Allogreft yallig'lanishining ob'ektiv chorasi sifatida buyrak transplantatsiyasida to'qimalarning umumiy rad etish moduli ballidan foydalanish

Aloqa: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Arya Zarinsefat 1*, Xose M. Arreola Guerra2, Tara Sigdel 1, Izabella Damm1, Ruben Sarval 1, Chitranon Chan-on1, Gyula Szabo3, Xorxe L. Agilar-Frasko4, Xicohtencatl Ixtlapale-Car,

Karlos Salinas-Ramos 4 , Leonardo Ramires-Martines 4 , Klaudio Ramires 4 , Mario Vilatoba 4 , Luis E. Morales Buenrostro 4 , Jozefifina M. Alberu5 va Minni M. Sarval 1

Jarrohlik bo'limi, Kaliforniya universiteti, San-Fransisko, CA, Amerika Qo'shma Shtatlari,

2 Ichki kasalliklar bo'limi, Centenario kasalxonasi Migel Hidalgo, Aguaskalientes, Meksika,

3 Patologiya bo'limi, Kaliforniya universiteti, San-Fransisko, CA, Amerika Qo'shma Shtatlari,

4 Instituto Nacional de Ciencias Medicas y Nutricio'n Salvador Zubira'n, Mexiko, Meksika,

5 Tibbiyot fakulteti, Tecnologico de Monterrey, Escuela de Medicina va Ciencias de la Salud, Mexiko, Meksika

Uzoq muddatli buyrak transplantatsiyasi(KT) allogreft natijalari rad etishni yaxshiroq tushunish va immunosupressiyani yaxshilashga qaramay, kutilganidek yaxshilanmadi. Oldingi ish immunitetni miqdoriy, xolis baholash imkonini beruvchi formalin bilan o'rnatilgan parafin bilan o'rnatilgan (FFPE) biopsiya namunalaridan olingan 11 genni kuchaytirishga asoslangan baholash orqali o'lchangan to'qimalarning umumiy rad etish moduli (tCRM) hisoblangan rad etish ballini tasdiqladi. jarohat. Biz tCRMni 124 KT oluvchining istiqbolli sinovida qo'lladik va tCRM va gistologiya bo'yicha kontrastli baholash protokol bo'yicha 2 mustaqil patolog tomonidan o'qiladi va transplantatsiyadan keyingi biopsiyaga sabab bo'ladi. FFPE biopsiya namunalaridan to'rtta 10- mm soqol RNKni ekstraksiya qilish va qPCR yordamida 11 tCRM genini kuchaytirish uchun ishlatilgan, ulardan tCRM balli hisoblangan. O'tkir rad etish (AR) yoki chegaraviy rad etish (BL) biopsiya tashxislarida yallig'lanish mavjud, barqaror biopsiyalarda esa yallig'lanish yo'q edi. Ikkala patolog tomonidan o'qilgan 77 ta biopsiyadan jami 40 tashxisda nomuvofiqliklar mavjud edi. AR, BL va barqaror tashxislar uchun o'rtacha tCRM ko'rsatkichlari mos ravishda 4,87, 1,85 va 1,27 bo'lib, barcha gistologik guruhlar o'rtasida umumiy sezilarli farq (Kruskal-Wallis, p < 0.0{="" {34}}01).="" yallig'lanishni="" aniqlagan="" va="" kelishmovchilik="" (p="0.003)" va="" yallig'lanishni="" aniqlagan="" va="" yallig'lanish="" yo'q="" (p="">< 0,001)="" va="" barcha="" ballar="" o'rtasidagi="" umumiy="" ahamiyatga="" ega="" bo'lgan="" patologlar="" o'rtasida="" tcrm="" ballarida="" sezilarli="" farqlar="" mavjud="" edi="" (p.="" kruskal-uollis,="" p=""><0,001). turli="" klinik="" ko'rsatkichlar="" o'zgaruvchilari="" va="" tcrm="" yordamida="" greft="" yallig'lanishini="" bashorat="" qiluvchi="" logistik="" regressiya="" modeli="" tcrm="" ballini="" greft="" yallig'lanishining="" yagona="" muhim="" bashoratchisi="" sifatida="" ko'rsatdi="" (or:="" 1,90,="" 95="" foiz="" ci:="" 1,40-2,68,="" p=""><0,0001). klinik="" namunani="" rad="" etishni="" to'g'ri,="" miqdoriy="" va="" xolis="" baholash="" juda="" muhimdir.="" xuddi="" shu="" namunalar="" bo'yicha="" patologlar="" o'rtasidagi="" nomuvofiq="" tashxislarni="" hisobga="" olgan="" holda,="" odamlar="" noaniq="" vaziyatlarda="" tcrm="" ballidan="" foydalanishlari="" mumkin.="" biz="" taklif="" qilamizki,="" tcrm="" miqdoriy="" ko'rsatkichi="" greft="" yallig'lanishining="" xolis="" miqdorini="" aniqlash="" imkonini="" beradi="" va="" uni="" ffpe="" soqolida="" pcr="" yordamida="" tezkor="" baholash="" klinik="" qarorlar="" qabul="" qilish="" va="" immunosupressiyani="" etkazib="" berishda="" yordam="" beradigan="" muhim="" yordamchi="" bo'lishi="">

Kalit so‘zlar:buyrak transplantatsiyasi, o'tkir rad etish, biomarkerlar, transkriptomikalar, formalin bilan biriktirilgan kerosin bilan o'rnatilgan (FFPE), greft yallig'lanishi

Cistanche tubulosa buyrak kasalligining oldini oladi, namunani olish uchun shu yerni bosing

KIRISH

Buyrak transplantatsiyasi(KT) oxirgi bosqichli buyrak kasalligi bilan og'rigan bemorlar uchun afzal qilingan davo bo'lib qolmoqda, kutish ro'yxatidagi bemorlarga nisbatan o'lim darajasi pasaygan va turli demografik guruhlarda omon qolish yaxshilangan (1-3). Bir yil ichida sezilarli yaxshilanishlarga qaramaybuyrakallograft omon qolish (4), transplantatsiyadan keyingi birinchi yildan keyingi surunkali transplantatsiya yo'qotish darajasi sezilarli darajada qolmoqda. Bu yaxshilangan immunosupressiya paydo bo'lishi bilan birga allograftni rad etishni yaxshiroq tushunishga qaramay kuzatildi. Gistologik rad etishning joriy tasniflash usullari namuna olish xatosi va uzoq muddatli transplantatsiya funktsiyasi va omon qolishning muhim prognozchisi bo'lgan allogreftdagi yallig'lanish yukini aniq aniqlashning imkoni yo'qligi bilan bog'liq (5-9). Muhimi shundaki, oldingi tadqiqotlar Banff darajasidagi buyrak allogreft patologiyasining patologoanatom korrelyatsiyasi biopsiya talqinlari o'rtasida jiddiy tafovutlar mavjudligini ko'rsatdi (10, 11).

Laboratoriyamizdagi oldingi ish 1030 dan to'liq genom mikroarray ma'lumotlarini tahlil qiladi.buyrak, yurak, o'pka va jigar allogreft biopsiyalari aniqlangan aumumiy immunitetTurli xil allogreftlar (12-14) bo'yicha o'tkir rad etishni (AR) aniqlaydigan 11 gendan iborat elektron javob moduli (CRM) va keyinchalik tasdiqlangan.buyrakallograft biopsiyalari (15, 16). Ushbu ma'lumotlar biopsiya tashxisida yordam berish uchun CRM balli kabi ob'ektiv o'lchovdan foydalanishning potentsial foydaliligini ko'rsatgan bo'lsa-da, bular ilgari banklangan to'qimalarda retrospektiv tahlillar edi. Bundan tashqari, bir xil biopsiyaning bir nechta ko'r-ko'rona patologiyasini o'qishlari yoki CRM reytingining ob'ektiv tashhis qo'yish yoki qo'shimcha ma'lumotlar nuqtasi sifatida foydalanish qobiliyati o'rtasida hech qanday taqqoslash amalga oshirilmadi.

Ushbu tahlilda biz serialni ko'rib chiqdikbuyrakKTda klinik sinovning bir qismi sifatida olingan biopsiyalar. Biz ARning gistologik jihatdan tasdiqlangan fenotiplari, chegaraviy rad etish (BL) bilan formalin bilan biriktirilgan parafin bilan o'rnatilgan (FFPE) blokdan to'rtta 10- mikron soqoldan ajratilgan RNKdan olingan 11 CRM genining gen ekspressiyasini o'lchaydigan protokolimizni qo'lladik. va barqaror tashxislar. CRM ballini biopsiya to'qimalariga qo'llashni hisobga olgan holda, biz bu ballni to'qima CRM (tCRM) deb ataymiz (15, 16). Keyin biz 2 ko'r patologning tashxislarini solishtirdik va ularni har bir biopsiya uchun tCRM ball bilan solishtirdik. Biz faraz qildikki, tCRM balli biopsiya diagnostikasida yordam berish uchun ma'lumot nuqtasi sifatida va, ehtimol, patologlar o'rtasida kelishmovchiliklar mavjud bo'lganda, ob'ektiv tiebreaker sifatida ishlatilishi mumkin.

cistanche foydasi: yallig'lanishga qarshi

USULLARI

Bemorni ro'yxatga olish va o'rganish dizayni

Bemorlar va namunalar TITRATE (Testing Immunosupression Threshold in renal allografts to Extend eGFR) klinik sinovi doirasida yig'ildi. Uning metodologiyasi bilan ClinicalTrials.gov portalida maslahat olish mumkin (Identifikator: NCT02581436). Qisqacha aytganda, bu AR, glomerulyar filtratsiya tezligi (GFR) va fibroz ko'rsatkichlarini o'z vaqtida aniqlash nuqtai nazaridan samaradorlik va xavfsizlikni baholash uchun ikki turdagi manevrlarga tayinlangan 124 KT qabul qiluvchining istiqbolli, ko'r-ko'rona, nazorat qilinadigan klinik sinovidir. KTdan keyingi 12 oyda protokol biopsiyalarida. Buyrak funktsiyasi monitoringi GFR va KTdan keyingi 3 va 12 oylarda va sababga ko'ra protokol bo'yicha bajarilgan transplantatsiya biopsiyalariga asoslangan. Induksion immunosupressiya (IS) immunologik xavf asosida Basiliksimab (past xavfli), antitimotsit globulin (yuqori xavfli) bilan yoki ikkita gaplotipga ega bo'lgan bemorlarda induksion terapiyasiz tayinlangan. Ta'minot IS takrolimus, mikofenolat va prednizonga asoslangan.

Joriy tadqiqot barcha mavjud KT biopsiyalarida tCRM genlari (15) uchun yordamchi tahlil edi. Bizning tadqiqotimiz uchun nolinchi kunlik biopsiyalarni hisobga olmaganda, Meksikadagi Milliy Tibbiyot fanlari instituti patologi tomonidan talqin qilingan biopsiya gistologiyasi bilan jami 136 ta biopsiya mavjud edi. Ushbu 136 biopsiyadan 77 tasi patologning korrelyatsiyasini keyingi baholash uchun ko'r-ko'rona o'qish uchun UCSFga yuborildi. Biopsiya tadqiqot vaqtida eng so'nggi Banff mezonlari asosida talqin qilingan (17). Graft ARning har qanday shakli (o'tkir hujayrali yoki antikor vositachiligida) bitta AR toifasiga birlashtirildi. UCSF tomonidan o'qiladigan biopsiyalar uchun ko'proq granüler gistopatologik tashxis ma'lumotlari mavjud edi, jumladan antikor vositachiligidagi rad etish (ABMR) turi va T-hujayra vositachiligidagi rad etish (TCMR) turi.

Umumiy RNK ekstraktsiyasi

Biz FFPE to'qimalaridan RNKni olish bo'yicha ilgari nashr etilgan protokolga amal qildik (18). Oldingi tajribamizga asoslanib, PureLink FFPE Total RNK izolyatsiyasi (Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA) yordamida FFPE namunalaridan jami RNK ajratib olish uchun 4 × 10 mm qalinlikdagi qismlardan foydalandik. RNK ma'lumotlarining sifati 260/280 yutilish signali nisbati va RIN raqami bilan baholandi.

cDNK sintezi va qPCR yordamida gen ifodasini aniqlash

Jami 5{6}} ng RNK SuperScript VILO (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA) yordamida komplementar DNKga (cDNK) teskari transkripsiya qilindi va keyin TaqMan yordamida barcha 11 gen uchun maqsadli maxsus kuchaytirish bosqichida kuchaytirildi. PreAmp Master Mix va TaqMan Primerlari va problari (Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA) jami 18 kuchaytirish sikli uchun. qPCR reaktsiyalari Fluidigm BioMark FD tizimida (Fluidigm, Janubiy San-Fransisko, Kaliforniya) 18S geni uy xo'jaligi geni va 40 tsikl uchun mos yozuvlar RNK sifatida Human XpressRef Universal Total RNK (Qiagen, Valensiya, CA) yordamida amalga oshirildi. Olingan chip ma'lumotlari dastlab BioMark Analysis Software Version 2.0 (Fluidigm, Janubiy San-Fransisko, Kaliforniya) yordamida sifat nazorati uchun tahlil qilindi va Ct qiymatlari elektron jadvalga eksport qilindi. Ma'lumotlarni normallashtirish ikki bosqichda amalga oshirildi. Alohida genlarning Ct qiymatlari dCt qiymatlarini olish uchun har bir gen uchun 18S Ct qiymatiga nisbatan normallashtirildi. ddCt qiymatlarini olish uchun har bir namunaning dCt qiymatlari mos yozuvlar namunasining dCt qiymatlariga nisbatan normallashtirildi, keyinchalik har bir namunadagi har bir gen uchun katlama o'zgarishi (RQ) qiymatlarini hisoblash uchun foydalanildi. tCRM balli har bir namuna uchun 11 CRM genining geometrik o'rtacha qiymatini olish yo'li bilan hisoblab chiqilgan (12).

Statistik tahlil

Barcha ma'lumotlar keyingi tahlillar uchun R 3.6.2 (R Foundation, Vena, Avstriya) versiyasiga import qilindi. Bemorlarning demografiyasi (1-jadval) tCRM balli 2,2 dan katta yoki undan kam bo'lgan, ARni bashorat qilish uchun optimal AUROC bilan oldindan aniqlangan chegara asosida ko'rsatilgan (15). Statistik test doimiy o'zgaruvchilar uchun Student's t-testi va kategorik o'zgaruvchilar uchun chi-kvadrat testi bilan o'tkazildi. Har bir patologik diagnostika guruhi uchun tCRM reytingining qabariq va bar chizmalari ggplot2 to'plami yordamida tuzilgan. Barcha patologik guruhlar o'rtasidagi sezilarli farqlar va har bir guruh o'rtasidagi juft farqlar Kruskal-Wallis testi bilan aniqlandi. Har xil patologik guruhlar va tCRM genlaridan foydalangan holda nazoratsiz ierarxik klasterlash amalga oshirildi, keyingi issiqlik xaritalari issiqlik xaritasi paketi yordamida amalga oshirildi. Biz rad etishning molekulyar tashxisiga ega bo'lish uchun tCRM ballarini 2,2 dan yuqori deb hisobladik. Biz biopsiyani yallig'lanish uchun ijobiy deb belgiladik, agar patologik tashxis AR yoki BL bo'lsa, yallig'lanish uchun salbiy, agar tashxis barqaror bo'lsa. Keyin biz patologlar o'rtasida kelishuv o'zgaruvchisini yaratdik, bu erda ikkala yallig'lanish borligini aytdi, ikkalasi ham yallig'lanish yo'qligini aytdi yoki biron bir yallig'lanish mavjud bo'lsa, ular rozi bo'lmadi. Keyin yuqorida tavsiflanganidek, kelishuv o'zgaruvchisi orasida tCRM ballari uchun chiziqli chizmalar va issiqlik xaritalari yaratildi.

Biz biopsiyada yallig'lanishning ikkilik natijasini taxmin qilish uchun logistik regressiya modelini hisobladik. Biz qabul qiluvchining yoshini, tana massasi indeksini (BMI), kechiktirilgan transplantatsiya funktsiyasini (DGF), jinsni, induksiya rejimini, tirik donor holatini, erkak donordan ayolga, oldingi KT, KTdan oldingi dializ va tCRM ballini bashorat qiluvchi o'zgaruvchilar sifatida kiritamiz. model.

Biz har bir bemorning KTdan keyingi ikki yildagi yakuniy GFR dan biopsiya GFR vaqtining o'zgarishi sifatida hisoblangan delta GFR ni oldik. Delta GFRni biopsiyadan olingan bemorning tCRM ko'rsatkichi bilan bog'lash uchun biz Pearson korrelyatsiya koeffitsientidan foydalandik. Bu tCRM ballari 2 dan kam bo‘lmaganidan keyin takrorlandi. Biz tCRM ballari bilan korrelyatsiyani amalga oshirish uchun har bir bemor uchun o‘rtacha FL floresan intensivligi (MFI) sifatida ifodalangan boshqa sitometriya orqali o‘lchangan eng yuqori donorga xos antikor (DSA) darajalaridan foydalandik. bog'langan Pearson korrelyatsiya koeffitsientini hisoblang. Bu korrelyatsiya, shuningdek, scatter plot formatida taqdim etilgan. Ketma-ket ko'rsatkichlarni tahlil qilish uchun biz transplantatsiyadan keyingi kunlarda ketma-ket tCRM ko'rsatkichlari bo'lgan bemorlarni chizdik, bunda ARning asl tashxisi bo'lgan, davolangan va keyingi biopsiya bilan kuzatilgan to'rtta bemorga e'tibor qaratildi. tCRM ko'rsatkichlari yuqori bo'lgan ikkita qo'shimcha bemor barqaror tashxisga ega deb o'qildi, ammo keyingi biopsiyalarida ARning yangi tashxisini ishlab chiqdi. Tadqiqot dizayni va keyingi tahlillar tasviriy shaklda qo'shimcha ravishda umumlashtiriladi (1-rasm).

NATIJALAR

Ikki mustaqil, ko'r-ko'rona patologlarning buyrak allograft biopsiya natijalari

Bemorlarning demografiyasi va qiziqish klinik o'zgaruvchilari tCRM ko'rsatkichlari 2,2 dan yuqori yoki undan kam bo'lgan bemorlar o'rtasida katta farqlarni ko'rsatmadi, transplantatsiyadan keyingi biopsiyalarda tCRM ko'rsatkichlari yuqori bo'lgan bemorlarda yuqori donor yoshi bundan mustasno (1-jadval). Ikkala markaz tomonidan jami 77 ta biopsiya o'qildi, 1-patolog (Meksika) 16 AR, 21 BL va 40 barqaror biopsiya tashxisini qo'ydi, 2-patolog (UCSF) esa 10 AR, 39 BL va 28 barqaror biopsiya tashxisini qo'ydi (2-jadval) . Patologlar o'rtasida jami 40 ta nomuvofiq tashxis mavjud bo'lib, bu nomuvofiqliklarning asosiy qismi BL toifasidagi farqlardan kelib chiqqan.

To'qimalarni umumiy rad etish moduli patologik tashxislar o'rtasida farq qiladi.

Keyin biz tCRM ballining bitta patolog uchun patologik tashxislarni farqlash qobiliyatini ko'rib chiqdik (bizda mavjud bo'lgan eng batafsil gistopatologik ma'lumotlarga ega ekanligimizni hisobga olib, UCSF da o'qilgan biopsiyalardan foydalangan holda). Gistologik diagnostika bo'yicha tCRM ko'rsatkichlarini ko'rib chiqsak, biz AR bilan og'rigan bemorlarda BL/barqaror bilan solishtirganda yuqori tCRM ballari va AR bemorlarida > 2,2 ballar nisbati yuqori bo'lgan aniq ajratishni ko'rdik (2A-rasm). AR, BL va barqaror tashxislar uchun median tCRM ballari va kvartillararo diapazonlar (IQR) 4,87 (IQR: 2,44–6,99), 1,85 (IQR: 1,21–2,48) va 1,27 (IQR: {{17}) edi. 2.14) mos ravishda. Bundan tashqari, barcha gistologik guruhlar o'rtasida umumiy sezilarli farq (p < 0.001),="" ar="" va="" bl="" va="" ar="" va="" barqaror="" juftlik="" taqqoslashlari="" o'rtasidagi="" sezilarli="" farqlar="" mavjud="" edi="" (2b-rasm).="" bu="" tcrm="" ballarining="" banff="" darajasidagi="" patologiya="" bilan="" bog'liqligini="">

tCRM genlarini nazoratsiz ierarxik klasterlashni amalga oshirayotganda, biz patologik tashxis bo'yicha nisbatan aniq klasterlashni ko'ramiz (2C-rasm). Har bir biopsiyani sinchkovlik bilan tekshirganda, diagnostika bo'yicha klasterlash klasterlangan guruhlarda heterojenlikni ko'rsatsa ham, tegishli tCRM balli (rang gradienti sifatida ko'rsatilgan) tashxis bilan bog'liq bo'ladi. Yallig'lanishning yuqori darajalarini aks ettiruvchi tashxislar bilan yuqori ballni ko'ramiz, bu tCRM ning allogreftdagi yallig'lanishni bir-biridan farq qilmasdan ajratish va ob'ektiv miqdorini aniqlash qobiliyatini anglatadi. Biz tCRM chegarasi 2,2 dan foydalanganimizda (yallig'lanishning molekulyar diagnostikasi), biz molekulyar diagnostika bo'yicha kuchli klasterlashni ko'ramiz. Nima bo'lishidan qat'iy nazar, AR va BL klasterining aksariyati yuqori gen ekspressiyasi va yuqori tCRM ballari bilan birga, gistologik jihatdan barqaror biopsiyalarning ko'pchiligi uchun aksincha.

To'qimalarni umumiy rad etish moduli transplantatsiyani rad etishning o'ziga xos turlarini ajratadi

Keyin biz tCRM ballining turli xil rad etish turlarini farqlash qobiliyatini ko'rib chiqdik: C4d-musbat (n=9) va salbiy ABMR (n=4), TCMR (n=3) , BL (n=21) va barqaror (n=40) biopsiya. C4d musbat ABMR, C4d-salbiy ABMR, TCMR, BL va barqaror tashxislar uchun median tCRM ballari va IQR 4,22 (IQR: 3,80–5,98), 3,47 (IQR: 1,71–6,{51) ni tashkil etdi. {23}} (IQR: 2,58–3.05), mos ravishda 1,91 (IQR: 1,32–2,88) va 1,37 (IQR: 0,99–2.00). Bundan tashqari, C4d-musbat ABMR va TCMR, C4d-musbat ABMR va. , TCMR va barqaror va BL va barqaror guruhlar (3A-rasm). Bu yana bir bor tCRM ko'rsatkichlarining o'ziga xos Banff darajasidagi patologiya bilan bog'liqligini ta'kidlaydi.

tCRM genlarini nazoratsiz ierarxik klasterlashni amalga oshirayotganda, biz ilgari tasvirlanganidek, greft yallig'lanishiga asoslangan klasterlashning o'xshash modellarini ko'ramiz (3B-rasm). C4d-musbat va salbiy ABMR va TCMR ning aniqroq diagnostik toifalari bilan biz ABMR guruhlari orasida eng sezilarli bir hil klasterlashni ko'ramiz. Avvalgidek, har bir biopsiyani sinchkovlik bilan tekshirganda, hatto diagnostika bo'yicha klasterlash klasterlangan guruhlarda heterojenlikni ko'rsatsa ham, tegishli tCRM balli (rang gradienti sifatida ko'rsatilgan) tashxis bilan bog'liq bo'ladi. Yallig'lanishning yuqori darajalarini aks ettiruvchi tashxislar bilan yuqori ballni ko'ramiz, bu tCRM ning allogreftdagi yallig'lanishni bir-biridan farq qilmasdan ajratish va ob'ektiv miqdorini aniqlash qobiliyatini anglatadi. Oxir oqibat, bizning nazoratsiz klasterlashimizning birinchi bo'limida har qanday darajadagi greft yallig'lanishi, xususan, har qanday ABMR, TCMR yoki BL holatlari bo'lgan ko'pchilik namunalar mavjud edi (3B-rasm).

To'qimalarni umumiy rad etish moduli patologning kelishuvi/kelishmovchiligi bilan farq qiladi

Keyin biz tCRM ballarini patologlar o'rtasidagi kelishmovchilik va kelishmovchiliklarni ko'rib chiqdik, ular ilgari tushuntirilganidek aniqlangan. Ikkala patolog tomonidan o'qilgan transplantatsiyadan keyingi 77 ta biopsiyaning ikkalasi ham 33,8 foizda yallig'lanish, 22,1 foizda yallig'lanish yo'qligini aytdi va namunalarning 44,2 foizida yallig'lanish mavjudligiga rozi bo'lmadi. tCRM ballarini o'rganayotganda, kelishuv o'zgaruvchisi yallig'lanish yo'qligi, kelishmovchilik va yallig'lanish mavjudligi bo'yicha kelishuvdan o'sib borishi sababli ballarning ko'payishini qayd etdik (4A-rasm). Yallig‘lanishni aniqlagan va kelishmovchilik (p=0.003) va yallig‘lanishni aniqlagan va yallig‘lanish yo‘qligini aniqlagan patologlar o‘rtasida tCRM ballarida sezilarli farq bor edi (p < 0,001).="" ),="" barcha="" ballar="" orasidagi="" umumiy="" ahamiyatga="" ega="" (p=""><>

tCRM genlarini nazoratsiz ierarxik klasterlashni amalga oshirayotganda biz kelishuv o'zgaruvchisi asosida biopsiya namunalarining klasterlanishini ko'rdik (4B-rasm). Ko'rishimiz mumkinki, yuqori gen ekspresyonining klasterlari ikkala patologning yallig'lanish mavjudligi to'g'risida kelishib olishlariga mos keladi, aksincha, past gen ifodasi ikkala patologning yallig'lanish yoki ular o'rtasida kelishmovchilik yo'qligi to'g'risida kelishib olishiga mos keladi. Bundan tashqari, har bir biopsiya uchun tegishli tCRM balli patologlar mos ravishda yallig'lanish yoki yallig'lanish yo'qligi to'g'risida kelishib olgan holda yuqori va past ko'rsatkichlarga mos kelishini ko'ramiz. Klasterlash mukammal bo'lmasa-da, aniq tendentsiya ko'rinadi.

To'qimalarni umumiy rad etish moduli rad etish va transplantatsiya funktsiyasini bashorat qiluvchi sifatida yuqorida biz tCRM ning klinik foydasini ko'rsatamiz, chunki u aniq patologik tashxis qo'yish bilan bog'liq. Uning qo'llanilishi an'anaviy ravishda biopsiya bilan tasdiqlangan tashxis bilan bog'liq bo'lsa-da, biz rad etish/yallig'lanishni bashorat qilish modelida tCRM-dan foydalanishni o'rganmoqchi edik. Yallig'lanishning ikkilik o'zgaruvchisi (AR va BL biopsiyalari) yordamida biz biopsiyada yallig'lanishning ikkilik natijasini taxmin qilish uchun logistik regressiya modelini yaratdik. Amaldagi klinik o'zgaruvchilar ilgari tasvirlangan (3-jadval). Qizig'i shundaki, patologiya tomonidan tashxis qo'yilgan yallig'lanishning yagona muhim bashoratchisi tCRM ko'rsatkichi edi (OR: 1,90, 95 foiz CI: 1,40–2,68, p < 0.{{16}="" }}01),="" ayol="" qabul="" qiluvchiga="" erkak="" donorga="" ega="" bo'lish="" chegaraviy="" ahamiyatga="" ega="" bo'lgan="" himoya="" edi="" (or:="" 0,27,="" 95="" foiz="" ci:="" 0,07-0,98,="" p="">

Keyin biz tCRM ning GFRdagi uzoq muddatli o'zgarishlarni bashorat qilish qobiliyatini ko'rib chiqdik. Biz delta GFRni (biopsiya vaqtidagi GFRdan yakuniy GFRgacha) bemorning biopsiyadagi tCRM balliga bog'ladik (Pirson korrelyatsiya koeffitsienti=0.21, p=0.{{6} }25). Keyin biz buni 2 dan kam tCRM ballarini chiqarib tashlaganimizdan keyin takrorladik, shuning uchun biz delta GFR ga ta'sirini ko'rish uchun faqat eng yuqori tCRM qiymatlarini ko'rib chiqdik, bu korrelyatsiya koeffitsientining 0,32 ga oshishiga olib keldi (p=0). 05). Shuningdek, biz har bir bemorning eng yuqori DSA darajasining ularning tegishli tCRM ko‘rsatkichi bilan o‘zaro bog‘liqligini ko‘rib chiqdik (qo‘shimcha 1-rasm), DSA darajalari va tCRM ballari o‘rtasida bog‘liqlik bor-yo‘qligini aniqlash uchun, biz korrelyatsiyani topmadik (Pirson korrelyatsiya koeffitsienti { {11}}, p=0.99).

Nihoyat, biz ketma-ket biopsiya va tCRM ballari bo'lgan bemorlarni ko'rib chiqdik. Transplantatsiyadan keyingi kunlar bo'yicha har bir bemor uchun ketma-ket tCRM ballari chizilgan (4C-rasm). ARning asl tashxisi bo'lgan va davolangan, so'ngra keyingi biopsiya bilan kuzatilgan to'rtta bemor bor edi (4C-rasm, qizil chiziqlar). Biz to'rtta bemorning barchasida dastlab tCRM ko'rsatkichi yuqori bo'lganini va davolanishdan keyin ularning ballari pasayganligini, ikkinchi biopsiyada faqat bitta bemorga AR tashxisi qo'yilganligini ta'kidladik. Shunisi e'tiborga loyiqki, patolog tomonidan barqaror tashxis qo'yilgan tCRM ko'rsatkichlari yuqori bo'lgan ikki bemorda tCRM ko'rsatkichi oshgan va keyingi biopsiyalarida ARning yangi tashxisi paydo bo'lgan (4C-rasm, ko'k chiziqlar).

cistanche tubulosa ekstrakti:buyrak faoliyatini yaxshilash

MUHOKAZA

Biz faraz qildikki, tCRM balli biopsiya diagnostikasida yordam berish uchun ma'lumot nuqtasi sifatida va, ehtimol, patologlar o'rtasida kelishmovchiliklar mavjud bo'lganda, ob'ektiv tiebreaker sifatida ishlatilishi mumkin. Yuqorida biz tCRM balli patologik tashxislarni ajrata olishini ko'rsatamiz. tCRM birlashtirilgan AR va BL va barqaror namunalar o'rtasida farqlay oladi, shuningdek, yuqorida ko'rsatganimizdek, ABMR va TCMR va ABMR va BL kabi aniqroq AR tashxislarini ajrata oladi. Banff mezonlarining birlashtirilgan sub'ektiv/ob'ektiv tabiatining ma'lum kamchiliklaridan biri shundaki, bir xil biopsiya namunalarini ko'rib chiqayotgan patologlar o'rtasida nomuvofiqliklar bo'lishi mumkin. Biz yuqorida buyrak biopsiyalarida yallig'lanish yuki bo'yicha patologlar o'rtasida kelishmovchilik keng tarqalganligini ko'rsatdik. Biz shuni ko'rsatamizki, patologlar o'rtasida yallig'lanish mavjudligi yoki yo'qligi to'g'risida kelishuv mavjud bo'lsa, bu tCRM reytingining eng yuqori chegaralarida bo'ladi. tCRM ballidagi foydali dasturning bir qismi bu erda, yallig'lanishning ob'ektiv o'lchovini ta'minlash qobiliyatida bo'lishi mumkin, ammo tashxis aniq bo'lmagan, ammo tCRM balli bu yoki boshqa yo'lni aniq ko'rsatadigan holatlarda tenglikni buzadi. Masalan, AR yoki BL deb tasniflanishi aniq bo'lmagan, lekin juda yuqori tCRM ballga ega bo'lgan biopsiyani o'qiyotgan patolog AR tashxisini qo'yishda ob'ektivroq va aniqroq bo'lishi mumkin.

Bundan tashqari, ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, tCRM reytingi ko'proq uzoq muddatli klinik natijalarni bashorat qilish uchun ishlatilishi mumkin. GFRdagi o'zgarishlar va yuqori tCRM ballari o'rtasidagi bog'liqlik zaif bo'lsa-da, biz ular o'rtasida statistik jihatdan muhim ijobiy korrelyatsiyani ko'rsatdik, biz tCRM ballarini 2 dan kattaroq filtrlaganimizda yanada kattaroq korrelyatsiyani ko'rsatdik, bu ko'proq yuqori ball allogreftning yuqori darajasini ko'rsatadi. uzoq muddatli qisqartirilgan greft funktsiyasini bashorat qila oladigan shikastlanish (katta delta GFR). Qizig'i shundaki, biz bemorning DSA darajalari va tCRM ballari o'rtasida korrelyatsiya topmadik. Bu qisman DSA bilan og'rigan ko'plab bemorlarda ABMR rivojlanishi shart emasligi, shuningdek, turli DSAlar ABMR rivojlanishining turli xil xavflarini keltirib chiqarishi mumkinligini bilish bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Bundan tashqari, ketma-ket biopsiya va tCRM ko'rsatkichlari bo'lgan bemorlarni kuzatish orqali biz tCRM va AR ko'rsatkichlari yuqori bo'lgan bemorlarning aksariyatida keyingi biopsiyalarda greft yallig'lanishining yaxshilanishi bilan birga ularning ballari pasayganligini ko'rsatdik (keyingi gistologiya AR dan barqaror holatga o'tdi) ). Shunisi e'tiborga loyiqki, tCRM ko'rsatkichlari sezilarli darajada yuqori bo'lgan 2 ta holat mavjud, ammo biopsiyada patologik tashxis barqaror edi. Bu ikkala holat ham keyingi biopsiyada tCRM ko'rsatkichining yanada oshishiga olib keldi va shunga mos ravishda AR patologik tashxisi qo'yildi. Bu gistologik tasnifning sub'ektiv tabiati tufayli noto'g'ri tashxis qo'yish imkoniyatini yoki greft yallig'lanishi bilan bog'liq bo'lgan tCRM genlarining yuqori ifodasi AR tashxisiga olib keladigan haqiqiy patologik topilmalardan oldin bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Nima bo'lishidan qat'iy nazar, bu AR tashxisini qo'yishda ko'proq ob'ektiv tCRM reytingining foydaliligini ko'rsatadi.

Buyrak allogreftidagi umumiy yallig'lanish yukining molekulyar miqdorini aniqlash invaziv biopsiya vaqtida aniqlash uchun muhimdir (5, 6, 9). Bizning usulimiz allaqachon mavjud biopsiya namunalaridan samarali foydalanishni osonlashtiradi (umumiy tajriba vaqti ko'rsatilgan tahlillar uchun 4-6 soat). ARning erta tashxisi uchun donordan olingan hujayrasiz DNK (dd-cfDNK) kabi noinvaziv testlar taklif qilinayotgan bo'lsa-da (19-23), bu testlarning kamchiliklaridan biri shundaki, ular maqsadli to'qimalarni bevosita so'roq qilmaydi. qiziqish, hatto dd-cfDNK allograftdan chiqarilgan bo'lsa ham. tCRM yordamida allaqachon olingan biopsiya to'qimasini yangi biopsiya yoki arxivlangan FFPE bloklaridan minimal to'qimalar yordamida qayta ishlash mumkin, bu esa qo'shimcha gistologik tahlillar uchun asosiy FFPE blokining ko'p qismini saqlab qoladi.

Bizning tadqiqotimiz qisman tCRM ning invaziv tabiati bilan cheklangan. Biopsiya oltin standart bo'lib qolmoqda va tez-tez olinadi, bu tCRM yordamida molekulyar profilni aniqlash imkonini beradi, ammo oxir-oqibat, qon yoki siydikda noinvaziv testlarga o'tish bemorlar uchun eng ideal bo'ladi. Laboratoriyamiz hozirda transplantatsiyani rad etish tashxisiga yordam berish uchun siydikdagi CRM genlaridan foydalanish ustida ishlamoqda (14). Bundan tashqari, ushbu tadqiqot istiqbolli sinov bo'lsa-da, tCRM qo'llanilishi klinik qarorlar qabul qilish uchun ishlatilmadi va buning o'rniga kashfiyot tahlili edi. Bizning kelajakdagi ishimiz tCRM ballini mumkin bo'lgan yakuniy nuqta sifatida ko'rib chiqish yoki biopsiya namunasi uchun yakuniy patologik tashxisni tanlashda balni hisobga olish foyda keltiradi. Bundan tashqari, bizning tadqiqot namunalarimiz TCMR tashxislarini o'z ichiga olgan bo'lsa-da, tahlil qilish uchun mavjud bo'lgan namunalarimizning aksariyati ABMR namunalari edi. Biz tCRM balli mavjud AR turidan qat'i nazar, yuqori ekanligini ko'rsatsak-da, kelajakdagi ishlarda har bir AR turidagi har bir toifadagi ko'proq namunalardan foydalanish kerak bo'ladi.

Biz tCRM reytingi allaqachon mavjud FFPE namunalaridan foydalangan holda patologik tashxislarni ajrata olishini ko'rsatdik. Muhimi, turli patologlar o'rtasida o'zgaruvchanlik mavjud bo'lib, bu bizning ma'lumotlarimizda tashxis qo'ygan ikkita ko'r patologga asoslangan holda ko'rsatilgan. Shunday qilib, biz tCRM nafaqat patologik tashxis qo'yishda yordam berishi mumkinligini, balki, ayniqsa, kelishmovchilik yoki noaniqlik mavjud bo'lganda, yakuniy va ishonchli xulosaga kelish uchun foydalanish mumkinligini ko'rsatamiz.

cistanche tubulosa foydasi: buyrak kasalliklarini davolash

MA'LUMOTLAR MAVJUDLIGI HAQIDA BAYON

Ushbu maqolaning xulosalarini tasdiqlovchi dastlabki ma'lumotlar mualliflar tomonidan ortiqcha izohlarsiz taqdim etiladi.

AXLOQ BAYoNOTI

Inson ishtirokchilari ishtirokidagi tadqiqotlar UCSF IRB tomonidan ko'rib chiqildi va tasdiqlandi. Bemorlar/ishtirokchilar ushbu tadqiqotda ishtirok etish uchun yozma ravishda xabardor qilingan roziligini berishdi.

MUALFOLAR HISSALARI

AZ tahlil dizayni, ma'lumotlarni tahlil qilish, sharhlash, qo'lyozma yozish va qo'lyozmalarni tahrirlashda o'z hissasini qo'shdi. JG tadqiqot dizayni, ma'lumotlar to'plash va qo'lyozmalarni ko'rib chiqishga hissa qo'shdi. TS ma'lumotlarni tahlil qilish va qo'lyozmalarni tahrirlashga hissa qo'shdi. ID namunani qayta ishlashga hissa qo'shdi. RS va GS namunani qayta ishlashga hissa qo'shdilar. CC namunani qayta ishlash va ko'rib chiqishga hissa qo'shdi. JF, XC, CSR, LM va CR namunalar va ma'lumotlar bazasini yig'ishga hissa qo'shdi. MV bemorni ro'yxatga olish va transplantatsiya qilishga hissa qo'shdi. LB bemorni ro'yxatga olishga hissa qo'shdi. JA tadqiqot dizayni, ma'lumotlar to'plash va qo'lyozmalarni ko'rib chiqishga hissa qo'shdi. MS tadqiqot dizayni, ma'lumotlar to'plash, tahlil dizayni va qo'lyozmalarni ko'rib chiqishga hissa qo'shdi. Barcha mualliflar maqolaga o'z hissalarini qo'shdilar va taqdim etilgan versiyani tasdiqladilar.

buyrak funktsiyasini yaxshilash cistanche tubulosa

ADABIYOTLAR

1. Wolfe RA, Ashby VB, Milford EL, Ojo AO, Ettenger RE, Agodoa LY va boshqalar. Dializda bo'lgan barcha bemorlarda, transplantatsiyani kutayotgan diyalizda bo'lgan bemorlarda va birinchi jasad transplantatsiyasini qabul qiluvchilarda o'limni taqqoslash.N InglizJ Med(1999) 341(23):1725–30. doi: 10.1056/NEJM 199912023412303

2. Meier-Kriesche HU, Ojo AO, Port FK, Arndorfer JA, Cibik DM, Kaplan B. Oxirgi bosqich buyrak kasalligi bilan og'rigan bemorlarda omon qolishni yaxshilash: transplantatsiya qiluvchilar va kutish ro'yxatidagi bemorlar uchun vaqt o'tishi bilan tendentsiyalar.J Am Soc Nefrol(2001) 12(6):1293–6. DOI: 10.1111/j.1600-6143.2004.00332.x

3. Onisku GC, Brown H, Forsythe JLR. Kadavra buyrak transplantatsiyasining transplantatsiya uchun ro'yxatga olingan bemorlarda omon qolishga ta'siri.J Am Soc Nephrol(2005) 16 (6):1859–65. DOI: 10.1681/ASN.2004121092

4. Hariharan S, Jonson CP, Bresnahan BA, Taranto SE, McIntosh MJ, Stablein D. Qo'shma Shtatlarda buyrak transplantatsiyasidan so'ng yaxshilangan greft omon qolish, 1988 yildan 1996 yilgacha.N InglizJ Med(2000) 342(9):605–12. DOI: 10.1056/NEJM 200003023420901

5. Pineda S, Sigdel TK, Liberto JM, Vincenti F, Sirota M, Sarval MM. Transplantatsiyadan oldingi va transplantatsiyadan keyingi buyrakni rad etish xavfini B hujayrali immun repertuar ketma-ketligi bilan tavsiflash.Nat Commun(2019) 10(1):1906. DOI: 10,1038/s41467-019-09930-3

6. Halloran PF, Famulski K, Reeve J. Buyrak transplantatsiyasi biopsiyalarida rad etishning molekulyar fenotiplari.Curr Fikr Organ Transplantatsiya (2015) 20(3):359–67. DOI: 10.1097/MOT.0000000000000193

7. Li L, Khatri P, Sigdel TK, Tran T, Ying L, Vitalone MJ va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasida o'tkir rad etish uchun periferik qon diagnostikasi.Men JTransplantatsiya(2012) 12(10):2710–8. DOI: 10.1111/j.1600-6143.2012. 04253.x

8. Roedder S, Sigdel T, Salomonis N, Hsieh S, Dai H, Bastard O va boshqalar. O'tkir rad etish xavfi yuqori bo'lgan buyrak transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlarni aniqlash uchun qisqa tahlil: ko'p markazli AART tadqiqotining natijalari.PloS Med(2014) 11(11): e1001759. DOI: 10.1371/journal.pmed.1001759

9. Naesens M, Khatri P, Li L, Sigdel TK, Vitalone MJ, Chen R va boshqalar. Buyrak allogreftlarida progressiv gistologik shikastlanish tug'ma va adaptiv immunitet genlarini ifodalash bilan bog'liq.Buyrak Int(2011) 80(12):1364–76. DOI: 10.1038/ki.2011.245

10. Furness PN, Taub N, Assmann KJM, Ban G, Cosyns JP, Dorman AM va boshqalar. Gistologik tasnifning xalqaro o'zgarishi katta va doimiy fikr-mulohazalar takrorlanishni yaxshilamaydi.Am J Surg Patol (2003) 27(6):805–10. doi: 10.1097/00000478-200306000-00012

11. Veronese FV, Manfro RC, Roman FR, Edelweiss MI, Rush DN, Dance S va boshqalar. Subklinik buyrak transplantatsiyasini rad etishda Banff tasnifining takrorlanishi.KlinTransplantatsiya(2005) 19(4):518–21. doi: 10.1111/j.1399- 0012.2005.00377.x

12. Khatri P, Roedder S, Kimura N, De Vusser K, Morgan AA, Gong Y va boshqalar. Ko'p organlarda o'tkir rad etish uchun umumiy rad etish moduli (CRM) organ transplantatsiyasi uchun yangi terapevtiklarni aniqlaydi.J Exp Med(2013) 210 (11): 2205–21. doi: 10.1084/jem.20122709

13. Sacreas A, Yang JYC, Vanaudenaerde BM, Sigdel TK, Liberto JM, Damm I va boshqalar. O'pka transplantatsiyasidan keyingi surunkali rad etishda umumiy rad etish moduli.PloS One(2018) 13(10):e0205107. doi: 10.1371/ journal.pone.0205107

14. Sigdel TK, Yang JYC, Bestard O, Schroeder A, Hsieh SC, Liberto JM va boshqalar. Invaziv bo'lmagan buyrak transplantatsiyasi monitoringi uchun siydikni umumiy rad etish moduli (CRM) reytingi.PloS One(2019) 14(7):e0220052. doi: 10.1371/ journal.pone.0220052

15. Sigdel TK, Bestard O, Tran TQ, Hsieh SC, Roedder S, Damm I va boshqalar. Buyrak allogreftlarida immunitet shikastlanishini bashorat qilish uchun hisoblangan gen ekspressiyasi.PloS One(2015) 10(9):e0138133. doi: 10.1371/jurnal. pone.0138133

16. Sigdel T, Nguyen M, Liberto J, Dobi D, Junger H, Vincenti F va boshqalar. Arxiv buyrak transplantatsiyasi biopsiyalarida molekulyar rad etish va yallig'lanishning miqdoriy transkripsiyaviy tahlili uchun 19 genni baholash va CRM gen panelini tasdiqlash.Old Med (2019) 6:213. doi: 10.3389/ feed.2019.00213

17. Haas M, Loupy A, Lefaucheur C, Roufosse C, Glotz D, Seron D va boshqalar. Banff 2017 buyrak yig'ilishi hisoboti: Surunkali faol T-hujayra vositasida rad etish, antikor vositachiligida rad etish uchun qayta ko'rib chiqilgan diagnostika mezonlari va keyingi avlod klinik sinovlari uchun integrativ yakuniy nuqtalar istiqbollari.Men J Transplantatsiya qilaman(2018) 18(2):293–307. doi: 10.1111/ajt.14625

18. Sigdel TK, Nguyen M, Dobi D, Hsieh SC, Liberto JM, Vincenti F va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasi biopsiyalarining maqsadli transkripsiyaviy profili.BuyrakIntRep(2018) 3(3):722–31. doi: 10.1016/j.ekir.2018.01.014

19. Bloom RD, Bromberg JS, Poggio ED, Bunnapradist S, Langone AJ, Sood P va boshqalar. Hujayrasiz DNK va buyrak allograftlarida faol rad etish.J Am Soc Nephrol(2017) 28(7):2221–32. doi: 10.1681/ASN.2016091034

20. Li H, Park YM, We YM, Xan DJ, Seo JW, Moon H va boshqalar. Raqamli PCRni buyrak transplantatsiyasida o'tkir rad etishni kuzatish usuli sifatida baholash.GenomikaXabar berish(2017) 15(1):2–10. doi: 10.5808/ GI.2017.15.1.2

21. Adamek M, Opelz G, Klein K, Morath C, Tran TH. Qattiq organ transplantatsiyasini qabul qiluvchilar zardobida donordan olingan hujayrasiz DNKni greft funktsiyasi uchun biomarker sifatida aniqlash va miqdorini aniqlashning tez va oddiy usuli.Clin Chem Lab Med(2016) 54(7):1147–55. doi: 10.1515/cclm-2015-0622

22. Beck J, Oellerich M, Schulz U, Schauerte V, Reinhard L, Fuchs U va boshqalar. Donordan olingan hujayrasiz DNK qattiq organ transplantatsiyasida allogreftni rad etish uchun yangi universal biomarkerdir.Transplantatsiya jarayoni(2015) 47 (8):2400–3. doi: 10.1016/j.transproceed.2015.08.035

23. Bek J, Bureau S, Balzer S, Andag R, Kanzow P, Schmitz J va boshqalar. Transplantatsiyani qabul qiluvchilarning qon aylanishida donor DNKsini tez aniqlash uchun raqamli tomchi PCR, transplantatsiya shikastlanishining potentsial universal biomarkeri sifatida.Klin Kimyo (2013) 59(12):1732–41. doi: 10.1373/clinchem.2013.210328