Cistanche Tubulosa feniletanoid glikozidlari tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali H22 gepatocellular karsinoma hujayralarida apoptozni qo'zg'atadi.
Mar 15, 2022
Batafsil ma'lumot uchun:ali.ma@wecistanche.com
Pengfey Yuan1 va boshqalar
Abstrakt
Fon: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Uayt - an'anaviy xitoy tabobati bo'lib, Tamarix o'simligining ildizlarini parazitlashtiradi va erkaklar ojizligini, bepushtligini, tana zaifligini davolashda va tonik sifatida ishlatilgan. Biroq, uning gepatotsellyulyar karsinomaga qarshi ta'siri hali ham tushunarsiz. Bu erda biz o'smaga qarshi ta'sirini o'rganib chiqdikCistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar(CTPG) H22 gepatotsellyulyar karsinoma hujayralarida ham in vitro, ham in vivo va uning mexanizmlari.
Usullari:Morfologiyasi, hayotiyligi,apoptoz, hujayra aylanishi va H22 hujayralarining mitoxondriyal membrana potentsiali (Dψm) mos ravishda teskari mikroskop, MTT tahlili va oqim sitometriyasi bilan tahlil qilindi. Oqsillarning ifodalanishi va faollashishiapoptozyo'l Western blot tomonidan aniqlangan. In vivo antitumor ta'siri erkak Kunming sichqonlari yordamida yaratilgan o'simta sichqonchasi modelida baholandi.
Natijalar:CTPG bilan davolash dozaga va vaqtga bog'liq holda H22 hujayralari o'sishini sezilarli darajada bostirdi, bu o'sish bilan bog'liq edi.apoptozva G0/G1 va G2/M fazalarida hujayra siklini to'xtatish. Bundan tashqari, CTPG bilan ishlov berilgan H22 hujayralarida xromosoma kondensatsiyasi kuzatildi. CTPG bilan davolash Bax/Bcl-2 nisbatini sezilarli darajada oshirdi, DM ni kamaytirdi va c sitoxromining chiqarilishini kuchaytirdi. Tashqi va ichki signalizatsiya yo'llarida ajralgan kaspaza-8 va kaspaza-9 darajalari PARPni ajratish uchun ketma-ket faollashtirilgan kaspaza-7 va -3 sezilarli darajada oshdi. Nihoyat, CTPG sichqonlarda H22 hujayralarining o'sishini inhibe qildi va o'simta sichqonlarining omon qolish darajasini yaxshiladi.
Xulosa: Ushbu natijalar CTPG H22 hujayra o'sishini tashqi va ichki yo'l bilan bostirishini ko'rsatdi.apoptozyo'llar.
Kalit so‘zlar: Cistanche tubulosa, Feniletanoid glikozidlar, Apoptoz, Signalizatsiya yo'li, Tumor sichqoncha modeli
Organik Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlari uchun bosing
Fon
Jigar saratoni dunyo bo'ylab saraton kasalligi bo'yicha oltinchi va saraton kasalligidan o'lim bo'yicha to'rtinchi o'rinni egalladi. Bundan tashqari, u past ijtimoiy-demografik indeksli mamlakatlarda saraton kasalligi bo'yicha to'rtinchi va saraton o'limi bo'yicha birinchi o'rinda turadi [1]. Xitoyda jigar saratoni 2015 yilda saraton bilan bog'liq o'limning uchinchi asosiy sababidir [2]. Dunyoda birlamchi jigar saratonlarining 90 foizdan ortig'i gepatotsellyulyar karsinoma (HCC) hisoblanadi [3]. Hozirgi vaqtda jigar rezektsiyasi HCC terapiyasining asosiy variantidir. Biroq, HCC bilan og'rigan bemorlarning 30 foizdan kamrog'i shifobaxsh jigar rezektsiyasi mezonlariga javob berdi va yuqori takrorlanish darajasi tufayli umumiy 5-yillik omon qolish darajasi hali ham 35-50 foizgacha past [4, 5] . O'rta va yuqori darajadagi HCC bo'lgan bemorlarni davolash imkoniyatlari juda cheklangan. Sorafenib, molekulyar maqsadli dori, FDA tomonidan ilg'or HCC uchun birinchi darajali davolash sifatida tasdiqlangan. Biroq, sorafenib atigi 3 oylik omon qolishni uzaytiradi va javob darajasi 4 foizdan kamroqdir [6, 7]. HCCga qarshi yangi dorilar yoki strategiyalarni ishlab chiqish shoshilinchdir.
An'anaviy xitoy tibbiyoti (TCM) yakka o'zi yoki boshqa strategiyalar bilan birgalikda HCCni davolashda qo'llanilgan va omon qolish muddatini uzaytirish, hayot sifatini yaxshilash, salbiy reaktsiyalarni kamaytirish va boshqalarni o'z ichiga olgan klinik imtiyozlarni ko'rsatdi [8, 9]. Cistanche, TCMning bir turi, turli xil biologik funktsiyalarga ega, masalan, antioksidlanish, yallig'lanishga qarshi, qarishga qarshi va neyroproteksiya [10, 11].Feniletanoid glikozidlarAntioksidlanish, yallig'lanishga qarshi, gepatoproteksiya va neyroproteksiya kabi turli xil faoliyatga ega bo'lgan Cistanche ning asosiy faol komponentlari hisoblanadi [12-15]. Bu haqda guruhimiz xabar berdiCistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar(CTPG) qo'zg'atishi mumkinapoptozmelanoma B16-F10 hujayralarida va sichqonlarda o'smalar o'sishini inhibe qiladi [16]. Ushbu tadqiqotda biz CTPG ning HCC H22 hujayralariga in vitro va in vivo jonli ravishda antitumor ta'sirini o'lchadik va uning mexanizmlarini o'rgandik. Biz CTPGni topdik(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)qo'zg'atilganapoptozH22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali va sichqonlarda H22 o'smalarining o'sishini bostirdi.
Usullari
Hujayra chizig'i
Sichqoncha H22 gepatotsellyulyar karsinoma hujayralari Shinjon universiteti (Urumchi, Shinjon, Xitoy) Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasidan olindi va 100 U/ml penitsillin va 100 ug/ml qo'shilgan RPMI 1640 muhitida (Gibco) yetishtirildi. streptomitsin va 10 foiz issiqlik bilan inaktivlangan homila sigir zardobi (Gibco) 37 daraja haroratda 5 foiz CO2 namlangan atmosferada.
MTT tahlili
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Shinjon, Xitoy) va CTPG ning asosiy birikmalaridan sotib olindi.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi yordamida malakali va miqdoriy aniqlangan [16]. Hujayra hayotiyligi 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolium bromid (MTT) tomonidan baholandi (Sigma, Sent-Luis, MO , AQSh) tahlil. H22 hujayralari har bir quduq uchun 1{20}}0 ul muhitda 2 × 104 hujayra zichlikdagi 96-quduq plastinkalariga inokulatsiya qilindi va 37 daraja haroratda kulturalandi. 24 soatdan so'ng hujayralar mos ravishda 24, 48 va 72 soat davomida turli konsentratsiyali CTPG (0,100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO (400 ug/ml CTPGdagiga teng) bilan ishlov berildi. 1000 rpm tezlikda 7 daqiqa davomida santrifüj qilingandan so'ng, supernatant tashlandi va har bir quduqqa 100 ul MTT eritmasi (PBSda 5 mg / ml) qo'shildi. Plitalar 37 daraja haroratda 4 soat davomida inkubatsiya qilindi va hosil bo'lgan formazan kristallarini eritish uchun 100 ul DMSO qo'shildi. OD490 qiymatlari 96-quduqli mikroplata o'quvchi (Bio-Rad Laboratories, CA, AQSH) tomonidan aniqlandi. Hujayra hayotiyligi quyidagi formula bo'yicha hisoblab chiqilgan: Hujayra hayotiyligi (foiz )=(OD bilan ishlov berilmagan/Ota ishlov berilmagan) x 100 foiz.
Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlari
Apoptozni aniqlash
H22 hujayralari turli konsentratsiyali CTPG bilan ishlov berilgan(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)({0}}, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO 24 soat davomida, so‘ngra Annexin VFITC/Propidium yodide (PI) bilan bo‘yalgan.ApoptozAniqlash to'plami (YEASEN, Xitoy) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Namunalar oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) orqali tahlil qilindi.
Mitoxondriyal membrana potentsialini aniqlash
H22 hujayralari turli konsentratsiyali CTPG bilan ishlov berilgan(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)(0, 200 va 400 ug/ml) 24 soat davomida, so'ngra membrana o'tkazuvchan JC-1 bo'yog'i (Beyotime, Xitoy) bilan 20 daqiqa davomida 37 darajada bo'yalgan. JC-1 buferi bilan ikki marta yuvilgandan so'ng, namunalar 300 ul JC-1 buferi bilan qayta suspenziya qilindi va oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) bilan tahlil qilindi.
Hujayra siklini tahlil qilish
H22 xujayralari 60 mm kulturali idishlarga emlangan va 24 soat davomida turli konsentrasiyalarda CTPG (0, 100,200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO bilan ishlov berilgan. . Barcha hujayralar to'plangan va ikki marta PBS bilan yuvilgan. Hujayralar 2 soat davomida - 20 daraja 70 foiz muzli etanolda o'rnatildi va ikki marta PBS bilan yuvildi, so'ngra 300 ul Propidium yodid/RNase bo'yash buferida (BD Biosciences) qayta suspenziya qilindi. Xona haroratida 10 daqiqadan so'ng, namunalar oqim sitometriyasi (BD FACSCalibur, AQSh) orqali yig'ildi va hujayra sikli taqsimoti ModFit LT 3.0 dasturi bilan tahlil qilindi.
feniletanoid glikozidlarichidaCistanche tubulosa
Hoechst 33,258 bo'yash
H22 hujayra yadrolarining morfologik o'zgarishlari membrana o'tkazuvchan DNK-bog'lovchi bo'yoq Hoechst 33,258 bo'yash orqali tahlil qilindi. H22 xujayralari 6-quduq plastinkasiga 2 ml muhitda 1 × 105 hujayra/quduq konsentratsiyasida ekilgan. 60% ~ 70% qo'shilishdan keyin hujayralar CTPG bilan ishlov berildi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)(0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) 24 soat davomida. Hujayralar to'plangan va 4 foiz muzli Paraformaldegid bilan 4 daraja haroratda 10 daqiqa davomida mahkamlangan. PBS bilan yuvilgandan so'ng, hujayralar Hoechst 33,258 (Beyotime, Xitoy) bilan 4 daraja 10 daqiqa davomida bo'yalgan. Namunalar teskari floresan mikroskop (Nikon Eclipse Ti-E, Yaponiya) tomonidan kuzatildi.
G'arbiy dog'
Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 va anti-Bax Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanxay, Xitoy) dan xarid qilingan. Anti-kaspaz-7, anti-kaspaz-7, anti-kaspaz-8, anti-kaspaz-8, anti-kaspaz-9, anti-kaspaz cleaved-caspase-9, anti-PARP, anti-cleaved PARP, antisichqoncha IgG-HRP va anti-quyon IgG-HRP Cell Signaling Technology kompaniyasidan xarid qilindi. Anti{26}}aktin Beijing ComWin Biotech Co., Ltd.dan (Pekin, Xitoy) xarid qilingan.
H22 hujayralari turli konsentratsiyali CTPG bilan ishlov berilgan(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)({0}}, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) yoki 0,3 foiz DMSO 24 soat davomida. Hujayralar yig'ildi va 30 daqiqa davomida muz ustida Cell Lysis Solution RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) bilan lizing qilindi. Namunalar supernatantlarni to'plash uchun (12,{10}} 15 daqiqa davomida 4 darajada) aylantirildi va oqsil kontsentratsiyasi BCA to'plami (Thermo Fisher Scientific, AQSh) yordamida o'lchandi. Har bir namunadagi oqsilning teng miqdori 12 foiz SDS-PAGE tomonidan ajratildi va PVDF membranalariga (Biosharp, Xitoy) o'tkazildi. TBST tamponida 5 foiz yog'siz sut mavjud bo'lganidan so'ng, membranalar mos ravishda horseradish peroksidaza (HRP) bilan konjugatsiyalangan mos keladigan birlamchi antikorlar va ikkilamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilindi. TBST bilan yuvilgandan so'ng, maqsadli oqsillar ECL tahlil to'plami (Beyotime, Xitoy) tomonidan aniqlandi.
Hayvonlar va axloqiy bayonot
6-8 haftalik erkak Kunming sichqonlari Shinjon tibbiyot universiteti hayvonlar laboratoriya markazidan (Urumchi, Shinjon, Xitoy) xarid qilindi. Sichqonlar Shinjon universitetining standart harorat bilan boshqariladigan, yorug‘lik aylanishiga ega hayvonlar muassasasida saqlangan. Hayvonlarning barcha tadqiqotlari Shinjon universiteti hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasining ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi. Protokol Shinjon universitetining Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasi (BRGE-AE001) Hayvonlar tajribasi etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.
O'simta sichqonchasini o'rganish
O'simta sichqoncha modelini induktsiya qilish uchun erkak Kunming sichqonlariga teri ostiga 100 ul PBSda 1 × 106 H22 hujayrasi o'ng qanotga AOK qilindi. 3 kundan keyin sichqonlar tasodifiy 3 guruhga bo'lingan (7 sichqon / guruh). Nazorat guruhiga o'simta atrofida teri ostiga 0,1 ml DMSO yuborildi. CTPG-200 va CTPG-400 guruhlari teri ostiga 200 yoki 400 mg/kg CTPG yuborilgan.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)o'simta atrofida 0.1 ml DMSO da. Sichqonlar har 2 kunda 21 kungacha davolandi. O'simta o'lchamlari 25 kungacha bo'lgan kaliperlar yordamida o'lchandi va o'simta hajmi quyidagi formula bo'yicha hisoblandi: o'simta hajmi (mm3)=(uzunlik × kenglik2)/2. 25 kundan so'ng, o'simta sichqonlarining omon qolishi ushbu tadqiqot oxirigacha har kuni kuzatildi.
Statistik tahlil
Statistik ahamiyatlilik davolash va nazorat guruhlari o'rtasidagi tafovutni bir tomonlama tahlil qilish yo'li bilan hisoblab chiqilgan. Barcha ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (SD) sifatida ifodalangan. p < 0.05="" statistik="" jihatdan="" ahamiyatli="" deb="">
Natijalar
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)in vitro H22 hujayralarining hayotiyligini pasaytiradi
CTPG ning antitumor ta'sirini o'rganish uchun(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)HCCda H22 hujayralari in vitroda turli konsentratsiyali CTPG (0, 100, 200, 300 va 400 ug/ml) bilan ishlov berildi. 24 soatdan keyin H22 hujayralarining morfologiyasi teskari mikroskop yordamida kuzatildi. Biz H22 hujayralarining morfologiyasi CTPG bilan davolash orqali keskin o'zgarganligini aniqladik. CTPG konsentratsiyasining oshishi bilan hujayralar kichik va yumaloq bo'lib qoldi va hujayralar soni ham sezilarli darajada kamaydi (1a-rasm). MTT tahlili mos ravishda 24, 48 va 72 soat davomida CTPG bilan davolashdan keyin H22 hujayralarining hayotiyligini tahlil qilish uchun ishlatilgan. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)dozaga bog'liq va vaqtga bog'liq holda H22 hujayra hayotiyligini sezilarli darajada kamaytirdi (1b-rasm). CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)300 ug / ml da eng yaxshi inhibitiv tezlikka erishdi (1c-rasm). H22 hujayralari uchun CTPG ning IC50 qiymatlari 24 soatda 236 ug / ml va 48 soatda 169,8 ug / ml ni tashkil qiladi.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)H22 hujayralarida induktsiya qilingan apoptoz
H22 hujayralarining hayotiy qobiliyatining pasayishi induksiya bilan bog'liqligini tekshirish uchunapoptoz, H22 hujayralari 24 soat davomida turli konsentratsiyali CTPG (0,100, 200, 300 va 400 ug/ml) bilan ishlov berildi va PI va Annexin V bilan bo'yaldi. Oqim sitometriyasi natijalari shuni ko'rsatdiki, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)sezilarli darajada qo'zg'atilganapoptozH22 hujayralari (shu jumladan erta va kechapoptoz) dozaga bog'liq holda (2a-rasm). CTPG ning yuqori dozasi bo'lsa-da(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)Shuningdek, H22 hujayralarining nekrozini sezilarli darajada oshiradi, nekroz H22 hujayralarining o'sishini inhibe qilishda kichik rol o'ynaydi, chunki uning nisbati (8,3 foiz) nisbatan past.apoptoz(52,6 foiz). Bundan tashqari, H22 hujayralarining umumiy oqsillari CTPGdan keyin ajratilgan(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash va anti-apoptotik B hujayrali lenfoma 2 (Bcl-2) va proapoptotik BCL-2-bog'langan X oqsili (Bax) ifodalari Western blot tomonidan aniqlandi. Kulrang skanerlash ma'lumotlari Bax va Bcl-2 ifoda darajalari mos ravishda oshirilgan va kamayganligini ko'rsatdi. Bax/Bcl-2 nisbati sezilarli darajada oshdi (2b-rasm). Ushbu natijalar CTPG ni induktsiya qilishini ko'rsatadiapoptozH22 hujayralarida.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)H22 hujayralarida xromosoma kondensatsiyasini va hujayra siklini to'xtatishni keltirib chiqaradi
Ma'lum bo'lishicha, DNKning shikastlanishi va dorilar tomonidan qo'zg'atilgan hujayra siklini to'xtatish o'simta hujayralarining o'sishini inhibe qilishi va sabab bo'lishi mumkin.apoptozo'simta hujayralarida [17, 18]. CTPGdan keyin H22 hujayralarida yadrolarning morfologiyasini aniqlash(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)24 soat davomida davolash, H22 hujayralari Hoechst 33,342 tomonidan bo'yalgan va teskari floresan mikroskop yordamida kuzatilgan. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash qilingan hujayralar yadrolarning yorqin kondensatsiyalangan xromatinining dozaga bog'liq o'sishini ko'rsatdi, ishlov berilmagan hujayralar esa bir hil bo'yalgan yadrolarni ko'rsatdi (3a-rasm). H22 hujayralarida hujayra siklining tarqalishi 24 soat davomida CTPG bilan davolashdan keyin PI bo'yash orqali tahlil qilindi. 3b-rasmda ko'rsatilganidek, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash G0/G1- va G2/M-faza hujayralari ulushini sezilarli darajada oshirdi va S-fazali hujayralar ulushini sezilarli darajada kamaytirdi, bu CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)H22 xujayralarida G0/G1 va G2/M fazalarini ushlab turishni keltirib chiqardi. CTPG ning yuqori dozasi ham sub G1 hujayralari ulushini sezilarli darajada oshirdi.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)mitoxondriyal membrana potentsialini pasaytiradi va sitoxrom c ning chiqarilishini oshiradi
ning induksiyasida mitoxondriyaga bog'liq yo'l muhim rol o'ynaydiapoptoz[19, 20]. Mitoxondriyal membrana potentsialidagi (Dsm) o'zgarishlar bo'lishi mumkin
JC-1 agregati (qizil floresans) tufayli JC-1 bo'yalishi bilan kuzatilgan, DM ning kamayishi bilan monomerga (yashil floresans) parchalanishi mumkin [21]. CTPGdan keyin(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)24 soat davolashda H22 hujayralari JC{2}} bo'yoq bilan bo'yalgan. Oqim sitometriyasi ma'lumotlari shuni ko'rsatdiki, FL-2 kanalidagi qizil lyuminestsent va FL-1 kanalidagi yashil floresans sezilarli darajada kamaygan va CTPG da ko'paygan.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash. PE-FITC plyus hujayralarining ulushi sezilarli darajada oshdi (4a-rasm), bu CTPG ekanligini ko'rsatadi.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)H22 xujayralarida DM ni kamaytirdi. Bu oshgan Bax/Bcl-2 nisbatiga mos keladi. Shunday qilib, biz CTPGda sitoxrom c ning chiqarilishi sezilarli darajada oshganini kuzatdik(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash (4b-rasm). Ushbu natijalar CTPG qisman induktsiya qilishi mumkinligini ko'rsatdiapoptozH22 hujayralarida mitoxondrialga bog'liq (ichki) yo'l orqali.
CTPG kaspaz yo'lini faollashtirdi va DNKni tiklashni oldini oldi
Keyinchalik, CTPG tomonidan induktsiya qilingan kaspazaning faollashishi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali tahlil qilindi. CTPGdan keyin(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)24 soat davomida davolashda jami oqsillar H22 hujayralaridan ajratildi va pro-va bo'lingan-kaspazalar darajasi Western blot yordamida aniqlandi. Ishlov berilmagan yoki DMSO nazorati bilan solishtirganda, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash nafaqat parchalangan kaspaza-8 (tashqi yo'l) darajasini, balki parchalangan kaspaza-9 (ichki yo'l) darajasini ham sezilarli darajada oshirdi (5-rasm). Ketma-ket faollashtirilgan kaspaza-8 va -9 5-rasmda kuzatilgan quyi oqim prokaspaza-3 va -7 ni ajratdi. Faollashtirilgan kaspaza-3 DNKni parchalab tashladi. poli (ADP-riboza) polimeraza (PARP) ning ta'mirlash fermenti DNK ta'mirlanishini oldini olish va shakl 3a da ko'rsatilganidek, DNKning shikastlanishini to'plash. Ushbu natijalar CTPG ekanligini ko'rsatdi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)qo'zg'atilganapoptozH22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali.
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)in vivo H22 HCC o'sishini bostiradi va o'simta sichqonlarining omon qolish darajasini yaxshilaydi.
Nihoyat, CTPG ning antitumor ta'siri(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)HCC bo'yicha o'simta sichqonchasi modelida baholandi, bu H22 hujayralarini teri ostiga yuborish orqali o'rnatildi. H22 hujayra in'ektsiyasidan 3 kun o'tgach, o'simta sichqonlari CTPG bilan davolandi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)8 marta. Sichqonlarning tana vazni va o'simta o'lchamlari belgilangan vaqt nuqtalarida kuzatildi. 6a-rasmda ko'rsatilganidek, har bir guruhdagi sichqonlarning tana vaznida sezilarli farq yo'q, bu CTPG ning tanlangan dozalari ekanligini ko'rsatadi.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)aniq yon ta'siri yo'q. Qizig'i shundaki, 200 mg / kg va 400 mg / kg CTPG bilan davolash qilingan sichqonlarda o'simta o'sishi sezilarli darajada inhibe qilingan (6b-rasm). Bundan tashqari, CTPG ning ikki dozasi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash tajriba oxirida nazorat guruhi (0/7) bilan solishtirganda o'simtali sichqonlarning (3/7, 3/7) omon qolishini ancha yaxshiladi (6b-rasm). Shuningdek, biz CTPG erkak Kunming sichqonlaridan ajratilgan splenotsitlarning dozaga bog'liq bo'lgan ko'payishini sezilarli darajada kuchaytirganligini aniqladik (6c-rasm), bu CTPG ekanligini ko'rsatdi.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)immunostimulyator ta'sirga ega.
Munozara
TCM uzoq vaqt davomida turli kasalliklarni, shu jumladan saratonni davolash uchun ishlatilgan. TCM induktsiya qilishi mumkinligi haqida xabar berilganapoptozHar xil turdagi o'simta hujayralarida o'smaga qarshi ta'sir ko'rsatish uchun tashqi (o'lim retseptorlari vositachiligida) va ichki (mitoxondriyaga bog'liq) signalizatsiya yo'llari orqali [22-25]. Ikkala yo'l mos ravishda kaspaz-8 va -9 ni faollashtirishi mumkin [24, 26]. Mana, biz CTPGni topdik(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)apoptozni induktsiya qilish va hujayra siklini to'xtatish orqali H22 hujayra o'sishini sezilarli darajada bostirdi. Yirtilgan kaspaz-8 va -9 darajalari CTPG tomonidan sezilarli darajada oshirildi.(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)davolash, tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari induktsiyada ishtirok etganligini ko'rsatadi.apoptoz. Bizning oldingi tadqiqotimiz shuni ko'rsatdiki, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)melanoma B16-F10 hujayralarida mitoxondriyaga bog'liq yo'l orqali apoptozni qo'zg'atdi, bu yorilib ketgan kaspaza darajasini oshirdi-9, lekin kaspaza emas-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)har xil turdagi o'simta hujayralarida alohida signal yo'llarini faollashtirishi mumkin.
Mitoxondriyal membrananing yaxlitligi BCL-2 oqsillar oilasi a'zolari, jumladan Bax va Bcl-2 tomonidan qattiq tartibga solinadi [27, 28]. Bax va Bcl-2 nisbati mitoxondriyaga bog'liq holda hal qiluvchi rol o'ynaydiapoptozyo'l [29]. CTPG bilan davolash qilingan H22 hujayralarida(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar), Bax/Bcl-2 nisbati sezilarli darajada yuqori tartibga solindi, bu esa Dsm ning pasayishiga va ushbu tadqiqotda kuzatilgan sitoxrom c ning chiqarilishiga olib kelishi mumkin. Natijada, pro-caspase-9 parchalanib, faollashtirildi. Nihoyat, faol kaspaza-8 va -9 tashabbuskorlari DNK taʼmirlanishining oldini olish uchun PARPni parchalash uchun kaspaza-3 ijrochisini faollashtirdilar. Birgalikda bu natijalar CTPG qo'zg'atganligini ko'rsatdiapoptozH22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali. O'simta sichqonchasi modelida CTPG H22 HCC o'sishini sezilarli darajada bostirdi va o'simta sichqonlarining omon qolishini sezilarli darajada yaxshiladi. Qizig'i shundaki, CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)dozaga bog'liq ravishda Kunming sichqonlaridan splenotsitlarning ko'payishiga yordam berdi, bu bizning oldingi tadqiqotimizga mos keladi [16]. Ushbu natijalar CTPG sichqonlarda H22 HCC o'sishini to'g'ridan-to'g'ri antitumor ta'siri va bilvosita immunitetni oshirish orqali bostirishi mumkinligini ko'rsatdi.
Cistanche tululosamahsulotlar
Xulosa
CTPG(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)in vitro va in vivo va induktsiyalangan H22 hujayralarining o'sishini bostirdiapoptozH22 hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali. Ushbu ma'lumotlar CTPG ekanligini ko'rsatdi(Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar)HCCni davolash uchun potentsial nomzod bo'lishi mumkin.
Qisqartmalar
Bax: BCL-2-bog'langan X oqsili; Bcl-2: B hujayrali limfoma 2; CTPG:Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlar; HCC: gepatotsellyulyar karsinoma; HRP: horseradish peroksidaza; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolium bromid; PARP: poli (ADP-riboza)polimerazaning DNKni tiklash fermenti; TCM: an'anaviy xitoy tibbiyoti; Dym: mitoxondriyal membrana potentsiali
Moliyalashtirish
Bu ish Shinjon-Uyg‘ur avtonom viloyatining JLga yuqori darajadagi iste’dodlarni joriy etish loyihasi, JLga Xitoy milliy tabiiy fanlar jamg‘armasi granti (31460241) va Shinjon universitetining doktoranturani boshlash jamg‘armasi (BS160261 to XW va BS150236) tomonidan qo‘llab-quvvatlandi. YL).
Ma'lumotlar va materiallarning mavjudligi
Ushbu tadqiqot uchun dastlabki ma'lumotlar tegishli muallifning asosli so'roviga binoan mavjud.
Mualliflarning hissalari
JL va JL tajribalarni ishlab chiqdilar. PY, JL, AA va YY tajribalarni amalga oshirdi. LX, XW va YL ma'lumotlarni tahlil qildi. PY, JL va JL qo'lyozmani yozgan. Barcha mualliflar yakuniy qo'lyozmaga o'z hissalarini qo'shdilar va tasdiqladilar.
Etikani tasdiqlash
Hayvonlarni o'rganish Shinjon universitetining Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasining Hayvonlar tajribalari etikasi qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.
Raqobatdosh manfaatlar
Mualliflar o'zlarining raqobatdosh manfaatlari yo'qligini e'lon qiladilar.
Nashriyot eslatmasi
Springer Nature nashr etilgan xaritalar va institutsional birlashmalardagi yurisdiksiyaviy da'volarga nisbatan betaraf qoladi.
Muallif tafsilotlari
1Xinjiang Biologik resurslar va genetik muhandislik asosiy laboratoriyasi, Hayotiy fanlar va texnologiya kolleji, Shinjon universiteti, 666 Shengli Road, Urumchi, Shinjon 830046, Xitoy.2Hayot fanlari kolleji, Shinjon Oddiy universiteti, 102 Xinyi Road, Urumchi 830054, Shinjon, Xitoy.3Shinjon tibbiyot universitetiga qarashli tumor kasalxonasi, Urumchi 830011, Xitoy.
Cistanche tululosamahsulotlar
Kimdan: 'Cistanche tubulosa feniletanoid glikozidlarqo'zg'atmoqapoptozH22 gepatotsellyulyar karsinoma hujayralarida tashqi va ichki signalizatsiya yo'llari orqali Pengfei Yuan1 va boshqalar.
---Yuan va boshqalar. BMC qo'shimcha va muqobil tibbiyot (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
Ma'lumotnomalar
1. Kasallikning global yuki saraton kasalligi bo'yicha hamkorlik, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R va boshqalar. 1990 yildan 2015 yilgacha bo'lgan 32 saraton guruhi uchun global, mintaqaviy va milliy saraton kasalligi, o'lim, yo'qolgan hayot yillari, nogironlik bilan yashagan yillar va nogironlikka moslashtirilgan hayot yillari: kasalliklarni o'rganishning global yukini tizimli tahlil qilish. JAMA Onkol. 2017;3:524–48.
2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J.Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66:115–32.3. Jigarni o'rganish bo'yicha Evropa assotsiatsiyasi, Evropa saraton kasalligini tadqiq qilish va davolash tashkiloti. EASL-EORTC klinik amaliyot ko'rsatmalari: gepatotsellyulyar karsinomani boshqarish. JHepatol. 2012;56:908–43.
4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Gepatotsellyulyar saratonni rezektsiya qilish 2 sm dan kam yoki unga teng: ikkita g'arbiy markazdan olingan natijalar. Gepatologiya. 2013;57:1426–35.
5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. An'anaviy gepatoprotektiv formulasi va Sorafenib o'rtasidagi gepatotoksisite, gistopatologiya va kalamushlarda farmakokinetika bo'yicha o't-dori o'zaro ta'siri. Molekulalar. 2017;22:E1034.
6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Xilgard P, Gane E, Blan JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raul JL, Forner A va boshqalar. Sorafenib rivojlangan gepatotsellyulyar karsinomada. N Engl J Med. 2008;359:378–90.
7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS va boshqalar. Osiyo-Tinch okeani mintaqasidagi rivojlangan gepatotsellyulyar karsinomasi bo'lgan bemorlarda sorafenibning samaradorligi va xavfsizligi: III faza randomize, ikki marta ko'r, platsebo-nazorat ostidagi sinov. Lancet Onkol. 2009;10:25–34.
8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. An'anaviy hasharotlar xitoylik dori-darmonlarni tizimli ko'rib chiqish va meta-tahlil jarrohlik bo'lmagan hepatoselüler karsinoma terapiyasi uchun kemoterapiyani birlashtirgan. Sci Rep.2017;7:4355.
9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. An'anaviy xitoy tibbiyoti bilan qo'shimcha terapiya natijalarni yaxshilaydi va gepatotsellyulyar karsinomada noxush hodisalarni kamaytiradi: randomize nazorat ostida bo'lgan sinovlarning meta-tahlili. Evidga asoslangan komplement Alternativ Med. 2017; 2017: 3428253.
10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Vang WH, Wu CR. Kemiruvchilarda Cistanche deserticola sabab bo'lgan anti-nosiseptiv va yallig'lanishga qarshi faollik. J Etnofarmakol. 2002;83:177–82.
11. Wu CR, Lin HC, Su MH. ning suvli ekstraktlari bilan qaytarishCistanche tubulosaAltsgeymer kasalligiga o'xshash kalamush modelidagi xulq-atvor kamchiliklaridan: amiloid cho'kishi va markaziy neyrotransmitter funktsiyasi uchun dolzarblik. BMC Complement Altern Med. 2014;14:202.
12. Jiang Y, Tu PF. Cistanche turlarida kimyoviy tarkibiy qismlarni tahlil qilish. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.
13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Cho'l o'simlikidan gepatoprotektiv faollikka ega asillangan feniletanoid oligo glikozidlariCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010; 18:1882–90.
14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Feniletanoid glikozidlarTarim cho'lida o'stirilgan Cistanche deserticola poyalaridan yallig'lanishga qarshi faollik bilan. Fitoterapia.2013;89:167–74.
15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Vang Y. Echinacoside TNF tomonidan qo'zg'atilgan SHSY5Y neyron hujayralarini qayta tiklaydi.apoptoz. Eur J Pharmacol. 2004;505:11–8.
16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Xuo S, Luo J, Chjan F.Feniletanoid glikozidlardanCistanche tubulosaB16-F10 hujayralarining o'sishini in vitro va in vivo induktsiya orqali inhibe qiladi.apoptozmitoxondrial bog'liq yo'l orqali. J Saraton. 2016;7:1877–87.
17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL va boshqalar. Curcumin DNKning shikastlanishiga olib keladi va HeLa insonning bachadon bo'yni saratoni hujayralarida bog'liq protein ifodasiga ta'sir qiladi. Oncol Rep. 2016;36:2207–15.
18. Vang R, Chjan Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B G1 hibsga olinishiga olib keladi,apoptoz, va PI3K / Akt / mTOR yo'lini blokirovka qilish orqali insonning kichik hujayrali o'pka saratoni A549 hujayralarida avtofagiya. Sci Rep. 2016;6:27071.
19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksidlanish stressi: mitoxondriyaga bog'liq va mitoxondriyadan mustaqil yo'llarapoptoz. Arch Toxicol. 2013 yil; 87:1157–80.
20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Qizilo'ngach saratoni terapiyasi uchun apoptotik mexanizmlarga qaratilgan an'anaviy xitoy tibbiyoti. Acta Pharmacol Sin. 2016; 37:295–302.
21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Sirtuin inhibitori nikotinamid AKT, BAD, PARP va mitoxondriyal bog'liq bo'lgan "anti-apoptotik" yo'llar orqali o'tkir anoksik shikastlanish vaqtida neyron hujayralarining omon qolishini oshiradi. Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.
22. Xu B, Vang SS, Du Q. Gepatokarsinomaning oldini olish va davolash uchun an'anaviy xitoy tibbiyoti: skameykadan yotoqgacha. Jahon J Gepatol. 2015;7:1209–32.
23. Xu B, An HM, Vang SS, Chen JJ, Xu L. Xitoy o'simlik birikmalarining gepatosellüler karsinomaga qarshi profilaktik va terapevtik ta'siri. Molekulalar. 2016;21:142.
24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Uyali apoptotik yo'lga qaratilgan an'anaviy xitoy tibbiyotining antitumor ta'siri. Drug Des Devel Ther. 2015;9:2735–44.
25. Li-Veber M. Maqsadni belgilashapoptozXitoy tibbiyoti tomonidan saraton kasalligining yo'llari. Saraton Lett. 2013;332:304–12.
26. Xu G, Shi Y.Apoptozsignalizatsiya yo'llari va limfotsitlar gomeostazi. Hujayra Res. 2007;17:759–71.
27. Tait SW, Green DR. Mitoxondriya va hujayra o'limi: tashqi membrananing o'tkazuvchanligi va undan tashqari. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11:621–32.
28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitoxondriya: xavf signalizatsiyasining asosiy regulyatorlari. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012;13:780–8.
29. Martinou JC, Youle RJ. Mitoxondriya ichidaapoptoz: Bcl-2 oila a'zolari va mitoxondrial dinamika. Dev xujayrasi. 2011;21:92–101.
