Spektr-ta'sir munosabatlari tahlili va tarmoq farmakologiyasi asosida Cistanche Tubulosadagi faol komponentlarni skrining uchun yangi strategiya Ⅱ

3. Natijalar va muhokama

3.1. HPLC barmoq izlari

3.1.1. Tasdiqlash usuli

HPLC usulini tekshirish shuni ko'rsatdiki, usulning aniqligi, takrorlanuvchanligi va barqarorligi uchun nisbiy standart og'ish (RSD) nisbiy tepalik maydoni (n = 11) uchun 2,85 foizdan va 0, 77 foizdan kam edi. nisbiy ushlab turish vaqti uchun (n = 11). Xuddi shu namunali eritmaning aniqligi 0.05–{{10}}, nisbiy vaqt uchun .77 foiz va 0.28– oraligʻida paydo boʻldi. Umumiy choʻqqilarning nisbiy maydoni uchun 2,70 foiz. Tajribaning takrorlanuvchanligi 0.0 nisbiy vaqt uchun 3–0,20 foiz va umumiy cho‘qqilarning nisbiy maydoni uchun 0,23–2,59 foiz oralig‘ida edi. Namuna barqarorligi nisbiy ushlab turish vaqti uchun 0,09-0,24 foizni va umumiy cho'qqilarning nisbiy maydoni uchun 0,75-2,85 foizni tashkil etdi. Ushbu natijalar belgilangan barmoq izi qoniqarli ekanligini ko'rsatdi. Geniposidik kislota uchun chiziqli munosabatlar,echinacoside, akteozid, tubulozid A, vaizoakteozidS4-jadvalda keltirilgan. R kvadratining qiymati 1.0000 bo'lib, yaxshi chiziqlilikni ko'rsatadi. Namuna olish natijalari shuni ko'rsatdiki, genipozid kislotasi, echinacoside,akteozid, tubulozid A, vaizoakteozid100,37 foiz, 103,59 foiz, 98,46 foiz, 100,81 foiz va 101,19 foizni tashkil etdi va namunaviy qayta tiklash uchun RSD 2,68 foizdan kam edi.

Cistanche faol komponentlari haqida batafsil ma'lumot olish uchun shu yerni bosing

3.1.2. Eng yuqori hudud (PA) va nisbiy ushlab turish vaqti (RRT)

C. tubulosa ning 11 partiyasidan olingan HM, WE va HRlarning mos yozuvlar barmoq izlari va barmoq izlari 2-rasmda keltirilgan. Yaxshi ajratish va ruxsatni namoyish etgan o'n bitta cho'qqi HM, WE va HRlar orasida umumiy cho'qqilar sifatida aniqlangan. Beshta standart birikma genipozid kislotasi (A2) sifatida aniqlandi,echinacoside(A8),akteozid (A9), tubulozidA (A10) vaizoakteozid(A11). Standart birikma,echinacoside, barcha xromatogrammalarda mavjud bo'lgan (o'rtacha ushlab turish vaqti 12.86 min) mos cho'qqilik maydoni va yaxshi barqarorlik, mos yozuvlar cho'qqisi sifatida tanlangan va qolgan o'ntasining nisbiy ushlab turish vaqtlarini (RRT) hisoblash uchun ishlatilgan. umumiy cho'qqilar. Ushbu turli shakllarning RRTlari 0.16–1,51 oralig'ida. Ushbu umumiy cho'qqilarning PA va dispersiya koeffitsienti (CV foiz) S5-S7 jadvallarida keltirilgan. Ma'lumotlarga ko'ra, turli shakllarda PA uchun CV foiz qiymatlari mos ravishda 25,78 foiz -142,02 foiz, 23,36 foiz -150,38 foiz va HM, WE va HR uchun 28,91 foiz -112,78 foiz. Ushbu natijalar har birining kontsentratsiyasida sezilarli farqlarni ko'rsatadiCistanche tubulosaturli shakllar orasidagi birikma. HM, WE va HR barmoq izlari 3-rasmda ko'rsatilgan.

Shakl 2 Standart namunalarning HPLC barmoq izlari

3.1.3. HM, WE va HR mazmuni

ning beshta standart tarkibiy qismiC. tubulosao‘lchandi. Asosiy komponentlarning tarkibi 1-jadvalda ko'rsatilgan. HM, WE va HR o'rtasidagi taqqoslash 2-jadval va 4-rasmda ko'rsatilgan. C. tubulosadagi PhG'lar biologik faol, ammo termosensitivdir. Suvda eriydigan issiqlikka sezgir komponentlar oqilona usul yordamida samarali ravishda olinishi mumkin. Odatda, Cistanche o'ti suv bilan chiqariladi va keyin quyidagi kimyoviy tahlil uchun konsentrlangan eritmada bug'lanadi [26, 27, 30]. Ekstraksiya va konsentratsiyadan so'ng, purkagich bilan quritish texnologiyasi qo'llanildi va protsedura avvalgi maqoladan o'zgartirildi. Suyuq bug'dan suv tezda olib tashlandi, so'ngra o'simliklardan xom ashyoning quruq ekstraktlari olindi. Ushbu bosqichda maltodekstrin qo'shilishi dispersiyani kuchaytirish va saqlash vaqtini uzaytirish uchun umumiy tashuvchi hisoblanadi. Bir qator ishlab chiqarish jarayonlari orqali o'simlik o'simliklari qo'shimchalar bilan formulali granulalarga bosildi. Yordamchi moddalarni qo'shishning bu bosqichi tajribaga kiritilmagan. Umuman olganda, bizning ishlab chiqarish jarayonimiz 2.2-bo'limda tavsiflanganidek, formulali granulalarni ishlab chiqarish jarayoniga parallel ravishda ekstraktsiya, konsentratsiya va buzadigan amallar bilan quritishni o'z ichiga oladi. Ushbu yarim tayyor mahsulotlarni ishlab chiqarish uchun yuqoridagi uchta bosqichga rioya qilish kerak. WE'larni shakllantirish tartibi konsentratsiyani va purkagichni quritishni o'z ichiga oladi, bu esa termosensitiv komponentlarning osongina yo'qolishiga olib keladi, ammo HR'lar HMlarni ekstraktsiyalash va quritishdan keyin olinadi. HRda faol komponentlar qolishi mumkinmi, deb hayron bo'lamiz. Bizning natijalarimizga ko'ra, verbaskozidning tarkibi HM dan WE va HR ga (mos ravishda va ) sezilarli darajada kamaydi. Verbaskozidning termal barqarorligi isitish jarayonida HPLC orqali tepalik maydonidagi o'zgarishlarni kuzatish orqali o'rganiladi. 4 soat davomida qizdirilgach, verbaskozidning 41,6 foizi qoladi. Bu verbaskozidning termosensitiv ekanligini ko'rsatadi [31]. WE'larda izoakteozid, tubuloside A va echinacoside murakkab ishlov berish protseduralaridan so'ng barqaror bo'lib qoldi. Uzoq muddatli quritish jarayonida PhG ning to'planishi sezilarli darajada pasaydi, bu termosensitiv komponentlarning termal degradatsiyasi bilan bog'liq bo'lishi mumkin [32]. Boshqa maqsadli komponentlar nuqtai nazaridan, HR va WE'lar verbaskoziddan tashqari sezilarli darajada farq qilmadi. Ushbu farqni tushunishimiz kelajakda o'simlik qoldiqlari uchun yaxshiroq sifat standartlarini ishlab chiqish va ularni mahsulotga aylantirish imkonini beradi.

1-jadval C. tubulosa ning 11 partiyasining tarkibi

2-jadval Asosiy komponentlar tarkibini taqqoslash (n = 11).

,

4-rasm Turli shakllardan beshta komponentning mazmunini aniqlash (n = 11). , ns: ahamiyatli emas.

3.1.4. Barmoq izlari o'xshashligini tahlil qilish

Uchta C. tubulosa guruhi o'rtasidagi o'xshashliklar baholandi. O'simlik materiali-suv ekstrakti, o'simlik materiali-o'simlik qoldig'i va suv ekstrakti-o'simlik qoldig'i o'xshashlik qiymatlari 0.943–0.994, 0.847–{ oralig'ida bo'lgan. {9}}.995 va 0.938–1.000 mos ravishda (3-jadval).

3-jadval C. tubulosa ning 11 partiyasi uchun HM-WE, HM-HR va WE-HR ning o'xshashligi.

3.2. Antioksidant faollik testi natijalari

C. tubulosa ning turli shakllarining antioksidant faolligi DPPH, , va tozalash qobiliyati tahlillari yordamida aniqlangan va tegishli natijalar 5-rasmda keltirilgan. S8-jadvalda DPPH va tozalash qobiliyatini tahlil qilish natijalari { {2}}.04–37,80, 0,98–843,90 va 0,32–27,65 mg/ml C. tubulosa ning 11 partiyasi orasida uch xil shaklda. Uchta antioksidant faollik testlarida HM va WE yaqin inhibisyon faolligini ko'rsatdi, HR esa eng zaif inhibisyonni ko'rsatdi.

Spray bilan quritilgan WE'lar past konsentratsiyalarda ham sezilarli faollik ko'rsatishi aniqlandi. Oldingi hisobotda aytilishicha, purkagich bilan quritilgan Vernonia amygdalina WE 0,17 mg/ml da 50 foiz tozalashni inhibe qilgan [33]. Uzoq ekstraktsiya vaqtlari va yuqori haroratlarni qo'llash ikki qirrali qilichdir. Bir tomondan, ekstraktsiya vaqtini oshirish va purkagichni quritish kirish harorati hosildorlik va samaradorlikni oshiradi. Bundan tashqari, ekstraktlar kuchli antioksidant faollikka va biologik komponentlarning yuqori konsentratsiyasiga erishadi [34]. Boshqa tomondan, haddan tashqari issiq kirish havosi bioaktiv birikmalarni buzadi. Bunday ko'tarilgan havo kirish harorati antioksidant Bidens pilosa ekstrakti faolligining yo'qolishiga olib keldi va fenolik birikmalarning kamayishi bilan bog'liq edi [35]. Hozirgi natijalar yuqorida qayd etilgan hisobotga mos keladi. Masalan, S6dagi WE HM va HRga qaraganda zaifroq radikal inhibitiv qobiliyatlarni namoyish etdi. Bundan tashqari, S5 da HR HM va WE ga qaraganda kuchliroq DPPH va superoksid anionlarini tozalash qobiliyatini namoyish etdi. PhG larning tuzilishi fermentativ ta'sir ostida oson gidrolizlanadigan yoki yuqori haroratlarda parchalanadigan glikozid bog'lari va asetil guruhlardan iborat. Bu reaktsiyalar katta hajmdagi ishlab chiqarish jarayonida ba'zi asosiy komponentlarning pasayishiga olib kelishi mumkin. Biroq, ba'zi komponentlarning gidrolizi yoki izomerizatsiyasi boshqa komponentlarning sintezini tezlashtirishi mumkin. Bunday o'zgarishlar Cistanches o'tlarini qayta ishlashda keng tarqalgan [36-38]. PhG ning suvda eruvchanligi biologik komponentlarning ko'pini suv olish orqali ishlatish mumkinligini anglatadi. Faol komponentlarning ko'pchiligi WE'larda qolishi haqidagi bahs o'nlab yillar davomida saqlanib qolgan, shuning uchun nam qoldiq materiallar ekstraksiyadan keyin tashlab yuborilishi mumkin deb taxmin qilish oqilona ko'rinadi. Biroq, C. tubulosa ning HRlarini chiqindi deb hisoblash noto'g'ri. Tadqiqotchilar ta'kidlashlaricha, PhGlar beqaror va ular fermentativ yoki gidrolitik degradatsiyaga moyil bo'ladi [39]. Qayta ishlash jarayonida fitomeditsinalar tarkibidagi biologik tarkibiy qismlarning kamayishiga hissa qo'shadigan gidroliz yoki izomerizatsiya reaktsiyalari bir vaqtning o'zida HR dan foydalanish uchun yangi imkoniyatlarni taqdim etishi mumkin. An'anaviy ekstraksiya usullarini o'zgartirish orqali dorivor qoldiqlarni ishlab chiqish va undan samarali foydalanish mumkin. Panax ginseng qoldiqlarini mono qandlarga aylantirish uchun fermentativ gidroliz amalga oshirildi. Polisaxaridlar va ginsenosidlarning hosildorligi oshdi, masalan, shakar, süksin kislotasi, jenshen polisaxaridlari va ginsenosidlar [40]. Sophora flavescens qoldiqlari ultratovush to'lqinlari orqali etil asetat bilan qayta chiqariladi [41]. O'simlik qoldiqlaridan foydalanishning yangilangan texnologiyalari Huang va boshqalar tomonidan umumlashtirilgan. [42].

PLSR va BCA natijalariga ko'ra, eng muhim cho'qqilarni aniqlash uchun DPPH, superoksid anioni va gidroksil radikallarini tozalash tahlillari yordamida turli shakllarning eng yaxshi beshta cho'qqisi tekshirildi. Natijalar Venn diagrammasida tasvirlangan (7-rasm). A2, A6, A8 va A10 superoksid anioni va gidroksil radikalini tozalash tahlillarida HM, WE va HR (7(a) va 7(c)-rasmlar) tomonidan taqsimlanadigan umumiy cho'qqilardir, HM, WE va HR ulushi DPPH tahlil cho'qqilari yo'q. Shu bilan birga, BCA modellari A1, A2, A3 va A6 HM, WE va HR tomonidan taqsimlangan umumiy cho'qqilar ekanligini ko'rsatadi (7(d)-7(f)-rasm). Shunisi e'tiborga loyiqki, Venn diagrammasidagi o'xshashliklar BCA modeli PLSR modelidan ko'ra ko'proq mos kelishini ko'rsatadi, birinchisi ko'proq takrorlanadi. BCA modeli koeffitsientlari va antioksidant qobiliyati IC50 qiymatlari RDA orqali tahlil qilindi. 8-rasmda ko'rsatilgan RDA kabi, HM va HR dan A1, A3 va A6 antioksidant indekslari bilan ijobiy bog'liq, faqat A3 gidroksil radikalini tozalash qobiliyatiga salbiy bog'liqdir. WE'dan A1 va A6 DPPH va superoksid anioni bilan kuchli korrelyatsiyaga ega. Turli shakllarda qayd etilgan A6 cho'qqilari DPPH, superoksid anioni va gidroksil radikallari bilan eng kuchli aloqani namoyish etadi. A1 va A3 ham xuddi shunday aloqani ko'rsatadi.

7-rasm

PLSR va BCA modelining Venn diagrammasi: (a) DPPH tahlili. (b) tozalash tahlili. (c) tozalash tahlili PLSR modeli tomonidan tahlil qilindi. (d) DPPH tahlili. (e) tozalash tahlili. (f) tozalash tahlili BCA modeli tomonidan tahlil qilindi. Bir-biriga o'xshash bo'lim HM, WE va HR tomonidan umumiy cho'qqilar parchasi edi.

3.4. Tarmoq farmakologiyasiga asoslangan tahlil

3.4.1. KT tarmog'ini qurish

GeneCards ma'lumotlar bazasi va OMIM ma'lumotlar bazasidan antioksidant faollik bilan bog'liq jami 4359 maqsad olindi. Shu bilan birga, faol komponentlar TCMSP ma'lumotlar bazasi va SwissTargetPrediction ma'lumotlar bazasidan tekshirildi. Keyin 198 ta maqsad to'plandi va UniPort ma'lumotlar bazasi orqali standartlashtirildi. Faol komponentlar va antioksidant bilan bog'liq kasalliklar tomonidan taqsimlangan 159 maqsadli gen mavjud edi (S1-rasmga qarang). KT tarmog'i birikmalar va asosiy gen maqsadlari o'rtasidagi korrelyatsiyani ko'rsatish uchun qurilgan (9-rasm).

9-rasm KT tarmog'i. Tarmoq faol komponentlar va asosiy gen maqsadlari o'rtasidagi bog'liqlikni ko'rsatdi.

3.4.2. PPI tarmog'ini qurish va asosiy maqsadlarni tekshirish

PPI STRING ma'lumotlar bazasi yordamida vizualizatsiya qilindi (10-rasm). Tarmoq 159 ta tugun va 2528 chekkadan iborat edi. Butun o'zaro ta'sir tarmog'ida birlashtiruvchi komponentlar yoki ko'proq maqsadli nuqtalarga ega tugunlar C. tubulosa'da antioksidant rol o'ynaydigan asosiy komponent yoki maqsadli gen bo'lishi mumkin. Natijalar yuklab olindi va vizualizatsiya uchun Cytoscape dasturiga kiritildi. DC qiymati qanchalik baland bo'lsa, rang quyuqroq bo'ladi va birlashtirilgan ball qiymati qanchalik katta bo'lsa, chekka qalinroq bo'ladi. Biz RAC-alfa serin/treonin-protein kinaz (AKT1), interlukin -6 (IL6), o'simta nekrozi omili (TNF) va tomir endotelial o'sish omili A (VEGFA) markazda joylashganligini aniqladik (11-rasm), faol komponentlar antioksidant ta'sir ko'rsatganda, ular asosiy maqsadlar bo'lganligini ko'rsatadi. Xabar qilinishicha, echinacoside mitoxondriyal disfunktsiyani mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazlar (MAPK) va AKT va ularning fosforlangan shakllarini tartibga solish orqali kamaytiradi [43]. Tadqiqotchilar C. tubulosa glikozidlarining diabetga qarshi ta'siri IL-6 va TNF- [44] kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlarni kamaytirish orqali PhGsning antioksidant faolligi bilan bog'liq bo'lishi mumkinligini taxmin qilishdi. Bundan tashqari, echinacoside angiogenezni inhibe qilish uchun VEGFA ifodasini pasaytirib, tuxumdon saratoni hujayralarining o'sishiga putur etkazishi mumkin [45], bu ROS uchun ROS tizimi bilan chambarchas bog'liq bo'lib, VEGF signalining ifodalanishini keltirib chiqaradi [46].

10-rasm PPI tarmog'i.

3.4.3. Boyitishni tahlil qilish va CTP tarmog'ini yaratish

Potentsial antioksidant birikmalar BP, CC va MF kabi ko'plab biologik funktsiyalarda ta'sir ko'rsatdi. Shakl 12 (a) da eng yaxshi 10 ta yo'l ko'rsatilgan. PPI tarmog'idan bashorat qilingan maqsadlar asosan organik siklik birikmalar, ksenobiotik stimulyatsiya, noorganik moddalar, kislorod darajasi va hujayra komponentlari harakatining ijobiy tartibga solinishi kabi ko'plab biologik jarayonlarga javob berdi. Hujayra komponentlarini tahlil qilish shuni ko'rsatdiki, genlar asosan membrana rafi, hujayradan tashqari matritsa, sekretor granulalar lümeni, transkripsiya regulyatori kompleksi va hujayraning apikal qismi bilan bog'liq. Ushbu maqsadlar, shuningdek, ko'plab molekulyar funktsiyalarda, jumladan DNKni bog'lovchi transkripsiya faktorini bog'lash, oqsillarni homodimerizatsiya faolligi, oqsil domeniga xos bog'lanish va sitokin retseptorlari bilan bog'lanishda ishtirok etadi.

12-rasm Boyitish tahlili: (a) GO boyitish tahlili. (b) KEGG boyitish tahlili.

Ushbu asosiy markazlarning biologik funktsiyalarini o'rganish uchun yo'lni boyitish tahlili o'tkazildi. KEGG boyitish natijalaridan eng yaxshi 20 ta yo'lni ko'rsatish uchun pufakchali diagramma chizilgan. Dog' qanchalik katta bo'lsa, yo'lga ko'proq genlar kiritilgan. Shakl 12 (b) da ko'rsatilganidek, C. tubulosa ning asosiy yo'llari saraton, lipid va ateroskleroz, diabetik asoratlarda AGE-RAGE signalizatsiya yo'li, kimyoviy kanserogenez - retseptorlarni faollashtirish va MAPK signalizatsiya yo'llari bilan bog'liq edi. C. tubulosa ning apoptoz va hujayra redoks gomeostaziga ta'siri o'rganildi. Ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, C. tubulosa yo'g'on ichak saratoniga qarshi terapiya uchun istiqbolli nomzod bo'lishi mumkin [47]. C. deserticola ekstrakti keksa odamlarda uchraydi [48].

13-rasmda yo'llar va ular bilan bog'liq maqsadlar o'rtasidagi bog'liqlik va C. tubulosa ning bir-biriga o'xshash maqsadli genlari va biologik faol komponentlari o'rtasidagi bog'liqlik ko'rsatilgan. 12 ta ingredient, 159 ta maqsad va 20 ta yoʻldan iborat boʻlgan CTP tarmogʻining global koʻrinishi yaratildi. Maqsadlarning ko'pchiligi nomzod faol birikmalar tomonidan baham ko'rilgan. O'zaro bog'lanish darajasi yuqori bo'lgan ushbu nomzod faol moddalar CTP tarmog'ining yuqori o'zaro bog'liqligi, ayniqsa quercetin (= 131 daraja) uchun javobgar edi. AKT1, IL6, TNF va VEGFA kabi maqsadlarning aksariyati saraton yo'llari bilan bog'liq bo'lgan KEGG yo'llari bilan taqqoslandi.

13-rasm CTP tarmog'i.

4. Xulosalar

Ushbu tadqiqotda biz birinchi navbatda HM, WE va HR o'rtasidagi spektr-ta'sir munosabatlarini ko'rib chiqishda murakkab vaziyatlarni tekshirdik.C. tubulosa. HPLC barmoq izlari vaantioksidant tahlillarining H, WE va HR o'rtasidagi farqlarni aniqlash uchun ishlatilganC. tubulosa. HPLC barmoq izlariga ko'ra, Hs, WE va HR ning 11 partiyasi orasida 11 cho'qqi keng tarqalgan. genipozid kislotasi,echinacoside, verbascoside, tubulozid A, vaizoakteozidbu cho'qqilar orasidan aniqlangan. Ushbu besh komponentning tarkibi aniqlandi. Bundan tashqari, ning antioksidant ta'siriC. tubulosaHs, WEs va HRs murakkab ishlab chiqarish sharoitlari tufayli kimyoviy tarkibdagi o'zgarishlar tufayli o'zgarib turardi. Turli xil statistik modellarga asoslanib, spektr-ta'sir munosabatlarini o'rganish shuni ko'rsatdiki, A6 cho'qqisi uchta shakl orasida eng hal qiluvchi komponent bo'lishi mumkin.C. tubulosa. Tadqiqot potentsial mexanizmlarini o'rganish uchun tarmoq farmakologiyasiga asoslangan ediC. tubulosayoqilganantioksidantbirikmalarni skrining qilish, asosiy maqsadlarni bashorat qilish, tarmoqlarni qurish va boyitish tahlilini o'tkazish orqali. Natijalarimiz o'simlik qoldiqlarini va uning salohiyatini qayta ishlash uchun nazariy asos bo'lib xizmat qiladiC. tubulosadavolashdaantioksidant bilan bog'liq kasalliklar.