonKeyinchalik, CF tez qariydigan sichqonlarning buyraklarida oksidlovchi stress va yallig'lanishni foydali modulyatsiya qilganmi yoki yo'qmi o'rganildi. Shakl 2e-h da ko'rsatilganidek, M guruhining buyraklarida SOD va GSH-Pxin darajalari Con guruhiga qaraganda ancha past edi va IL-1 darajasi sezilarli darajada yuqori edi. Con guruhi. CF davolashdan so'ng yuqoridagi ko'rsatkichlar yaxshilandi, ayniqsa CF-L va CF-M ning yaxshilanish ta'siri yaxshiroq.

CF SAMP8 sichqonlarining buyragida Nrf2 yo'lini faollashtirdi

Ushbu tadqiqotda Nrf2 yo'lining CF ning himoya ta'sirida ishtirok etganligini tekshirish uchun p-Nrf2 ifoda darajasi buyrak to'qimalarida o'lchandi (Fig.3a-c). Faqatgina SAMP8 guruhida p-Nrf2 ning ifoda darajasi sezilarli darajada kamaydi (P<0.01, fig.="" 3c),="" and="" the="" downregulation="" was="" reversed="" to="" some="" extent="" by="" the="" treatment="" of="" cf="" crude="" extract.="" there="" was="" no="" significant="" change="" in="" the="" expression="" level="" of="" keapl="" among="" the="" groups(fig.="" 3b="" and="" d).="" further,="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" was="" detected="" and="" analyzed="" by="" immunohistochemical="" and="" western="" blot="" analyses.="" it="" was="" found="" that="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" mice="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" con="" group;="" while="" cf="" treatment="" significantly="" reduced="" the="" expression="" levels="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" the="" mice="" (fig.3a-b="" and="">

CF SAMP8 sichqonlarining buyragida Wnt/-katenin/RAS signalizatsiya faollashuvini susaytiradi.

Fibrozga qarshi ta'sir ko'rsatadigan CF ning potentsial mexanizmini yanada o'rganish uchun. Proteinni lokalizatsiya qilish immunohistokimyo yordamida amalga oshirildi. 4a-rasmda ko'rsatilganidek, Wnt4 ning ifoda darajasi va

-katenin asosan buyrak tubulyar hujayralarida induksiyalangan. Shunga o'xshash natijalar AGTR1, Wnt signalizatsiyasining quyi oqim yo'lining maqsadlari baholanganda kuzatildi (4a-rasm). Shundan so'ng, oqsillarni ifodalash darajasi aniqlandi va natijalar Wnt4, -katenin, renin va AGTR1 oqsillari model guruhidagi sichqonlarning buyrak to'qimalarida to'planganligini ko'rsatdi, CF esa bu o'zgarishlarni sezilarli darajada inhibe qildi (4b-f-rasm). ). Bundan tashqari, CTGF ning ifoda darajasi ham joylashgan va miqdoriy tahlil qilingan. Yuqorida aytib o'tilgan natijalarga muvofiq, CTGF asosan buyrak kanalchalarida ifodalangan va CF CTGF faolligini sezilarli darajada inhibe qilgan (4d g-rasm).

CF va uning birikmalari D-gal tomonidan qo'zg'atilgan NRK-52E hujayralarining qarishini inhibe qildi.

D-gal tomonidan qo'zg'atilgan NRK-52E hujayralari KFdagi ma'lum faol moddalarni skrining qilish, CF ekstrakti orqali keksalik buyraklarini davolash uchun moddiy asosni aniqlash uchun ishlatilgan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, CF dozaga va birikmalarga bog'liq holda hujayra hayotiyligini oshirdi

CF dan ajratilgan SDC-0-14,16 va SDC-1-8 hujayra proliferatsiyasiga yaxshi ta'sir ko'rsatdi. Bundan tashqari, 25 ug/ml CF va SDC-0-14,16 va SDC-1-8 birikmalari -galaktosidaza faolligini inhibe qilish ta'sirini ko'rsatdi (5-rasm).

CF SAMP8 sichqonlarida buyrak to'qimalarining PCA tahlilini yaxshiladi Asosiy komponentlar tahlili (PCA) CF ning SAMP8 sichqonlariga ta'sirini o'rganish uchun o'tkazildi. Shakl 6a da ko'rsatilganidek, nazorat va model guruhlari (R2X =0.542; Q2=0.38) o'rtasida aniq guruhlanish mavjud bo'lib, bu SAMP8 sichqonlarining endogen metabolitlari SAMR1 dan farq qiladi. sichqonlar, bu ularning SAMR1 guruhidan chetlanishiga olib keladi. 6b-rasmda ko'rsatilganidek, turli CF guruhlari ham nazorat va model guruhlardan turli sinflarga to'plangan va CF guruhlari nazorat guruhiga yaqinlashib, shuni ko'rsatadiki,

CF bilan aralashgan SAMP8 sichqonlarining endogen metabolitlari SAMR1 sichqonlariga o'xshash edi.

Munozara

KKH rivojlanishida qarish muhim rol o'ynaydi [19]. CKD fibrozining rivojlanishi bilan qarigan hujayralar pro-fibrotik omillarni (TGF-, CTGF va boshqalar) va yallig'lanishga qarshi omillarni (IL-1, IL-6, TNF- va boshqalarni) ifodalaydi va ajratadi. ), bu qarish bilan bog'liq bo'lgan sekretor fenotip omillari bo'lib, shu bilan buyrak fibrozini tezlashtiradi [20, 21]. Hozirgi vaqtda an'anaviy xitoy tibbiyoti buyrak fibrozini kamroq yon ta'siri bilan davolashda yaxshi natijalarga erishdi [22]. Ushbu tadqiqot SAMP8 sichqonlarida CF ekstraktining buyrak fibroziga interventsion ta'sirini o'rganib chiqdi. Ushbu tadqiqot uchun tanlangan sichqoncha shtammi SAMP8 bo'lib, u AKR/sichqonlarning umr ko'rish davomiyligi, qarishi va patologik fenotipik baholash ko'rsatkichlari asosida ishlab chiqilgan va faqat genetik kelib chiqishi bo'lgan tezlashtirilgan qarish modeli edi [23,24]. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, SAMP8 sichqonlarining buyrak patologiyasidagi o'zgarishlar (9 oy) tubulointerstitial fibroz va fokal segmental glomerulosklerozni o'z ichiga oladi [25]. Va SAMP8 sichqonlarida buyrak fibrozi yoshga bog'liq ekanligi aniqlandi [6]. Shuning uchun biz -galaktosidaza va faolligini sinab ko'rdik

SAMP8 sichqonlarida buyrak fibrozi darajasi va CF-L va CF-M SAMP8 sichqonlarida buyrak fibrozi va -galaktosidaza faolligini yaxshilashini aniqladi (1-rasm). Va biz sichqonlarning siydik chiqishini ham sinab ko'rdik. Ikki xil jarayonda olingan CF diuretik ta'sirga ega ekanligini ko'rsatadigan ilgari chop etilgan tadqiqotlarga muvofiq [13], ekstrakt SAMP8 sichqonlarining siydik hajmini sezilarli darajada oshirdi. Shuningdek, ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, CF bilan qo'shimchalar buyrak funktsiyasini, antioksidant fermentlarning faolligini va SAMP8 sichqonlarida yallig'lanish omillari darajasini yaxshilagan (2-rasm).

Keap1-Nrf2 tizimi so'nggi yillarda antioksidant va yallig'lanishga qarshi xususiyatlari tufayli ko'plab olimlarning e'tiborini tortdi. Buyrak kasalliklarini davolashda uning farmakologik salohiyati klinik bo'lmagan va klinik tadqiqotlarda keng o'rganilgan [26]. Nrf2 oksidlanish-qaytarilish holati va antioksidant ta'sirlar bilan bog'liq genlar uchun asosiy transkripsiya regulyatoridir [27]. Tadqiqotlar Nrf2 faollashuvi va maqsadli gen induksiyasi uchun fosforlanish zarurligini ko'rsatdi [28]. Nrf2 ni faollashtirish oksidlovchi stressni oldini olish va hujayra redoks gomeostazini saqlab qolish orqali CKD rivojlanishini yaxshiladi [29]. Asosiy transkripsiya omili sifatida Nrf2 o'zining quyi oqimidagi antioksidantlarini va detoksifikatsiya fermentlarini tartibga solish orqali oksidlovchi stressdan himoya qilishda hal qiluvchi rol o'ynaydi [30]. Kim va boshqalar. resveratrol kuchli Nrf2 faollashtiruvchisi sifatida qarish bilan bog'liq progressiv buyrak shikastlanishini yaxshilaganligini xabar qildi [31]. Ushbu tadqiqotda CF Keaplning ifoda darajasiga ta'sir qilmasdan SAMP8 sichqonlarining buyragida Nrf2 ning susaytirishini yaxshiladi, bu CF xom ekstrakti Nrf2 yo'lini faollashtirish orqali buyraklardagi oksidlanish shikastlanishini yaxshilashi mumkinligini ko'rsatdi (3-rasm).

Buyrak fibrozisi buyrak parenximasida chandiqlar paydo bo'lishiga olib keladigan hujayradan tashqari matritsaning (ECM) ortiqcha cho'kishi bilan tavsiflanadi [32]. Transformatsiya qiluvchi o'sish omili- (TGF-) fibro-blastning haddan tashqari faollashuvida asosiy sitokin hisoblanadi [33, 34]. Albatta, buyrak fibrozini kamaytirish uchun faqat TGF signalizatsiya yo'lini maqsad qilib qo'yish etarli emas. Ba'zi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CTGF, Wnt/-katenin, renin-angiotensin tizimi, oksidlovchi stress va boshqalar buyrak fibroziga ta'sir qiladi [35-37]. Wnt/-katenin - bu to'qimalar gomeostazini, organlarning rivojlanishini va jarohatni tiklashni tartibga solishda ishtirok etadigan evolyutsion tarzda saqlanib qolgan signalizatsiya yo'lidir [38]. Cisternas va boshqalar. skelet mushaklari va buyraklardagi Wnt signalizatsiyasining pro-fibrotik ta'sirini muhokama qildilar [39]. O'rnatilgan dalillar shuni ko'rsatdiki, Wnt/ -katenin signalizatsiya yo'li jarohatdan keyin buyrak fibrotik lezyonlarining rivojlanishi va rivojlanishini tartibga solishda hal qiluvchi rol o'ynaydi [40-42]. Wnt/-katenin signali sog'lom kattalarning buyragida nisbatan jim bo'lib, buyraklar har xil zararlanganda faollashadi [43].

Sutemizuvchilarda Wnt oilasida buyrak rivojlanishi uchun muhim bo'lgan kamida 19 oila a'zosi mavjud. Va bu oila a'zolarining kamida 15 tasi qarigan buyrakda, shu jumladan Wnt4 [6] tomonidan farqlanadi. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatdiki, SAMP8 sichqonlarining buyraklarida Wnt4 oqsilining ifoda darajasi SAMR1 sichqonlariga qaraganda sezilarli darajada yuqori bo'lib, bu G'arbiy blot va immunohistokimyoviy tahlillar bilan tasdiqlangan (4a, d va f-rasm). Tasodifan, -katenin oqsilining ifoda darajasi ham yuqoriga ko'tarildi. Shuningdek, immunohistokimyoviy tahlil (4a va f-rasm) tomonidan aniqlanganidek, Wnt4 va -katenin ham buyrak tubulali epiteliya hujayralarida ifodalangan. Wnt/-katenin RAS komponentlari, matritsa metalloproteinaz-7 (MMP-7), plazminogen faollashtiruvchi ingibitor 1 (PAI-1) va salyangoz [37] kabi bir nechta fibrogen genlarni qo'zg'atish orqali buyrak fibrozini qo'zg'atdi. ]. Chjou va boshqalar. Wnt/ -kateninni buyraklardagi barcha sinovdan o'tgan RAS komponentlarining ekspressiyasini nazorat qiluvchi asosiy yuqori oqim regulyatori sifatida tasvirlangan [44]. Chjou va boshq. 5/6 nefrektomiya (5/6 NX) kalamush modelidan miya va buyraklardagi angiotensinogen, angiotensinga aylantiruvchi ferment va angiotensin II AT kabi RAS ning asosiy komponentlarini ifodalash darajasini ko'rsatish uchun foydalanganlar. }} retseptorlari sezilarli darajada yuqori tartibga solingan. Yuqori tartibga solinadigan ifoda darajasi Wnt ning markaziy blokeri tomonidan inhibe qilingan, bu DKK1 genini haddan tashqari ifodalovchi adeno bilan bog'liq virus vektori [45]. Xuddi shunday, ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, AGTR1 hali ham buyrak quvur epiteliyasida ifodalangan va SAMP8 sichqonlarining buyrak to'qimalarida renin va AGTRl ning ifoda darajalari SAMR1 sichqonlariga qaraganda sezilarli darajada yuqori edi (4a va dg-rasm). Ushbu natijalar Wnt / -catenin / RAS signalizatsiya yo'li SAMP8 sichqonlarining buyraklarida faollashtirilganligini ko'rsatdi va CF bu yo'lning faollashuvini samarali ravishda inhibe qildi.

CTGF ko'plab biologik funktsiyalarni bajaradi, jumladan, kemotaktik hujayralarning mitozini rag'batlantirish, adezyonni qo'zg'atish va hujayra proliferatsiyasi va ECM sintezini rag'batlantirish [35,46]. CCN2 (CTGF) modulyatsiyalangan Wnt signalizatsiyasi past zichlikdagi lipoprotein retseptorlari bilan bog'liq protein 5/6 (LRP5 / 6) bilan bog'lanib, fibrozni qo'shimcha vositachilik qiladi [39, 47]. Boshqa tadkikotlar Nrf2 CTGF ifoda darajasini tartibga solish orqali Wnt yo'lini tartibga solishini aniqlash va tasdiqlash uchun gen o'chirishdan foydalangan, bu esa buyrak oraliq kasalliklariga ta'sir qiladi. Shuningdek, Nrf2 CTGF transkripsiya darajasini asosan CTGF transkripsiya regulyatori c-Fos [48] orqali boshqargan. Immunohistokimyoviy tahlil shuni ko'rsatdiki, CTGF va pc-Fos asosan buyrak tubulali epiteliya hujayralarida, PC-Fos esa glomerullarda ham tarqalgan. Miqdoriy tahlil shuni ko'rsatdiki, ikkala oqsilning ifoda darajalari CF tomonidan inhibe qilingan (3b va e va 4a va c). Nihoyat, PCA tahlili CF SAMP8 sichqonlarida buyrak shikastlanishini yaxshilaganligini qo'shimcha tekshirish uchun ishlatilgan (6-rasm). Ushbu tadqiqot CF nafaqat Nrf2 signalizatsiyasini faollashtirgani, balki oksidlovchi stress va yallig'lanishni muvozanatlash uchun Nrf2 ga tayanganligi, Wnt / -katenin / RAS signalizatsiyasini inhibe qilganligi va buyrak qarishini va buyrak fibrogenezini yaxshilaganligini isbotladi. Biroq, biz ushbu tajribada CF ning Masson va SA{27}}gal bo'yalishiga ta'sirida ham izchil yaxshilanishni topdik. Taxminlarga ko'ra, bu SAMP8 sichqonlarida buyrak qarishi va buyrak fibrozining nomuvofiq rivojlanishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Ushbu tajribada sichqonlarda buyrak qarishi darajasi fibrozdan ko'ra jiddiyroq bo'lishi mumkin. Shu sababli, SAMP8 sichqonlarida CF-H ning buyrak qarishiga yaxshilovchi ta'siri buyrak fibrozi kabi aniq emas edi.

Qaytaruvchi monosaxarid sifatida D-galaktoza in vivo va in vitro turli yoshdagi kasalliklarda keng qo'llaniladi. D-gal NRK-52E hujayralari [49] ning qarishi va shikastlanishiga olib kelishi, inson buyragi proksimal naychali epiteliya hujayralarining (HKC-8 hujayralari) qarishiga olib kelishi va ikkita buyrakning ekspressiv darajasini oshirishi aniqlandi. fibroz marker oqsillari FN va a-SMA [6]. Ushbu tadqiqotda D-gal in vitro NRK-52E hujayralarini induktsiya qilish uchun ishlatilgan. CF dan ajratilgan birikmalarni aniqlash uchun MTT tahlili va -galaktosidaza bo'yashidan foydalangan holda, SDC-0-14,16 va SDC-1-8 D-gal tomonidan qo'zg'atilgan hujayra hayotiyligini kuchaytirgan va D-gal-induktsiyasini inhibe qilgani aniqlandi. hujayraning qarishi (5-rasm). Bular SDC-0-14,16 va SDC-1-8 buyrak qarishini kechiktirish uchun CF uchun asosiy asos bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi. SDC{21}} feniletanoid glikozidlardan biridir. feniletanoid glikozidlar Caenorhabditis Elegans [50] ning umrini uzaytirishi, qarishga qarshi [51] va neyroprotektiv ta'sirga ega [52-54]. Bular KF ning farmakologik ta'siri bo'yicha keyingi tadqiqotimiz uchun yo'nalish beradi.

Xulosa

Xulosa qilib aytganda, in vivo tadqiqotlar CF keksa sichqonlarda buyrak fibrozini kamaytirishini ko'rsatdi. Ba'zi potentsial faol moddalar in vitro tajribalarida topilgan. Ushbu topilmalar CF yordamida buyrak kasalliklarini davolash uchun farmakologik yordam va CF faol moddalari bo'yicha keyingi tadqiqotlar uchun yo'nalishni taqdim etdi.

Ushbu maqola Cao va boshqalardan olingan. BMC qo'shimcha tibbiyot va terapiya (2022) 22:52