Cistanche polisaxaridining immunitetga qanday foydalari bor

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Cistanche polisaxaridining immunologik faolligi va mexanizmi

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Jiliang

[Avstrakt]Maqsad: o'rganishimmunitetga egafaoliyatiCistanchePolisaxarid(CDPS) va uning mexanizmiimmunitetga egain vitro tartibga solish. Usullari: CDPS ning tartibga soluvchi ta'sirini kuzatish uchun tiazol ko'k kolorimetrik usuli (MTT) ishlatilgan.Cistanche polisaxarid) sichqonchaning timik limfotsitlarining in vitro proliferatsiyasini inhibe qiluvchi IQS DEX TNF bo'yicha; CDPS (Cistanche polisaxarid) oqim sitometriyasi yordamida hujayra siklini va hujayra siklini tahlil qilish uchun ishlatilgan. Hujayra ichidagi Ca2 ni aniqlash. Natijalar: CDPS (Cistanche polisaxarid) yuqori konsentratsiyada ISQDEX ning limfotsitlar proliferatsiyasiga inhibitiv ta'siriga va yuqori konsentratsiyali TNF ning limfotsitlar proliferatsiyasiga inhibitiv ta'siriga qarshilik ko'rsatishi va past konsentratsiyali TN F ning limfotsitlarga proliferatsiyani rag'batlantiruvchi ta'sirini sinergizatsiya qilishi mumkin; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche polisaxarid) bo'linish bosqichida hujayralarni sezilarli darajada oshirishi mumkin; yuqori konsentratsiyali (100ug/ml) CDPS (Cistanche polisaxarid) sichqon timositlarida Ca ionining kontsentratsiyasini sezilarli darajada oshirishi mumkin. Xulosa: CDPS (Cistanche polisaxarid) hujayralarni bo'linish fazasiga kirishiga yordam berishi mumkin va uning sichqon timus limfotsitlarining ko'payishiga ta'sir etuvchi ta'siri sichqon timus limfotsitlarida kaltsiyning ajralishini rag'batlantirish bilan bog'liq degan xulosaga keladi.

Cistanche(CistancheDesertikolaYC Ma) mening mamlakatimdagi noyob va qimmatbaho xitoy dorivor materialidir. U "Shen Nong's Materia Medica" da eng yuqori baho sifatida qayd etilgan.Cistancheqonni oziqlantirish, buyrakni oziqlantirish va yangga yordam berish, ichaklarni namlash va qarishni kechiktirish funktsiyalariga ega. Zamonaviy farmakologik tadqiqotlar shuni ko'rsatadiCistanchePolisaxaridtanani yaxshilashi mumkinimmunitetga egafunktsiyasi, DNK sintezini rag'batlantiradi, jismoniy kuchni mustahkamlaydi, aqlni yaxshilaydi va aniq qarishga qarshi ta'sirga ega [1]. Muallif CDPSni tartibga solishni o'rgangan(Cistanche polisaxarid), ning polisakkarid komponentiCistanche, ustidaimmunitetga egafunktsiyasisichqoncha limfotsitlari.

Cistanche polisaxaridtarg'ib qilishtarqalishilimfotsitlar

1 Materiallar va usullar

1.1 Reaktivlar va preparatlar.

RPM, I 1640 muhiti: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamin: Shanxay Dongfeng reagent fabrikasi; Penitsillin va streptomitsin: Shimoliy Xitoy farmatsevtika fabrikasi; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A kompaniyasi; Fitohemagglutinin (PHA): Shanxay tibbiyot laboratoriyasi; Isoproterenol (ISO): Shanxay Tianfeng farmatsevtika fabrikasi; Merkaptoetanol: Fluka kompaniyasi; Yangi tug'ilgan buzoq zardobi: Sijiqing Bioengineering Company; Deksametazon (DEX) Zhejiang universiteti tibbiyot fakultetining birinchi bog'langan kasalxonasi doktor Ma Liang tomonidan taqdim etildi; O'simta bostiruvchi omil (TNF) Chjejiang universiteti Hayot fanlari fakulteti, hujayralar bo'limi professori Yu Yuehan tomonidan taqdim etilgan; Qolgan reaktivlarning barchasi mahalliy ishlab chiqarilgan analitik navlardir.

1.2 Eksperimental hayvonlar.

ICR sichqonchalari, erkak, 68 haftalik, vazni 18-20g, 22, Zhejiang eksperimental hayvonlar markazidan sotib olingan.

1.3 Cistanche polisaxaridini olish [2]:

CistanchePolisaxaridlaboratoriyamiz tomonidan chiqariladi! Xom preparatni maydalashdan keyinCistanche, u issiq etanolga botiriladi, qaynoq suvda chiqariladi va etanolda cho'kadi. Neytral ferment deproteinizatsiya uchun Sewag usuli, anion DEAE-Sephadex A- 50 almashinish xromatografiyasi va Sephacry S-200 gel filtrlash xromatografiyasi bilan birgalikda CDPS ning bitta komponentini olish uchun (Cistanche polisaxarid)). Quruq tuting, ishlatishdan oldin ma'lum bir konsentratsiya qilish uchun to'liq bo'lmagan RPMI1640 dan foydalaning va ultrafiltratsiya orqali sterilizatsiya qiling.

1.4 Taloq va timus limfotsitlarini tayyorlash [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, taloq hujayralari kontsentratsiyasini X 10 / ml ga va timositlar kontsentratsiyasini × 10 daraja / ml ga sozlang.

1.5 Limfotsitlar proliferatsiyasi reaktsiyasi:Mosmanmn usuliga ko'ra [4] Yaxshilash: 96-quduq hujayra madaniyati plastinkasi, har bir quduqqa 10/ml taloq hujayra suspenziyasi yoki suv 10/ml timosit suspenziyasi 100M1 va turli konsentratsiyali dorilar 10041 qo'shing. CO2.37C inkubatorida 72 soat davomida kultivatsiya qiling. Kultura tugashidan 4 soat oldin har bir quduqqa 8m1 MTT (5 mg/ml) qo'shing. Madaniyat oxirida har bir quduqdan 150"1 supernatantni aspiratsiya qiling va 0,5N izopropanol gidroxlorid 150M1 qo'shing. Ko'k kristallarni to'liq eritish uchun mikro shakerda sekin silkiting. OD570 ni mikroplastinka o'quvchida o'lchang. Har bir tajribani o'rnating. uchta takroriy quduq sifatida ishora qiling.

1.6 Hujayra tsikliga ta'sirini aniqlash [5]:

{{0}}quduq hujayra madaniyati plastinkasi, har bir quduqqa 4 10 daraja /ml timosit suspenziyasi 1ml qo'shing, kuchli CO 2 ml ga turli reagentlar va polisaxarid eritmasi qo'shing, 37 inkubator 72 soat davomida kultivatsiya qilingandan so'ng, sentrifuga qiling. 1500r/min tezlikda 15 daqiqa, supernatantni to‘kib tashlang, cho‘kma hosil bo‘lgan hujayralarni mahkamlash uchun 7 ta etanol qo‘shing, kutish rejimida tekshirish uchun 4C da saqlang, hujayralarni PBS bilan ikki marta yuving, 1500 r/min tezlikda 15 daqiqa davomida santrifüj qiling. supernatant, va qo'shing 0,5ml0,1 RNaseA 4C da 30 daqiqa davomida hazm qilingandan so'ng, 50ug/ml bromoatsetat 4C da 30 daqiqa davomida bo'yalgan va hujayra namunalarining floresans intensivligi FACScan oqim sitometrida o'lchangan. Har bir namuna uchun 10,{22}} hujayra sinov nuqtalari to'plangan va ma'lumotlar Mul tricycle dasturiy ta'minoti tahlilidan foydalanilgan.

1.7 Hujayra ichidagi kaltsiy ioni kontsentratsiyasini aniqlash [6]

Yuqoridagi kabi sichqon timositlarini oling. To'liq bo'lmagan RPMIl640 madaniyat muhitida to'xtatib turing va hujayra konsentratsiyasini × 10'/ml ga sozlang. Har bir tajriba naychasiga 1 ml timosit suspenziyasi va 1 mkM qo'shing Fluo{4}}AM bo'yash eritmasi 5m1, 2 foiz F-275m1, 37 da 30 daqiqa inkubatsiyadan so'ng, to'liq bo'lmagan RPM1640, 1500r/ bilan ikki marta yuving. min, 10 daqiqa davomida santrifüj qiling, supernatantni tashlang va cho'kma hujayralariga polisaxaridlar va polisaxaridlarning turli konsentratsiyasini qo'shing ConA dan so'ng, floresans intensivligi FACScan oqim sitometrida o'lchandi. Har bir namuna uchun 10,{16}} hujayra sinov nuqtasi maʼlumotlari toʻplandi va CELLQUEST dasturi tomonidan tahlil qilindi. 1.8 Dispersiyani tahlil qilish uchun statistik usullardan foydalanildi va hujayra aylanishi va kaltsiy ionini o'lchash oqim sitometrining dasturiy ta'minoti bilan tahlil qilindi.

Cistanche deserticola dan Cistanche polisaxarid

2 Natijalar

2.1 Cistanche polisaxarid in vitro ISO DEX TNF tomonidan sichqon timus limfotsitlarining ko'payishini inhibe qiladi.

-adrenergik retseptorlari agonisti izoproterenol (ISO) va buyrak usti korteks gormoni deksametazon (DEX) sinfi limfotsitlar proliferatsiyasini inhibe qiladi CDPS (Cistanche polisaxarid) yuqori konsentratsiyada (75 125ug/ml) ISO DEX ning limfotsitlar proliferatsiyasiga inhibitiv ta'siriga qarshi turishi mumkin (P).<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polisaxarid) (125ug / ml) yuqori konsentratsiyada TNF ning inhibitiv ta'siriga qarshi turishi mumkin va TNF ning past konsentratsiyasi bo'lgan limfotsitlarning ko'payishiga sinergik tarzda yordam beradi (2-rasm).

2.2 Cistanche polisaxaridining timus limfotsitlar aylanishini tartibga solish

CDPS (CistanchePolisaxarid) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml 72 soat davomida sichqon timus limfotsitlariga uchta konsentratsiya ta'sir ko'rsatildi, hujayralardagi DNK tarkibi FACS yordamida o'lchandi va ko'payish indeksi (PI) hisoblandi. formula bo'yicha. Natijalar shuni ko'rsatadiki, 100ug / ml va 200ug / ml bo'linish bosqichida hujayralarni sezilarli darajada oshirishi mumkin va ikkalasining proliferatsiya indeksi (68,0 foiz, 56,6) nazorat guruhidan (44,6) va 200ug / ml dan sezilarli darajada yuqori. guruhi 100ug/ml guruhidan bir oz pastroq, chunki 200ug/ml konsentratsiyada uning hujayra proliferatsiyasiga ta'siri pasayish tendentsiyasiga aylandi [7]. 25ug/ml guruhidagi PI qiymati (47,5 foiz) nazorat guruhidagidan sezilarli darajada yuqori emas edi.

2.3 Cistanche polisaxaridining sichqon timositlaridagi kaltsiy ionlari kontsentratsiyasiga ta'siri

Tajriba natijalari shuni ko'rsatadiki, CDPS ning yuqori konsentratsiyasi (100 ug/ml)Cistanche polisaxaride) sichqon timositlarida kaltsiy ionlari kontsentratsiyasining oshishiga sezilarli yordam berishi mumkin, nazorat guruhi bilan solishtirganda sezilarli farq bor (P).<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Munozara

Cistanche, odatda sifatida tanilgan"cho'l jenshen", ning quruq, po'stloq go'shtli poyasiCistanche.Cistanchebuyrak yang, oziqlantiruvchi mohiyat, qon va ichaklarni oziqlantirish funktsiyalariga ega. Bu gipofiz-adrenal korteksning bir turiga tegishli yoki buyrak usti korteksiga o'xshash gormonga o'xshash ta'sirga ega. ni tartibga soladigan qimmatli xitoylik doriimmunitetga egafunktsiyasitananing. Bizning oldingi tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, CDPS (Cistanche polisaxarid) in vitro ConA PHA tomonidan faollashtirilmagan yoki faollashtirilmagan timus T limfotsitlarining ko'payishiga yordam berishi mumkin. ConA PHA bilan birgalikda T hujayra stimulyatorining ikki turi mavjud, biz CDPS (Cistanche polisaxarid) T xujayralari uchun yomon vositadir va biz CDPS (Cistanche polisaxarid) yuqori konsentratsiyalarda sichqonchaning taloq limfotsitlari sekretsiyasini sezilarli darajada oshirishi mumkin [8]

Ba'zi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, rekombinant TNF oddiy sichqonchani va inson T-limfotsitlari klasterlarining apoptozini in vitroda keltirib chiqarishi mumkin va bu ta'sir IIL-2 IL-1 IFN va IIL-4 tomonidan inhibe qilinishi mumkin. deksametazon (DEX) bilan limfotsitlar ekspressiyasini va IL-2 sekretsiyasini inhibe qilish va yuqori yaqinlikdagi IL-2R ishlab chiqarishni kamaytirish orqali limfotsitlar proliferatsiyasini inhibe qilishi mumkin. Ushbu tajriba shuni ko'rsatdiki, CDPS ning yuqori konsentratsiyasi (CistanchePolisaxarid) TN F ning yuqori konsentratsiyasining limfotsitlar proliferatsiyasiga ta'siriga qarshi turishi mumkin. Limfotsitlarning ko'payishini rag'batlantirish uchun TNF ning past konsentratsiyasi bilan sinergik inhibisyon va ISQ DEX ning limfotsitlar proliferatsiyasiga inhibitiv ta'siriga qarshi turishi mumkin. Bu effektlar aynan CDPS (CistanchePolisaxarid) T-limfotsitlarning proliferatsiyasini rag'batlantirish va T hujayralari IL-2 va boshqa sitokinlar tomonidan avtokrin bo'lib, yakunlanadi.

So'nggi yillarda o'simlik polisaxaridlarining immunofarmakologik ta'siri bo'yicha ko'plab tadqiqotlar o'tkazildi, ammo kamdan-kam hollardaimmunitetga egapolisaxaridlarni tartibga solish mexanizmi, ayniqsa ikkinchi xabarchi sifatida Ca2 bo'lgan limfotsitlarga ta'sir qiluvchi polisaxaridlarning signal uzatish yo'li. Hech qanday hisobot yo'q. Ushbu tajriba ushbu sohada dastlabki tadqiqotlarni o'tkazdi. Hujayra ichidagi signalizatsiya molekulalariga cAM R Ca", IP3 DG cGMP va boshqalar kiradi, ular orasida Ca" hujayralarga juda muhim fiziologik ta'sir ko'rsatadi. Hujayra ichidagi Ca² kontsentratsiyasining oshishi limfotsitlar faollashishi va ko'payishining dastlabki bosqichidagi muhim hodisadir. Bu jarayon, asosan, hujayralar stimulyatorlar tomonidan faollashtirilganda, birinchi o'n soniyalarda va daqiqalarda sodir bo'ladi. T hujayralarini faollashtirishning klassik usuli fosfatidil mushakni metabolizatsiya qilish uchun fosfatidilinositol (PIB) dir. Spirtli ichimliklar metaboliti 1,4.5-inositol trifosfat (IP3) ichki tarmoq retseptorlari bilan bog'lanib, hujayra ichidagi Ca2 darajasini va hujayra ichidagi Ca kontsentratsiyasini oshirish orqali ichki to'rda saqlanadigan Ca" ning chiqarilishiga yordam beradi. * ortadi.Yuqori NF-AT (faollashtirilgan T hujayraning nudeik omili) ishlab chiqarilishiga yordam beradi, ikkinchisi IIL-2 genining ekspressiyasini rag'batlantiradi.Tajriba natijalari shuni ko'rsatadiki, yuqori konsentratsiya (100ug/ml) ) CDPS (CistanchePolisaxarid) 5 10 daqiqa davomida samarali boʻladi Vaqt sichqon timositlarida Ca* kontsentratsiyasini oshirishga sezilarli taʼsir koʻrsatadi va ConA bilan sinergik taʼsir koʻrsatadi. Shuning uchun biz taxmin qilamizki, CDPS (Cistanche polisaxarid) hujayra ichidagi kaltsiy ionlari kontsentratsiyasini oshirish uchun sichqon timus limfotsitlarida kaltsiyning chiqarilishiga yordam beradi. O'sish IL-2 genining ekspressiyasiga yordam beradi va T hujayralarining ko'payishiga olib keladi, bu nazariy asoslardan biri hisoblanadi.CistanchePolisaxaridlarorganizmga tartibga soluvchi ta'sir

Cistanche polisaxarid

Ma'lumotnomalar

1. IN XiuHin, SU Yuke ( Farmakologiya tadqiqotlarining umumiy holatiCistancheSka 【J】. Xitoyning an'anaviy va o'simlik preparatlari ((Xitoy o'simlik tibbiyoti). 1993.24(10. 550-552(Xitoy tilida))

2. ZHANG Weijiee (Birikkan polisaxaridning biokimyoviy tex.

3. MA Bo- (Ma Baoli).Immunologiya texnikasi【M1. Shanxay tibbiyot universiteti rahbari (Shanxay tibbiyot universiteti nashriyoti), 1984 188-190. (n Xitoy))

4. Mosmann T. Ko'payish va sitotoksiklikni yo'qotish uchun oson o'sish va omon qolish uchun rapiloloimerik tahlil[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, va boshqalar (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian va boshqalar), zinning siklik hujayralarning ko'payishiga ta'siri.immunitetga egaoqim sitometriyasi [J] yordamida organ-tahlil. Xitoy immunologiyasi (Xitoy immunologiya jurnali), 1994, 10X5: 278-281. (Xitoyda)

6. TAO axin. JIYong-yong, GAO Qi-rong va boshqalar (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong va boshqalar). Elaktivatsiya paytida hujayra ichidagi C2 dagi o'zgarishlarning FACS tahlili [J] Xitoy immunologiya jurnali (Xitoy Immunologiya jurnali), 1993, 9 (2): 97-10 L. (xitoy tilida)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; d polisakdaridni tozalashCistancheDesertikolaYC Mfa va uning immunomodulyatsion ta'siri Chjejiang tibbiyot universitetining Tellfunction[J].burnal (Chjejiang tibbiyot universiteti jurnali), 1998.27 (3: 108-111. (Xitoy tilida)

8. Sarin A, Mishel C. Perre AH T-Lymfoblakdagi TNF va limfotoksinning sitotoksik ta'siri. J Immunol, 1995, 1553716-3721.