Urolitin A ning In vitro 2-da qoramol oositlariga qarishga qarshi ta'siri

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.8.Statistik tahlil

Embrion ishlab chiqarish va sifat seanslari ma'lumotlari SAS (Statistical Analysis Systems, SAS Inst., Inc., Cary, NC, AQSH) dan Proc Glimmix yordamida ikkilik taqsimot va logitni bog'lanish funktsiyalari sifatida tahlil qildi. Umumlashtirilgan chiziqli aralash model davolashni (UA dozalari, qarish effekti va ayol yoshi va ularning o'zaro ta'siri) sobit ta'sir sifatida va tasodifiy ta'sir sifatida takrorlashni o'z ichiga oladi. Bundan tashqari, har bir davolash uchun vositalar hisoblab chiqildi va PDIFF testi yordamida guruhlar o'rtasidagi taqqoslashlar amalga oshirildi. JC-1 ma'lumotlari, mRNK transkript darajalari va mt-DNK nusxalari soni davolash (UA effekti, qarish effekti va/yoki ayol yoshi va ularning o'zaro ta'siri) o'z ichiga olgan modelga ega SAS Proc Mixed yordamida tahlil qilindi. qat'iy ta'sir sifatida. Sessiya tasodifiy ta'sir sifatida qabul qilindi. Xromosoma konfiguratsiyasi ma'lumotlari aniq Fisher testidan foydalangan holda guruhlar o'rtasida 2 x 2 tasodifiy jadvalda taqqoslandi. Natijalarni tahlil qilish p<>

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

3. Natijalar

3.1.Oldingi tahlil-doza-javob tadqiqoti

Pishirish muhiti bilan to'ldirilgan UA ning doza-javob tadqiqi davomida kuzatilgan oosit yetilish holati 1-rasmda ko'rsatilgan. 50 UA guruhi (38,9±0,5 foiz) Nazorat (10.8±{{ bilan solishtirganda, AI/TI fazasi holatida oositlarning yuqori darajasini aniqladi. 15}},5 foiz ,P=0.03)va 10 UA(0.0±0.{{ 45}} foiz ,p=0.0006) guruhlar. Bu bosqichda 25 UA (17,2±0,5 foiz,p=0,05)guruhdagiga nisbatan yuqori ko‘rsatkich. 10 UA guruhi ham aniqlandi. Bundan tashqari, 50 UA guruhi va 1 UA (14,3±2,0 foiz ,p=0,08) o'rtasida tendentsiya aniqlandi. Eng yuqori doza ham zararli ta'sir ko'rsatdi va Metafaz-IIda tasniflangan oositlar sonini kamaytirdi. (MII) bosqichi (50 UA,44,4 ±2,0 foiz) nazorat (86.5±7,0 foiz,p=0,003),1UA(82,1±2,5 foiz,p{{) bilan solishtirganda 53}}.01), 10 UA(89,3±6,5 foiz ,p=0,002)va 25UA(82,8±9,0 foiz,p=0.01)guruhlar. Qolgan guruhlar orasida farq kuzatilmadi. oositlarning yetilish bosqichlari. GV va CCl yetilish fazalari 1-rasmda ko'rsatilmagan, chunki bu toifalarda oositlar baholanmagan.

Doza-javob testi UA kontsentratsiyasining parchalanish va tuxumdan chiqqan embrion tezligiga sezilarli ta'sirini ko'rsatmadi. Biroq, 7-kunda ishlab chiqarilgan embrionlar tezligiga UA ning turli konsentratsiyasi ta'sir ko'rsatdi. 5{19}} UA guruhida (7,2±2,7 foiz) 7-kun embrionlar soni 1 UA (28,5±4,8 foiz,p=0,004),10 UA(20,4±4,0 foiz)ga nisbatan pastroq bo‘lgan. , p=0.03) va 25 UA(18,5±4,7 foiz ,p=0,05)guruhlar. Nazorat va 50 UA guruhlari o'rtasida sezilarli farqlar topilmasa ham, tendentsiya (p=0.06) aniqlandi. Bundan tashqari, 7-kun embrion tezligi (p =0.07) nazorat bilan solishtirganda 1 UA dozasi qo'shilgandan keyin yuqoriroq bo'ladi. Bundan tashqari, 1 UA guruhi nazorat (34,6 foiz, n=10) va 10 UA (26,8) bilan solishtirganda a'lo/yaxshi embrion sifati sonini (1-darajali embrionlarning 68,9 foizi, n=20) ikki baravar oshirdi. foiz ,n=10). Yuqori dozalarda 1-darajali embrionlarning kam soni olindi: 25UAgroup (15,4 foiz ,n=4) va 50UA (35,4 foiz ,n=3). Yuqorida aytib o'tilgan natijalarga asoslanib, quyidagi tadqiqotlarni davom ettirish uchun 1 uM UA tanlangan.

3.2.Tajriba 1——Ootsitlar sifati va qarigan va fiziologik yetuk tuxum hujayralarining rivojlanish salohiyati

3.2.1.Yadroning yetilishi

Biz UA qo'shimchasining prepubertal va kattalar urg'ochilaridan to'plangan keksa va fiziologik jihatdan etuk oositlarning xromosoma etilish holatiga ta'sirini o'rgandik. UA ta'siridan qat'i nazar, oositlarning qarishi va ayol yoshi kamolotga sezilarli darajada zararli ta'sir ko'rsatdi. MII fazasining yuqori darajasi nazorat oositlarda keksalarga nisbatan aniqlandi (22 soat=93,2±5,4 foizga nisbatan 30soat=77,6±4,1 foiz, p {{11) }}.02). Bundan tashqari, AI/TI fazasida (22 soat=3,4±0,5 foizga nisbatan 3{43}}soatga nisbatan ko'proq oositlarga ega bo'lgan keksa gametalar va prepubertal ayollarda kamolotning kechikishi aniqlandi. =17.9±{47}}.6 foiz, p=0.01 va balogʻatga yetmaganlarga nisbatan=21.1±1.1 foiz=6.8±0.7 foiz p =0.03).Bundan tashqari, 30 soatlik IVMdan keyin degeneratsiyalangan oositlar soni 22 soatdan keyingi bilan solishtirganda aniqlandi (7,1 ± 1,39 foizga nisbatan 4,1 ± 0,89 foiz, p =0.02) . Ayol yoshi va UA qo'shimchasi degeneratsiyalangan oositlar soniga to'sqinlik qilmadi (p 0,05).

Ham in vitro qarish, ham etuklik muhitiga UA qo'shilishi prepubertal va kattalar ayollarda oositlarning xromosoma konfiguratsiyasiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi (p.<0.05, figure="" 2).="" on="" the="" al/ti="" phase="" of="" the="" maturation="" status,="" higher="" rates="" of="" oocytes="" were="" found="" in="" this="" stage="" in="" the="" control="" aged="" 30="" h="" prepubertal="" group="" (46.7±0.5%)="" when="" compared="" to="" control="" prepubertal="" (0.0±0.0%,p="0.05)" and="" ua="" aged="" 30h="" prepubertal="" (0.0="" ±0.0%,p="0.02),and" both="" adult="" control="" (5.6±0.5%,p="0.01" and="" ua="" adult,0.0±0.0%,="" p="0.0002)and" control="" aged="" 30h="" adult="" (9.1±10%,p="0.02)groups." a="" trend="" was="" also="" identified="" between="" ua="" adults="" and="" ua="" aged="" 30="" h="" adult="" (p="">

To'liq yadro kamolotiga to'g'ri keladigan MII fazasiga kelsak, guruhlar o'rtasida ham sezilarli farqlar aniqlandi (2-rasm). 3{5}} soatlik prepubertal (53,3±2,0 foiz) nazorat yoshidagi (10{{2{) bilan solishtirganda, MII bosqichida oositlarning pastroq darajasi aniqlandi. {27}}}}.0±1,5 foiz ,p=0,05), UA 30 soatlik prepubertal (100,0±2,5 foiz, p=0,02) va UA kattalar (100,0) ±10,5 foiz ,p=0.0002) va 30 yoshli (86.0±5,5 foiz p =0.056) nazorat guruhlari. Bundan tashqari, UA kattalar guruhida 30 soatlik kattalar (86) 30 soatlik kattalar (76,2±11,3 foiz, p=0.01) bilan solishtirganda, etuk oositlar (MII) yuqoriroq bo'lgan. 0±5,5 foiz, p=0,08) va nazorat kattalar (83,3±4,5 foiz, p=0,057).

Oosit kamolotining qolgan bosqichlari o'rtasida farqlar kuzatilmadi.flavonoidlar,Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, UA qo'shimchasi qarish jarayoniga duchor bo'lgan oositlarda, ayniqsa, prepubertal ayollarda in vitro kamolotning rivojlanishini yaxshiladi. Shunday qilib, UA ning qarishga qarshi muhim ta'siri aniqlandi.

3.2.2.Mitoxondriyal membrana salohiyati

Ayol yoshidagi oositlarda mitoxondriyal disfunktsiyaning ishtirokini va UA va ona yoshining ta'sirini tahlil qilish uchun turli guruhlardagi oositlarda mitoxondriyal membrana potentsiali (MMP) baholandi.

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Ayol yoshi va UA ta'siridan qat'i nazar, oositlarning qarishi o'lchangan qizil va yashil floresans nisbati sifatida baholangan MMPga sezilarli zararli ta'sir ko'rsatdi (22 soatlik nisbat =0, 54±1,8 foizga nisbatan 30hratio{{6} },47±1,5 foiz ,p=0,002).

Ayol yoshi, qarish ta'siri va kamolot davrida UA qo'shilishining kombinatsiyasi (p{0}}.{{10}}07) MMPga sezilarli ta'sir ko'rsatdi. (3-rasm). 3-rasmda kuzatilganidek, oositlar 22 soat davomida etuk bo'lgan UA prepubertal (nisbat=0.55±0.04) va UA kattalar (nisbat=0.63±0.04) guruhlarida MMPning yuqori ko'rsatkichlari olingan. , 30 soatlik kattalar (nisbati=0,45±0,04,p{18}},04 va p=0,0007,mos ravishda) va 30 soatlik kattalar (nisbat{ {23}}.45±0.03,p=0.03 va p=0.0003, mos ravishda) guruhlar.hesperidin ishlatiladiBundan tashqari, JC{0}} agregat/monomerlar nisbatining sezilarli o'sishi, bu MMPning sezilarli o'sishini ko'rsatadi, UA kattalar guruhida nazorat kattalar bilan solishtirganda kuzatildi (nisbat =0,47). ±0.04,p =0.0031),Pubertallikni nazorat qilish(nisbat=0.52±0,04, p=0. 03), 30 soatlik kattalar (nisbat=0,48±0,03,p=0,003) va 30 soatlik kattalar (nisbat=0,47±0,03,p{{25) nazorati }}.001)guruhlar.Bundan tashqari, pubertatgacha boʻlgan UA va 30 soatlik pubertallik davridagi UA oʻrtasida ham tendentsiya aniqlandi (p=0.07).

Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, UA fiziologik etuklik davrida MMP ni yaxshilagan, ammo prepubertal va kattalar oositlarida qarishning salbiy ta'sirini bartaraf eta olmadi.

3.2.3.Embrion rivojlanishi

Embrionning rivojlanish potentsiali balog'atdan oldingi va kattalar urg'ochi ayollarning etuklik davridagi COClariga qo'llaniladigan turli xil muolajalar (qarish va UA qo'shimchalari) bilan olingan bo'linish, D7 va tuxumdan chiqqan embrion tezligi orqali baholandi. Ayol yoshi va UA ta'siridan qat'i nazar, oositlarning qarishi ajralishga sezilarli darajada zararli ta'sir ko'rsatdi (22 soat=79,5±1,7 foizga qarshi 30soat=68,6±2,0 foiz, p=0.0001) va D7 embrion tezligi (22 soat=18,6±1,9 foiz

vs.30h=12.1±1,7 foiz ,p=0.01).UA qo'shimchasi D7 embrion tezligini yaxshilashi ham ko'rsatildi (nazorat{ {8}}.1±1,5 foizga nisbatan UA=20.0±2,0 foiz ,p=0.0009).

Ayol yoshi, qarish ta'siri va kamolot davrida UA bilan qo'shilishi kombinatsiyasi sezilarli darajada (p {0}}.{{30}}1) embrion rivojlanishiga, xususan, yorilish va D7 embrion stavkalari (2-jadval). Katta yoshdagi oositlar 22 soat davomida UA qo'shilgan yoki qo'llanilmagan holda pishganida yuqori bo'linish tezligiga erishildi (kattalar=1,4±3,2 foiz va UA kattalar=80 nazorat qilinadi. 9±3,4 foiz) va prepubertal oositlar 22 soat davomida UA qo'shimchasi (UA prepubertal=80,6±3,2 foiz), 3 yoshli UA bilan solishtirganda (66,5±4,2 foiz, p dan kam) yoki 0,01 ga teng), 30 soatlik pubertal (66,9 ± 3,9 foiz , p 0,02 dan kam yoki teng) va 30 soatlik pubertal (67,2 ± 4,0 foiz, p 0,01 dan kam yoki teng) guruhlar (2-jadval). Nazorat qiluvchi kattalar va 30 soatlik kattalar guruhlari o'rtasida tendentsiya (p=0.09) ham aniqlandi.

Another parameter that was significantly (p=0.01) influenced by the combination of the female age, the supplementation with UA, and COCs aging was the rate of embryos produced at day 7(Table 2). Exceptions were made for the UA prepubertal and UA 30 h prepubertal groups, the UA adult group presented the highest rates of the embryo at day7 (26.8±4.3%,p≤0.05). Moreover, lower D7 embryo rates were produced from aged oocytes from both adult and prepubertal females without the supplementation of UA (control aged 30hprepubertal=7.7±2.6% and control aged 30h adult=7.7±2.6%)compared to those that were supplemented with UA, respectively (UA aged 30 h prepubertal=18.9±4.0%,p=0.03 and UA aged 30 h adult=15.9±4.0%,p=0.09). The supplementation of UA to the maturation medium did not significantly (p>0.05)1,2 va 3-darajali ishlab chiqarilgan embrionlarning sifat ko'rsatkichlariga, shuningdek, qarish ta'siri yoki o'rganilgan barcha ta'sirlar birgalikda ta'sir ko'rsatmaydi (3-jadval). Biroq, 22 soat davomida pishgan oositlarga UA qo'shilganda hosil bo'lgan a'lo/yaxshi sifatdagi embrionlar soni ikki baravar ko'paydi (3-jadval).

3.3. Tajriba 2

3.3.1.Genlarni ifodalash darajalari

UA ta'sirini va Nrf2 signalizatsiya yo'liga ona yoshi ta'sirini o'rganish uchun prepubertal va katta yoshli sigirlardan GCs madaniyatida NFE2L2 va NQO1 gen ifoda darajalari tahlili RT-qPCR tomonidan baholandi. Boshqa o'rganilgan omillardan qat'i nazar, ayol yoshi NFE2L2 genining ifodalanishiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi, bu prepubertal ayollarning GKlarida NFE2L2 transkriptlarining yuqori darajasida aks ettirilgan (mRNK darajasi prepubertal=0.00015 Kattalarga nisbatan ±0,0012 foiz=0,00011±0,0012, p=0,048).

The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly(p>0.05) NFE2L2, NQOl va mt-ND5 genlarining gen ifoda darajalariga ta'sir qiladi. 4-rasm UA bilan davolash qilingan prepubertal va kattalar GKlarida tegishli nazorat bilan normallashtirilgan ushbu genlarning ifoda darajalarini ko'rsatadi.

3.3.2.mt-DNK nusxasi raqami

Analysis of mt-ND5 DNA content in GC culture from prepubertal and adult cows was assessed by qPCR. The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly (p>0.05) mt-ND5 genining nusxa soniga ta'sir qiladi.yo'qolgan imperiya cistanche5-rasmda ushbu genning UA bilan davolash qilingan prepubertal va kattalar GKlarida tegishli nazorat bilan normallashtirilgan nusxalar soni ko'rsatilgan.

4. Munozara

So'nggi o'n yilliklarda chorvachilikda ART qo'llanilishiga talab ortib borayotgani kuzatildi [8,46,47]. Bundan tashqari, keksa onalik yoshi bilan bog'liq bo'lgan tug'ishning kechikishi ayollarni ART ga murojaat qilishiga olib keladigan asosiy omilga aylandi [5]. Oosit sifati muvaffaqiyatli kontseptsiyaning paydo bo'lishi uchun juda muhimdir va ayol jinsiy hujayralarining qarishi ART muvaffaqiyati uchun asosiy tashvishdir. Ushbu sohada erishilgan yutuqlarga qaramay, qo'llaniladigan texnologiyalar hali tug'ilishni tiklay olmaydi, biologik soatni qaytaradi [7]. Ushbu ishda qoramol oositlarida yoshga bog'liq bepushtlikni o'rganish modeli ishlab chiqilgan. Inson homiladorligi, follikulyar va endokrin hodisalar bilan o'xshashliklari tufayli [48,49] bu model inson oositlarida ushbu tadqiqotlarga xalaqit beradigan axloqiy va jismoniy cheklovlardan qochib, inson tadqiqotlari uchun ham foydali bo'lishi mumkin. Ayol jinsiy hujayralarining qarishi bo'yicha bizning modelimiz juda samarali va reproduktiv qarish va tug'ilishning buzilishi bilan bog'liq turli muammolarni o'rganish uchun mos ekanligini isbotladi, hozirda dunyodagi eng muhim muammolardan biri. Bundan tashqari, hozirgi ishda o'rganilganidek, ayol jinsiy hujayralarining qarishi natijasida yuzaga keladigan bepushtlikning oldini olish potentsialiga ega bo'lgan yangi antioksidant terapiyani izlash ham bir xil darajada muhimdir.

Taqdim etilgan natijalar birinchi marta UA ning ART natijalariga foydali ta'siri haqida xabar berdi. UA oziq-ovqat metaboliti bo'lib, yoshga bog'liq disfunktsional mitoxondriyalarning to'planishini oldini olishga qodir, ularning mitofagiyasini va hujayralarning umrini uzaytiradi [28]. UA ilgari hech qachon sigir naslida sinovdan o'tkazilmaganligi sababli, uning saratonga qarshi, yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'sirini ko'rsatadigan turli hujayra liniyalarida muvaffaqiyatli qo'llanilgan dozalar ishlatilgan [28,35,39]. Bizning tadqiqotimizda avvalgi doza javob tahlili o'tkazildi va 1 uM UA kontsentratsiyasi eng istiqbolli deb aniq belgilandi. Bundan tashqari, zararli ta'sir yuqori dozalarda, ayniqsa 50 uM UA dozasida namoyon bo'ldi, bu MIIgacha yadro kamolotining rivojlanishiga zarar etkazdi. Bu ta'sir embrion rivojlanishining buzilishida aks etdi. Shunga ko'ra, Liu va uning hamkasblari (2019) 50 uM UA konsentratsiyasida hujayra hayotiyligi va inson terisi fibroblastlarining ko'payishi sezilarli darajada kamayganini payqashdi. Ularning ta'kidlashicha, yuqori UA dozalari hujayra hayotiyligining pasayishiga olib keladi, G / M hujayra siklida hibsga olingan hujayralar sonini oshiradi [35]. Aksincha, kamolotga etish muhitiga 1 mM UA qo'shilgandan so'ng, boshqa dozalarga nisbatan embrionlarning yuqori ko'rsatkichlari 7-kunida hosil bo'ldi. Ayollarning ko'payishida UA ta'sirining potentsial mexanizmlarini qo'shimcha o'rganish uchun oositlarning qarishi va turli yoshdagi ayollarni oosit donorlari sifatida qo'llash davrida tadqiqot o'tkazildi. Yamamoto va uning hamkasblari (2010) qari sigirlarning urug'lanish darajasining yoshga bog'liq pasayishi haqida xabar berishdi, bu oositlar pishib etish davrida birinchi meiotik bo'linishni davom ettirishga ko'proq moyil bo'lganligini va ko'pincha oosit yig'ishda meiotik kamolotni boshlaganligini ko'rsatdi [50] Bu ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, keksa sigirlardagi oositlar tezroq yadroviy etuklikka erishgan va oosit qobiliyati pastligi sababli MII fazaga yosh urg'ochilardagi oositlarga qaraganda tezroq erishgan [51]. Shunga ko'ra, bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatadiki, ayol donorlarning yoshi va oositlarning qarishi jarayoni pishib etish jarayonida oositlarning xromosoma konfiguratsiyasiga sezilarli ta'sir qiladi. Haqiqatan ham, prepubertal sigirlardagi oositlar kechikish bosqichlarining yuqori ko'rsatkichini ko'rsatdi, masalan, Al/TI fazalari (prepubertal =21.1 foizga nisbatan kattalar =6.8 foiz ), yadroviy rivojlanish sekinroq ekanligini ko'rsatdi. etuklik, bu Soto-Heras va uning hamkasblari (2018) tomonidan taklif qilinganidek, past oosit kompetentsiyasiga bog'liq bo'lishi mumkin. Keksa oositlar, shuningdek, fiziologik davrga (93,2 foiz) nisbatan 30 soatlik davrda (7,6 foiz) MII fazasiga yetgan oositlar sonining pastroq bo'ladi. Bundan tashqari, fiziologik etuklik jarayonida UA bilan davolashning ijobiy ta'siri, shuningdek, prepubertal va kattalar ayollarda qarishga qarshi ta'siri aniqlangan.

Bizning topilmalarimiz bilan kelishilgan holda, tadqiqot shuni ko'rsatdiki, oitro etukligi davrida melatonin qo'shilishi sigir COClarida meiozning tiklanishini rag'batlantirishi mumkin, gormonlarsiz o'stirilgan nazorat oositlari esa sekinroq meiozning tiklanish tezligiga ega edi [52]. Aksincha, quercetin, vitamin C yoki resveratrol kabi boshqa antioksidant moddalar bilan qo'shilganda, hatto ROS darajasining pasayishi yoki antioksidant fermentativ darajalarining ortishi kuzatilgan bo'lsa ham, yadroviy etilish tezligiga hech qanday ta'sir ko'rsatmadi [53,54].mikronlashtirilgan tozalangan flavonoid fraktsiyasi 1000 mg qo'llaniladiAksincha, bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, UA oositlarni keksa yoshdagi va prepubertal ayollarda qarish ta'siridan qutqarishi mumkin, bu esa kam malakaga ega va kamolotga erishish tezligini oshiradi.

Oosit sifatiga ta'sir qiluvchi kambag'al tug'ilish natijalarining asosiy omillaridan biri mitoxondrial funktsiyalar bilan bog'liq bo'lib, ular onaning yoshi va ovulyatsiyadan keyingi qarishi bilan buziladi [21,55]. MMP turli modellarda keng miqyosda o'rganilib, ovulyatsiyadan keyin ham, onaning qarishidan keyin ham keksa gametalar mitoxondrial funktsiyani yo'qotishini aniqladi [56]. Binobarin, MMP yo'qolishi oosit va embrion rivojlanishiga salbiy ta'sir ko'rsatdi [26,57]. Ushbu topilmalarga ko'ra, bizning tadqiqotimizda prepubertal va katta yoshli sigirlarning keksa oositlarida kamaygan MMP nisbati aniqlandi. Bundan tashqari, madaniy muhitga UA qo'shilishi 22 soat davomida etuk bo'lgan prepubertal va kattalar oositlarining MMP ko'payishiga olib keldi, bu esa yuqori bo'linish tezligida aks etadi. Ushbu ma'lumotlar Liang va hamkasblari (2017) tomonidan topilgan natijalarga mos keladi, ular sigir tuxum hujayralari 22 soat davomida melatonin bilan to'ldirilganda MMP kuchayganini kuzatgan [26]. Shu bilan birga, biz UA bilan to'ldirilgan keksa oositlarda MMP ning kamayishini aniqladik, bu UA MMPda qarishning salbiy ta'sirini bartaraf eta olmasligini ko'rsatdi. Qarigan oositlarni antioksidant birikmalar bilan to'ldirgandan so'ng, MMP bo'yicha nomuvofiq natijalar kuzatildi. Darhaqiqat, bir nechta mualliflar melatonin [26] va laminarin [21] bilan qo'shilgandan so'ng oositlarda MMP ning ko'proq darajasini qayd etishgan, boshqalari esa aksincha, L-karnitin [58] va melatonin [38] bilan davolash qilingan keksa oositlarda MMP kamayganini kuzatgan. Bundan tashqari, Ryu va uning hamkasblari (2016) UA [28] bilan yetishtirilgan sichqon miyoblastlarida MMP kamayganini ko'rsatdilar. Bizning natijalarimizga kelsak, oosit mitoxondriyalarida UA ta'sir qilish mexanizmi haqidagi bilimlarni chuqurlashtirish va keksa va fiziologik etuk oositlarga aniqlangan differentsial ta'sirlarni tushuntirish uchun keyingi tadqiqotlarni o'tkazish kerak.

Oositlarning ichki sifati keyingi embrion rivojlanishining asosiy hal qiluvchi omili sifatida keng tarqalgan. Yig'ilgan dalillar shuni ko'rsatdiki, bir nechta hujayrali va molekulyar anormalliklar uzoq in vitro etilish davrlarida, shuningdek, ovulyatsiyadan keyingi qarish davrida sodir bo'ladi [57]. Bundan tashqari, bu anomaliyalar embrion ishlab chiqarishda aks etadigan oosit sifatiga tegishli ta'sir ko'rsatishi mumkin [52]. UA qarishga qarshi birikma sifatida harakat qilishi va oosit sifatini yaxshilash, oositlarning qarishini kechiktirishini ko'rsatish uchun biz in vitro urug'lantirilgandan keyin keksa oositlarning rivojlanish qobiliyatini o'rganib chiqdik. Bizning tadqiqotimizda gametalar qarishining ajralish va 7-kun embrion ishlab chiqarish tezligiga sezilarli (p 0.01 dan kam yoki unga teng) zararli ta'siri kuzatildi. Shunga ko'ra, bir qancha mualliflar keksa urg'ochilarning reproduktiv qobiliyatining yoshga bog'liq pasayishi, bu tug'ilishning pastligi va embrion sifatining pastligida aks etadi [44,55]. Boshqa tomondan, keksa oositlarni qutqarish uchun boshqa antioksidant molekulalarni sinovdan o'tkazish bo'yicha o'tkazilgan oldingi tadqiqotlar, bu birikmalarning bir nechtasining in vitro kamolotga etish davrida turli turdagi qoramol [58], cho'chqa [58], cho'chqa [58], cho'chqa [58], cho'chqa [58], cho'chqa go'shti kabi keksa urg'ochilarning embrion rivojlanishiga foydali ta'siri haqida xabar berdi. 38] va sichqonlar [6]. Masalan, L-karnitin sigirlarning ootsitlarida sinovdan o'tkazildi va olingan parchalanish tezligida sezilarli farqlar topilmadi. Biroq, L-karnitinsiz keksa oositlar bilan solishtirganda blastotsist bosqichiga qadar rivojlangan zigotalarning tezligi sezilarli darajada oshgani aniqlandi [59]Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, fiziologik etuklik davrida UA qo'shilishi prepubertal va kattalar urg'ochi ayollarda bo'linish tezligini yaxshilagan. UA yoshidagi oositlarning bo'linish tezligi nazorat yoshidagi oositlardan sezilarli darajada farq qilmasa ham, prepubertal va kattalar ayollaridagi UA yoshidagi oositlarda yuqori D7 embrion darajasi aniqlangan. Ushbu natijalar ilgari turli hujayra madaniyatlarida aniqlangan UA ning qarishga qarshi ta'siri [28,35] oositlar va embrionlar uchun amal qilishini ko'rsatdi. Oositlarning qarishi embrionning rivojlanishiga putur etkazadigan ko'p omilli jarayon bo'lib, qarigan oositlarning rivojlanish qobiliyatini tiklash ushbu tadqiqotda erishilgan muhim maqsaddir.

Bundan tashqari, biz embrion sifatining yoshga bog'liq yomonlashuvida UA ning oldini olish rolini ham baholadik. Ushbu tadqiqotda embrion sifat ko'rsatkichlarida sezilarli farqlar topilmagan bo'lsa-da, UA bilan to'ldirilgan oositlar davolanmaganlarga nisbatan ko'chiriladigan embrionlar sonini ko'paytirdi. Oldingi tadqiqot shuni ko'rsatdiki, L-karnitin bilan davolash ROS darajasini pasaytirish va yuqori darajadagi glutation va boshqa antioksidant fermentlarni kamaytirish orqali qarigan qoramol oositlaridan hosil bo'lgan embrionlarning sifatini yaxshilashi mumkin [58]. Bu natijalar va bizniki o'rtasidagi farqlar embrion sifatini baholash uchun qo'llaniladigan turli usullar bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Embrion sifatini morfologik baholash kuzatuvchining tajribasiga bog'liq bo'lgan sub'ektiv usul bo'lib qolmoqda. Kelajakda embrion sifatini to'g'ri baholash uchun boshqa usullardan foydalangan holda ko'proq tadqiqotlar o'tkazilishi kerak.

Ko'pchilikka ma'lumki, oksidlovchi stress tug'ilishning yoshga bog'liq pasayishida hal qiluvchi rol o'ynaydi. Oksidlanish stressi oosit kamolotining samaradorligi va oositlar sifatining yomonlashishiga olib keladigan asosiy omillardan biri bo'lib, embrionning keyingi rivojlanishiga putur etkazadi [11]. Gameta va somatik hujayralar o'rtasidagi hujayralararo aloqa yuqori sifatli oositlarning to'g'ri rivojlanishi uchun juda muhimdir. Keksa tuxumdonlarning mikro-muhitidagi o'zgarishlar, masalan, antioksidant fermentativ faollikning pasayishi, bu ROSni tozalash samaradorligining pasayishiga olib kelishi haqida xabar berilgan.oteflavonoidBundan tashqari, yosh va katta yoshdagi ayollarning GKlari antioksidant faollik va onaning yoshi bilan bog'liq bo'lgan farqli ravishda ifodalangan genlarga ega ekanligi ko'rsatildi [2,13]. Shunday qilib, oositlarni qarishdan qutqarish va bepushtlik muammolarini bartaraf etish uchun topilgan mexanizmlar oksidlovchi stressni boshqarishi katta ahamiyatga ega. Nrf2-Keapl yo'li oksidlovchi stressning zararli ta'siriga dosh berish va antioksidant xususiyatlarga ega bo'lishi tufayli keng o'rganilgan [60]Sigir GKlarida Nrf2 signalizatsiya yo'lining faollashuvini qo'shimcha o'rganish uchun biz buni baholadik. NFE2L2 ning mRNK ifoda darajasi va uning quyi oqimi antioksidanti (NQO1). Natijalarimiz ayol yoshining NFE2L2 transkriptlari darajasiga sezilarli ta'sirini ko'rsatdi, bu yosh bilan kamayadi. Haqiqatan ham, prepubertal sigirlarda kattalarnikiga qaraganda mRNKning ko'proq ifoda darajalari kuzatildi. Bu 22 va 49 yoshdagi bola tug'adigan yosh sichqonlar va ayollarning tuxumdon to'qimalarida Nrf2 oqsili va mRNKning yuqori darajada ifodalanganligi haqidagi oldingi tadqiqotlarga mos keladi, keksa sichqonlar va ayollarda esa pastroq ifoda topilgan. Nrf2 ifodasining kamayishi keksa ayollarning reproduktiv qobiliyatining pasayishiga olib kelishi mumkin va uning nazorati tuxumdonlarning qarishini kechiktirishda muhim ta'sir ko'rsatishi mumkin [15,61]. Bundan tashqari, Akino va uning hamkasblari (2019) dimetil fumaratni kiritish orqali Nrf{18}}Keapl yo‘lining faollashishi ROS darajasini pasaytirishi va kechikib qolgan bepushtlikka olib kelishi mumkinligini ko‘rsatdi [18]. UA ning qarigan inson terisi fibroblastlarida ROSni kamaytirishga ta'siri bo'yicha shunga o'xshash natijalar haqida xabar berilgan. Ushbu hujayralar UA bilan davolash qilinganida, SOD1, NQ01, GCLC va HMOX1 kabi Nrf2 maqsadli genlarning mRNK ifodasida sezilarli o'sish kuzatildi. [35] .Bizning tadqiqotimizda GCdagi NFE2L2 va NQO1 genlarining ifoda darajasi UA qo'shimchasidan sezilarli darajada ta'sir qilmaganini kuzatdik. Shu bilan birga, ROSning kamayishi va ishlab chiqarilgan blastotsistning keyingi yaxshilanishi, shuningdek, keksa oositlarda yuqorida qayd etilgan genlarning mRNK ifodasiga UA ta'sirini tasdiqlash uchun keyingi tadqiqotlar o'tkazilishi kerak.

Mitoxondriyal DNKning (mt-DNK) [25,57] zararlanishidan tashqari, mitoxondriyal gen ekspressiyasining buzilishi ham yosh bilan mitoxondriyal disfunktsiyaga hissa qo'shishi ko'rsatilgan. Chjan va uning hamkasblari (2019) OXPHOSda ishtirok etadigan ba'zi genlar, ya'ni mt-ND2, mt-ND3, mt-ND4, mt-ND4L va mt-ND5, keksa sichqonlarning oositlarining GV bosqichida sezilarli darajada pasayganligini xabar qilishdi. yosh sichqonlar bilan solishtirganda [62]. Bizning tadqiqotimizda mt-ND5 mRNK ifodasida, prepubertal va katta yoshli sigirlardan olingan GClar o'rtasida sezilarli farq topilmadi. Bundan tashqari, biz mt-DNK nusxasi raqamini ham baholadik, chunki GKdagi mt-DNK tarkibi oosit sifati va embrion rivojlanishi bilan ijobiy bog'liq edi [63,64]. Bizning tadqiqotimizda prepubertal va kattalar sigirlarining GCdagi mt-DNK nusxalari soni o'rtasida sezilarli farqlar aniqlanmagan bo'lsa-da yoki UA bilan davolash qilinganida, biz davolanmagan guruhlarga nisbatan blastotsist bosqichiga qadar rivojlangan oositlarning ko'pligini kuzatdik. Bundan tashqari, Ryu va hamkasblari (2016) mt-DNK tarkibi va nafas olish komplekslaridagi oqsil darajasi UA [28] bilan to'ldirilgan sichqon miyoblastlarida o'zgarmaganligini xabar qilishdi. Ayollarning tug'ilishini yaxshilashda UA ta'sir qilish mexanizmini ochib berish uchun keyingi tadqiqotlar o'tkazilishi kerak.

5. Xulosalar

Ushbu tadqiqotda olingan natijalar oositlarning qarishi uning rivojlanish qobiliyatiga zararli ta'sirini tasdiqladi. Bundan tashqari, ayol jinsiy hujayralarining qarishi uchun bizning modelimiz reproduktiv qarish va natijada tug'ilishning buzilishi bilan bog'liq turli muammolarni o'rganish uchun juda samarali va foydali bo'ldi. Bundan tashqari, keksa oositlarning pishib etish jarayonida UA qo'shilishi kamolotga erishish tezligini va embrionlarni ishlab chiqarishni yaxshilaydi. Shu sababli, keksa gametalarni qutqarishda UA ning qarishga qarshi ta'siri birinchi marta aniqlandi, bu blastotsist rivojlanishini yaxshilaydi, bu esa qabul qiluvchi urg'ochilarga o'tkazish uchun embrionlar sonining ko'payishiga olib keladi. UA ning fiziologik kamolotga, MMP va embrion rivojlanishiga ijobiy ta'siri ham aniqlandi. Xulosa qilib aytganda, UA davolash gametalarning qarishini oldini olish yoki kechiktirish va ARTda keyingi blastotsist shakllanishi va tug'ilish natijalarini yaxshilash uchun yangi terapevtik yondashuvni ta'minlaydi.

Ushbu maqola Hayvonlar 2021, 11, 2048 dan olingan. https://doi.org/10.3390/ani11072048 https://www.mdpi.com/journal/animals