Noinvaziv buyrak transplantatsiyasi monitoringi uchun umumiy siydik rad etish moduli (uCRM) balli

Aloqa: Audrey Xu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt

Oldin allogreft biopsiyalarida ifodalangan 11 gendan iborat umumiy rad etish moduli (CRM) o'tkir rad etish (AR) uchun biomarker bo'lib xizmat qilishi, transplantatsiya shikastlanishi darajasi bilan bog'liqligi va kelajakdagi allogreft shikastlanishini bashorat qilishi haqida xabar berilgan edi. Biz ushbu gen panelini buyrak transplantatsiyasi qilingan bemorlarning siydik hujayralari pelletida qo'llashni tekshirdik. Biopsiya bilan tasdiqlangan o'tkir rad etish, chegara AR (bAR), BK virusli nefropati (BKVN) va normal protokol biopsiyalari (STA) bilan barqaror buyrak greftlari bo'lgan bemorlardan siydik hujayralari cho'kindilari to'plangan, miqdoriy polimeraza zanjiri yordamida ushbu 11 genni ifodalash uchun tahlil qilingan. reaktsiya (qPCR). Biz ushbu 11 CRM genini ularning ko'pligi, avtokorrelyatsiyasi va individual ifoda darajalari uchun baholadik, STA bilan solishtirganda ARda 10/11 genlarning ifodasi yuqori bo'lgan. sezgirlik=93.6 foiz , oʻziga xoslik=97.6 foiz). Au CRM ko‘rsatkichi ifoda darajalarining o‘rtacha geometrik ko‘rsatkichiga asoslangan holda ARni STA dan yuqori aniqlik bilan ajrata oladi (AUC= 0,9886) va tubulit va oraliq yallig‘lanishning gistologik ko‘rsatkichlari bilan tubulyar atrofiya, glomeruloskleroz, intimal proliferatsiya, quvurli vakuolizatsiya yoki o'tkir glomerulit. Ushbu siydik genini ifodalashga asoslangan ball ARning invaziv bo'lmagan va miqdoriy monitoringini ta'minlashi mumkin.

CSITANCHE TA'SIRLARI: Yallig'lanishga qarshi

Kirish

Buyrak transplantatsiyasi (KTx) har qanday sababga ko'ra oxirgi bosqichdagi buyrak etishmovchiligini (ESRD) davolash uchun afzal qilingan usuldir [1]. Ushbu terapevtik yondashuv butun dunyo bo'ylab odatiy amaliyotga aylangan bo'lsa-da, bemorning hayot sifati va omon qolishini sezilarli darajada yaxshilaydi[2], allograftni rad etishning immun biologiyasini yaxshiroq tushunishga va yangi texnologiyalarning paydo bo'lishiga qaramay, uzoq muddatli buyrak transplantatsiyasi natijalari kutilgandek yaxshilanmadi. va kuchliroq immunosupressiv vositalar [3]. Doimiy va yomon greft omon qolishining asosiy sababi, immunologik shikastlanish yukini invaziv bo'lmagan holda aniqlash va jiddiy funktsional pasayish va gistologik shikastlanishdan oldin o'tkir rad etishni taxmin qilishning mumkin emasligidir. Darhaqiqat, KTx bilan kasallangan bemorlar doimiy ravishda immun va noimmun bog'liq jarohatlarga duchor bo'lishlari yaxshi ma'lum bo'lsa-da [4, 5], davriy KTx monitoringi zardobdagi kreatinin (6, Z) va sporadik KTx monitoringi kabi allograft disfunktsiyasining sezgir bo'lmagan surrogat belgilariga bog'liq. Qon zardobidagi kreatininning buzilishi bo'lmaganda subklinik gistologik transplantatsiya shikastlanishini aniqlash uchun allogreft biopsiya protokoliga asoslanadi[8].Graft disfunktsiyasini faqat qon zardobidagi kreatinin miqdoriga qarab baholash nospesifik, aniqlangan, allogreft shikastlanishiga sezgir bo'lsa ham, u o'tkir rad etish (AR) tashxisi uchun past o'ziga xoslikka ega, chunki qon zardobida kreatininning ko'tarilishi allograftni rad etish bilan bevosita bog'liq bo'lmagan boshqa sabablarga ko'ra bo'lishi mumkin, masalan, immunosupressiv (IS) dori bilan bog'liq nefrotoksiklik, o'tkir quvurli nekroz, infektsiya , va interstitsial fibroz va tubular atrofiya (IFTA) Bundan tashqari, kuzatuv biopsiyalaridan foydalanish boshqa diagnostika uchun oltin standart vosita sifatida qabul qilingan. lograft lezyonlari, bu yondashuv qimmat, invaziv, protsedura morbiditesi (qon ketish xavfi); sedasyon talab qiladigan protsedura, ayniqsa KTx pediatrik bemorlar uchun)[9], operatorlar o'rtasida o'qish o'zgaruvchanligi bilan to'la va ko'pincha fokal gistologik shikastlanishni kam ifodalaydi, shuning uchun invaziv bo'lmagan biologik markerlardan foydalanish, bu og'irlikni aniq bashorat qilish va hisoblash imkonini beradi. allogreftdagi immun shikastlanish aniq KTx monitoringi [10-12] uchun muhim muvaffaqiyat bo'ladi.

KTx bilan og'rigan bemorlarning siydigidagi proteomik, RNK va mikroRNK biomarkerlarini so'roq qilish bizning guruhlarimiz va boshqalar [13-17] tomonidan buyrak allogreftini ketma-ket monitoring qilish uchun optimal biologik suyuqlik ekanligini ko'rsatdi, chunki u buyrakning ultrafiltratidir. buyrak va buyrak greftida topilgan biologik jarayonlar va yallig'lanish yukini aks ettiradi [18]. Oldindan siydik biomarkerlarini buyrak transplantatsiyasida ARni tahlil qilish uchun noinvaziv diagnostik yondashuv sifatida baholagan bir qator tadqiqotlarga qaramasdan, alohida kimyokinlar va CXCR3, CXCL9 yoki CXCL10 kabi retseptorlar kabi yagona biomarkerlarga eksklyuziv e'tibor qaratilgan [{{ 6}}] turli KTx bemorlarida AR ning molekulyar murakkabligi va heterojenligini aniqlashni qiyinlashtiradi. Ushbu heterojenlikni ushlash AR ni istiqbolli monitoring qilish va terapevtik aralashuvdan so'ng greft shikastlanishini tiklash uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan tarzda shikastlanish yukini aniqlash uchun juda muhimdir [25, 26].

Ushbu tadqiqotda biz 11 gendan iborat Umumiy rad etish modulidan (CRM) foydalanish natijasida olingan bilimlarni qo'llaymiz [27], dastlab to'rt xil turdagi qattiq moddadan olingan biopsiya namunalarining ommaviy ravishda mavjud bo'lgan transplant to'qimalarining mikroarray ma'lumotlar to'plamining to'liq meta-tahlilidan foydalangan holda ishlab chiqilgan. organlar. To'qimalardagi CRM genlari (tCRM) organ turidan, immunosupressiya protokollaridagi farqlardan yoki gen ekspressiyasini so'roq qiluvchi platformalardagi farqlardan qat'i nazar, AR bemorlarida haddan tashqari ifodalangan. Birlashtirilgan gen-skorni (tCRM balli) hisoblash tahlili orqali aniqlangan miqdoriy chegara inson buyragi allogreftining 8 ta mustaqil kogortasida (n= 236 namunada) to'qima genini ifodalash imzolarini o'zaro tekshirish orqali AR mavjudligini aniq bashorat qildi. biopsiya [27]. tCRM balli KTx biopsiya namunalari bo'yicha alohida tadqiqotda qPCR tomonidan AR va surunkali allogreft shikastlanishining (CAl) diagnostikasi sifatida turli xil gen chegaralari bilan tasdiqlandi [28]. Bundan tashqari, ushbu CRM genlari to'plami surunkali o'pka allogreft disfunktsiyasi (CLAD) bo'lgan o'pka transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlarning mustaqil biopsiya qilingan to'qimalarida tasdiqlangan [29].

Ushbu tadqiqotda biz KTx bemorlarining siydik namunalarida foydalanish uchun CRM genini, ma'lum gistologiyaga ega allogreft biopsiyalari bilan bog'langan holda, AR va boshqa immun vositachiligidagi shikastlanishlarning invaziv bo'lmagan diagnostikasi uchun baholaymiz. Bundan tashqari, biz STA va AR bemorlarini aniq ajratadigan siydik CRM (uCRM) skorini ishlab chiqamiz. Biz bu ballni tubulit va interstitsial yallig'lanishning gistologik ko'rsatkichlari bilan bog'lash orqali bARni aniqlashda ushbu ballning klinik imkoniyatlarini baholaymiz.

CSITANCHE TA'SIRLARI: Immunitetni yaxshilash

Materiallar va uslublar

Siydik namunalari va tadqiqot guruhi

Tadqiqotga 2000-2011 yillarda Stenford universitetida va 2014-2016 yillarda roʻyxatdan oʻtgan UCSF tibbiyot markazida oʻqigan KTx qabul qiluvchilaridan biobank siydik namunalari (n=1760) kiritildi. Tadqiqot San-Fransisko, Kaliforniya universitetining institutsional tekshiruv kengashi va axloq qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan. Barcha bemorlar Xelsinki deklaratsiyasiga to'liq rioya qilgan holda, tadqiqotda qatnashish uchun yozma ravishda xabardor qilingan roziligini berishdi. Xabar qilinayotgan klinik va tadqiqot faoliyati Istanbul deklaratsiyasining organ savdosi va transplantatsiya turizmi to'g'risidagi Istanbul deklaratsiyasida bayon etilgan tamoyillariga mos keladi. AR uchun uCRM chegarasini belgilashda foydalanilgan siydik namunalari uchun 178 ta siydik namunalari Banff darajasidagi AR[30,31] aniq belgilangan patologiyalari yoki shikastlanmagan/barqaror (STA) greftlari (1-rasm) bilan juftlashgan buyrak allogreft biopsiyalari bilan aniqlandi. Bundan tashqari, biz BK virusli nefropatiyada uCRM tahlilining imzosini ham baholadik, bu AR diagnostikasi uchun muhim chalg'ituvchi hisoblanadi va ko'pincha allogreft biopsiyasida sezilarli yallig'lanish bilan namoyon bo'ladi. Umuman olganda, past kontent va sifatsiz RNK bilan bog'liq QC muammolari tufayli 28 ta namuna tashlab yuborildi, natijada immun vositali KTx shikastlanishining ko'ndalang tahlili uchun 150 kishidan 150 ta siydik namunasi yakunlandi. Har bir siydik namunasi Stenford universiteti (Richard Sibley) yoki UCSF (Zol-tan Laszik) markaziy patologi tomonidan baholangan siydik to'plash vaqtida biopsiya bilan moslashtirildi.

Bemorning xususiyatlari

150 unique urine samples were assessed for the uCRM assay in 150 unique kidney transplant patients. Baseline clinical and demographic variables by AR, bAR, BKVN, or STA phenotype are shown in Table1, There were no significant differences between the groups in the demographic variables, except in recipient age (p= 0.025) and in donor-source (p=0.0008). These samples were used in cross-sectional analyses for modeling of gene expression data and subsequent development and validation of the uCRM threshold for biopsy-proven AR. Samples were collected from both pediatric (n=94) and adult (n=56)patients to enable a model-independent of recipient age or baseline immunosuppression. Based on the matched biopsy diagnosis, urine samples were categorized in the following categories: AR(n=64;45 biopsies met criteria for Banff confirmed AR with >i2,t2, and infiltration by >4 ta mononuklear hujayralar / quvurli kesma, 19 tasi il/i2 va t0/t1 bilan chegaralangan AR va 1-4 mononuklear hujayralar/naychali kesma bilan infiltratsiya mezonlariga javob beradi), STA (n { {8}}), BK virusli nefrit (n =43), Bemorlar takrolimus va mikofenolat mofetilga asoslangan kalsinevrin inhibitori ILS rejimini, steroidlar bilan yoki steroidlarsiz va timoglobulin yoki anti-IL{{ bilan induksion terapiya oldilar. 12}} retseptorlari monoklonal antikor (daclizumab yoki bazi. infliximab)[32]. Siydik namunalari transplantatsiyadan keyingi o'rtacha 731 kun ichida olingan (diapazon 169-1335 kun).

Shikastlanish fenotiplarining ta'rifi

All kidney biopsies were blindly and centrally analyzed at each institution by staff pathologists (RS and ZL)and were graded by the Banff dassification[31,33] for acute rejection.Intragraft C4d stains were performed [34] to assess for acute humoral rejection(AHR)[35]. Transplant injury was defined as>Sarum kreatininining avvalgi barqaror holatdagi bazaviy qiymatidan 20 foizga oshishi va AR yoki BKVN.AR deb tasniflangan bog'liq biopsiya, Banff sxemasiga ko'ra, kamida 1 dan katta yoki teng tubulit ko'rsatkichi aniqlangan. interstitsial yallig'lanish ko'rsatkichi Cd va DSA manfiy bilan 1 dan katta yoki unga teng. Tcell vositachiligidagi AR (TCMR) va antikor vositachiligidagi rad etish (ABMR) holatlari ham qo'zg'atildi, ammo kuzatilgan barcha ABMR holatlari TCMR va ABMRning aralash fenotipiga ega edi, chunki sof ABMRga rioya qilish kamdan-kam xavfli, sezgir bo'lmagan kogortalarda kuzatiladi. Chegara o'zgarishlari (bAR) mononuklear hujayralarning infiltratsiyasi bilan tavsiflangan TCMRning ayrim holatlarida kuzatildi.<25% of="" the="" parenchyma)or="" foci="" of="" mild="" tubulitis(1-4="" mononuclear="" cells/tubular="" cross-section),="" and="" for="" purposes="" of="" molecular="" correlation="" analysis,="" these="" have="" been="" shown="" as="" bar,="" as="" the="" burden="" of="" histological="" inflammation="" was="" overall="" lower="" for="" these="" biopsy="" samples.="" bkvn="" was="" defined="" as="" the="" positivity="" of="" polyomavirus="" pcr="" in="" peripheral=""><1000-28,800,000), together="" with="" a="" positive="" sv40="" stain="" in="" the="" concomitant="" renal="" allograft="" biopsy.="" normal="" (sta)="" allografts="" were="" defined="" by="" an="" absence="" of="" significant="" injury="" pathology="" on="" the="" 6-month="" protocol="" biopsy,="" as="" defined="" by="" banff="" schema,="" stable="" graft="" function,="" no="" proteinuria,="" and="" no="">

1-rasm. Namuna tanlash va tadqiqotning o'rganish sxemasi. 2000 yildan 2016 yilgacha 1760 ta siydik namunasi to'plangan.

ulardan 643 tasi biopsiya ma'lumotlariga mos kelgan. Ushbu 643 tadan 178 tasida AR, bAR, BKVN yoki STA ning aniq belgilangan fenotiplari mavjud edi.

RNK ekstraktsiyasi, cDNK sintezi va qPCR miqdorini aniqlashdan so'ng, 28 ta namuna QA/QC dan o'tmadi va 150 tasi qoldi.

statistik tahlil va modellashtirish uchun namunalar.

Siydik to'plash, qayta ishlash, umumiy RNK ekstraktsiyasi, cDNK sintezi va qPCR

Siydik (50 ml; steril idish) buyrak transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlardan biopsiya jarayonidan oldin va AR uchun har qanday davolashni kuchaytirishdan oldin to'plangan. Siydik hujayralari cho‘kindisidan RNK ilgari xabar qilingan [36] protokolimiz asosida ajratilgan. Qisqasi, siydik hujayralari 50-ml siydik namunasini 2000xg da 20 daqiqa davomida santrifüj qilish orqali olingan. RNeasy Plus Micro Kit(Qiagen, Valensiya, Kaliforniya). RNK sifati 260/280 nisbatda NanoDrop ND-2000 spektrofotometri (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) yordamida baholandi. cDNK sintezi SuperScript VILO"Master Mix(Invitrogen, Carlsbad, CA) yordamida 50ng ekstraksiya qilingan RNK yordamida amalga oshirildi. qPCR 50ng umumiy RNKdan sintez qilingan cDNKda amalga oshirildi, keyin 1,56ng cDNK maxsus maqsadli kuchaytirish va namuna orqali qayta ishlandi. multipleksdagi 1l uCRM genlari uchun birlashtirilgan Taqman tahlillari bilan, Taqman PreAmp Master Mix(ABI) bilan yakuniy hajmdan 5ulgacha, termal sikl qurilmasida 18 tsikl davomida, so'ngra DNK suspenziya buferi (TEKnova, CA) bilan suyultirildi. Mikrofluidik qPCR 96,96 dinamik massivda (Fluidigm, Janubiy San-Fransisko, CA) har bir gen transkripti (S1 jadvali), Taqman Universal master mix (Applied Biosystems) uchun Taqman Assays (ABI) bilan birga aniq maqsadli kuchaytirishdan olingan 2,25 ul suyultirilgan namunadan foydalangan holda amalga oshiriladi. Foster City, CA) va Loading Reagent (Fluidigm), HX IFC Controller orqali chipni ishga tushirish va yuklash va BioMark (Fluidgm) tizimida qPCRni amalga oshirish. RNK ifodasining nisbiy miqdori qiyosiy cy yordamida hisoblab chiqilgan. cle threshold (CT) usuli. Ifoda qiymatlari 18 Susing ribosoma RNK endogen mos yozuvlar va universal RNK (Agilent Inc., Santa Clara, CA) ga normallashtirildi.

Statistika

Barcha qPCR tahlillari ikki nusxada o'tkazildi. Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida taqdim etiladi. Fenotip bo'yicha CRM genlarini taqqoslash uchun Geisser-Greenhouse tuzatish bilan aralash effektli model ishlatilgan, Beniamini, Krieger va Yekutieli ikki bosqichli chiziqli bosqichli protsedura yordamida bir nechta taqqoslash tuzatishlari. Pearson korrelyatsiyasi va ierarxik changni tozalash Morpheusda (Broad Institute) amalga oshirildi. Mashinada oʻrganishni bashorat qilish modellari uchun maʼlumotlar oʻquv majmuasiga (80 foiz) va test toʻplamiga (20 foiz) boʻlingan. Sinov to'plamida tasdiqlangan qarorlar daraxti tasnifi modeli eng aniq uCRM ball chegarasini aniqlash uchun ishlatilgan. Tasodifiy o'rmonlar yordamida o'zgaruvchan tanlov (VSURF) AR ys STA ni tasniflash, shuningdek, individual gen ahamiyatini baholash va tartiblash uchun ishlatilgan. Tasodifiy o'rmon o'zgaruvchan ahamiyati chiqishi modeldan chiqarib tashlangan (tasodifiy almashtirilgan) o'zgaruvchi (gen) modelining noaniqligining o'rtacha foiz kamayishi sifatida aniqlanadi. Fenotipni ajratishni tasavvur qilish uchun nazoratsiz changni tozalash Mathematica 11.3 (Wolfram Research, Champaign. IL) da taqsimlangan stokastik qo'shni joylashtirish algoritmi (t-SNE) yordamida amalga oshirildi. CRM genlarining tarmoq tahlili GeneMANIA [37] yordamida amalga oshirildi. Demografik o'zgaruvchilar bo'yicha statistik ma'lumotlar diskret uchun Chi-kvadrat tahlillari va IMP 14.2 (SASInstitute, Cary, NC) da doimiy o'zgaruvchilar uchun Kruskal-Wallis testi yordamida amalga oshirildi. Agar boshqacha ko'rsatilmagan bo'lsa. boshqa barcha tahlillar Prism 8.0.1 (GraphPad, Carlsbad, CA) yordamida amalga oshirildi va ingl.

O'qishni tasdiqlash

Tadqiqot Stenford universiteti tibbiyot fakulteti va UCSF tibbiyot markazining axloqiy qo'mitalari tomonidan tasdiqlangan. Barcha kattalar bemorlari va voyaga etmagan bemorlarning ota-onalari / vasiylari Xelsinki deklaratsiyasiga to'liq rioya qilgan holda tadqiqotda qatnashish uchun yozma xabardor qilingan rozilik oldilar. Xabar qilinayotgan klinik va tadqiqot faoliyati Istanbul deklaratsiyasining organ savdosi va transplantatsiya turizmi to'g'risidagi Istanbul deklaratsiyasida bayon etilgan tamoyillariga mos keladi.

CSITANCHE TA'SIRLARI: Immunitetni yaxshilash

Natijalar

AR, bAR, BKVN va STA fenotiplari bo'lgan barcha 150 KTx oluvchilar uchun boshlang'ich klinik va demografik o'zgaruvchilar 1-jadvalda ko'rsatilgan.

Sichqoncha hujayralari cho'kindisida CRM gen ifodasining nisbiy ko'pligi va korrelyatsiyasi

Nisbiy ko'plik. Siydik cho'kindilarida CRM gen transkriptlarining nisbiy ko'pligini aniqlash uchun sikl chegarasi (Ct) ko'plik ko'rsatkichi sifatida ishlatilgan. Ct qiymati qanchalik past bo'lsa, uning CRM genlari orasida ko'pligi shunchalik yuqori bo'ladi. 11 ta CRM genlari orasida BASP1 siydik hujayralari cho'kindisida eng ko'p bo'lgan transkript edi. BASP1 dan keyin TAP1, PSMB9 va ISG20 4 ta eng koʻp boʻlgan transkript sifatida joylashdi. LCK va CD6 CRM gen toʻplamidagi siydik choʻkmalarida eng kam tarqalgan transkriptlardan edi. Ct qiymatlari eng past Ct qiymatidan 14 dan eng yuqori Ct qiymatidan 20 gacha bo'lganligi sababli, BASP1 va CD6 gen transkriptlari o'rtasida 64-katta farq bor edi, CD6 esa eng kam transkript edi.

2-rasm. Siydikdagi CRM genlari ko'pligining nisbiy ko'pligi va korrelyatsiyasi va buyrak transplantatsiyasining turli klinik fenotiplarida CRM genlarining ifodasi. A. Pearson korrelyatsiya matritsasi 11 ta CRM genlari o'rtasidagi o'zaro bog'liqlikni siydik hujayralari cho'kindilarida ifodalashda ko'rsatadi. Kvadratning o'lchami korrelyatsiya kuchining vizual ko'rsatkichi bo'lib xizmat qiladi. B. AR, bAR, BKVN va STAda CRM genlarining nisbiy ifodasini ko'rsatuvchi fenotip bo'yicha nazorat qilinadigan klasterli issiqlik xaritasi. C. AR, bAR, BKVN va STA siydik hujayralari pelletida CRM genlarining tarqalishini tasvirlaydigan skripka chizmalari. � AR va STA ko'p taqqoslashdan keyin muhim ekanligini ko'rsatadi. # shuni ko'rsatadiki, bAR va STA ko'p taqqoslashdan keyin muhim edi. Qo'shimcha statistik ma'lumotlar 2-jadvalda keltirilgan.

CRM gen genlari o'rtasidagi gen ekspressiyasining korrelyatsiyasi.

Keyinchalik, biz 11 CRM genlari orasidagi gen ekspresyonining korrelyatsiyasini baholadik. Korrelyatsiya juda zaif (CXCL9 va NKG7 uchun r=-0.17 va r=-0.10 CXCL10 va RUNX3) dan juda kuchli (INPP5D va TAP1 uchun r=0.77 va CD6 va LCK uchun bir xil qiymat). CXCL9 va CXCL10 bir xil kimyokinlar sinfida bo'lsa-da, ular orasidagi gen ifodasi korrelyatsiyasi faqat o'rtacha edi (r=0.46). Korrelyatsiya matritsasining grafik ko'rinishi 2A-rasmda keltirilgan. Nazorat qilinadigan klasterlash yordamida yaratilgan issiqlik xaritasi STA fenotipiga nisbatan AR, bAR va BKVN da CRM genlarining gen ekspresyon qiymatlarining sezilarli o'sishini ko'rsatadi (2B-rasm).

Biopsiya bilan tasdiqlangan AR va BKVN bilan siydik cho'kindilarida uCRM genining ifodasi

AR va bARda CRMgenlarning gen ifodasi. Keyinchalik, biz AR, bAR, BKVN va STAda nisbiy ifodasi uchun 11 CRM genlarining har birining gen ifodasini baholadik. Tahlil natijalarining qisqacha mazmuni 2-jadvalda va 2C-rasmda keltirilgan. 11 gendan 10 AR siydik cho'kindilarida STA dan siydik cho'kindilari bilan solishtirganda sezilarli darajada oshgan. Biroq, faqat beshta CRM genlari (Cd6, Cxcll0, Cxd9, Nkg7 va Psmb9) STA bilan solishtirganda bAR namunalarida sezilarli darajada yuqori tartibga solingan va ularning bAR guruhidagi ifodasi Banff darajali AR guruhiga qaraganda nisbatan past bo'lgan, bu uCRM genlari bo'lishi mumkinligini ta'kidlaydi. allograft Eig 2C ichidagi yallig'lanish yukini aks ettiradi.

Jadval 2. Turli fenotiplar bo'yicha CRM genlarining gen ekspresyon darajalari

BKVNda CRMgenlarning gen ifodasi. CD6, CXCL10, CXCL9, LCK, NKG7 va PSMB9 ning ekspressiyasi STA bilan og'rigan bemorlarning namunalari bilan solishtirganda BKVN bilan kasallangan siydik namunalarida differentsial tartibga solingan. BKVN va STA namunalari o'rtasida statistik jihatdan har xil gen ifoda qiymatlariga ega bo'lgan oltita gendan faqat NKG7 ekspressiyasi BKVN siydigida sezilarli darajada past bo'lgan.

Buyrak transplantatsiyasini rad etishni aniqlash uchun siydik CRM (uCRM) genini ifodalash ballini aniqlash

Transplantatsiya fenotiplari bo'yicha CRM gen to'plamining ifodasi bir hil bo'lmaganligi va turli genlar o'rtasida sezilarli fiziologik o'zaro bog'liqlik mavjud bo'lganligi sababli (S1-rasm), biz fenotiplarni yanada farqlash va tasniflash uchun chiziqli bo'lmagan boshqariladigan usullardan foydalandik. UCRM genlari va fenotiplari o'rtasidagi munosabatlarni aniqlash uchun t-SNE orqali nazoratsiz klasterlash amalga oshirildi. Shakl 3A t-SNE sxemasini ko'rsatadi, bu 11 CRM genlari ARni STA namunalaridan deyarli butunlay ajratishi mumkinligini ko'rsatadi. Tasodifiy o'rmonlar ahamiyatiga bog'liq bo'lgan VSURF modeli PSMB9 va CXCL10 STA dan ARni qondirishda ikkita eng muhim gen ekanligini aniqladi. 3B-rasmda ushbu 2 genning ahamiyati ko'rsatilgan. Gen og'irliklarining ahamiyati grafigi shuni ko'rsatadiki, agar 2 gendan biri modeldan chiqarib tashlangan bo'lsa, model noaniqligining taxminan 20 foizga pasayishiga to'g'ri keladi. Bu ikki gen AR ni STAga nisbatan 1l gen modeli kabi yuqori aniqlikda, sezuvchanlik 93,6 foiz va o'ziga xoslik 97,6 foizni tashkil qilishi mumkin. Ushbu ikki gen uchun genni ifodalash chegaralari qaror daraxti tasniflagichi tomonidan aniqlangan va bu ikki genning log-miqyosidagi qiymatlari 3C-rasmda tasvirlangan. CXCL10 uchun 28 chegara va PSMB9 uchun 3 toʻgʻri tasniflangan 86/88 AR va STA holatlari umumiy aniqlik 97,7 foiz. Shunisi e'tiborga loyiqki, bAR namunalari AR va STA feno-tiplari o'rtasida joylashgan bo'lib, bu ikki genning allograft yallig'lanish darajasida gradatsiyasini ko'rsatadi.

AR, chegaraviy AR va STA holatlarida uCRM ballining tasniflash samaradorligini o'rganish uchun qarorlar daraxti tasniflagichi ishlab chiqarildi (4A-rasm). Qaror daraxti har bir fenotip uchun uCRM reytingining optimal chegaralarini aniqladi. 4 dan yuqori ball to'g'ri tasniflangan 44/49 AR holatlari; 1,8 balldan kam ball to'g'ri tasniflangan 33/35 STA holatlari.14/23 chegara holatlari bu ikki chegara o'rtasida edi. uCRM ballarining fenotip bo'yicha taqsimlanishi 4B-rasmda tasvirlangan. AR, bAR va STA uchun o'rtacha uCRM ballari (SEM) 8,195 (0,631), 3,265 (0,412{{21) ni tashkil etdi. }}) va 1.404 (0.162) mos ravishda va barcha taqqoslashlar bir nechta taqqoslashlarni tuzatishdan keyin muhim edi. uCRM balli AR va STAni yuqori aniqlik bilan ajrata oladi - 3,63 chegarasida sezuvchanlik va o'ziga xoslik mos ravishda 95,35 va 97,78 foizni tashkil etdi (Mas. 4C. AR va bAR va STA kombinatsiyasini farqlashda uCRM balli saqlanib qoldi. bir xil chegarada yuqori aniqlik, sezgirlik va o'ziga xoslik mos ravishda 87,10 foiz va 97,78 foizni tashkil etdi (S2A-rasm).

BKVN namunalarini qo'shganda, bAR va BKVN (S2BFig) bundan mustasno, bir nechta taqqoslashlarni tuzatishdan so'ng barcha fenotiplar bir-biridan sezilarli darajada farq qildi. AR va bAR, STA va BKVN kombinatsiyasini farqlashda uCRM ball hali ham yuqori, ammo pastroq aniqlikni saqlab qoldi. Xuddi shu 3,63 chegaradan foydalangan holda, sezgirlik va o'ziga xoslik mos ravishda 76,92 va 97,78 foizni tashkil etdi (S2CFig).

ComScore ARga xos biopsiya gistologik lezyonlari bilan bog'liq. Shunisi e'tiborga loyiqki, uCRM ballining STA dan bar dan AR gacha ko'tarilish tendentsiyasi uCRM balli yallig'lanishning klinik ahamiyatga ega bo'lgan gradatsiyalarini aniqlashi mumkinligini ko'rsatdi. Shunday qilib, biz uCRM balli bir vaqtning o'zida to'plangan bir bemordan mos keladigan biopsiyalarda kuzatilgan gistologik AR lezyonlari darajasi bilan bog'liqligini baholadik. 5A va 5B-rasmda ko'rsatilganidek, uCRM ko'rsatkichlari tubulit (t) va interstitsial yallig'lanish (i) biopsiya ko'rsatkichlari AR (R=0).5479, P.<0.0001 and="" r="0.4420,"><0.0001 for="" the="" ucrm="" score="" regarding="" t="" and="" ii,="" respectively).="" there="" was="" no="" correlation="" between="" the="" ucrm="" score="" and="" measures="" of="" tubular="" atrophy="" (ta),glomerulosclerosis="" (gs),mesangial="" matrix="" (mm),="" intimal="" proliferation="" (cv),="" medial="" arteriolar="" hyaline="" (ah),="" tubular="" vacuolization(tv),="" arteritis="" (v),="" or="" acute="" glomerulitis="">

CSITANCHE TA'SIRLARI: ANTI-CHARGANCHA

Munozara

Transplantatsiya tibbiyotida transplant klinisyenlariga allogreft shikastlanishi xavfini oldindan aniqlashga yordam beradigan ishonchli va invaziv bo'lmagan monitoring vositalarini ishlab chiqish uchun shoshilinch ehtiyoj bor. Bir qator transkripsiyaviy biomarkerlar AR bilan bog'langan bo'lsa-da, tadqiqotlarning aksariyati asosan yagona yoki yagona transkripsiya omiliga qaratilgan va allograftni rad etishning biologik jarayonining butun molekulyar murakkabligini aks ettirmaydi [11,38]. Bundan tashqari, immun vositali allogreft shikastlanishining mavjudligini diagnostika qilishning hozirgi oltin standarti allogreft biopsiyasi bo'lsa-da, ma'lumki, protsedura tez-tez noto'g'ri namuna olish, uning yuqori narxi va takroriy takrorlashning amaliy emasligi nuqtai nazaridan asosiy cheklovlarga ega. texnikaning invaziv tabiati tufayli skrining.

Bir nechta hisobotlar buyrak transplantatsiyasini qabul qiluvchilarning siydik namunalarida ARni bashorat qiluvchi turli biomarkerlarni o‘rganish qiymatini ko‘rsatdi [20-22]. Immun effektor molekulalari va transkriptlarning siydik darajasining oshishi, masalan, granzim B. CXCL10.CXCL9.IFN-y va CXCR3. AR bilan yuqori darajada bog'langanligi ko'rsatilgan va ba'zi hollarda hatto AR paydo bo'lishini oldindan taxmin qilish mumkin [19,24,39-43]. Bizning guruhimiz [2Z, 29,44] tomonidan yaqinda e'lon qilingan ma'lumotlardan foydalanib, to'qima a'zosining turidan qat'i nazar, AR paytida allogreft biopsiyalarida gen ekspresyonining umumiy rad etish modulini ko'rsatadigan ma'lumotlardan foydalangan holda, ushbu tadqiqotning asosiy maqsadi baholashning mavjudligini tekshirish edi. Buyrak transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlarning siydigidagi CRM ning AR paydo bo'lishini bashorat qiluvchi ideal noinvaziv biomarker sifatida foydali bo'lishi mumkin.

Ko'pgina individual CRM genlari va gen mahsulotlari alohida baholangan bo'lsa-da, bu KTxda ARni bashorat qilishda CRM genlaridan kollektiv, invaziv bo'lmagan foydalanish haqidagi birinchi hisobotdir. Misol uchun, siydik CXCL9 mRNK va oqsil va CXCL10 mRNK ilgari AR diagnostikasi uchun ko'p markazli tadqiqotlarda baholangan [13,45,46. Buyrak biopsiyalarida PSMB9 transkriptlari ham ilgari greft sifati va o'tkir rad etishni bashorat qilish bilan bog'liq edi [ 47].

Biz CRM transkriptlarining nisbiy ko'pligi va ularning CRM genlari o'rtasidagi ekspressiya korrelyatsiyasi uchun KTx bemorlarining siydik cho'kindilari bo'yicha gen ekspressiyasi ma'lumotlarini tahlil qildik (2A-rasm). Oldin xabar qilingan tadqiqotimizga muvofiq, to'qimalarning buyrak va o'pka allogreft namunalarida CRM ballini tahlil qilish, CRMgenlar AR va AR va BKVN kabi boshqa transplantatsiya jarohatlarida ifodani oshirdi (2B va 2C-rasm). Ushbu hisobotda biz yangi ishlab chiqilgan uCRM ko'rsatkichi va gistologik yallig'lanish skorlari (buyrak biopsiyalarining t va ii ballari) o'rtasida kuchli bog'liqlikni kuzatdik. Ushbu CRM genlarining aksariyati deyarli faqat infiltratsiya qiluvchi immunitet hujayralarida ifodalanganligi sababli, siydik cho'kindilarida CRM genlarining ko'payishi, transplantatsiya jarohati olgan buyrak transplantatsiyasini qabul qiluvchilarning siydigida infiltratsiya qiluvchi immun hujayralarining ko'payishini ko'rsatadi.

Keyinchalik, buyrak transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlarni o'tkir rad etilgan yoki shikastlanmagan bemorlarga tasniflash uchun metrik sifatida individual CRM genlarining individual gen ekspresyon qiymatlaridan hisoblangan birlashtirilgan balldan foydalandik, ComScore va AR uchun chegarani aniqladik. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, uCRM tahlilining kuchi nafaqat AR bilan og'rigan bemorlarni aniqlash, balki allogreftda sodir bo'ladigan shikastlanish darajasini aniqlashdir, chunki STA bemorlaridagi ball past qiymatlardan bAR bemorlaridagi oraliq qiymatlarga ko'tariladi. va tubulit va interstitsial yallig'lanish gistologiyasi ballarida aks etganidek, AR bemorlarida yuqori qiymatlarga. Biz ishonamizki, uCRM balli transplantatsiya monitoringida potentsial foydali bo'ladi va biopsiya uchun qo'shimcha yoki yo'naltiruvchi test sifatida xizmat qilishi mumkin. Past uCRM balli bo'lgan bemor keraksiz protokol biopsiyalaridan qochishi mumkin, yuqori uCRM balli bo'lgan bemor esa greft holatini baholash uchun ketma-ket monitoring yoki sababga ko'ra biopsiya talab qilishi mumkin.

Biz ushbu tadqiqotning bir qator cheklovlarini tan olamiz, ular orasida (i) tadqiqotning cheklangan namunasi hajmi, (ii) surunkali allograft shikastlanishi yoki dori toksikligi kabi transplantatsiya jarohati fenotiplarining yo‘qligi va (i) bo‘ylama bo‘yicha uCRM reytingining baholanmaganligi kiradi. kattaroq kohort hajmidagi namuna. Ushbu istiqbolli topilmalar klinik sharoitda uCRM ballining potentsial foydaliligini tasdiqlash va to'liq baholash uchun qo'shimcha, istiqbolli tadqiqotlar zarurligini ko'rsatadi. Xulosa qilib aytganda, biz buyrak transplantatsiyasi bilan og'rigan bemorlarda transplantatsiya shikastlanishi va rad etishni aniqlay oladigan 11 gendan tashkil topgan Umumiy rad etish modulidan ishlab chiqilgan invaziv bo'lmagan, siydik asosidagi biomarkerni taqdim etamiz.

CSITANCHE TA'SIRLARI: Xotirani yaxshilaydi

Ma'lumotnomalar

1 Wolfe RA, Ashby VB, Milford EL, Ojo AO, Ettenger RE, Agodoa LY va boshqalar. Dializdagi barcha bemorlarda, transplantatsiyani kutayotgan dializda bo'lgan bemorlarda va birinchi jasad transplantatsiyasini oluvchilarda o'limni taqqoslash. New England tibbiyot jurnali. 1999; 341(23):1725–30.

2. Laupasis A, Keown P, Pus N, Krueger H, Ferguson B, Vong C va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasining hayot sifati va foydaliligini o'rganish. Xalqaro buyrak. 1996 yil; 50(1):235–42. PMID: 8807593.

3. Lodhi SA, Lamb KE, Meier-Kriesche HU. Transplantatsiya qilingan bemorlar uchun uzoq muddatli natijalarni yaxshilash: uzoq muddatli kasalliklarga xos va multidisipliner tadqiqotlar uchun ishni qilish. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2011; 11(10):2264–5.

4. Naesens M, Khatri P, Li L, Sigdel TK, Vitalone MJ, Chen R va boshqalar. Buyrak allogreftlarida progressiv gistologik shikastlanish tug'ma va adaptiv immunitet genlarini ifodalash bilan bog'liq. Xalqaro buyrak. 2011; 80(12):1364–76.

5. Sigdel TK, Li L, Tran TQ, Khatri P, Naesens M, Sansanwal P va boshqalar. Immunogen epitoplarga HLA bo'lmagan antikorlar surunkali buyrak allogreft shikastlanishining rivojlanishini bashorat qiladi. Amerika nefrologiya jamiyati jurnali: JASN. 2012; 23(4):750–63.

6. Pape L, Offner G, Ehrich JH, de Boer J, Persijn GG. Xuddi shu donorning mos keluvchi bolalar va kattalar juftliklarida buyrak allograft funktsiyasi. Transplantatsiya. 2004; 77(8):1191–4. PMID: 15114083.

7. Provoost AP, Wolff ED, de Keijzer MH, Molenaar JC. Buyrak transplantatsiyasidan keyin qabul qiluvchining kattaligining buyrak funktsiyasiga ta'siri. Eksperimental va klinik tekshiruv. Pediatrik jarrohlik jurnali. 1984 yil; 19(1):63–7.

8. Moreso F, Lopez M, Vallexos A, Giordani C, Riera L, Fulladosa X va boshqalar. Barqaror buyrak allogreftlarida surunkali transplantatsiya nefropatiyasining rivojlanishini aniqlash uchun ketma-ket biopsiya protokoli. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2001; 1(1):82–8. PMID: 12095044.

9. Davis ID, Oehlenschlager W, O'Riordan MA, Avner ED. Bolalar buyrak biopsiyasi: bu muolajani ambulatoriya sharoitida bajarish kerakmi? Bolalar nefrologiyasi. 1998 yil; 12(2):96–100. PMID: 9543363.

10. Roedder S, Sigdel T, Salomonis N, Hsieh S, Dai H, Bastard O va boshqalar. O'tkir rad etish xavfi yuqori bo'lgan buyrak transplantatsiyasi bemorlarini aniqlash uchun kSORT tahlili: ko'p markazli AART tadqiqotining natijalari. PLoS tibbiyoti. 2014; 11(11):e1001759.

11. Sarwal M, Chua MS, Kambham N, Hsieh SC, Satterwhite T, Masek M va boshqalar. DNK mikroarray profili bilan aniqlangan o'tkir buyrak allogreft rad etishda molekulyar heterojenlik. New England tibbiyot jurnali. 2003; 349(2):125–38.

12. Sigdel TK, Sarval MM. Proteo mikrofonlar yordamida qattiq organlarni transplantatsiya qilishda biomarkerlarni topishdagi so'nggi yutuqlar. Proteomikaning ekspert sharhi. 2011; 8(6):705–15. https://doi.org/10.1586/epr.11.66 PMID: 22087656.

13. Suthanthiran M, Schwartz JE, Ding R, Abecassis M, Dadhania D, Samstein B va boshqalar. Siydik-hujayra mRNK profili va buyrak allograftlarida o'tkir hujayrali rad etish. New England tibbiyot jurnali. 2013 yil; 369 (1): 20–31.

14. Sigdel TK, Gao Y, He J, Vang A, Nicora CD, Fillmore TL va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasi shikastlanishini kuzatish uchun inson siydigi proteomini qazib olish. Xalqaro buyrak. 2016; 89(6):1244–52. https://doi.org/10.1016/j. trikotaj.2015.12.049 PMID: 27165815.

15. Sigdel TK, Ng YW, Li S, Nicora CD, Qian WJ, Smit RD va boshqalar. Transplantatsiyani rad etishda siydik ekzosomasidagi buzilishlar. Tibbiyotdagi chegaralar. 2014; 1:57.

16. Yang JY, Sarval MM. Transplantatsiya genetikasi va genomikasi. Tabiatning Genetika sharhlari. 2017; 18(5):309–26.

17. Loupy A, Lefaucheur C, Vernerey D, Chang J, Hidalgo LG, Beuscart T va boshqalar. Antikor vositachiligida buyrak allogreftini rad etishda xavf tabaqalanishini yaxshilash uchun molekulyar mikroskop strategiyasi. Amerika nefrologiya jamiyati jurnali: JASN. 2014; 25(10):2267–77. EPub 2014/04/05.

18. Sigdel TK, Vitalone MJ, Tran TQ, Dai H, Hsieh SC, Salvatierra O va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasi shikastlanishini aniqlash uchun tezkor noinvaziv tahlil. Transplantatsiya. 2013 yil; 96(1):97–101. PMID: 23756769.

19. Hauser IA, Spiegler S, Kiss E, Gauer S, Sichler O, Scheuermann EH va boshqalar. IFN-gamma (MIG) tomonidan qo'zg'atilgan siydik monokinlari tomonidan o'tkir buyrak allograftini rad etishni bashorat qilish. Amerika nefrologiya jamiyati jurnali: JASN. 2005; 16(6):1849–58.

20. Xu H, Kwun J, Aizenstein BD, Knechtle SJ. Siydikda bir nechta sitokinlar/xemokinlar ko'payishi orqali inson buyrak transplantatsiyasida o'tkir va surunkali shikastlanishlarni noinvaziv aniqlash. Transplantatsiya. 2009; 87(12):1814–20. PMID: 19543058.

21. Jekson JA, Kim EJ, Begli B, Cheeseman J, Harden T, Perez SD va boshqalar. Siydikdagi kimyokinlar CXCL9 va CXCL10 buyrak allograftini rad etish va BK virusli infektsiyasining noinvaziv belgilaridir. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2011; 11(10):2228–34.

22. Schaub S, Nickerson P, Rush D, Mayr M, Hess C, Golian M va boshqalar. Siydikdagi CXCL9 va CXCL10 darajalari subklinik tubulit darajasi bilan bog'liq. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2009; 9 (6): 1347–53.

23. Segerer S, Cui Y, Eitner F, Goodpaster T, Hudkins KL, Mack M va boshqalar. Insonning buyrak transplantatsiyasini rad etishda kemokinlar va kimokin retseptorlarining ifodasi. Amerika buyrak kasalliklari jurnali: Milliy buyrak jamg'armasining rasmiy jurnali. 2001; 37(3):518–31. PMID: 11228176.

24. Tatapudi RR, Muthukumar T, Dadhania D, Ding R, Li B, Sharma VK va boshqalar. Siydikdagi IP-10 va CXCR3 uchun mRNKni o'lchash orqali buyrak allogreft yallig'lanishini noinvaziv aniqlash. Xalqaro buyrak. 2004; 65(6):2390–7.

25. Menon MC, Merfi B, Xeger PS. Biomarkerlarni buyrak transplantatsiyasida klinik amaliyotga o'tkazish. JASN. 2017 yil.

26. Naesens M, Anglicheau D. Precision Transplant Medicine: qutqarish uchun biomarkerlar. JASN. 2017 yil.

27. Khatri P, Roedder S, Kimura N, De Visser K, Morgan AA, Gong Y va boshqalar. Ko'p organlarda o'tkir rad etish uchun umumiy rad etish moduli (CRM) organ transplantatsiyasi uchun yangi terapevtiklarni aniqlaydi. Eksperimental tibbiyot jurnali. 2013 yil; 210(11):2205–21.

28. Sigdel TK, Bestard O, Tran TQ, Hsieh SC, Roedder S, Damm I va boshqalar. Buyrak allogreftlarida immunitet shikastlanishini bashorat qilish uchun hisoblangan gen ekspressiyasi. PloS biri. 2015; 10(9):e0138133.

29. Secrets A, Yang JYC, Vanaudenaerde BM, Sigdel TK, Liberto JM, Damm I va boshqalar. O'pka transplantatsiyasidan keyingi surunkali rad etishda umumiy rad etish moduli. PloS biri. 2018; 13(10):e0205107. Epub 2018/10/06.

30. Sis B, Mengel M, Haas M, Colvin RB, Halloran PF, Racusen LC va boshqalar. Banff '09 yig'ilishi hisoboti: antikor vositachiligidagi transplantatsiyaning yomonlashishi va Banff ishchi guruhlarini amalga oshirish. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2010; 10(3):464–71.

31. Solez K, Kolvin RB, Racusen LC, Haas M, Sis B, Mengel M va boshqalar. Buyrak allograft patologiyasining Banff 07 tasnifi: yangilanishlar va kelajakdagi yo'nalishlar. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2008; 8 (4): 753–60.

32. Sarwal MM, Ettenger RB, Dharnidharka V, Benfield M, Mathias R, Portale A va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasi bo'lgan bolalarda steroiddan to'liq voz kechish samarali va xavfsizdir: uch yillik kuzatuv bilan ko'p markazli randomizatsiyalangan sinov. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2012; 12(10):2719–29.

33. Racusen LC. Banff sxemasi va allogreft disfunktsiyasining differentsial diagnostikasi. Transplantatsiya jarayonlari. 2004; 36(3):753–4.

34. Jianghua C, Wenqing X, Huiping W, Xuan J, Jianyong W, Qiang H. C4d buyrak allograftlarida humoral rad etish uchun muhim bashoratchi sifatida. Klinik transplantatsiya. 2005; 19(6):785–91.

35. Crespo M, Pascual M, Tolkoff-Rubin N, Mauiyyedi S, Collins AB, Fitzpatrick D va boshqalar. Buyrak allogreft qabul qiluvchilarda o'tkir gumoral rad etish: I. Insidansi, serologiyasi va klinik xususiyatlari. Transplantatsiya. 2001; 71(5):652–8. PMID: 11292296.

36. Keslar KS, Lin M, Zmijewska AA, Sigdel TK, Tran TQ, Ma L va boshqalar. Invaziv bo'lmagan gen ifodasi profilini yaratish uchun standartlashtirilgan protokolni ko'p markazli baholash. AJT. 2013 yil.

37. Montojo J, Zuberi K, Rodriges H, Bader GD, Morris Q. GeneMANIA: Cytoscape uchun tezkor gen tarmog'ini qurish va funktsiyani bashorat qilish. F1000 tadqiqoti. 2014; 3:153.

38. Der SD, Chjou A, Uilyams BR, Silverman RH. Oligonukleotid massivlari yordamida interferon alfa, beta yoki gamma tomonidan differentsial tartibga solinadigan genlarni aniqlash. Amerika Qo'shma Shtatlari Milliy Fanlar Akademiyasi materiallari. 1998 yil; 95(26):15623–8.

39. Hartono C, Muthukumar T, Suthanthiran M. Buyrak allograftlarini o'tkir rad etishning noinvaziv diagnostikasi. Organ transplantatsiyasi bo'yicha hozirgi fikr. 2010; 15(1):35–41. https://doi.org/10.1097/MOT. 0b013e3283342728 PMID: 19935064.

40. Lazzeri E, Rotondi M, Mazzinghi B, Lasagni L, Buonamano A, Rosati A va boshqalar. Rad etilgan buyraklardagi yuqori CXCL10 ifodasi va o'tkir rad etish va surunkali allograft nefropatiya uchun transplantatsiyadan oldingi sarum CXCL10 ning prognozli roli. Transplantatsiya. 2005; 79(9):1215–20. PMID: 15880073.

41. Matz M, Beyer J, Wunsch D, Mashreghi MF, Seiler M, Pratschke J va boshqalar. Transplantatsiyadan keyingi erta siydik IP{2}} ifodasi buyrak transplantatsiyasidan keyin qisqa va uzoq muddatli transplantatsiya funktsiyasini bashorat qiladi. Xalqaro buyrak. 2006; 69(9):1683–90.

42. Simon T, Opelz G, Wiesel M, Ott RC, Susal C. Buyrak transplantatsiyasini qabul qiluvchilarda o'tkir rad etishni bashorat qilish uchun ketma-ket periferik qon perforin va granzim B genini ifodalash o'lchovlari. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2003; 3(9):1121–7. PMID: 12919092.

43. Yannaraki M, Rebibou JM, Ducloux D, Saas P, Duperrier A, Feliks S va boshqalar. O'tkir buyrak transplantatsiyasini rad etishda noinvaziv tashxis uchun siydik sitotoksik molekulyar markerlar. Transplant xalqaro: Organ transplantatsiyasi bo'yicha Evropa jamiyatining rasmiy jurnali. 2006; 19(9):759–68. https://doi.org/10. 1111/j.1432-2277.2006.00351.x PMID: 16918537.

44. Yang JYC, Verleden SE, Zarinsefat A, Vanaudenaerde BM, Vos R, Verleden GM va boshqalar. Bronxoalveolyar yuvishdan olingan hujayrasiz DNK va CXCL10 o'pka transplantatsiyasining omon qolishini taxmin qiladi. J Clin Med. 2019; 8(2). EPub 2019-02-20.

45. Faddoul G, Nadkarni GN, Bridges ND, Goebel J, Hricik DE, Formica R va boshqalar. Transplantatsiyadan keyingi dastlabki 2 yil ichida biomarkerlar tahlili va 5-Yillik buyrak transplantatsiyasi natijalari: organ transplantatsiyasidagi klinik sinovlar natijalari-17. Transplantatsiya. 2018; 102(4):673–80. EPub 2017/12/01.

46. ​​Hricik DE, Nickerson P, Formica RN, Poggio ED, Rush D, Newell KA va boshqalar. Buyrak transplantatsiyasi shikastlanishi uchun xavfni tabaqalashtiruvchi biomarker sifatida siydik CXCL9 ning ko'p markazli tekshiruvi. Amerika transplantatsiyasi jurnali: Amerika Transplantatsiya Jamiyati va Amerika Transplantatsiya Jarrohlari Jamiyatining rasmiy jurnali. 2013 yil; 13(10):2634–44. Epub 2013/08/24.

47. Kotsch K, Kunert K, Merk V, Reutzel-Selke A, Pascher A, Fritzsche F va boshqalar. Nol soatlik buyrak biopsiyalarida yangi belgilar transplantatsiya sifati va klinik natijani ko'rsatadi. Transplantatsiya. 2010; 90(9):958–65. EPub 2010/09/23. PMID: 20859252.