Cistanche glikozidlari MiRNA‑483‑3p ni tartibga solish orqali prostata bezining benign giperplaziyasida prostata fibrozini susaytiradi.

 

ANTRACT

Maqsad:Prostata bezining yaxshi giperplaziyasida (BPH) prostata fibroziga sistanx glikozidlarining meliorativ ta'sirini va mikroRNK (miRNK) ni tartibga solish mexanizmini o'rganish -483-3p.

Usullari:Erkak sichqonlar tasodifiy ravishda beshta guruhga ajratildi: normal nazorat, BPH modeli nazorati, finasterid, sistanx glikozidlari va cistanx glikozidlari + miRNA‑483‑3p antagonisti. BPH modeli ikki tomonlama orxiektomiya, so'ngra testosteron propionatning har kuni teri ostiga kiritilishi bilan o'rnatildi. 30 kundan so'ng prostata kollagenining cho'kishi Masson trikromi va Sirius Qizil bo'yalishi bilan baholandi va gidroksiprolin (Hyp) miqdori o'lchandi. Transformatsiya qiluvchi o'sish omili-1 (TGF-1), mitogen-faollashtirilgan protein kinaz 2 (MK2) va mitogen-faollashtirilgan protein kinaz 6 (MKK6), shuningdek, miRNA-483-3p darajalarining prostata bezining mRNK darajalari miqdoriy PCR (real vaqt) bilan aniqlandi. TGF‑ 1, MK2, fosforlangan MK2 (p‑MK2), MKK6 va fosforlangan MKK6 (p‑MKK6) ning prostata oqsili darajalari Western blotting yordamida baholandi. MiRNA‑483‑3p ning MK2 ga to'g'ridan-to'g'ri bog'lanishi lusiferaza reportyor tahlili yordamida tekshirildi.

Natijalar:Oddiy nazorat guruhiga nisbatan, BPH modeli nazorat guruhi prostatik kollagen cho'kmasini sezilarli darajada oshirdi; TGF‑ 1, MK2 va MKK6 mRNK darajasining oshishi; va TGF‑ 1, p‑MK2 va p‑MKK6 ning yuqori protein darajalari (barchasi P <0,01), miRNA‑483‑3p darajalari esa sezilarli darajada kamaydi (P <0,01). BPH modelini nazorat qilish guruhi bilan solishtirganda, sistanx glikozidlari miRNA‑483‑3p ni yuqori tartibga soldi, TGF‑1, MK2 va MKK6 ning mRNK darajasini pasaytirdi, TGF‑1, p‑MK2 va p‑evigened MKK6 propozitsiyasi, kollektiv propozitsiyasini pasaytirdi. Ta'kidlash joizki, miRNA‑483‑3p antagomirini sistanx glikozidlari bilan birgalikda qo‘llash miRNA‑483‑3p ni sezilarli darajada kamaytirdi, kollagen cho‘kishini ko‘paytirdi va TGF‑1, MK2 va MKK6 mRNK darajalarini, shuningdek, TGF‑1, MK2 va MKK6, shuningdek, p‑F, p‑F, T2‑F protein darajasini oshirdi. p‑MKK6 faqat cistanche glikozidlari bilan solishtirganda (barchasi P <0,01). Lusiferaza tahlili miRNA‑483‑3p MK2 ni bevosita nishonga olishini ko‘rsatdi.

Xulosa: Cistanche glikozidlari miRNA‑483‑3p ni tartibga solish va MK2 signalizatsiyasini inhibe qilish orqali BPHda prostatik fibrozni susaytiradi.

Kalit so'zlar: Cistanche glikozidlari; miRNK‑483‑3p; prostata;fibroz; yaxshi xulqli prostata giperplaziyasi

 

 

 

Yuqori sifatli Cistanche Deserticola

BPH davolash uchun o'tlar haqida ko'proq ma'lumot

 

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:
Email:wallence.suen@wecistanche.com
 

 

Kirish

Yaxshi prostata giperplaziyasi (BPH)Bu o'rta va keksa yoshdagi erkaklarda keng tarqalgan kasallik bo'lib, yoshi bilan tarqaladi. Hisobotlar shuni ko'rsatadiki, 50 yoshdan oshgan erkaklarda BPH tarqalishi 50% dan oshadi. BPH va u bilan bog'liq bo'lgan pastki siydik yo'llarining belgilari (LUTS) hayot sifati va uzoq muddatli sog'liqni saqlash xarajatlariga katta yuklaydi. Klinik jihatdan 5 -reduktaza ingibitorlari va ‑adrenergik retseptorlari blokerlari farmakoterapiya tavsiya etiladi. Biroq, ‑blokerlar prostata hajmini kamaytirmaydi va bemorlarning 25–30 foizida reduktaza ingibitorlari bilan LUTSda yaxshilanish kuzatilmaydi; bundan tashqari, 5-7% hatto yomonlashishi mumkin. Prostata bezining transuretral rezeksiyasi bilan solishtirganda tulium lazerli prostatektomiya kabi jarrohlik yangiliklari tobora ko'proq qo'llanilsa-da, operatsiyadan keyingi LUTS hali ham 23% dan oshadi.

Hozirgi dalillar BPHdagi uchta asosiy patobiologik jarayonni ko'rsatadi: bezlar giperplaziyasi, silliq mushaklarning qisqarishi va prostata fibrozisi. Ushbu jarayonlar klinik rivojlanishni qo'zg'atish uchun mustaqil yoki sinergik tarzda harakat qiladi. BPH odatda (har doim bo'lmasa ham) LUTS bilan birga mavjud; fibroz, hujayradan tashqari matritsaning ortiqcha cho'kishi bilan tavsiflanadi, prostata ichidagi uretraning moslashuvchanligini buzadi va siydik obstruktsiyasiga yordam beradi. Shunga qaramay, ayniqsa organ fibroziga qaratilgan terapevtik imkoniyatlar cheklanganligicha qolmoqda.

Cistanche (Cistanche spp.) an'anaviy dorivor va ozuqaviy o'simlik hisoblanadi. Uning xarakterli feniletanoid glikozidlari (bu erda birgalikda sistanx glikozidlari deb ataladi, masalan, echinacoside va acteosid) mikroblarga qarshi, gipolipidemik, antiallergik, kardiotonik, antidiyabetik, o'smaga qarshi, neyroprotektiv, immunodulyar ta'sirlarni o'z ichiga olgan keng bioaktivlikni namoyish etadi. To'plangan dalillar buyrak, o'pka, yurak va jigar kabi organlarda ushbu glikozidlarning anti-fibrotik ta'sirini ko'rsatadi. Biroq, ularning prostata fibroziga ta'siri haqida xabar berilmagan. Ushbu tadqiqot sistanx glikozidlarining prostata fibroziga ta'sirini o'rganib chiqdi va hujayradan tashqari matritsani qayta qurish bilan bog'liq miRNA‑483‑3p/MK2 o'qiga e'tibor qaratib, asosiy mexanizmlarni o'rgandi.

Yuqori sifatli Cistanche Deserticola

 

Materiallar va usullar

Materiallar

 

miRNA‑483‑3p antagomir (kimyoviy modifikatsiyalangan): Shanghai GenePharma Co., Ltd.dan sotib olingan (To‘plam raqami: 12953).

Testosteron propionat in'ektsiyasi: Tianjin Jinyao Pharmaceutical Co., Ltd. (To'plam raqami: 150822).

Cistanche glikozidlari: Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (tozaligi 98% dan katta yoki unga teng, partiya raqami: M14062). Nutraceutical ishlab chiqaruvchilar uchun eslatma: material standartlashtirilgan feniletanoid glikozid fraktsiyasiga mos keladi; HPLC tarkibi bo'yicha spetsifikatsiyani ta'minlash (masalan, umumiy PEGLlar, echinacoside/acteosid).

Finasterid tabletkalari: MSD (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. (To'plam raqami: U011856; 5 mg / planshet).

Lusiferaza muxbiri tahlili to'plami (To'plam raqami: E2920) va psiCHECK‑2 vektori (to'plam raqami: C8021): Promega (AQSh).

qPCR aniqlash to'plami: KAPA Biosystems (To'plam raqami: KM4101).

Gidroksiprolin (Hyp) tahlil to'plami: Nankin Jiancheng bioengineering instituti (partiya raqami: 20190626).

TGF‑ 1, MK2 va MKK6 uchun primerlar Wuhan Tianyi Huiyuan Biotechnology Co., Ltd tomonidan sintez qilingan.

Yuqori sifatli Cistanche Deserticola

 

Hayvonlar

Etti haftalik o'ziga xos patogensiz (SPF) erkak C57BL/6 sichqonlari (22-24 g) Huazhong qishloq xo'jaligi universitetidan olingan (ishlab chiqarish litsenziyasi №: SCXK Hubei 2015-0019). Hayvonlar 23 ± 2 daraja, 50 ± 5% namlikda, 12 soat yorug'lik / 12 soat qorong'i tsikl ostida joylashtirildi.

 

Uskunalar

 

StepOnePlus real vaqtda PCR tizimi (Applied Biosystems, AQSH).

Luminoskan 5200110 mikroplatali luminometr (Thermo Fisher Scientific, AQSH).

Eksperimental dizayn va BPH modeli
1 haftalik iqlimlashtirishdan so'ng, sichqonlar tasodifiy ravishda besh guruhga (tasodifiy raqamlar jadvali) ajratildi (har bir guruh uchun n=6): normal nazorat, BPH modeli nazorati, finasterid, sistanx glikozidlari va sistanx glikozidlari + miRNA‑483‑3p antagomir. BPH modeli jarrohlik kastratsiya va 30 kun davomida 7,5 mg·kg⁻¹ miqdorida testosteron propionatning har kuni teri ostiga yuborilishi bilan qo'zg'atildi. Finasterid guruhi kuniga 1 mg·kg⁻¹ finasteridni og'iz orqali qabul qildi (0,5% CMC‑Nada eritilgan). Sistanx glikozidlari guruhi kuniga 100 mg·kg⁻¹ sistanx glikozidlarini og'iz orqali qabul qilishdi. Kombinatsiyalangan guruh ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga rioya qilgan holda kuniga 100 mg·kg⁻¹ og'iz sistanx glikozidlarini va miRNK‑483‑3p antagomirini dumli venaga har 5 kunda 10 mg·kg⁻¹ dozasida qabul qildi. Oddiy va BPH model nazorat guruhlari og'iz orqali 0,5% CMC-Na ning teng hajmini oldi.

30 kundan so'ng, sichqonlar natriy pentobarbital (80 mg·kg⁻¹) intraperitoneal in'ektsiyasi bilan behushlik qilindi va bachadon bo'yni dislokatsiyasi bilan evtanizatsiya qilindi. Prostata bezlari kesilgan; Massonning trixrom va Sirius Qizil bo'yashlari uchun qismlar o'rnatildi va ko'mildi va yangi to'qimalar qPCR, Western blotting va biokimyoviy tahlillar uchun qayta ishlandi. Hayvonlar uchun protseduralar Xubey provintsiyasining Laboratoriya hayvonlarini boshqarish qoidalariga (Operator malaka №: TY20190784) mos keladi.

Yuqori sifatli Cistanche Deserticola

 

Prostatik fibrozni baholash

Kollagen cho'kishi Sirius Red va Massonning trikromli bo'yalishi bilan baholandi. Prostata to'qimasidagi gip tarkibi to'plam ko'rsatmalariga muvofiq hisoblangan. Har bir slayd uchun uchta tasodifiy maydon Image‑Pro Plus 6.0 yordamida ijobiy bo'yalgan maydon foizini hisoblash uchun tahlil qilindi.

MK2 Pathway Faoliyatini baholash

qPCR: MK2, TGF‑1 va MKK6 prostatik mRNK darajalari o'lchandi. Primer ketma-ketligi:

MK2 (264 bp) oldinga 5'-GGAAGTGCCTGCTGAT-3', teskari 5'-AGTTGTGACTGGTGGTTT-3';

TGF‑ 1 (153 bp) oldinga 5'-AGGAGACGGAATACAGGG-3', teskari 5'-ATGAGGAGCAGGAAGGG-3';

MKK6 (146 bp) oldinga 5'-CCTCAGACCAGTTCCAC-3', teskari 5'-CGCATCTTCTCCACCA-3'.

Western blot: TGF‑ 1, MK2, p‑MK2, MKK6 va p‑MKK6 ning oqsil darajalari avval o‘rnatilgan protokollar asosida aniqlangan.

miRNK ni o'lchash‑483‑3p
miRNA‑483‑3p primerlari: oldinga 5'-GGGTCACTCCTCCCCT-3', teskari 5'-AACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3'; RT primer 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAAGACGGG-3'. qPCR to'plam ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi.

 

Luciferase Reporter Assay

Yovvoyi tipdagi (WT) va mutant (MUT) reportyor plazmidlarni yaratish uchun MK2 3'UTR psiCHECK‑2 vektoriga klonlandi. HEK‑293T xujayralari miRNK‑483‑3p va Lipofektamin 3000 yordamida reportyor plazmidlar bilan birgalikda transfektsiya qilindi; nazorat hujayralari bo'sh vektor oldi. 24 soatdan keyin lusiferaza faolligi to'plam protokoliga muvofiq o'lchandi.

Statistik tahlil
Ma'lumotlar SPSS 17.0 yordamida tahlil qilindi. Bir tomonlama ANOVA dispersiyaning normalligi va bir xilligi tasdiqlangandan keyin qo'llanildi. Natijalar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi. LSD post hoc testlari bir nechta taqqoslash uchun ishlatilgan. Farqlar P <0.05 da statistik ahamiyatga ega deb hisoblandi.

 

Natijalar

Oddiy nazorat guruhi bilan solishtirganda, BPH modeli nazorat guruhi prostata kollagenining cho'kishida sezilarli o'sishni ko'rsatdi; TGF-1, MK2 va MKK6 ning yuqori mRNK ifodalari; va TGF‑ 1, p‑MK2 va p‑MKK6 ning yuqori protein darajalari (barchasi P <0,01). miRNA‑483‑3p darajalari sezilarli darajada kamaydi (P <0,01).

BPH modeli nazoratiga nisbatan, sistanx glikozidlari miRNA‑483‑3p ni sezilarli darajada oshirdi, TGF‑ 1, MK2 va MKK6 ning mRNK darajasini pasaytirdi, TGF‑ 1, p‑MK2 va pro- va MKK6 protein miqdorini pasaytirdi.

Faqat sistanx glikozidlari bilan solishtirganda, sistanx glikozidlarining miRNA‑483‑3p antagomiri bilan birikmasi miRNK‑483‑3p ni sezilarli darajada kamaytirdi va kollagen cho‘kishini ko‘paytirdi, shuningdek, TGF‑1, MK2 mRNK darajalari, shuningdek, T‑F1G oqsili darajalari ortdi. p‑MK2 va p‑MKK6 (barchasi P <0,01).

Lusiferaza muxbiri tahlili miRNA‑483‑3p MK2 ni bevosita nishonga olishini tasdiqladi.

 

Munozara (qisqacha, ozuqaviy ahamiyatga ega)

Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, sistanx glikozidlari miRNA‑483‑3p ni tartibga solish va TGF-signalizatsiyasining quyi oqimida MK2 yo'li faolligini bostirish orqali kastratsiya/testosteron bilan qo'zg'atilgan BPH modelida prostatik fibrozni susaytiradi. Hozirgi BPH farmakoterapiyalarining fibrotik remodelingni hal qilishdagi cheklovlarini hisobga olgan holda, sistanx glikozidlari hujayradan tashqari matritsa muvozanatiga qaratilgan qo'shimcha oziq-ovqat strategiyasi bo'lishi mumkin.

Oziq-ovqat qo'shimchalarini ishlab chiqishda quyidagilarga e'tibor qaratiladi:

Standartlashtirish: umumiy feniletanoid glikozidlar va marker birikmalarini aniqlang (masalan, echinacoside 20% dan katta yoki teng, akteozid 10% dan katta yoki HPLC bo'yicha).

Dozani o'zgartirish: sichqonlarda 100 mg·kg⁻¹ tana sirtini o'lchashdan foydalangan holda 8–12 mg·kg⁻¹ inson ekvivalenti dozasini (HED) tashkil qiladi, 60–70 kg vaznli kattalar uchun taxminan 500–800 mg/kun; klinik tasdiqlash talab qilinadi.

Sifat va xavfsizlik: identifikatsiyani (botanika manbasi, ifloslantiruvchi moddalar, og'ir metallar, pestitsidlar) ta'minlash va ‑blokerlar yoki 5‑reduktaza inhibitörleri bilan potentsial o'zaro ta'sirlarni baholang.

Da'volar: tuzilish/funksiya da'volari "siydik oqimi va prostata to'qimalarining muvozanatini qo'llab-quvvatlash" ga e'tibor qaratishi va klinik dalillarsiz kasallikni davolash tilidan qochish kerak.

 

Xulosa

Cistanche glikozidlarimiRNA‑483‑3p ni tartibga solish va MK2 signalini inhibe qilish orqali BPHda prostatik fibrozni engillashtiradi. Ushbu topilmalar prostata sog'lig'i uchun qo'shimcha oziqlantiruvchi moddalar sifatida standartlashtirilgan sistanche ekstraktlari bo'yicha keyingi tarjima tadqiqotlarini qo'llab-quvvatlaydi.

 

Minnatdorchilik

Bu ish Xitoy Milliy Tabiatshunoslik Jamg'armasi (Grant No. 81703594) tomonidan qo'llab-quvvatlandi.

Muallif haqida ma'lumot
Yang Chuhao (1991–), ayol, Vuxan, Xubey, klinik farmatsevt, MS; Asosiy tadqiqot yo'nalishi: klinik farmatsiya. ORCID: 0000-0002-8921-5758; Tel: +86-27-82440854.