Surunkali buyrak kasalligini davolashda Yishen Qingli Heluo granulasi: tarmoq farmakologiyasi tahlili va eksperimental tasdiqlash Ⅱ
Dec 07, 2023
Natijalar
YQHG ning faol birikmalari va tegishli maqsadlari haqida ma'lumot
TCMSP ma'lumotlar bazasidan va keng ko'lamli adabiyot qazib olishdan YQHG ning jami 63 ta faol birikmasi tanlab olindi. Barcha faol birikmalar ADME filtrlash usuliga javob berdi, OB 30% dan katta yoki unga teng va DL 0,18 dan katta yoki teng. YQHGdagi har bir o't uchun birikmalar soni 17 (NX), 13 (TFL), 16 (HQ), 10 (HZ), 10 (DH), 8 (HJ), 5 (SW), 2 (DG), 2 (JXC), 1 (LYX) (S1-jadval). 63 ta faol birikmalar orasida bir nechta o'tlarda mavjud bo'lgan 9 ta birikma mavjud edi. Misol uchun, Quercetin birikmasini YQHG ning 6 o'tida (HQ, NX, HZ, TFL, SW, JXC) topish mumkin edi. Biz 63 ta faol birikma uchun 250 ta maqsadni aniqladik (S2-jadval). HQ, NX, HZ, TFL, SW, JXC, HJ, DH, DG va LYX faol birikmalaridan ta'sirlangan potentsial maqsadlar soni 208, 201, 193, 174, 169, 150, 55, 43, 30 va 11 ni tashkil etdi. , mos ravishda. Ko'pgina faol birikmalar bir vaqtning o'zida bir nechta maqsadlarga bog'lanib, farmakologik ta'sir ko'rsatadi. Masalan, vogonin NX dagi faol birikma sifatida 43 ta maqsad bilan oʻzaro taʼsir qilishi mumkin, jumladan TP53, CASP3, PTGS2, IL-6 va hokazo.
BUYRAK INFEKTSIONIDA 25% EXINAKOSID VA 9% AKTEOSID BO'LGAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRAKTINI OLING.
YQHG nomzodining CKDga qarshi maqsadlari
Ma'lumotlar bazasini skrining orqali 1161 ta CKD bilan bog'liq maqsadlar (OMIM ma'lumotlar bazasida 526, DisGeNET ma'lumotlar bazasida 379, GeneCards ma'lumotlar bazasida 331, MalaCards ma'lumotlar bazasida 113 va TTD ma'lumotlar bazasida 73) olingan. Kesishish maqsadlari Venn diagrammasi bilan ko'rsatilgan (2A-rasm).
2-rasm Venn diagrammasi. (A) CKD maqsadlari. CKD bilan bog'liq maqsadlar beshta ma'lumotlar bazasidan (OMIM, DisGeNET, GeneCards, MalaCards, TTD) olingan. (B) CKDni davolashda YQHG ning nomzod maqsadlari.
YQHG ning potentsial maqsadlari Venn platformasi tomonidan CKD bilan bog'liq maqsadlar bilan bir-biriga mos tushdi (2B-rasm). CKD ga qarshi YQHG uchun nomzod maqsadlar sifatida jami 79 ta kesishuvchi maqsadlar tanlangan (2-jadval). Bu erda biz 10 ta o'simlik (HQ dan 72, HZ dan 72, NX dan 69, SW dan 64, TFL dan 64, JXC dan 59, HJ dan 21, DH dan 15, 9 o'simlik) o'rtasida CKD bilan bog'liq maqsadlarning taqsimlanishini o'rgandik. DG, LYXdan 2) Venn tahlili orqali. Ushbu 79 ta maqsad keyin Cytoscape tomonidan H-CT tarmog'ini qurish uchun ishlatilgan.
Tarmoq vizualizatsiyasi
(1) C-T network. To reveal the synergistic effects of multi-compound and multi-target in the 10 herbs of YQHG (Figure 3A) and evaluate its mechanism of action, a C-T network analysis was carried out (Figure 3B). The active compounds corresponding to the abbreviations in Figure 3 were shown in Table S1. The C-T network consisted of 63 active compounds, 250 targets, and 914 C-T interactions (313 nodes and 914 edges). The average degree centrality, betweenness centrality, and closeness centrality values were 14.67, 0.02, and 0.33, respectively. The above topological parameters of 12 compounds were higher than the average, which were shown in Table 3. These compounds were considered to be the main active compounds of YQHG in the treatment of CKD. The average number of targets for each herb was 123, indicating the multi-target properties of these herbs. A total of 31 key targets satisfied the screening rules (degree centrality>3.656, betweenness centrality>0.003, closeness centrality>0.333), of which PTGS2 has the highest filtering parameters (degree centrality=41, betweenness centrality=0.085, closeness centrality=0.516). (2) H-CT network. To explore the synergistic effects of YQHG at the individual herb level, we constructed a H-CT network (Figure 3C). We found that 6 herbs covered more than 75% of the 79 candidate targets, of which HQ and HZ both covered 91%. Interestingly, the 10 herbs in YQHG shared a common target, which is PTGS2. The existence of this target is a manifestation of the synergistic effect of TCM, which may be involved in the pathological process of CKD. (3) PPI network. The proteins with a combined score>0.90 PPI tarmog'ini qurish uchun tanlangan (3D-rasm). "Daraja" parametri tarmoqdagi tugunlarning topologik ahamiyatini baholash uchun ishlatilgan. Cytoscape dasturida tarmoq analizatori tomonidan olingan eng yaxshi 6 ta oqsil TP53, AKT1, RELA, IL6, MAPK1 va ESR1 edi. Keyinchalik, KT va PPI tarmoqlari orqali skrining qilingan 6 ta eng yaxshi faol birikmalar (Quercetin, Kaempferol, Luteolin, 7-O-methylisomukronulatol, wogonin, Stigmasterol) va oltita protein maqsadi keyingi tahlil uchun ishlatilgan.
GO va KEGG boyitish tahlili
GO atamalari biologik jarayon, molekulyar funktsiya va hujayra komponentiga ko'ra tasniflangan va eng yaxshi 10 tasi 4A-rasmda ko'rsatilgan. Molekulyar funktsiya toifasining nomzod maqsadli oqsillari asosan retseptor faollashtiruvchi faolligi va retseptor-ligand faolligi bilan bog'liq edi. Hujayra komponentlari toifasidagi maqsadli oqsillar membrana mikrodomenida va membrana rafida boyitilgan. GO biologik jarayoniga kelsak, u yuqoridagi uchta GO atamasida katta rol o'ynadi. Shuning uchun, YQHG ning tegishli biologik jarayonini CKD ga qarshi aniqlab, ma'lum darajada mexanizm uchun yo'nalishni ko'rsatdi. KKDni davolashda YQHG ning 79 nomzod maqsadlariga ko'ra, eng yaxshi 10 ta biologik jarayonlar aniqlandi. Ular ikkita sohaga e'tibor qaratdilar: (1) hujayra siklini va apoptozni tartibga solish (epitelial hujayralar ko'payishi, apoptotik signalizatsiya yo'lini tartibga solish, apoptotik signalizatsiya yo'lini salbiy tartibga solish). (2) Reaktiv kislorod turlarining (ROS) metabolik jarayonini tartibga solish (oksidlanish stressiga javob, reaktiv kislorod turlarining metabolik jarayoni, kislorod darajasiga javob, oksidlovchi stressga hujayra javobi, reaktiv kislorod turlariga javob, reaktiv kislorod turlarining metabolik jarayonini tartibga solish, reaktiv kislorod turlarining metabolik jarayonini ijobiy tartibga solish). YQHG ning CKD ga qarshi potentsial mexanizmlarini yanada tushuntirish uchun biz clusterProfiler tomonidan 40 ta KEGG yo'llarini ko'rib chiqdik (4B-rasm). Natijalar shuni ko'rsatdiki, 8 ta muhim signal yo'llari (p53, Toll-like retseptorlari, VEGF, T hujayra retseptorlari,
Yadro faol birikmalar va oqsillarning molekulyar joylashishi
Tarmoq farmakologiyasining to'g'riligini qo'shimcha tekshirish uchun asosiy faol birikmalar va markaz oqsillari o'rtasidagi bog'lanish yaqinligi Autodock Vina dasturiga asoslangan molekulyar o'rnatish usuli bilan tahlil qilindi. Oltita faol birikmaning (Quercetin, Kaempferol, Luteolin, 7-O-methylisomukronulatol, Vogonin, Stigmasterol) markaz oqsillari (TP53, AKT1, RELA, IL6, MAPK1, ESR1) bilan bog'lanish darajasi -5 dan kam edi. kkal/mol, bu ularning yaxshi bog'lanish faolligiga ega ekanligini ko'rsatadi. Bog'lanish yaqinligi tafsilotlari 4-jadvalda ko'rsatilgan. Vodorod bog'lanishi birikma-oqsil bog'lanish o'zaro ta'sirini barqarorlashtirishda muhim rol o'ynaydi. Shuning uchun H-donor va H-akseptor atomlari orasidagi qulay bog'lanish masofasi 3,5 Å dan kam bo'lishi ta'minlanadi [24]. Quercetin, Kaempferol va Luteolin ushbu tadqiqotda oltita oqsil bilan bog'lanish rejimida eng yaxshisi edi. Bundan tashqari, YQHG barqarorligini aniqlash uchun UHPLC-MS yondashuvi o'rnatildi (rasm S2A va B) va ekstraktdagi asosiy faol birikmalar (Quercetin, Kaempferol va Luteolin) miqdorini aniqlash (jadval S3, va S2C va D rasm). Eng yaxshi konformatsiyaga ega bo'lgan birikma va oqsilning ulanish natijalari 5-rasmda ko'rsatilgan.
YQHG 5/6 nefrektomizatsiya qilingan kalamushlarda buyrak funktsiyasi va fibrozni yaxshilagan.
Potentsial terapevtik qiymatni o'rganish uchun buyrak ko'rinishini (rang, kapsula, chegara), tegishli parametrlarni (Scr, BUN, siydik oqsili, glomerulyar fibroz hududi, tubulointerstitial fibroz hududi) va buyrak to'qimalarining patologiyasini (H&E, Masson) har tomonlama baholash o'tkazildi. CKD bo'yicha YQHG. Shu maqsadda 5/6 nefrektomiya modeli va YQHG dozalash rejimi o'rnatildi (6A-rasm). Kutilganidek, model guruhi vazn yo'qotish, rangpar buyraklar, notekis chegaralar va tozalash qiyin bo'lgan kapsulalarni ko'rsatdi. Shunisi e'tiborga loyiqki, YQHG bilan dozaga bog'liq davolash kasallikning rivojlanishiga to'sqinlik qildi, bu kalamushlarning tana vaznining ortishi, qizil-jigarrang buyraklarning tiklanishi, chegaralarning yaxlitligi va kapsulalarning silliqligi bilan namoyon bo'ldi (6B va C-rasm). Scr, BUN va siydik oqsili buyrak funktsiyasining buzilishini ko'rsatadigan asosiy belgilardir. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, model guruhi bilan taqqoslaganda, YQHG dozaga bog'liq ravishda uchta parametr darajasini sezilarli darajada kamaytirdi (6D-F-rasm). Gistopatologik tahlil 5/6 nefrektomiya kalamushlarida yallig'lanish infiltratsiyasi, mezangial kengayish, naycha atrofiyasi va kengayishi, glomerulyar skleroz va interstitsial fibrozni aniq ko'rsatdi, bularning barchasi YQHG bilan davolash bilan keskin yaxshilandi (6G-rasm). Bundan tashqari, YQHG davolashda glomerulyar fibroz sohasi va tubulointerstitial fibroz maydonini o'z ichiga olgan histopatologik ko'rsatkichlar tekshirildi. Bu erda biz YQHG davolash glomerulyar fibroz maydonini sezilarli darajada kamaytirganini aniqladik (6H-rasm). Bundan tashqari, HD YQHG bilan davolash tubulointerstitial fibroz maydonini sezilarli darajada kamaytirdi (6I-rasm). Birgalikda bu ma'lumotlar YQHG ning 5/6 nefrektomizatsiyalangan kalamushlarga chuqur himoya ta'siriga ega ekanligini ko'rsatdi, bu esa to'qimalarning shikastlanishini engillashtirish, buyrak funktsiyasini yaxshilash va buyrak fibrozini kamaytirish bilan tavsiflanadi.
YQHG 5/6 nefrektomizatsiyalangan kalamushlarda firmikutlar/bakteroidota nisbatini kamaytirish orqali ichak mikrobiotasini qayta shakllantirdi.
TCM o'simliklari ichak mikrobiotasi bilan yaqin aloqada bo'lib, ularning tarkibiga ta'sir qiladi.30 Aksincha, ichak mikrobiotasi TCM o'tlaridan olingan uglevodlar, oqsillar, lipidlar va kichik ozuqaviy bo'lmagan kimyoviy moddalarni foydali yoki foydali bo'lishi mumkin bo'lgan kimyoviy metabolitlarga aylantirishda ham muhim rol o'ynaydi. inson salomatligiga salbiy ta'sir ko'rsatadi.31 Ichak mikrobiotasi gomeostazi TCM o'simliklarining samaradorligida muhim rol o'ynashini hisobga olsak, 32-34 biz YQHG ning 5/6 nefrektomizatsiya qilingan kalamushlarda ichak mikrobiotasiga ta'sirini o'rganib chiqdik. Biz ichak mikrobiotasini ikki xil taksonomik darajada (filum va jins) tahlil qildik. PCoA YQHG guruhlarining ichak mikrobial tarkibi soxta guruhga yaqin ekanligini va model guruhidan farqli ekanligini aniqladi (7A va F-rasmlar). Filum darajasida jamiyat tahlili shuni ko'rsatdiki, sham guruhi va YQHG guruhlari bilan solishtirganda (7B-rasm), Firmicutes va Bacteroidota kabi ba'zi bakteriyalarda model guruhining ichak mikrobial tarkibi o'zgargan. Xususan, LD YQHG bilan davolash Firmicutes ko'pligini sezilarli darajada kamaytirdi (7C-rasm) va Bacteroidota ko'pligini oshirdi (7D-rasm). Muhimi shundaki, bu ikki bakteriyaning nisbati YQHG bilan davolash orqali dozaga bog'liq holda sezilarli darajada kamaydi (7E-rasm). Bundan tashqari, jins darajasidagi ichak mikrobiotasi YQHG guruhlarida qayta shakllantirildi, bu jamoa barplot va Circos uchastkasi tomonidan ko'rsatilgan (7G va H-rasm). Birgalikda olingan bu natijalar shuni ko'rsatdiki, YQHG bilan davolash ichak mikrobiotasining tarkibini samarali tikladi va Firmicutes/Bacteroidota (F/B) nisbatini kamaytirdi va shu bilan TCM o'tlarining shifobaxsh ta'sirini ko'rsatish uchun ichak mikrobial ekotizimini normallashtirishga yordam berdi.
YQHG 5/6 nefrektomizatsiya qilingan kalamushlarda PTGS2, P53 va IL{2}} ifodasini tartibga solgan
H-CT tarmog'i, KEGG yo'lini boyitish tahlili va molekulyar o'rnatish uchta asosiy protein maqsadi (PTGS2, p53, IL6) YQHGda CKDga qarshi ishtirok etganligini taxmin qildi. Shuning uchun PTGS2 va p53 ifodalari YQHG davolashda tekshirildi. Bu erda biz HD YQHG davolash buyrak to'qimalarida PTGS2 ifodasini sezilarli darajada kamaytirganini aniqladik (8A va B-rasm). Bundan tashqari, HD YQHG ma'lum darajada p53 ifodasini tartibga solishi mumkin (8A va C-rasm). Keyinchalik, biz YQHG ning IL6 ifodasiga inhibitiv ta'sirini baholadik. YQHG davolashdan so'ng, IL6 ifodasi buyrak to'qimalarida sezilarli darajada kamaydi (8D-rasm).
5-rasm Oqsilning birikma bilan bog'lanish tartibi. (A) ESR1 oqsilining Luteolin bilan bog'lanish tartibi. (B) MAPK1 oqsilining Quercetin bilan bog'lanish tartibi. (C) TP53 oqsilining Luteolin bilan bog'lanish tartibi. (D) AKT1 oqsilining Kaempferol bilan bog'lanish tartibi. (E) RELA oqsilining Quercetin bilan bog'lanish tartibi. (F) IL6 oqsilining Quercetin bilan bog'lanish tartibi. Har bir rasm uchta hududni ko'rsatadi: (I) Kompleksning 3D tuzilishi. (II) faol joyning yuzasi. (III) Kompleksning detallarni bog'lash tartibi. Proteinning asosiy qismi naychada tasvirlangan va yashil rangga bo'yalgan. Murakkab sariq rang bilan berilgan. Sariq chiziq vodorod aloqasi masofasini yoki p- stackingni bildiradi
Shakl 6 YQHG 5/6 nefrektomizatsiyalangan kalamushlarda buyrak funktsiyasi va fibrozni yaxshilaydi. (A) 5/6 nefrektomiya modeli va YQHG dozalash jadvalini qurish. (B) Kalamushlarning buyragi suratga olindi (n=6). (C) Kalamushlarning tana vazni o'lchandi (n=6). (D-F) YQHG davolashning 5/6 nefrektomizatsiya qilingan kalamushlarda Scr, BUN va siydik oqsili darajasiga ta'siri (n =6). (G) Buyrak to‘qimalarining H&E (4{{20}}×kattalashtirish, masshtab chizig‘i 20mkm) bo‘yalishi va Masson (40×kattalashtirish, masshtab chizig‘i 20 mkm) bo‘yalishining vakillik tasvirlari (n) =6). (H–I) Masson bo'yashiga asoslangan glomerulyar fibroz maydoni va tubulointerstital fibroz maydonining miqdoriy tahlili (n=6). Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ifodalanadi. Oddiy taqsimlangan ma'lumotlar uchun (tana vazni, Scr, siydik oqsili, glomerulyar fibroz hududi, tubulointerstital fibroz hududi) bir tomonlama ANOVA va undan keyin Tukey testi ishlatilgan. Oddiy taqsimlanmagan ma'lumotlar (BUN) uchun Kruskal-Uollis testidan so'ng parametrik bo'lmagan Wilcoxon darajali yig'indisi testi qo'llanildi. **P <0,01 soxta guruhga nisbatan; Model guruhiga nisbatan # P <0,05, ##P <0,01.
Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
