Feniletanoid glikozidga boy ekstraktining Cistanche Desertikolaning kako-2 hujayra bir qatlamli modeli bo'ylab ichak orqali tashilishini baholash

Kirish

Odamning yo'g'on ichak adenokarsinomasidan olingan Kako{0}} hujayra liniyasi enterotsitlarga o'xshash xususiyatlarga ega. Oddiy sharoitda kako{2}} hujayralari o'z-o'zidan etuk hujayralardan ajralib turadi va buzilmagan monoqatlamlarni hosil qiladi [1]. Qo'shni hujayralar monoqatlamning apikal tomonida hosil bo'lgan qattiq birikmalar orqali yopishadi, bu esa epiteliya qatlami bo'ylab passiv va faol tashiladigan dorilarni ajrata oladi [2]. Oddiy enterotsitlar bilan morfologik va biokimyoviy o'xshashligi tufayli Caco{5}} hujayra monoqatlamlari dorilarning ichakdan so'rilish potentsialini va transport xususiyatlarini o'rganish uchun yaxshi qabul qilingan in vitro modeli bo'lib xizmat qiladi [3, 4].

Kimyoviy moddalardan farqli o'laroq, o'simlik ekstraktlari (PE) biologik faolligi va faol tarkibiy qismlari ko'pincha yaxshi aniqlanmagan aralashmalardir [5]. Bundan tashqari, PE ning ichakdagi transport xususiyatlari, uning tarkibiy qismlarining xususiyatlaridan farqli o'laroq, klinik foydalanish bilan chambarchas bog'liq. Kaco-2 hujayra monoqatlami boʻylab sinov namunasi uchun oqim oʻlchovlari odatda HPLC, LC/MS va boshqalar kabi kimyoviy usullarni oʻz ichiga oladi. Garchi bu usullar kuchli vosita boʻlsa-da, ular murakkab, vaqt talab qiluvchi, qimmat va vaqti-vaqti bilan talab qilinadi. murakkab uskunalarni talab qiladi. Eng muhimi shundaki, na bitta, na ozchilik komponenti PEni bir butun sifatida aks ettira olmaydi. Shunday qilib, PE ning transport xususiyatlarini aniqlash va baholash uchun tarkibiy qismlarni aniqlashdan mustaqil yangi yondashuvni o'rnatish kerak.

Cistanche deserticola YC Ma (CD), holoparazit o'simlik, an'anaviy xitoy tibbiyoti bo'lib, asosan buyrak etishmovchiligi, tana zaifligi va ich qotishini davolashda qo'llaniladi va bu foydalanish Xitoy farmakopeyasida rasman qayd etilgan [6]. Feniletanoid glikozidlar (PhGs), shu jumladanechinacoside (EC), akteosid (AC) va izoakteosid(IS) va boshqalar polifenol birikmalar sinfidir [7]. Ular asosiylardan biri hisoblanadiCistanche turlarining bioaktiv tarkibiy qismlari[8]. Farmakologik tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, PhG ning bioaktivligi xilma-xil bo'lib, antioksidlovchi [9], charchoqqa qarshi [10], gepatoprotektiv [11], immunomodulator [12], yallig'lanishga qarshi [7, 13] va neyroprotektiv ta'sirlarni o'z ichiga oladi. 14]. Biroq, PhGsning ichak orqali tashish xususiyatlari o'rganilmagan. Ushbu tadqiqotda biz o'rganib chiqdikCD dan PhG ga boy ekstrakti (PRE) ning ichak o'tkazuvchanligiintegratsiyalashgan tizim sifatida va farqlangan Caco{0}} hujayralarida uchta asosiy PhG (AC, IS va EC) o'tkazuvchanligi. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, PRE asosan kam so'rilgan passiv diffuziya orqali kontsentratsiya gradienti bo'ylab oqimsiz tashiladi, bu FG ni CDda klinik qo'llash uchun farmakokinetik asosni ta'minlaydi.

TABIY CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE O'TLARI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Materiallar va usullar

Materiallar

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98% Must Biotechnology Co. (Chengdu, Xitoy) dan sotib olingan. Dulbekkoning modifikatsiyalangan Eagle muhiti (DMEM), homila sigir zardobi (FBS) va muhim bo'lmagan aminokislotalar (NEAA) Gibco BRL (Grand Island, NY, AQSh) tomonidan ishlab chiqarilgan. 6-quduq TranswellTM plitalari (qo‘shish membranasi o‘sish maydoni 4,67 sm2) Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, AQSH) kompaniyasidan olingan. Sichqoncha quyruqli kollagen Sigma-Aldrichdan (Sent-Luis, MO, AQSh) olingan. HPLC tahlili uchun barcha reagentlar va kimyoviy moddalar analitik darajada edi.

CD dan PRE tayyorlash

Havoda quritilgan CD materiali kukunga aylantirildi va 70% etanol bilan perkolatsiya orqali ekstraktsiya qilindi. PhG ga boy fraksiya avval tavsiflanganidek [10] tayyorlangan va suv bilan toʻyingan n-butil spirti bilan ekstraksiya qilingan. Ekstrakt suyuqligi konsentrlangan va past bosim ostida quritilgan. Katta gözenekli qatron-UV spektrofotometriyasi [15] PhG miqdorini 78,4% ni o'lchadi. Yakuniy namuna quruq vazn bo'yicha 1,75% xom ashyo hosilini ko'rsatdi. Olingan namuna keyingi foydalanishgacha -20 darajada saqlanadi.

HPLC yordamida AC, IS va ECni aniqlash

PREda AC, IS va EC tarkibini tahlil qilish uchun LC yechim dasturi bilan jihozlangan Shimadzu HPLC tizimi ishlatilgan. Teskari fazali Intersil C18 ustuni (4,6 mm × 250 mm, 5 mkm) ishlatilgan va xona haroratida saqlangan. Ko'chma fazalar asetonitril va suv o'z ichiga olgan 0,1% fosfor kislotasi (v/v) gradientli elyusiya bilan (1-jadval) 1,0 ml/min oqim tezligida. UV spektrofotometr detektori 334 nm ga o'rnatildi. AC va IS oqimini aniq aniqlash uchun biz yangi HPLC-fluoresansni aniqlash (HPLC-FLD) usulini ishlab chiqdik. Strukturaviy tahlil va floresans to'lqin uzunligini skanerlashdan so'ng (ma'lumotlar ko'rsatilmagan), biz AC (masalan: 338 nm, Em: 448 nm) va IS (masalan: 320 nm, Em: 434 nm) uchun optimal floresansni aniqlash shartlarini oldik.

HPLC analitik usuli quyidagi ishlash xususiyatlaridan foydalangan holda tasdiqlangan: barqarorlik, chiziqlilik, sezgirlik, aniqlik (kun ichidagi va kunlararo o'zgaruvchanlik) va aniqlik. Transport tamponidagi tahliliy moddalar 24 soat davomida 25 daraja qorong'i joyda saqlanadi va ularning barqarorligi o'lchanadi. Analitiklar vitamin C (0.4%) borligida juda barqaror edi, chunki eng yuqori hududlarda nisbiy standart og'ish (RSD) qiymatlari < 3,5% edi. AC, IS va EC uchun chiziqli regressiya tenglamasi, korrelyatsiya koeffitsienti, chiziqlilik diapazoni, LOD va LOQ 2-jadvalda keltirilgan. LODlar (18–30 nM) va LOQs (60–100 nM) qiymatlar HPLC-FLD va HPLC-UV usullari juda sezgir ekanligini ko'rsatadi. Usulning aniqligini ifodalovchi RSD qiymatlari kun ichidagi va kunlararo o'zgaruvchanlik uchun <2% edi, bu yaxshi aniqlikni ko'rsatadi. Qayta tiklashni baholash uchun uchta (yuqori, o'rta va past) konsentratsiya darajasini olish uchun transport buferiga AC, IS va EC qo'shildi. Tahlil qiluvchi moddalar uchun usulning qayta tiklanish qiymatlari 3-jadvalda jamlangan. O'rtacha unumdorlik 90,0% dan 96,4% gacha bo'lgan, bu yaxshi aniqlikdan dalolat beradi. Xulosa qilib aytganda, o'rnatilgan HPLC usullari transport buferidagi AC, IS va EC miqdorini aniqlash uchun chiziqlilik, sezgirlik, aniqlik va aniqlik bo'yicha qoniqarli.

TABIIY SITSTANCHE TUBULOSA EXTRACT PHGS75% ECH 30% AKT 12%

Bioassay tizimi orqali PRE ni aniqlash

Bioassay (umumiy oksidlanishga qarshi quvvat) biz ilgari tasvirlab bergan [16] FRAP (temirni kamaytiruvchi/antioksidant quvvat) tahliliga asoslangan va chiziqlilik va aniqlik (kun ichidagi va kunlararo o'zgaruvchanlik) nuqtai nazaridan tasdiqlangan. Bioassay usulining chiziqliligi kalibrlash egri chiziqlari asosida aniqlandi. Lineerlikning konsentratsiya diapazoni 0 edi.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996). Belgilangan bioassay usulining aniqligi PRE (10,0 ug / ml) tahlili uchun kun ichidagi va kunlararo o'zgaruvchanlik nuqtai nazaridan aniqlandi. Usulning kun davomida takrorlanishi o'sha kuni ketma-ket beshta aniqlash asosida aniqlandi. Kunlararo takroriylik uch xil kundagi beshta ketma-ket aniqlash asosida o'lchandi. Usulning aniqligi uchun RSD qiymatlari mos ravishda 1,014% va kun ichidagi o'zgaruvchanlik uchun 4,72% ni tashkil etdi, bu yaxshi aniqlikni ko'rsatadi. Shunday qilib, o'rnatilgan bioassay usuli transport buferida PRE miqdorini aniqlash uchun chiziqlilik, aniqlik va aniqlik bo'yicha qoniqarli.

Hujayra madaniyati

Kako{0}} hujayralari 37 daraja va 95% nisbiy namlikda 5% CO2 va DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-glutamin, penitsillindan tashkil topgan muhitda ekilgan. (100 U/ml) va streptomitsin (100 ug/ml). Hujayra o'sishi va differentsiatsiyasi paytida muhit har kuni o'zgartirildi. Hujayralar 75-sm2 plastik kolbalarda o'stirildi va har 3-5 kunda 0,05% EDTA-tripsin bilan yig'ib olindi. Tashish tajribalari uchun hujayralar kollagen bilan qoplangan Transwell qo'shimchalarida 1 × 105 hujayra / sm2 zichlikda ekilgan. Ekishdan taxminan 21 kun o'tgach, mono qatlamlar transport tajribalari uchun ishlatilgan. Ularning yaxlitligi ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., AQSh) bilan jihozlangan EVOM bilan mono qatlamlar bo'ylab trans-epitelial elektr qarshiligini (TEER) o'lchash yo'li bilan aniqlandi. Caco{24}} hujayra monoqatlamining TEER qiymatlari 500 O∙cm2 dan oshishi kerak.

Transport tajribalari

Yagona qatlam transport buferi (1{24}} mM HEPES, 1 mM natriy piruvat, 10 mM glyukoza, 3 mM CaCl2 va 145 mM NaCl, pH 7,4 ni o'z ichiga olgan P-bufer) bilan yuvilgan va keyin oldindan inkubatsiya qilingan. 37 daraja. Tashish tamponini olib tashlaganingizdan so'ng, sinov namunalarini o'z ichiga olgan yangi transport buferi APdagi apikal (AP) kameraga (1,5 ml) bazolateral (BL) yo'nalishli tadqiqotlar yoki BL dan AP yo'nalishi bo'yicha BL kamerasiga (2,5 ml) qo'shildi. HPLC yordamida AC, IS va EC tahlillari uchun har bir qabul qiluvchi kameradan turli vaqt oralig'ida (30, 60, 90 va 120 minut) bir alikot (300 ul) chiqarildi. Qabul qiluvchi kamera har bir namuna olishdan keyin bir xil hajmdagi yangi oldindan qizdirilgan (37 daraja) transport buferi bilan to'ldirildi. Yig'ilgan namunalar keyingi foydalanish uchun -20 daraja haroratda saqlanadi. Bioassay yordamida PREni aniqlash uchun faqat 120 daqiqada namunalar olindi. PRE, AC, IS va EC ning beqarorligi tufayli 0,4% (w/v) vitamin C edi.

HPLC tomonidan AC, IS va EC tarkibini aniqlash uchun namunalarni barqarorlashtirish uchun qo'shildi va PRE bioassay uchun namunalar namuna olingandan so'ng darhol tahlil qilindi. Har bir namunaning ko'rinadigan o'tkazuvchanlik koeffitsienti (Papp yoki 'Papp) qiymati hisoblab chiqilgan.

Ma'lumotlarni tahlil qilish

AC, IS va EC ning AP BL yoki BLAP yo‘nalishlaridagi Papp qiymatlari quyidagi tenglama asosida hisoblangan: Papp {0}} (4Q/4t)/(AC0), bu erda Papp - HPLC tomonidan aniqlangan ko'rinadigan o'tkazuvchanlik koeffitsienti (sm / s). (4Q/4t) - qabul qiluvchi tomonda tekshirilayotgan birikmaning (AC, IS yoki EC) paydo bo'lish tezligi (mkmol/s); A - qo'shimchaning sirt maydoni (sm2); C0 - donor tomonidagi dastlabki sinov birikma kontsentratsiyasi (mkmol/ml). Xususan, "Papp qiymatlari" hisoblanganda "mkmol" o'rniga "ug" massa birligi ishlatilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida ifodalanadi.

Natijalar

CD dan PREda AC, IS va EC tarkibi

Chunki AC, IS va EK asosiy bioaktiv hisoblanadiCistanche turlarining PHGlari[8], biz HPLC-UV orqali PREda ularning tarkibini tahlil qildik. Vakolatli xromatogramma 1-rasmda ko'rsatilgan. Ushbu tarkibiy qismlarning identifikatsiyasi 334 nm to'lqin uzunligidagi saqlanish vaqtlari va UV spektrini haqiqiy standartlar bilan solishtirishga asoslangan. PREdagi AC, IS va EC tarkibi mos ravishda 26,60%, 1,84% va 32,83% ni tashkil etdi. Shunday qilib, bu uchta birikma PRE ning 61,27% ni tashkil qiladi; bundan tashqari, yuqoridagi natijalar PREdagi PhG miqdori 78,4% ekanligini ko'rsatadi. Shuning uchun, AC, IS va EC PREdagi PhGlarning taxminan 80% ni tashkil qiladi.

BUYRAK FUNKSIYASINI YAXSHLASH UCHUN TABIY CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

PRE, AC, IS va EC ning jami oksidlanishga qarshi imkoniyatlari

CD dan PhG larning oksidlanishga qarshi faolligini o'rganish haqida xabar berilgan [9] va AC, IS va EC PREdagi PhGlarning taxminan 80% ni tashkil qiladi. Shunday qilib, PRE, AC, IS va EC ning umumiy antioksidlovchi imkoniyatlari FRAP qiymatlari (× 10-6 mmol) yordamida tahlil qilindi va ifodalandi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, FRAP qiymati 8 × 10-6 mmol bo'lganida, PRE, AC, IS va EC ning yakuniy konsentratsiyasi 6,20 ug / ml, 3,14 ug / ml, 22,92 ug / ml va 4,89 ug bo'lgan. /ml, mos ravishda, bu to'rtta namunaning jami oksidlanishga qarshi qobiliyati quyidagicha tartiblanganligini ko'rsatadi: AC > EC > PRE > IS. PRE ning bioaktivligi uning faol moddalar guruhlari (AIG) bilan bog'liq. Taxminan 60% PRE, AC va EC PRE va ISga qaraganda kuchliroq jami oksidlanishga qarshi faollikni ko'rsatdi. IS (1,84%) PRE ning juda kichik qismini tashkil qilganligi sababli, zaif antioksidant IS kabi boshqa komponentlar ham PREda aniq faoldir. Ajablanarlisi shundaki, umumiy oksidlanishga qarshi faollik AC va uning izomeri IS o'rtasida deyarli 7- baravar farq qilgan, bu nafaqat fenolik gidroksil guruhlarning soni [9], balki molekuladagi fenolik gidroksil guruhlarning holati ham ta'sir qilganligini ko'rsatadi. antioksidlovchi ta'sir.

Caco{0}} monoqatlamlarini tekshirish

Caco{0}} hujayra monoqatlam tizimini tasdiqlash uchun propranolol (yaxshi tashiladigan marker) va Lucifer sariq (yomon tashiladigan marker)ning Papp qiymatlari Caco-2 monoqatlamlari bo‘ylab AP dan BLgacha bo‘lgan. mos ravishda 1,51 × 10-5 sm / s va 2,8 × 10-7 sm / s deb belgilangan va bu qiymatlar oldingi hisobotlarda chop etilganlar bilan kelishilgan [17, 18]. Ishqoriy fosfataza faolligi tahlili shuningdek, kako{13}} hujayra monoqatlamlari sifat jihatidan ingichka ichak epiteliysi bilan solishtirish mumkinligini tasdiqladi [19].

AC, IS va EK ning o'tkazuvchanligi

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 sm/s), sust so‘rilgan dorilar esa past edi (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2 [20]. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

PRE ning o'tkazuvchanligi

Yuqoridagi natijalar shuni ko'rsatadiki, PRE ning umumiy oksidlanishga qarshi qobiliyati kamida PRE dan AIG ning 61,27% ga bog'liq. Shunday qilib, biz PRE ning TR ni uning umumiy oksidlanishga qarshi qobiliyatining konsentratsiya-ta'sir egri chizig'i asosida baholadik va PRE ning transport xususiyatlarini aks ettirish uchun "Papp qiymatlarini" hisoblab chiqdik. AP!BL va BL!AP uchun PRE ning Papp qiymatlari (2,16 ± 0,26) × 10–7 sm/s va (3,13 ± 0,29) × 10–7 sm/ edi. s, o'z navbatida, bu birikma yomon o'tkazuvchanligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, oqim yoki faol transport aniq emas edi, chunki PRE uchun 'Papp BL dan AP / 'Papp AP dan BL nisbati 1,45 [20] edi. Bundan tashqari, PRE ning ikki yo'nalishli TR taxminan 300 va 900 ug / ml oralig'ida chiziqli ravishda oshdi (5-rasm). Natijalarning yo'naltirilgan afzalligi yo'qligi passiv diffuziya PRE ning asosiy transport mexanizmi ekanligini ko'rsatadi.

Munozara

Yuqori darajada tozalangan dori vositalari bilan solishtirganda, PE odatda turli xil fizikokimyoviy xususiyatlarga ega bo'lgan yuzlab tarkibiy qismlardan iborat aralashmalardir. Shu sababli, PE o'zining murakkab AIG [21] tufayli tizimli, ko'p maqsadli va ko'p kanalli sinergik ta'sir ko'rsatadi, bu esa PE ning transport xususiyatlarini tahlil qilishga to'sqinlik qiladi. PE ning transport xususiyatlarini yanada ilmiy baholash uchun ba'zi tadqiqotchilar PEda bitta komponent emas, balki bir nechta komponentlarni aniqladilar [22-24]. Shunga qaramay, cheklangan miqdordagi tarkibiy qismlar PEni bir butun sifatida aks ettira olmaydi. Biroq, PEdagi barcha komponentlarni aniqlash mumkin emas. Bundan tashqari, agar PEdagi turli komponentlar butunlay boshqacha transport xususiyatlarini namoyish qilsa, PEning yaxlit transport xususiyatlarini aniqlash qiyin bo'ladi.

1990-yillarda mikroblarga qarshi vositalarning TR ni baholash uchun bioassay tizimlari ishlatilgan [25]. 2005 yilga kelib, Eguchi va uning hamkasblari [26] sabzi ekstraktining oksidlanishga qarshi faolligini farqlangan Kako-2 hujayralaridan BL muhitidan foydalangan holda baholadilar; bu yondashuv in vivo vaziyatlarni aks ettirish uchun ko'proq mos keladi.

PhGs [9] faolligi haqidagi oldingi hisobotga va bizning natijalarimizga (2-rasm) asoslanib, PREdagi AIG ning TR ni qabul qiluvchi kameradagi muhitning umumiy oksidlanishga qarshi qobiliyatini aniqlash orqali baholash mumkin. Tashish tajribalaridan so'ng biz PRE ning TR har ikki yo'nalishda ham o'xshashligini aniqladik va bu transport to'yinmagan va yomon so'riladi ('Papp < ​​1.0 × 10-6 sm/s) [3] va u oqimni ko'rsatmadi, bu konsentratsiya gradienti bo'yicha passiv diffuziya PRE ning asosiy transport mexanizmi ekanligini ko'rsatadi (5-rasm). Bundan tashqari, PRE ning transport xususiyatlari PREda oksidlanishga qarshi faollikni ko'rsatadigan samarali komponentlar bo'lgan AC, IS va EC ning xususiyatlariga mos keladi (4-rasm va 4-jadval). Ushbu natija kutilgan edi va hozirgi bioassay tizimi differentsiatsiyalangan Caco{12}} hujayralarida PREda AIG ning tashish xususiyatlarini baholash uchun mos va ishonchli ekanligini ko'rsatdi.

Odatda bitta birikmaning tashilishini aks ettirish uchun ishlatiladigan kanonik Papp qiymatidan farqli o'laroq, kontsentratsiya-ta'sir egri chizig'iga asoslangan TRdan olingan "Papp" qiymati nafaqat tuzilishga ega bo'lgan mono qatlamlarga o'tadigan komponentlarni aks ettirishi mumkin, balki Shuningdek, maqsadli faollikka taalluqli boshqa omillar, masalan, komponentlarning metabolitlari, kimyoviy jihatdan parchalangan mahsulotlar va hatto maqsadli bioaktivlikka ta'sir qilishi mumkin bo'lgan stimulyatsiyaga javoban Caco{1}} hujayralaridan ajralib chiqadigan ba'zi sitokinlar ham kiradi. Shunday qilib, faqat tashilgan buzilmagan komponentlar emas, balki yuqorida aytib o'tilgan multifaktor "Papp" qiymatini aniqlaydi. Shuning uchun, 'Papp kanonik Papp qiymatidan ko'ra in vivo vaziyatlar bilan kuchliroq bog'lanishi mumkin [26]. Ushbu tadqiqotda biz PRE ning "Papp" qiymatiga asoslanib, passiv tarqaladigan va yomon so'rilgan tabiatini aniqladik va bu tabiat CD ning yuqori dozasi va uzoq klinik davolash davri bilan bog'liq bo'lishi mumkin [27]. Shunga qaramay, bu topilmalar klinisyenlar uchun CDni qo'llashda ko'proq tizimli yo'l-yo'riq beradi, agar faqat FG'lar emas, balki CDdagi aksariyat AIG ning transport xususiyatlari aniqlangan bo'lsa.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA CISTANCHE EKSTRAKT PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Shu bilan birga, tanlangan bioaktivlik elementi qabul qiluvchi kameraning muhitida aniqlanishi uchun etarlicha sezgir bo'lishi kerak, bu PE ning transport xususiyatlarini baholash uchun bioassay tizimini yaratishda qiyinchilik tug'diradi. Bundan tashqari, bioaktivlik imkon qadar ko'proq komponentlarga bog'liq bo'lishi kerak. Bizning tadqiqotimizda jami oksidlanishga qarshi quvvat tahlili bir qancha boshqa usullarga qaraganda ko'proq mos edi (S1-rasm). Ammo shunga qaramay, bizning tahlilimiz faqat 120 daqiqada PRE TR ni aniqlay oladi.

Birgalikda, ushbu tadqiqot differentsiatsiyalangan Caco{0}} hujayralarida PRE ning ichak o'tkazuvchanligini baholash uchun yangi bioassay tizimini yaratdi. Olingan natijalar shuni ko'rsatdiki, konsentratsiya gradienti bo'ylab oqimsiz past so'rilgan passiv diffuziya PRE ning asosiy transport mexanizmidir (5-rasm), bu FG ning CDda klinik qo'llanilishi uchun farmakokinetik asosni ta'minlaydi. TRni baholash uchun yangi bioassay tizimidan foydalanish va shu bilan "Papp qiymatlarini baholash uchun" hisoblash.ichakni tashish xususiyatiPElarda AIG ni qo'llash mumkin. Tegishli bioaktivlikni hisobga olgan holda, bu yondashuv boshqa PE uchun ham mos bo'lishi mumkin.