Komplement faolligi C3 glomerulopatiyada IgG-faktor H termoyadroviy oqsillar bilan tartibga solinadi.

Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Alissa C. Gilmor, Yuchun Chjan, X. Terens Kuk, Debora P. Lavin, Suresh Katti, YiVang2, Krista K. Jonson, SungKvon Kim² va Metyu C. Pikering

Yallig'lanish kasalliklari markazi, London Imperial kolleji, Buyuk Britaniya; and²Alexion Pharmaceuticals, Nyu-Xeyven, Konnektikut, AQSh

C3 glomerulopatiyaglomerullarda C3 komplementining to'planishi bilan tavsiflanadi. Sabablari komplement muqobil yo'lining asosiy salbiy regulyatori bo'lgan H omilidagi anormalliklarni o'z ichiga oladi, lekin ular bilan cheklanmaydi. H-faktor etishmovchiligi (Cfh-/-) sichqonlarida C3 rivojlanadiglomerulopatiyaplazma C3 darajasining pasayishi bilan birga. Ushbu modeldan foydalanib, biz H omilining muqobil yo'l tartibga soluvchi domenlarini (FH1-5) o'z ichiga olgan ikkita termoyadroviy oqsilning samaradorligini baholadik.

maqsadli bo'lmagan sichqoncha immunoglobulini (IgG-FH1-5) yoki sichqonchaga qarshi properdin antikori (Anti-P-FH1-5) bilan bog'langan. Ikkala oqsil ham plazma C3 ni ko'paytirdi va glomerulyar C3 cho'kmasini ekvivalent darajada kamaytirdi, bu FH1-5 uchun plazma yoki glomerullarda C3 faollashuvini o'zgartirish uchun to'g'ri maqsadli belgilanish shart emasligini ko'rsatadi. IgG-FH1-5 qo'llanilgandan so'ng plazmadagi C3 darajalari B omil darajasidagi o'zgarishlar bilan vaqtincha bog'liq bo'lsa, plazma C5 darajasi plazmadagi properdin darajasidagi o'zgarishlar bilan bog'liq edi. Ta'kidlash joizki, plazmadagi o'sish

C5 va properdin darajalari C3 va B omilining ortishiga qaraganda uzoqroq davom etdi. Cfh-/- sichqonlarda IgG-FH1-5 tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit paytida buyrak shikastlanishini kamaytiradi. Shunday qilib, bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, IgG-FH1-5 aylanma muqobil yo'l faolligini tikladi va Cfh-/- sichqonlarda glomerulyar C3 cho'kmasi kamayadi va plazmadagi properdin darajasi H omili etishmovchiligida C5 konvertaza faolligining sezgir belgisi hisoblanadi. Immunoglobulin konjugatsiyalangan FH{12}} oqsili plazmadan nisbatan uzoq yarimparchalanish davri tufayli C3 uchun potentsial terapiya bo'lishi mumkin.glomerulopatiya.

Cistanche glomerulopatiya bilan yordam beradi

Tarjima bayonoti

C3 glomerulopatiya(C3G) buyrak kasalligi bo'lib, glomerullarda C3 komplementining anormal to'planishi va glomerulyar shikastlanish bilan tavsiflanadi. Bu komplementning alternativ yo'lining nazoratsiz faollashishi bilan bog'liq. Muqobil yo'l regulyatorining funktsional domenlaridan tashkil topgan termoyadroviy oqsillar, antikor bilan bog'langan H omil (FH), C3G sichqonchasi modelida komplement regulyatsiyasini tikladi va glomerulyar C3 ni kamaytiradi. Maqsadli bo'lmagan antikor konjugatsiyasi plazma oqsilining yarimparchalanish davrining nisbatan uzoq bo'lishiga olib keldi va bu yoki shunga o'xshash konjugatsiya usullari C3G terapiyasida FH funktsiyasini oshirish uchun ishlatilishi mumkin edi.

C3 glomerulopatiya(C3G) glomeruliyadagi C3 ning anormal miqdori bilan tavsiflangan komplement vositachiligidagi buyrak buzilishidir.1 Bu buyrak etishmovchiligiga o'tishi mumkin va aniq davoga ega emas.2 C3G komplement alternativ yo'lining (AP) anormal faollashuvi bilan bog'liq. AP faollashishi natijasida C3bBb (C3 konvertaza), C3 ni parchalaydigan ferment ishlab chiqariladi. Boshqa C3b molekulasi qo'shilgandan so'ng, hosil bo'lgan C3bBbC3b kompleksi (C5 konvertaza) C5 komplementini parchalashi mumkin. Nazoratsiz

C3G da AP faollashuvi aylanma C3, C5, omil B (FB) va properdinning kamayishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Nazoratsiz AP faollashuvining sabablari komplement regulyatorlarida funksiya o'zgarishlarining yo'qolishi va komplement aktivatorlarida funksiya o'zgarishlarining oshishini o'z ichiga oladi.2 Asosiy salbiy AP regulyatori H omil (FH) va odamlar, cho'chqalar va sichqonlarda FH etishmovchiligi C3G bilan bog'liq. 3 C3 nefritik omil, AP C3 konvertazasini barqarorlashtiradigan antikor C3Gda tez-tez uchraydi.4 C3 nefrit omili faqat C3 ning kamayishiga (to'g'ri mustaqil C3 nefritik omil) yoki C3 va C5 ning ham kamayishiga (to'g'ri) olib kelishi mumkin. bog'liq C3 nefrit omil).5,6

Properdin tanqisligi plazmadagi C3 kontsentratsiyasini yaxshilamagan bo'lsa-da, C5 darajalari ortdi, bu properdin C5 faolligi uchun zarurligini, ammo C3 konvertazasi uchun emasligini ko'rsatadi.8,9

Sichqoncha10 yoki inson FH11,12 ni Cfh-/- sichqonlariga yuborish glomerulyar C3 bo'yashini kamaytirdi va aylanma C3 darajasini oshirdi. FH ning faqat tartibga soluvchi va maqsadli sohalarini (mini-FH molekulalari) o'z ichiga olgan konstruktsiyalar ham ushbu modelda samarali hisoblanadi.13 Boshqa yondashuvlarga komplement faollashuv joylarini maqsad qilib olgan oqsillar kiradi. Bularga TT30,14 komplement retseptorlari 2 ning komplement bog'lovchi domenlari bilan bog'langan FH (FH1-5) ning komplement tartibga soluvchi domenlarini o'z ichiga olgan oqsil va homodimerik FH molekulalari, komplement bog'lovchi domenlarni o'z ichiga olgan 15 mini-FH molekulalari kiradi. omil H bilan bog'liq protein 1.

Komplement C3 faollashuvini inhibe qilishning terapevtik foydasi C3Gda tekshirilayotganligi sababli, glomerulyar C3 cho'kmasining kinetikasini va uning glomerulyar va qon aylanishida AP faollashuvi bilan bog'liqligini tushunish muhimdir. Immun kompleksi vositachiligidagi glomerulonefrit modellarida glomerulyar C3c komplement faollashuvining oldini olgandan keyin 24 soat ichida tozalanadi, glomerulyar C3d esa haftalar davomida saqlanib qoldi.16 Xuddi shunday, Cfh–/– sichqonlarda ekzogen FH 24 soat ichida glomerulyar C3c bo‘yalishining qisqarishiga olib keladi. , glomerulyar C3d esa o'zgarishsiz qoladi.11

Ushbu tadqiqotda biz C3G ning Cfh-/- sichqoncha modelida to'ldiruvchi tartibga solish faolligiga ega ikkita yangi termoyadroviy oqsillarning samaradorligini tekshirdik. Proteinlar sichqonchaning FH (FH1-5) tartibga soluvchi domenlarini o'z ichiga olgan bo'lib, ular biologik yarimparchalanish davrini uzaytirish uchun sichqon Ig bilan konjugatsiyalangan. IgG-FH1-5 deb nomlangan termoyadroviy oqsillardan biri maqsadli bo'lmagan sichqonchaning monoklonal antikoriga konjugatsiya qilingan. Anti-P-FH1-5 deb nomlangan ikkinchisi sichqoncha properdiniga monoklonal antikor bilan konjugatsiya qilingan. Bu properdin cho'kmasi bilan o'zaro ta'sir qilish orqali ushbu termoyadroviy oqsilni komplement faollashuv joylariga yo'naltirish to'qimalarni to'ldirishni tartibga solishni kuchaytirishi haqidagi gipotezani sinab ko'rish uchun qilingan. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, maqsadli bo'lmagan (IgG-FH1-5) va to'g'ri maqsadli (anti-P-FH1-5) oqsillari Cfh–/– sichqonlarida plazma va glomerulyar C3 regulyatsiyasini tikladi. Taymkurs tadqiqotlari shuni ko'rsatdiki, C3 va FB darajalarining tiklanishi qon aylanishidagi termoyadroviy oqsillar darajasini aks ettiradi. Bundan farqli o'laroq, plazma C5 ning ortishi termoyadroviy oqsillar qon aylanishidan tozalanganidan keyin ham davom etdi. Biz Cfh–/– sichqonlarida tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefritida IgG-FH1-5 glomerulyar shikastlanishni yaxshilaganligini ko'rsatamiz.

cistanche buyrak kasalligini davolash mumkin buyrak faoliyatini yaxshilaydi

NATIJALAR

Sichqoncha FH (FH1-5) ning dastlabki 5 qisqa konsensus takroriy (SCR) domenlarini sichqonchaga qarshi properdin antikori (anti -P-FH1-5) yoki maqsadli bo'lmagan Ig domeni bo'lgan antikor (IgG-FH1- 5, qo'shimcha rasm S1). Oqsillarning faolligi APga xos gemolitik tahlil yordamida baholandi (1a-rasm). Anti-P-FH1-5 va IgG-FH1-5 anti-P-FH1-5 uchun katta kuchga ega bo'lgan dozaga bog'liq holda gemolizni inhibe qildi. Anti-properdin (anti-P) ham dozaga bog'liq holda gemolizni kamaytirdi, ammo IgG nazorati hech qanday ta'sir ko'rsatmadi. Proteinlarni Cfh–/– sichqonlariga ekvimolyar yuborishdan so‘ng, IgG-FH1-5 oqsili inyeksiyadan 11 kun o‘tgach, anti-P-FH1-5 esa 4 kundan keyin aniqlangan. in'ektsiya (qo'shimcha rasm S2). IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 Cfh-/- sichqonlarida plazmadagi AP regulyatsiyasini tiklay oladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun biz termoyadroviy oqsillarni kiritgandan so'ng birinchi navbatda plazma C3 darajasini o'lchadik (1b-rasm). . IgG-FH1-5 yoki anti-P-FH1-5 ni qo'llash plazma C3 ni in'ektsiyadan keyin 24 soatdan keyin va kamroq darajada 96 soatdan keyin sezilarli darajada oshiradi (1b-rasm). Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 Cfh-/- sichqonlarida plazma AP regulyatsiyasini vaqtincha tiklashi mumkin. Keyinchalik biz nafaqat plazma C3, balki plazma C5 va muqobil yo'l oqsillari FB va properdindagi o'zgarishlarning vaqt kursini tavsiflash orqali ushbu o'zgarishlarni batafsil tahlil qildik. Cfh–/– sichqonlarida IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 kiritilgandan keyin aylanma C5 va properdin darajalarining ortishi C3 va FB dagi ortishlarga qaraganda uzoqroq davom etadi.

IgG-FH1-5 yoki anti-P-FH1-5 bir marta yuborilganidan keyin 27 kungacha bo'lgan vaqt oralig'ida oqsillarni o'lchash orqali C3, C5, FB va properdindagi o'zgarishlar kinetikasini solishtirdik. 2-rasm). IgG-FH1-5 kiritilgandan so'ng, C3, C5, FB va properdinning eng yuqori ko'tarilishi in'ektsiyadan keyingi 1-kuni sodir bo'ldi. Ushbu o'zgarishlarning davolanishdan oldingi darajaga tushish vaqti har xil edi. Davolashdan oldingi darajaga qaytish FB uchun 1 va 4 kunlar, C3 uchun 7 va 11 kunlar va properdin va C5 uchun 14 va 21 kunlar orasida sodir bo'ldi (2a, c, e va g-rasm). Anti-P-FH1-5 qo'llanilgandan so'ng, C3 eng yuqori darajalari 1-kuni sodir bo'ldi, ammo 4 va 7-kunlar oralig'ida davolashdan oldingi darajaga tushdi (2b-rasm). C5 eng yuqori darajalari 4-kuni sodir bo'ldi va 7 va 11 kunlar orasida davolashdan oldingi darajaga qaytdi (2d-rasm). FBning eng yuqori ko'tarilishi 1-kuni sodir bo'ldi va 1 va 4 kunlar oralig'ida davolashdan oldingi darajaga tushdi (2f-rasm). Kutilganidek, anti-P-FH1-5 yoki anti-P kiritilgandan so'ng plazmadagi erkin properdin tugadi (2h-rasm). Erkin plazma properdin darajasi anti-P-FH1-5dan keyin 7 kungacha va anti-Pdan keyin 14 kungacha pastligicha qoldi (2h-rasm). Ikkala termoyadroviy oqsil ham plazmadagi AP regulyatsiyasini vaqtincha tiklagan bo'lsa-da, C3, FB va C5 darajalarining yaxshilanish muddati ularning plazmadagi aniqlanish muddatini aks ettirdi, bu anti-P-FH1-5 uchun qisqaroq (Qo'shimcha rasm S2) . Xulosa qilib aytganda, C3 va FB darajasidagi o'zgarishlar C5 va properdinga qaraganda qisqaroq bo'lgan. Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, plazma FB bu parametrda C3 konvertaza faolligining sezgir belgisidir, properdin esa C5 konvertaza faolligining belgisidir. Shunisi e'tiborga loyiqki, anti-P in'ektsiyasidan so'ng, 24 va 96 soatlarda va 7-kunlarda C5 ko'tarildi.

1-rasm| (a) To'ldiruvchi alternativ yo'lga bog'liq gemoliz tahlili. Antikorlar 60 nM dan 0,5 nM gacha 2-katta suyultirishda titrlangan. IgG-FH1-5, anti-P-FH1-5 va anti-P reagentlari quyon eritrotsitlari gemolizini dozaga bog'liq holda kamaytirdi. IgG-nazorat oqsili hech qanday inhibisyondan foydalanilmagan. Gorizontal chiziqlar o'rtacha qiymatlarni, xatoliklar esa SD ni bildiradi. (b) termoyadroviy oqsillarni in'ektsiyadan keyin Cfh-/- sichqonlarida plazma to'ldiruvchi C3. Plazma C3 miqdori IgG-FH1-5 (qizil uchburchaklar, n ¼ 5) Anti-P–FH1-5 (binafsha uchburchaklar, n ¼ 6), qarshi -P (yashil nuqta, n ¼ 5) va IgG nazorati (ko'k nuqta, n ¼ 5). Gorizontal chiziqlar o'rtacha qiymatlarni, mo'ylovlar esa SD ni bildiradi. ***P # 0,001 va dastlabki ishlov berish qiymati va Bonferroni bir nechta taqqoslash testi bilan 2-ANOVA usulidan olingan. FH, omil H; P, properdin.

(2d-rasm). Xabar qilinganidek, 8,9 C5 konvertazasi Cfh-/- sichqonlarida properdinga bog'liqligini ko'rsatadi.

IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 glomerulyar C3c ni kamaytirdi, ammo Cfh–/– sichqonlarida C3d bo‘yalishini o‘zgartirmadi.

Keyinchalik IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 ning glomerulyar C3b/iC3b/C3c, C3d, properdin va FH bilan bog'liq (FHR) oqsillariga ta'sirini baholadik. IgG-FH1-5 yuborilgandan keyin 96 soatdan keyin glomerulyar C3b/iC3b/C3c bo'yalishi kamaydi, lekin glomerulyar C3d (3a-rasm) va FHR bo'yalishi (3b-rasm) kamaymadi. Glomerulyar C3b/iC3b/C3c IgG-nazorati yoki anti-P bilan o'zgarishsiz qoldi. Davolanmagan Cfh-/- sichqonlarda glomerulyar properdinning noan'anaviy chiziqli bo'yalishi9 IgG nazoratidan keyin 96 soat o'tgach saqlanib qoldi. Anti-P yoki IgG-FH1-5 bilan AOK qilingan Cfh–/– sichqonlarida glomerulyar properdin darajasi 96 soatda deyarli aniqlanmagan (3b-rasm). Kutilmaganda, anti-P-FH1-5 in'ektsiya natijasida anti-properdin, anti-FH/FHR va anti-IgG antikorlari yordamida granulyar glomerulyar binoni paydo bo'ldi (3b-rasm). Ushbu topilma anti-P-FH1-5 oqsili glomeruliyalarda to'planib qolganligini ko'rsatdi. Yovvoyi tipdagi sichqonlarga anti-P-FH1-5 oqsilini yuborish 96 soatda anti-properdin, anti-FH/FHR va anti-IgG antikorlari bilan glomerulyar bo'yashga olib keldi (qo'shimcha rasm S3), bu shuni ko'rsatadiki, bu reagent oddiy glomeruli bilan o'zaro ta'sir qiladi. Biroq, biz anti-P-FH1-5 oqsili Cfh–/– sichqonlarida oldindan mavjud bo'lgan glomerulyar properdin bilan ham o'zaro ta'sir qilishi mumkinligini taxmin qildik. Glomerulyar properdinni olib tashlash uchun anti-P bilan oldindan ishlov berilgan Cfh-/- sichqonlariga reagentni kiritganimizda, anti-properdin, anti-FH/FHR va anti-IgG antikorlari yordamida granüler bo'yash naqshlarida pasayish kuzatildi ( Qo'shimcha rasm S4). Bu kuzatishlar Cfh–/– sichqonlarida anti-P-FH1-5 oqsilining glomerulyar oʻzaro taʼsiri qisman glomerulyar properdinga bogʻliqligini koʻrsatadi.

IgG-FH1-5 Cfh–/– sichqonlarida tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit paytida buyrak shikastlanishini yaxshiladi.

C3G bilan og'rigan bemorlarda o'tkir buyrak shikastlanishi interkurent infektsiyalar fonida rivojlanishi mumkin. Masalan, FHR5 nefropatiyasida buyrak funktsiyasining yo'qolishi sinfaringitik makroskopik gematuriya epizodlari bilan bog'liq.17 C3G bemorlaridagi asosiy C3 disregulyatsiyasi, ehtimol, buyrak yallig'lanishiga olib keladigan triggerdan so'ng komplement vositachiligida buyrak shikastlanishining kuchayishiga olib keladi. Buni modellashtirish uchun biz immunitet kompleksi bo'lgan tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefritini qo'zg'atdik.

2-rasm| IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 bilan AOK qilingan Cfh–/– sichqonlarida plazma komplementi profili vaqti kursi. Plazma C3 (a,b), C5 (c,d), FB (e,f) va properdin (P; g,h) tajriba boshidan IgG-FH bir marta yuborilganidan keyin 27 kungacha{{1{21} }}}} (a,c,e,g; qizil uchburchaklar, n ¼ 5) yoki anti-P- FH1-5 (b,d,f,h; binafsha uchburchaklar, n ¼ 6). Tekshirish vositalariga anti-P (yashil nuqta, n ¼ 5) va izotipga mos keladigan monoklonal antikor (IgG nazorati; ko'k nuqta, n ¼ 5) kiradi. Gorizontal chiziqlar o'rtacha qiymatlarni, mo'ylovlar esa SD ni bildiradi. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 oldingi davolash qiymatiga nisbatan va 2-Bonferroni koʻp taqqoslash testi yordamida dispersiyani tahlil qilishdan olingan. FB, omil B; FH, omil H.

Cfh-/- sichqonlarida komplement va Fc retseptorlari vositachiligidagi yo'llarni o'z ichiga olgan glomerulonefrit modeli, 18,19. Biz ilgari Cfh–/– sichqonlari bu sharoitda buyrak shikastlanishiga o'ta sezgir ekanligini ko'rsatdik7 va FH1-5 proteini AP tartibga solishni kuchaytirish orqali ushbu modelda komplement vositachiligida buyrak shikastlanishini yaxshilashi mumkinligini taxmin qildik. Bizning ma'lumotlarimiz anti-P-FH1-5 oqsili oddiy glomeruliyalarda to'planganligini ko'rsatganligi sababli, biz tezlashtirilgan zardob nefrotoksik nefritida IgG-FH1-5 dan foydalandik. Qo'ylarga nefrotoksik zardobni yuborishdan yigirma to'rt soat oldin sichqonlar IgG-nazorati (n ¼ 7) yoki IgG-FH1-5 (n=8) ning ip in'ektsiyasini oldilar. Eksperimental protokol 4a-rasmda tasvirlangan. Sichqonlar qo'ylarga nefrotoksik zardob kiritilgandan keyin 6 kun o'tgach yo'q qilindi. Glomerulyar patologiyaning barcha 3 ta gistologik o'lchovi (og'irlik darajasi, umumiy hujayralar soni va makrofaglar soni) IgG-FH1-5 guruhida sezilarli darajada past bo'lgan (4b-rasm). IgG-FH1-5 guruhida tubulointerstitial shikastlanish ham pastroq edi (4b-rasm). Qon zardobida karbamid sezilarli darajada ko'tarilgan

3-rasm| Cfh–/– sichqonlarda IgG-FH1-5 yoki anti-P-FH1-5 kiritilgandan keyin 96 soat o'tgach, glomerulyar komplement immuno-bo'yash. (a) 4 ta eksperimental guruhdagi glomerulyar C3b/iC3b/C3c va C3d miqdorini aniqlash bilan birga reprezentativ tasvirlar: IgG-FH1-5 (qizil uchburchaklar, n ¼ 5), anti-P-FH1-5 (binafsha uchburchaklar, n ¼ 6), anti-P (yashil nuqta, n ¼ 5) va IgG nazorati (ko‘k nuqta, n ¼ 5). PlazmaC3 darajalari 1-rasmda ko‘rsatilgan. (b) Ma'lumotlar nuqtalari median qiymatlarni, mo'ylovlar esa kvartillar oralig'ini bildiradi. Dunn ko'p taqqoslash testi bilan Kruskal-Wallis testidan olingan P qiymatlari. (b) Glomerular IgG, FHR va 4 ta eksperimental guruhdagi bo'yashning vakili tasvirlari. Bar ¼ 100 mm. AFU, o'zboshimchalik bilan floresan birliklar; FH, omil H; P, properdin. Ushbu rasmni ko'rishni optimallashtirish uchun ushbu maqolaning onlayn versiyasiga qarangwww.kidney-international.org.

IgG-nazorat guruhi, ammo qon zardobidagi albumin va siydikdagi albumin-kreatinin nisbatidagi o'zgarishlar farq qilmadi (4b-rasm). Kutilganidek, glomerulyar C3b/iC3b/C3c IgG-FH1-5 guruhida sezilarli darajada kamaydi (4b-rasm), lekin glomerulyar sichqon IgG (4b-rasm) va qo'y IgG (ma'lumotlar ko'rsatilmagan) guruhlar o'rtasida farq qilmadi. .

4-rasm| IgG-FH1-5 bilan oldindan davolash Cfh–/– sichqonlarida tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit paytida buyrak shikastlanishini yaxshiladi. (a) Tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit protokolining sxemasi. Qo'y IgG bilan oldindan emlangan sichqonlar IgG-FH1-5 (davolash guruhi, n=8) yoki IgG nazorati (nazorat guruhi, n=7) qo'ylarga nefrotoksik zardobni yuborishdan 24 soat oldin qabul qilingan. (b) IgG-FH1-5 (davolash; qizil uchburchaklar, n=8) yoki IgG-nazorati (nazorat; ko‘k doiralar, n) bilan davolash qilingan sichqonlarda tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit induksiyasidan 6 kun o‘tgach buyrak funktsiyasi va gistologiyasi ¼ 7). Gorizontal chiziqlar median qiymatlarni, mo'ylovlar esa kvartillar oralig'ini bildiradi. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 nazoratga nisbatan va Mann-Whitney testidan olingan. FH, omil H; P, properdin.

MUHOKAZA

IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 ham Cfh–/– sichqonlarida C3, FB va C5 darajalarini normallashtirdi. Bu topilma FH sichqonchaning komplement tartibga soluvchi domenlari SCR domenlari 1 dan 5 gacha (C3b bilan bog'lanish joyi va I omil vositachiligida C3b ajralishi uchun kofaktor faolligi) ichida joylashganligi bilan mos keladi. geparin va endotelial hujayralar bilan bog'lanishiga ta'sir qiladi va ikkinchi C3b bog'lash joyini o'z ichiga oladi, 18 dan SCR domenlarida mavjud.

20 (FH18-20) va shuning uchun termoyadroviy oqsillarda mavjud emas.20 Shunga qaramay, ikkala oqsil ham glomerulyar iC3b/C3b/C3cni kamaytirdi, bu FH18-20 bu parametrda talab qilinmaganligini ko'rsatadi. Bu topilma 1 dan 15 gacha SCR domenlaridan (Cfh–/– .FHD16-20) tashkil topgan mutant FH oqsilini ifodalovchi Cfh–/– sichqonlarida glomerulyar C3 ning anormal cho‘kmasi rivojlanmaganligini ko‘rsatuvchi oldingi ma’lumotlarga mos keladi.21,22 Biroq, Cfh–/–.FH D16-20 hayvonlar buyrak endoteliyasi bo‘ylab C3 faollashuvini tartibga sola olmadi va trombotik mikroangiopatiya rivojlandi. FH18-20 sirtiga mo‘ljallangan domenlar yo‘qligi sababli, FH tanqisligida FH1-5 o‘z ichiga olgan termoyadroviy oqsillarni qo‘llash trombotik mikroangiopatiyaga sezuvchanlikka olib kelishi mumkin. Bundan tashqari, termoyadroviy oqsillarning dimerik tuzilishi ostida C3b bilan bog'lanishning ortib borayotgan avidligi FH18-20 domenlarini maqsad qilib qo'yadigan sirt yo'qligini qoplash uchun etarli bo'lishi mumkin. Shu bilan birga, C3b ning sirt tanilishi FHdagi konformatsion o'zgarishlar bilan ham ta'sir qiladi.23 A Streptococcus pneumoniae FH-bog'lovchi oqsil (SCR 9-domenini bog'laydigan PspCN), FH konformatsion o'zgarishini qo'zg'atadi va FH-PspCN kompleksi va C3b bog'lanishini kuchaytirdi. parchalanishni tezlashtiruvchi faollikni kuchaytirdi. FH20 C3d-bog'lanish joyi FHda ta'sirlanmaydi, lekin FH-PspCN kompleksida ochiladi. Bu nima uchun FH{30}} ning C3d yuzasi bilan o'zaro ta'sir qilishini tushuntirishi mumkin, lekin FH ta'sir qilmaydi.24,25 Bizning agentlarimiz konformatsion o'zgarishlar orqali ham suyuqlik fazasi, ham C3b yuzasi bilan samarali o'zaro ta'sir qilishi mumkin deb taxmin qilamiz. Shunisi e'tiborga loyiqki, IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 AP ga bog'liq gemoliz tahlilida eritrotsitlarni lizisdan himoya qilgan.

Ikkala termoyadroviy oqsil ham glomerulyar C3d bo'yalishini kamaytirmadi, ehtimol glomerulyar C3d ning doimiy tabiati tufayli. Eksperimental immun-kompleks nefritda glomerulyar C3c komplement faollashuvi to‘xtatilganidan keyin 24 soat ichida hal bo‘ladi, biroq C3d haftalar davomida saqlanib qoldi.16 Bundan tashqari, glomerulyar C3d qizil yuguruk nefritida doimiy bo‘ladi.26 Bu, ehtimol, uning glomerulyar yuzalar bilan kovalent o‘zaro ta’sirini aks ettiradi. Cfh–/– sichqonlarida inson FH ni takroriy in'ektsiya qilish 10 kun davomida glomerulyar C3d ning kamayishini ko'rsatdi.11 IgG-FH1-5 ning takroriy dozasi ushbu modelda glomerulyar C3d ni kamaytirishi mumkin. Glomerulyar FHR bo'yalishida ham o'zgarish yo'q. Sichqoncha FHR oqsillarining funktsiyalari haqida kam narsa ma'lum, ammo ular C3b27,28 va C3d bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkin. Biz taxmin qilamizki, glomerulyar FHR oqsillari faqat C3d olib tashlanganida glomeruliyadan tozalanadi. Shu nuqtai nazardan shuni ta'kidlash joizki, inson C3G da H omili bilan bog'liq protein 5 glomerulyar C3d.29 bilan bog'lanadi.

Anti-P-FH1-5 oqsili kutilgandek plazmadagi erkin properdin darajasini kamaytirdi, chunki bu termoyadroviy oqsilning antiproperdin qismi bitta inyeksiyadan keyin 8 kun davomida AP faolligini (properdinning kamayishi tufayli) bloklashi mumkin.30 Biroq, Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, FH{6}} ning plazmadagi C3 darajasini oshirish va glomerulyar C3b/iC3b/C3c bo'yalishini kamaytirishdagi samaradorligi 2 termoyadroviy oqsil o'rtasida solishtirish mumkin (ya'ni, to'g'ri maqsadli yo'naltirilganligidan qat'iy nazar). Bundan tashqari, anti-P yoki IgG-FH1-5 kiritilgandan so'ng glomerulyar properdinning anormal bo'yalishi sezilarli darajada kamaydi. Shubhasiz, C3d va FHR oqsillaridan farqli o'laroq, glomerulyar properdin C3 regulyatsiyasi tiklangandan so'ng osongina tozalanadi. Glomerulyar properdin anti-P-FH1-5 oqsili qo‘llangandan so‘ng o‘zgardi, ammo bu termoyadroviy oqsilning Cfh–/– va yovvoyi tipdagi glomeruliyalarda cho‘kishini aniqlaganimiz tufayli murakkablashdi. Bu qisman glomerulyar properdin bilan o'zaro ta'sirga bog'liq edi, ammo yovvoyi tipdagi glomeruliyalarda cho'kma uning qisman glomerulyar komplementga bog'liq emasligini va ehtimol termoyadroviy oqsilning fizik-kimyoviy xususiyatlari bilan bog'liqligini ko'rsatdi.

Bizning kinetik ma'lumotlarimiz FB, C5 va properdindagi vaqtinchalik o'zgarishlarga oid yangi topilmalarni ko'rsatdi, bu termoyadroviy oqsillarni in'ektsiyadan keyin Cfh-/- sichqonlarida C3 ning ortishi bilan birga keladi. FB darajasi in'ektsiyadan keyin tez ko'tarildi

va C5 va properdin darajalari yuqoriligicha qolgan bir vaqtda boshlang'ich darajaga qaytdi. Cfh–/– sichqonlarida properdin darajalari boshlangʻich bosqichda kamaydi va IgG-FH1-5 kiritilgandan soʻng normal darajaga (20 mg/ml30) koʻtarildi va bu darajada kamida 14 kun saqlanib qoldi. Plazma C5 darajasining ko'tarilishi uchun shunga o'xshash vaqt kursi kuzatildi. Ajablanarlisi shundaki, IgG-FH1-5 11 kun davomida qon aylanishida asosan yo'q edi, bu Cfh-/- sichqonlarida C5 konvertaza hosil bo'lishi C3 konvertazadan ko'ra sekinroq ekanligini ko'rsatadi (chunki C3 darajalari dastlabki darajaga qaytdi. 7 va 11 kun). Plazma C5 anti-P davolashdan so'ng ortdi va anti-P-FH1-5 oqsili bilan ko'paydi. Demak, to'g'ri maqsadli yo'naltirish va FH{20}} ta'siri C5 darajasining oshishiga hissa qo'shgan va C5 konvertazasi Cfh-/- sichqonlarida qisman properdinga bog'liq ekanligini ko'rsatadi. Bu topilma FH va properdinning birgalikda tanqisligi bo'lgan sichqonlarda C5 disregulyatsiyasining yaxshilanishi bilan mos keladi.8,9 Aylanma properdin darajalari C3Gda kamayishi mumkin va plazma C5 yoki eruvchan C5b dan farqli o'laroq, sirt C5 konvertaza faolligi bilan bog'liq ko'rinadi{ {30}}.31,32 Bizning ma'lumotlarimiz properdin darajalari va C5 konvertaza faolligi o'rtasidagi yaqin aloqani qo'llab-quvvatlaydi va doimiy glomerulyar C5 faollashuvining biomarkeri sifatida properdin darajasidan foydalanishni qo'llab-quvvatlaydi.

Shunisi e'tiborga loyiqki, IgG-FH1-5 oqsili bitta in'ektsiyadan keyin ham 11 kungacha qon aylanishida aniqlangan. Bu 24 soat ichida qon aylanishidan olib tashlangan konjugatsiyalanmagan FH1-5 oqsili haqida avval xabar qilganimizdan ancha uzoqroqdir.14 Bu topilma shuni ko'rsatadiki, IgG-FH{ ning plazma yarimparchalanish davri uzoqroq. {9}} protein antikor konjugasiyasidan olingan. IgG-FH1-5 oqsilining plazmadagi yarimparchalanish davri ham to‘liq uzunlikdagi FH uchun biz ilgari kuzatganimizdan uzoqroq edi. Cfh–/– sichqonlarida.11 IgG-FH{19}} oqsilining komplement regulyatsiyasidagi samaradorligini ko‘rsatuvchi ma’lumotlarimiz bilan birgalikda, biz FH{20}} oqsilining farmakokinetik profilini uzaytirish uchun konjugatsiyasini potentsial terapevtik ta’sirga ega deb hisoblaymiz. C3G-da yordamchi dastur.

Xulosa qilib shuni ko'rsatamizki, sirtni aniqlash domenlari yo'qligiga qaramay, FH{0}} termoyadroviy oqsillari glomerulyar C3 faollashuvini kamaytirish va FH tanqisligida plazma komplementi regulyatsiyasini tiklashda samarali bo'lgan. FH1-5 domenlarini antiproperdinga konjugatsiya qilishning aniq afzalligi yo'q edi va IgG-FH1-5 proteini eksperimental nefritda buyrak shikastlanishini kamaytiradi. Terapevtik foydalanish uchun FH ning keng ko'lamli preparatlarini ishlab chiqarishdagi qiyinchiliklardan farqli o'laroq, antikorlarga asoslangan terapiyaning keng ko'lamli ishlab chiqarilishi yaxshi yo'lga qo'yilgan, bu IgG-FH1-5 ni C3G uchun jozibador potentsial terapevtik qiladi.

USULLARI

Birlashtiruvchi oqsillar

IgG-FH1-5. Birinchi 5 sichqoncha FH SCR domenlari (mFH1-5) bog'langan

maqsadli bo'lmagan IgG1 sichqonchasi Ig (sichqonchaning monoklonal antikoriga qarshi ko'tarilgan anti-idyotipik antikor).

Anti-P-FH1-5. Sichqonchaning anti-properdin antikori (anti-P) bilan bog'langan murin FH1-5,30 Pensilvaniya universiteti V. Song tomonidan Alexionga taqdim etilgan.

Boshqaruv. Boshqaruv elementlari izotipga mos keladigan maqsadli bo'lmagan sichqon Ig (IgG-nazorat) va sichqonchani anti-properdin (anti-P) edi (Qo'shimcha rasm S1). Proteinlar pVEK vektorlari va Expi293 hujayralari (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) yordamida hosil qilingan, A proteini (MabSelect SuRe, Cytiva, Marlborough, MA) yordamida tozalangan.

APga xos gemolitik tahlil

60 nM dan 0,5 nM gacha titrlangan 20% normal sichqon zardobi quyon eritrotsitlari (1.{4}} hujayra/ml) bilan 37 C da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Gem ajralib chiqishi spektrofotometrik tarzda aniqlandi (optik zichlik 415 nm); 100 foiz lizis ingibitorsiz sarum edi.

Plazma FB va FH

Plazma etilendiamin tetraasetik kislotasi (Sardtedt, Nordrhein-Vestfalen, Germaniya) bo'lgan naychalarga to'plangan qonni santrifüjdan so'ng olingan. Proteinlar kapillyar elektroforez immunoassay (WES, ProteinSimple, San-Xose, CA) bilan o'lchandi. Antikorlar poliklonal sichqonchaga qarshi FH antikorlari (Alexion Pharmaceuticals, Boston, MA) va sichqonchaga qarshi FB antikorlari (Abcam, Kembrij, Buyuk Britaniya); WES quyonlarga qarshi aniqlash moduli (ProteinSimple, San-Xose, CA) ishlatilgan. Xemilyuminesans signallari Compass for SW dasturi (ProteinSimple, 5.0.1 versiya) yordamida tahlil qilindi, eng yuqori hududlar sifatida miqdori aniqlandi va tahlil nazorati uchun normallashtirildi.

Sichqoncha

Barcha sichqonlar maxsus patogensiz sharoitlarda joylashtirilgan; protseduralar institutsional ko'rsatmalarga muvofiq amalga oshirildi va Birlashgan Qirollik Ichki ishlar vazirligi tomonidan tasdiqlandi. C57BL/6 yovvoyi turdagi sichqonlar Jekson Laboratoriyasidan (Bar Harbor, ME) sotib olindi va Cfh–/– sichqonlari avval tavsiflanganidek yaratilgan.7 Sichqonlar yoshi va jinsi bo'yicha moslashtirilgan; Proteinlarning ekvimolyar dozalari ip in'ektsiyasi orqali yuborildi (anti-properdin va IgG-nazorati uchun 1 mg; IgG-FH1-5 va anti-P-FH1-5 uchun 1,4 mg). Tezlashtirilgan sarum nefrotoksik nefrit qo'y nefrotoksik zardobini qo'y IgG bilan oldindan immunizatsiya qilingan sichqonlarga tomir ichiga yuborish orqali qo'zg'atildi.7 Birlashtirilgan oqsillarni administratsiyasi qo'y nefrotoksik zardobini induktsiyasidan 24 soat oldin amalga oshirildi (4a-rasm).

C3, C5 va erkin properdin Plazma C3 ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili bilan o'lchandi.14 Plazmadagi "erkin" properdin va C5 darajalari elektroximiluminesans immunoassaylari (Meso Scale Discovery [MSD], Meso Scale Diagnostics, Rockville, MD) yordamida o'lchandi. - properdin yoki yuqori bog'langan MSD plitalari bilan qoplangan maxsus anti-murin C5. Bog'langan "erkin" properdin va C5 anti-properdin (W. Song'dan) yoki streptavidin-SULFO (MSD, Meso Scale Diagnostics) bilan birlashtirilgan biotinillangan monoklonal anti-C5 (Alexion) bilan aniqlandi. Kimiluminesans signali SECTOR S 6000 tasvirlagichi (MSD, Meso Scale Diagnostics) yordamida olingan va MSD Discovery Workbench dasturi (Meso Scale) yordamida tahlil qilingan.

Diagnostika, 4-versiya.0.12.1). Standart sifatida rekombinant murin properdin va C5 ishlatilgan.

Buyrak funktsiyasi va gistologiyasi

Gematuriya va proteinuriya Hema-Combistix (Bayer, Reading, Buyuk Britaniya) yordamida baholandi; plazmadagi karbamid o'lchandi va buyrak to'qimalari yuqorida tavsiflanganidek qayta ishlandi.9 Siydikdagi kreatinin kreatinin qo'shimcha protokoli tahlili (#1012; Excell, Filadelfiya, PA) va dog'li siydik yordamida aniqlangan siydik namunalarida aniqlandi. plazma albumini fermentga bog'langan immunosorbent tahlili bilan o'lchandi (#E99-134; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). Davriy kislota-Schiff bilan bo'yalgan buyrak bo'limlari ko'r-ko'rona baholandi va glomerulyar va tubulointerstitial shikastlanishning og'irligiga qarab tartiblandi (0 [yo'q], 1 [engil], 2 [o'rtacha]). O'rtacha glomerulyar hujayralar sonini aniqlash uchun har bir bo'limda o'nta glomeruli baholandi. DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA) bilan Vectashield muhiti yordamida o'rnatilgan 5-mm kriyoseksiyalarda immunofluoressensiya bilan bo'yash amalga oshirildi. Ishlatilgan antikorlar floresein izotiyosiyanat (FITC) bilan konjugatsiyalangan poliklonal echkiga qarshi sichqonchani C3b/C3c/iC3b (1:200; #55500; MP Biomedical, Santa Ana, CA)9; Anjir zanjiriga xos FITC konjugatsiyalangan poliklonal echki sichqonchaga qarshi IgG (1:400; #F5387; Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO); FITC-konjugatsiyalangan monoklonal sichqonga qarshi echki/qo'y IgG (1:100; #F5137; Sigma-Aldrich); yoki FITC-konjugatsiyalangan echki odamga qarshi properdin (1:50; #GAHu/PPD/FITC, Nordic Immun logic Laboratories, Kopengagen, Daniya).9 Biotinillangan echki sichqonchaga qarshi C3d (1:10; # BAF2655; R&D Systems) , Minneapolis, MN) streptavidin AF488 ikkilamchi antikori (1:200; #S-32354; Thermo Fisher Scientific) bilan biotin bilan bloklangan qismlarda (Biotin Bloklash tizimi; Agilent Dako, Santa Clara, CA) ishlatilgan. FH tozalangan kalamushlarga qarshi CD16/CD32-bloklangan bo‘limlarda (1:100; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) echki odamga qarshi FH (1:1000; #A312; Quidel, San-Diego) yordamida tasvirlangan. , CA) va monoklonal anti-echki IgG-FITC ikkilamchi antikor (1:100; klon GT-34; F4891; Sigma-Aldrich). Glomerulyar makrofaglar FITC-konjugatsiyalangan kalamushlarga qarshi CD68 (FA{69}} GTX43518 klon; GeneTex, Irvine, CA) yordamida aniqlandi. Miqdoriy immunofloressensiya tahlili Leica DFC700T raqamli kamerasi (Leica Microsystems, Wetzlar, Germaniya) va Image-Pro Plus dasturiy ta'minoti (Media Cybernetics, Rockville, MD, 7-versiya) bilan birgalikda Leica DM4B optik mikroskopi yordamida amalga oshirildi. Har bir bo'limda o'nta glomeruli tekshirildi va o'rtacha intensivlik o'zboshimchalik bilan floresan fan birliklarida ifodalandi.

Statistik tahlil

Statistik tahlil uchun GraphPad Prism, 8-versiya.0 (GraphPad, San-Diego, CA) ishlatilgan. Vaqt-kurs tahlili uchun Bonferroni ko'p taqqoslash testi (faktorlar vaqt va davolash edi) bilan takroriy o'lchovlar 2-variant tahlili ishlatilgan. Bir nechta guruhlarni taqqoslashda Kruskal-Uollis bilan Dunn ko'p taqqoslash testi qo'llanilgan va 2 guruh uchun Mann-Uitni testidan foydalanilgan.

OSHHOR QILISh

MCP Alexion, ChemoCentryx, Novartis, Gyroscope va Achillion Pharmaceuticals kompaniyalaridan maslahat to'lovlarini oldi. HTC Alexion, Novartis, Aurinia va Achillion Pharmaceuticals kompaniyalaridan maslahat to'lovlarini oldi. YZ, YW, KKJ va SK-K Alexion Pharmaceuticals xodimlaridir. SK Alexion Pharmaceuticals kompaniyasining sobiq xodimi va hozirda Gemini Pharmaceuticals kompaniyasida ishlaydi. Boshqa barcha mualliflar hech qanday raqobatdosh manfaatlar yo'qligini e'lon qilishmagan.

MAQDAT

MCP klinik fanlar bo'yicha Wellcome Trust katta ilmiy xodimidir (grant ma'lumotnomasi 212252/Z/18/Z) va ACG va DPL ushbu stipendiya tomonidan qo'llab-quvvatlanadi. YZ, SK, YW, KKJ va SK-K Alexion Pharmaceuticals tomonidan moliyalashtirildi.

QO'SHIMCHA MATERIAL

Qo'shimcha fayl (PDF)

S1-rasm. Fusionproteinsusedinthisstudy.IgG-FH1-5 maqsadli bo'lmagan sichqon Ig bilan bog'langan H (FH1-5) sichqoncha omilining birinchi 5 domenini o'z ichiga oladi. Anti-P-FH1-5 neytrallashtiruvchi sichqonchaga qarshi properdin antikori bilan bog'langan mFH1-5 dan iborat (anti-P; Miwa va boshq. 30ga qarang). Boshqaruv oqsillari tarkibiga izotipga mos keladigan maqsadli bo'lmagan sichqon Ig (IgG-nazorat) va neytrallashtiruvchi sichqonchaga qarshi properdin antikori (Anti-P) kiradi. S2-rasm. (A) IgG-FH1-5 yoki (B) Anti-P-FH1-5 yuborilgan FH yetishmaydigan sichqonlarning plazma namunalarida FH1-5 ni aniqlash uchun WES blot tahlili. 94-kDaIgheavychainlinkedtomouseFH1-5 (HC-FH1-5)IgG-FH1-5 yuborilganidan keyin 11 kungacha va anti-P-FH1-5 oqsil (qizil qutilar) kiritilgandan keyin 4 kungacha aniqlanadi. ).To'liq uzunlikdagi omil H oqsili aniqlangan yovvoyi tipdagi plazma sichqonlaridan (FH, qora qutilar, chiziq C1) va in'ektsiya qilinmagan FH etishmayotgan sichqonlardan, FH aniq bo'lmagan (qora qutilar, laneC2,) plazmadan iborat. Kutilganidek, anti-P yoki IgG nazorati kiritilgan sichqonlarning plazma namunalarida FHnorFH1-5 ham aniqlanmaydi.

S3-rasm. Yovvoyi turdagi sichqonlarda IgG-nazorati yoki anti-P-FH1-5 kiritilgandan keyin 96 soat o'tgach, glomerulyar komplement immuno-bo'yash. Vakil glomerulyar tasvirlar ko'rsatilgan (bar ¼ 100 mm).

S4-rasm. FH yetishmaydigan sichqonlarning glomerulida anti-P-FH1-5 cho'kishida properdinning roli. Cfh–/– sichqonlariga IgG-nazorati yoki anti-P (davolash 1), 24-soatlardan keyin IgG-nazorati yoki anti-P-FH1-5 (2-davolash) bilan AOK qilindi. Birinchi davolashdan 120 soat o'tgach hayvonlar o'ldirildi va IgG, properdin va FH / FHR uchun glomerulyar bo'yash baholandi. Vakillik tasvirlari ko'rsatilgan. Anti-P in'ektsiyasi properdinni (1-qator, 2-ustun) sezilarli darajada kamaytirdi, lekin FH/FHR (o'zgarishsiz qoladi) yoki IgG (yo'q bo'lib qoladi) bo'yashini emas. Anti-P-FH1-5 24-IgG nazoratidan keyin bir necha soat o'tgach, anti-P-FH yuborilgandan so'ng ko'rinib turganidek, anti-IgG, anti-FH/FHR va anti-P antikorlari bilan granüler bo'yash paydo bo'lishiga olib keldi. 1-5 yolg'iz (3b-rasmga qarang). Anti-P-FH1-5 in'ektsiyadan oldin aylanma (1h-rasmga qarang) va glomerulyar (3b-rasmga qarang) ga qarshi anti-P in'ektsiyasi qo'llanilganda, bu donador bo'yash kamayadi. Anti-IgG bilan glomerulyar bo'yash faqat anti-P-FH1-5 (3-qator, 3 va 4-ustunlar) kiritilgan sichqonlarda aniq bo'lgan va anti-P-FH1-5 olgan sichqonlarda sezilarli darajada past bo'lgan. oldin anti-P. Biz Cfh–/– sichqonlarining glomeruliyalarida anti-P-FH1-5 cho'kishi qisman properdinga bog'liq degan xulosaga keldik. Gorizontal chiziqlar median qiymatlarni, mo'ylovlar esa kvartillar oralig'ini bildiradi. P-qiymati Mann-Whitney testidan olingan. Bar ¼ 100 mm.

ADABIYOTLAR

1.FakhouriF, Frémeaux-Bacchi V, Noöl LH va boshqalar C glomerulopatiya∶ yangi dassifikatsiya. Nat Rev Nephrol.20106:494-499.

2 SmithRH.AppeG8.BlomAMet aLC3gkomeripatiya - nodir komplementga asoslangan haqiqiy kasallikni tushunish. Nat ReyNefrol.201915129-143

3. Pickering MC, Cook HT. Komplement omil H bo'yicha tarjima mini-ko'rib chiqish seriyasi: H omili bilan bog'liq buyrak kasalliklari odamlar va hayvonlarning yangi tushunchalari. Cin Exp Immunol.2008;151:210-230.

4. Daha MR Fearon DT Austen KF, C3nechritic omil （C3NeF）∶suyuqlik fazasini barqarorlashtirish va hujayra bilan bog'langan alternativ yo'l konvertazasi. J Immunol 1976;116:1-7.

5. Mollnes TE, Ng YC, Peters DK, va boshqalar nefritik omilning C3 ga ta'siri va in vivo va in vitro komplementning terminal yo'liga. Oin Exp Immunol. 1986;65:73-79.

6. Nq YC, Peters DK. G3 nefritik omil (C3NeF): hujayra bilan bog'langan dissotsiatsiya va muqobil C3 konvertaza yo'lining suyuqlik fazasini barqarorlashtirish. Cn Exp Imunol.19865:450-457.

7. Pickering MC, Cook HT, Warren J, va boshqalar Nazoratsiz C3 faollashuvi H komplement omili yetishmaydigan sichqonlarda membranoproliferativ glomerulonefritni keltirib chiqaradi. Nat Genert.2002:31;424-428.

8. Lesher AM, Zhou L, Kimura Y va boshqalar. H omil mutatsiyasi va properdin etishmovchiligining kombinatsiyasi og'ir C3 glomerulonefritiga sabab bo'ladi. J Am Soc Nephrol. 2013;24:53–65.

9. Ruseva MM, Veron KA, Lesher AM va boshqalar. Properdinning yo'qolishi H omilining etishmasligidan kelib chiqadigan C3 glomerulopatiyasini kuchaytiradi. J Am Soc Nephrol. 2013;24:43-52.

10. Paixao-Cavalcante D, Hanson S, Botto M va boshqalar. H omili suyuqlik fazasida C3 faollashuvini nazorat qilish orqali GBM bilan bog'langan iC3b ning tozalanishini osonlashtiradi. Mol Immunol.2009;46:1942-1950.

11Fakhuri F, de Xorxe EG. Brune F, va boshq. Inson komplement omili H bilan davolash H omili yetishmaydigan sichqonlarda buyrak to'ldirilishini tezda qaytaradi. Buyrak Int.2010:78:279-286.

12. Mishelfelder S, Parsons J, Bohlender Ll, va boshqalar Moss tomonidan ishlab chiqarilgan, glikozillanish bilan optimallashtirilgan H inson omili komplement kasalliklarida terapevtik qo'llash uchun. JAm Soc Nephrol.201728:1462-1474.

13. Nichols EM, Barbour TD, Pappworth Y, va boshqalar Kengaytirilgan mini-komplement omil H molekulasi eksperimental C3 glomerulopatiyasini yaxshilaydi. Buyrak Int. 201588:1314-1322.

14. Ruseva MM, Peng T, Laser MA va boshqalar Eksperimental C3 glomerulopatiyasida maqsadli komplement inhibisyonining samaradorligi. J Am Soc Nephrol. 2016;27:405-416.

15. Yang Y, Denton H, Davies OR, va boshqalar C3 glomerulopatiyasini davolash uchun ishlab chiqilgan qo'shimcha omil H konstruktsiyasi. J Am Soc Nephrol. 2018;29:1649-1661.

16. Schulze M, Pruchno CJ, Burns M, va boshqalar Glomerulyar C3 klokalizatsiyasi eksperimental glomerulonefritda davom etayotgan immun konlarini shakllantirish va komplement faollashuvini ko'rsatadi. Men J PatholL. 1993:142179-187.

17. Athanasiou Y, Voskarides K Gale DP, va boshqalar CFHRS mutatsiyalari bilan bog'liq oilaviy C3 glomerulopatiyasi 16 nasldagi 91 bemorning klinik xususiyatlari. CTn JAm Soc Nephrol.20116:1436-1446.

18. Kaneko Y, Nimmerhn F, Madaio MP, va boshqalar Nefrotoksik nefritda patologiya va himoya o'ziga xos Fc retseptorlarining tanlab ulanishi bilan aniqlanadi. J Exp Med.2006;203:789-797.

19. Sheerin NS, Springall T, Carroll MC va boshqalar. Anti-glomerulyar bazal membranadan himoya qilish (C{3}}va C4-defisitli sichqonlarda GBM vositachiligidagi nefrit. C Exp Immunol. 1997;110:403-409.

20. Cheng ZZ Hellwae J, Seeberger H va boshqalar. Sichqoncha va inson komplement omili H.Mol Immunol.2006;43.972-979 sirtni aniqlash va C3b bog'lanish xususiyatlarini taqqoslash.

21 dp roe EG. Macor P.Paixao-Caakante D. va boshqalar tipik gemolitik uremik sindromning rivojlanishi C5.J Am Soc Nephrol.2011;22:137-145 komplementiga bog'liq.

22.Pdkering MC, de Xorxe EG.Martinez-Barricarte Ry va boshqalar. Sirtni tanib olish sohalari yo'q komplement omil H tomonidan qo'zg'atilgan spontan gemolitik uremik sindrom. J Exp Med.2007;204:1249-1256.

23 Gerbert AP. Mayk E, Chen ZAet aL Qo'lga kiritilgan H omilini kuchaytirish orqali komplementdan qochish: o'z-o'zini komplementdan himoya qilish uchun ta'sir. J Immunol. 2015;195:4986-4998.

24. Goicoechea de Xorxe E Caesar JJ, Malik TH, va boshqalar. Komplement omil H bilan bog'liq oqsillarning dimerizatsiyasi bilan komplement faollashuvini modulyatsiya qiladi. Proc Natl Acad Sci US A.2013;110:4685-4690.

25. Schmidt CQ, Bai H Lin Z, va boshqalar. Noyob uch tomonlama maqsadli xususiyatlarga ega minimallashtirilgan immun inhibitorining ratsional muhandisligi. J Immunol. 2013;190:5712-5721.

26. Wilson HR, Medjera-Tomas NR, Gilmore AC va boshqalar. Glomerulyar membrana hujumi kompleksi qizil yuguruk nefritida davom etayotgan C5 faollashuvining ishonchli belgisi emas. Buyrak Int. 2019.95655-665.

27. Antonioli AH White J, Crawford F, va boshqalar Sichqoncha omili H bilan bog'liq oqsillar tomonidan komplementning muqobil yo'lini modulyatsiya qilish. J Immunol. 2018;200:316-326.

28. Cserhalmi M, CsincsiALMezei Z va boshqalar. Sichqoncha omili H bilan bog'liq protein FHR-B komplement faollashuviga yordam beradi. Front Immunol.20178:1145.

29. Medjeral-Tomas NR, Moffett H, Lomax-Browne HJ va boshqalar Glomerulyar komplement omil H bilan bog'liq protein 5 (FHR5) C3 glomerulopatiyasida juda keng tarqalgan va renalimpairmentKdney Int Ren bilan bog'liq. 2019;4:1387-1400.

30. Miwa T, Sato S, Gullipalli D, va boshqalar. Bloklash properdin, muqobil yo'l va anafilatoksin retseptorlari parchalanishni tezlashtiruvchi omil va CD59 er-xotin nokautli sichqonlarda buyrak ishemiyasi-reperfuzion shikastlanishini yaxshilaydi. J Immunol. 2013;190:3552-3559.

31. Corillo F, Bravo Garcia-Morato M, Nozal P, va boshqalar C3 glomerulopatiyasida C5 konvertaza disregulyatsiyasining biomarkeri sifatida zardobning properdin iste'moli. Clin Exp Immunol.2016;184:118-125.8. Lesher AM, Zhou L Kimura Y va boshqalar. H omil mutatsiyasi va properdin etishmovchiligining kombinatsiyasi og'ir C3 glomerulonefritini keltirib chiqaradi.JAm Soc Nephrol.2013;2453-65.

32. zhang Y, Nester OM Martin B. va boshqalar C3 glomerulopatiyasining komplement biomarker profilini aniqlash. Clin J Am Soc Nephvol.20149:186-1882.