Kosmetik maqsadlarda foydalanish uchun suvli impulsli elektr maydonlari yordamida olingan Islandiya dengiz o'tlari ekstraktining salohiyatini o'rganish 2-qism

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

2.5.4. Gialuronidazani inhibe qilish faoliyati

Barcha dengiz o'tlari ekstraktlari sezilarli darajada yuqori ko'rsatdiantigialuronidazafaolligi (4-jadval), tanin kislotasi eritmalari (gialuronidazaning taniqli inhibitori) bilan taqqoslanadigan natijalarni ko'rsatadi. Xususan, A.esculenta ekstraktlari sinovdan o'tgan barcha usullar uchun 100 foiz inhibisyonni ko'rsatdi. Bundan tashqari, U. Lactuca ekstraktlari inhibisyonning 90 foizdan yuqori faolligini namoyish etdi, bu erda PEF (96,8 foiz) va PEF va HW (97,3 foiz) kombinatsiyasi tomonidan ishlab chiqarilgan ekstraktlarning inhibisyoni an'anaviy issiq suv tomonidan ishlab chiqarilgan inhibisyondan yuqori bo'ldi. usul 93,4 foiz)(s<0.05). all="" p.palmaria="" extracts="" exhibited="" similar="" activities="" (p=""><0.05), the="" inhibition="" of="" the="" extracts="" produced="" by="" pef="" was="" (91.9="" %)="" and="" the="" combination="" of="" pef+="" hw="" (89.5%)="" and="" the="" traditional="" hot="" water="" method="">

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Boshqa mualliflar, shuningdek, turli xil dengiz o'tlari ekstraktining antigialuronidaza faolligini ta'riflagan, ayniqsa o'tlarga boy ekstraktlar uchun.florotanninlarjigarrang suvo'tlardan [73,74]. Biroq, bizning eng yaxshi ma'lumotlarga ko'ra, PEF tomonidan ishlab chiqarilgan P. palmitat va U.lactuca ekstraktlarining gialuronidaza inhibitiv faolligi birinchi marta xabar qilingan.

Cistanche immunitetni yaxshilashi mumkin

Gialuron kislotasi dermisning asosiy tarkibiy qismi bo'lib, u to'qimalarni tiklashda ishtirok etadi, u qarish bilan parchalanadi, ajinlar va terining qattiqligini yo'qotadi. Shu ma'noda, gialuronidaza inhibitörleri qarish ko'rinishini yaxshilash uchun dermal hujayradan tashqari matritsaning gialuron kislotasi darajasini oshiradi.yuz terisi[13]. Shu sababli, ushbu tadqiqot natijalari kosmetik mahsulotlarda potentsial foydalanish bilan suv o'tlari manbalaridan tabiiy gialuronidaza inhibitörlerini ekspluatatsiya qilish uchun yangi yo'llarni ochishi mumkin.

Xulosa qilib aytganda, to'plangan ma'lumotlar A.esculenta ekstrakti P.palmaria va U. Lactuca ga qaraganda sinovdan o'tgan fermentlarga nisbatan yaxshiroq inhibitiv faollik ko'rsatdi degan xulosaga kelishimizga imkon berdi. Shunday qilib, dengiz o'tlarining eng istiqbolli turi hisoblanadiantienzimatikfaoliyati va shuning uchun u laboratoriyamizda keyingi tadqiqotlar uchun tanlangan. A.esculenta-dan olingan xom ekstraktlar in vitro tajribalarida yaxshi nomzod bo'lib ko'rinsa-da, ushbu biologik ta'sirlar uchun mas'ul bo'lgan metabolitlarning identifikatorini aniqlash uchun qo'shimcha tadqiqotlar o'tkazish kerak.

2.6.Kimyoviy birikmalar va bioaktiv xossalar o'rtasidagi bog'liqlik

Asosiy komponentlar tahlili (PCA) natijalari shuni ko'rsatdiki, guruhlarning asosiy bo'linishi PC1 va PC2 tomonidan aniqlangan, bu ma'lumotlarning mos ravishda 71,9 foizini va 14,5 foizini tashkil qiladi (2-rasm). A.esculenta ekstraktlari tarkibida flavonoidlar va fenolik birikmalarning yuqoriligi, fermentlarga (kollagenaza, tirozinaza va elastaz) ingibitor ta'siri, DPPH va FRAP qiymatlari boshqa turlarga, P. palmata va Ulga qaraganda ko'proq edi. Laktuca. Boshqa tomondan, A.esculenta, ayniqsa, P. palmitat bilan solishtirganda (u PC1 ning qarama-qarshi tomonida joylashgan) kamroq uglevod tarkibiga ega edi. PC2 bo'ylab ma'lumotlarning o'zgarishi asosan ABTS va bilan bog'liq edigialuronidazainhibisyon. Uchastkadagi joylashuvdan ko'rinib turibdiki, P. Palmata ABTS bilan kuchliroq bog'liq edi, U. Lactuca esa ko'proq bog'liq edi.gialuronidazabu ikki turga nisbatan inhibisyon ta'siri.

TPC, TFC, DPPH, FRAP o'rtasidagi yuqori va sezilarli ijobiy korrelyatsiya va kollagenaza, elastaz va inhibitiv ta'sirga ega.tirozinazaPearson korrelyatsiya tahlili bilan ko'rsatildi (5-jadval).

Shakl 2. Asosiy komponentlar tahlili (PCA) omillar yuklanishining biploti (qora doiralar) va suv o'tlari ekstrakti uchun ballar (P. palmata: jigarrang nuqta (yuqori o'ng); U. Lactuca: yashil uchburchaklar (asosan yuqori chapda); A esculenta: ko'k kvadratlar (syujetning pastki qismi).

Bu fenolik birikmalar (jumladan, flavonoidlar) turli dengiz o'tlarining antioksidant faolligiga asosiy hissa qo'shuvchi [75-77] bo'lgan oldingi tadqiqotlar bilan kelishilgan edi. Jigarrang makroalglardan olingan ekstraktlarning yuqori antioksidant faolligi ma'lum bir polifenollar guruhi, florotanninlar va ularning noyob molekulyar tuzilishi bilan bog'liq. Jigarrang suv o'tlaridan olingan florotannis elektron tuzoq vazifasini bajaradigan sakkiztagacha o'zaro bog'langan fenol halqalariga ega ekanligi xabar qilinadi [78,79]. ABTlar TPC, boshqa antioksidant parametrlar bilan bog'liq bo'lishi kutilgan edi. Mumkin bo'lgan sabablar, usullarning turli xil reaktsiya sharoitlariga asoslanganligi va reaktivlik vaqti va komponentlar oralig'i bo'yicha farq qilishi bo'lishi mumkin. Masalan, ABTS reaktivi kengroq diapazon bilan reaksiyaga kirishadiantioksidantlarDPPH radikaliga qaraganda [80]. Boshqa tomondan, ABTS uchun eslatib o'tilgan cheklovlardan biri uzoq reaktsiya bo'lib, umumiy reaktsiya vaqti yakuniy nuqtaga erishishga imkon bermasligi mumkin.

Natijalar shuni ko'rsatadiki, TPC va TFC ning kollagenaza, elastaz va tirozinazning inhibitiv faolligiga ({0}}.93-0.99), inhibisyonga bo'lgan aloqasi esa yuqori ijobiy korrelyatsiya mavjud. gialuronidaza unchalik kuchli emas edi (mos ravishda r=0,42 va 0,54). Bu boshqa komponentlar ekstraktlarning inhibitiv ta'siriga hissa qo'shgan bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi. Boshqa tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, polisaxaridlar gialuronidazani inhibe qiluvchi faollikka ega, masalan, jigarrang suv o'tlaridagi algin kislotasi [81,82]. Izolyatsiya qilingan birikmalarning fermentga ta'siri uchun makroalg turlarining kimyoviy tarkibi bo'yicha keyingi tadqiqotlar har bir kimyoviy komponentning hissasini baholash uchun zarur, chunki bu tadqiqotda asosiy e'tibor xom ekstraktlarga qaratilgan edi.

Topilmalar oldingi tadqiqotlar bilan uyg'un bo'lib, ekstraktlarning kimyoviy tarkibi va bioaktivlik darajasi uchta nasl (qizil, yashil va jigarrang suv o'tlari) va bir xil filumga mansub turli turlar o'rtasida sezilarli darajada farq qilishini va yoshga bog'liqligini ta'kidladi. va to'qimalar turi. Bundan tashqari, tarkibi va xususiyatlari makroalglarning tarqalishi va o'sishiga ta'sir qiluvchi ko'plab ekologik omillarga bog'liq. Masalan, yorug'lik (UV-nurlanish), harorat, ozuqa moddalarining mavjudligi, havoga ta'sir qilish, suv harakati, to'lqin ta'siri va sho'rlanish. TPC kontsentratsiyasiga ta'sir qiluvchi omillar sifatida harorat pigment hosil bo'lishiga va ozuqa moddalarining kontsentratsiyasiga, sho'rlanishga va ultrabinafsha nurlanishiga eng kuchli ta'sir ko'rsatadigan omil sifatida tavsiflangan [83].

Turli xil makroalg turlarining tarqalishi suv chuqurligi bilan farq qiladi. To'lqinlararo yoki qirg'oq zonasidagi qirg'oqdan yuqoriroq pozitsiyalar ko'proq stressli, chunki u erda o'sadigan turlar suv oqimining o'zgarishi tufayli abiotik omillarning ko'p o'zgarishiga bardosh berishi kerak. Masalan, havoning qurituvchi ta'siri, yuqori quyosh nurlari (past suv oqimida), sho'rlanish va haroratning o'zgarishi va past havo harorati sharoitida, shu jumladan muzlash. Past suv belgisi ostida, ortib borayotgan chuqurlik yorug'lik intensivligining juda tez pasayishiga va nurlanishning kamroq ta'siriga olib keladi.

To'lqinlar oralig'ida o'sadigan suv o'tlari ultrabinafsha nurlanishiga nisbatan past sezgirlikka ega va quyosh ta'siridan tezroq tiklanadi. Holbuki, sublittoral zonada o'sadigan suv o'tlari ultrabinafsha nurlanishiga ko'proq sezgir va quyosh ta'siridan kamroq tiklanishga ega [84]. Shu bilan birga, suv ustuni himoya qiladi. Ushbu tadqiqotda quyosh nuriga ta'sir qilish P. palmata uchun boshqa turlarga nisbatan kuchliroq bo'lgan. Boshqa tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, MAA hosil bo'lishi to'g'ridan-to'g'ri quyosh nuriga bog'liq [85], organizmlarni UV-A va UV-B nurlanishidan himoya qiladi. Bundan tashqari, yig'ish chuqurligi oshishi bilan MAA ning o'ziga xos miqdori kamayishi ko'rsatildi. A.esculenta kabi kelplar yuqori sublittoral zonada o'sadi, lekin ayni paytda past suv belgisi ustidagi eng past intertidalgacha cho'ziladi. Ya'ni, suv ustuni P.palmataga qaraganda kuchliroq himoyani ta'minladi. Bundan tashqari, morfologik xususiyatlar har xil, A.esculenta pichoqlari boshqa ikki turga nisbatan qalinroq. UI. Lactuca, asosan, intertidal va sublittoralda o'sadi, fotosintez qilish va juda past nurlanishlar ostida o'sishga qodir. UVB nuriga ta'sir qilish U.Lactuca fotosintetik parametrlarini UVA nurining salbiy ta'siridan tiklashni tezlashtirish uchun aytilgan. U har yili yangi oʻsadigan A.esculenta (5-7 vear) va P. palmatadan kichikroq, tuzilishi sodda va umri qisqaroq (3 oy).

Xulosa qilib shuni aytish mumkinki, ekstraktlar xossalaridagi asosiy farqlar suv o'tlari turlarining umr ko'rish davomiyligi, morfologik xususiyatlari va o'sish sharoitlaridagi o'zgaruvchanlikdir.

3. Materiallar va usullar 3.1.Materiallar

Islandiya dengiz o'tlari U.lactuca (yashil suv o'tlari), A.esculenta (jigarrang suv o'tlari) va P. palmitate (qizil suv o'tlari) Breidafjordurda (G'arbiy-Islandiya) dengiz o'tlarini yig'ib olingan Islandiya ko'k midiya va dengiz o'tlari bilan ta'minlangan. O'rim-yig'imdan keyin dengiz o'tlari quritilgan (taxminan 90% quruq material), maydalangan va vakuumli qadoqlangan holda etkazib berilgan. Namunalar foydalanilgunga qadar xona haroratida quruq va qorong'i joyda saqlangan.

Qo'ziqorindan tirozinaza, L-3,4-digidroksifenilalanin (L-DOPA), cho'chqa oshqozon osti bezi elastazasi, askorbin kislota, N-suksinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN), gialuronidaza sigir moyaklar, quercetin, -tokoferol, tanin kislotasi, 2,2-difenil-1-pikrilgidrazil(DPPH),24,6-Tripiridil-s-Triazin (TPTZ), Trolox, Folin-Ciocalteu reagent, gallik kislota va kollagenaz faolligi kolorimetrik tahlil to'plami (MAK293) Sigma-Aldrich Co. (Sent-Luis, MO, AQSh) dan sotib olindi. Gialuron kislotasi natriy tuzi MakingCosmetics kompaniyasidan (Redmond, WA, AQSh) sotib olindi. Foydalanilgan barcha kimyoviy moddalar va reagentlar analitik darajada bo'lib, VWR International, MChJdan olingan. Deionlashtirilgan suv (ElixEssential, Merck, Darmstadt, Germaniya) suvga asoslangan eritmalarni olish va tayyorlash uchun ishlatilgan.

3.2. Eksperimental dizayn

Icelandic seaweedspecies (U.lactuca, A.esculenta, P. palmata) va ekstraksiya bilan ishlov berish (issiq suv olish (HW, 95 daraja C), PEF yordamida ekstraksiya (PEF) va kombinatsiyasi) ta'sirini baholash uchun faktoriy dizayn ishlatilgan. ikkala texnika (PEF plus HW), ekstrakt tarkibi va bioaktivligi (6-jadval) Ekstraksiya har bir guruh uchun uch nusxada amalga oshirildi va har bir ekstrakt replikatsiyasi uch nusxada tahlil qilindi.

3.3. Islandiya dengiz o'tlaridan bioaktiv moddalarni olish

Turli darajalarda makroalgal biomassasini ekspluatatsiya qilish olimlarni yashil ekstraksiya yondashuvlariga asoslangan ekologik toza, samarali va tejamkor qazib olish usullarini o'rganishga undadi. Ushbu ishda PEF yordamida ekstraksiya funktsional ekstraktlarni ishlab chiqarish uchun yangi va yashil usul sifatida baholandi, an'anaviy issiq suv ekstraktsiyasi esa taqqoslash uchun ishlatilgan. Bundan tashqari, ikkala usulning kombinatsiyasi, so'l suv o'tlarini PEF bilan davolash, so'ngra an'anaviy issiq suv olish, bioaktiv tiklanishga ta'siri o'rganildi. Jismoniy ishlov berishdan so'ng hujayra membranalarida kutilgan elektroporatsiya tufayli issiq suv bilan quyidagi ekstraksiya hujayra ichidagi moddaning [86] chiqishini yanada osonlashtirishi va ekstraktsiya hosildorligini oshirishi mumkin. Davolanishdan so'ng materiallar hujayralardan tarqalib ketishi uchun vaqt kerak bo'ladi [87,88] va bu tajribada suspenziyalar suyuqlik (ekstrakti) pulpadan ajralmaguncha bir kechada kutildi.

Ekstraksiya muhitiga kelsak, zaharli moddalar va organik erituvchilardan foydalanish bo'yicha cheklovlarni bartaraf etish uchun dengiz o'tlari ekstraktlarini ishlab chiqarish uchun distillangan suv ishlatilgan. Suv dengiz oʻtlaridan bir qancha bioaktiv birikmalarni ajratib olish uchun yaxshi erituvchi ekanligini isbotladi [46,89-91] va ekologik jihatdan qulay. Bundan tashqari, suv odatda PEF yordamida qazib olish uchun ishlatiladi, chunki u elektr uchun yaxshi o'tkazgichdir.

3.3.1. Ekstraksiya jarayonlari

Har bir guruhdagi har bir takrorlash uchun dengiz o'tlari (15 g) bir kechada xona haroratida (22 daraja) deionizatsiyalangan suvda (300 ml) namlangan. Keyin suspenziya PEF (PEF), qizdirilgan (HW) yoki ikkala PEF bilan ishlangan va qizdirilgan (PEF plus HW) bilan ishlov berilgan. Suspenziyalar bir kecha davomida muzlatgichda saqlanadi, so'ngra qo'pol (20 mkm) filtr qog'ozi bilan filtrlanadi. Keyin filtratlar (ekstraktlar) tahlil qilinmaguncha 4 daraja haroratda saqlanadi.

Impulsli elektr maydonlari yordamida qazib olish uyda qurilgan impuls generatori yordamida amalga oshirildi. Unda FuGHCK-200-2000 kondansatörü (Fu.G.Elektronik GmbH, Rosenheim, Germaniya) va uchqun bo'shlig'i (18,5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelektronika, GMBH, Wiese-baden, Germaniya) mavjud edi. PEF uskunasi kengligi 0.96 us va 18 kV amplitudali eksponensial parchalanish impulslarini yaratdi. O'lchamlari (L × H × W) 20 × 8 × 2,5 sm bo'lgan, plastinka elektrodlari orasidagi eng qisqa masofa bo'lgan plexiglass ishlov berish kamerasi suspenziyalarni 1,2 Gts chastotada 10 daqiqa davomida 8 kV / sm elektr maydoni bilan davolash uchun ishlatilgan. HW-ekstraktlari suspenziyani termostatik suv hammomida stakanda qizdirish yo'li bilan tayyorlangan va 45 daqiqa davomida 95 daraja haroratda saqlanadi. Kombinatsiyalangan impulsli elektr maydoni va isitish bilan ishlov berish uchun suspenziyalar PEF bilan ishlov berildi va keyin stakanga joylashtirildi, suv hammomida isitiladi va 45 daqiqa davomida 95 daraja haroratda saqlanadi.

3.3.2. O'tkazuvchanlik, pH va harorat o'lchovlari

Dengiz oʻtlari suspenziyalarining elektr oʻtkazuvchanligi va pH darajasi hoʻllashdan keyin va ekstraksiya jarayonlaridan soʻng xona haroratida oʻtkazuvchanlik bilan jihozlangan pH-metr (Orion StarTM A215 pH/Oʻtkazuvchanlik dastgohi oʻlchagich, Thermo Scientific, Waltham, MA, AQSh) yordamida oʻlchandi. datchik va pH/ARC triod birikma elektrodi. Bundan tashqari, muolajalar natijasida harorat o'zgarishi qayd etilgan.

3.4. Dengiz o'tlari ekstraktining spektral profillari

Turli xil dengiz o'tlari ekstraktining UV-VIS yutilish spektrlari 200 dan 450 nm gacha bo'lgan diapazonda ikki nurli Thermo Scientific Evolution 350 UV-Vis Spektrofotometri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSH) 1 sm kvarsli kvarts yordamida o'lchandi. Har bir dengiz o'ti ekstrakti uchun uchta skanerdan o'tkazildi. 3.5. Umumiy polifenol tarkibini aniqlash

Dengiz o'tlari ekstraktidagi umumiy fenolik miqdori (TPC) Folin-Ciocalteu reagenti yordamida Chjan [92] tomonidan tavsiflangan biroz o'zgartirilgan usul bo'yicha Multiskan Sky Microplate spektrofotometri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) yordamida aniqlangan. 20 mkl dengiz o'tlari ekstrakti yoki seriyali standart eritma 100 mkL Folin-Ciocalteu reaktivi (10 foiz distillangan suvda) bilan aralashtirildi. 5 daqiqadan so'ng 80 mL 7,5 foiz (o/w) natriy karbonat eritmasi qo'shildi. Reaksiya aralashmasi xona haroratida va zulmatda 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi.Asorbsiya 760 nm toʻlqin uzunligida oʻlchandi.Blanka sifatida distillangan suvdan foydalanildi.Jami fenolik tarkibni aniqlash uchun gallik kislotaning standart egri chizigʻidan foydalanildi va gallik kislota ekvivalentlarining ug sifatida ifodalangan. (GAE) quruq materialning grammiga (ug GAE/g dw).

3.6. Flavonoidlarning umumiy miqdorini aniqlash

Dengiz o'tlari ekstraktidagi umumiy flavonoid miqdori (TFC) Kamtekar 【93】 tomonidan tavsiflangan usul bilan aniqlangan va 96-quduq mikroplastinkalariga moslashtirilgan. Qisqacha aytganda, 25 mkl hajmdagi dengiz o'tlari ekstrakti yoki seriyali standart eritma 100 mkl natriy nitrit (v/v 0,375%) bilan aralashtiriladi. 5 daqiqadan so'ng aralashmaga 25 mkL alyuminiy xlorid (v/v 3 foiz) qo'shildi va xona haroratida 6 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Keyin aralashmaga 100 uL natriy gidroksidi (2 foiz vazn/v) qo'shiladi va aralashtiriladi. Darhol, absorbans 510 nm to'lqin uzunligida o'lchandi. Blanka sifatida distillangan suv va etanol ishlatilgan. Umumiy fenolik tarkibni aniqlash uchun kversetinning standart egri chizig'i (etanolda erigan) ishlatilgan va quruq materialning bir grammiga (ug QE/g do) quercetin ekvivalentlarining ug (QE) sifatida ifodalangan. 3.7. Uglevodlar tarkibini aniqlash

Erkin shakar miqdori [94] tomonidan tavsiflangan usul bo'yicha, engil o'zgarishlar bilan o'lchandi. 100 mkl namuna yoki standart eritmaga 50 mkl fenol eritmasi (4 foiz) va 250 mkl sulfat kislota (96 foiz) qo‘shildi. Xona haroratida 10 daqiqa inkubatsiyadan so'ng, aralashmaning absorbansi 490 nm da o'qildi. Umumiy uglevod miqdorini aniqlash uchun glyukozaning standart egri chizig'i ishlatilgan va quruq materialning grammiga (mg GluE/g dw) mg glyukoza ekvivalenti (GluE) sifatida ifodalangan.

3.8. Dengiz o'tlari ekstraktining antioksidant xususiyatlari

3.8.1.2,2 Difenil{5}}pikrilgidrazil (DPPH) erkin radikallarni tozalash tahlili

Dengiz o'tlari ekstraktining antioksidant faolligi (DPPH) ba'zi o'zgartirishlar bilan oldindan tavsiflangan 【94】 metodologiyasi bo'yicha aniqlandi. Qisqacha aytganda, 200 mL 10,825 × 10-5M DPPH eritmasi 96- quduq plastinkasida 100 mLof namunaga (metanolda 1∶1) qo'shildi. Xuddi shu hajmdagi DPPH 50 mkL standart va 50 mkl metanol bilan aralashtirildi. Keyin namunalar va standart qorong'i joyda xona haroratida 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Absorbans 517 nm to'lqin uzunligida o'lchandi. Blank sifatida distillangan suv ishlatilgan. DPPH radikalini tozalash qobiliyati quyidagi tenglama yordamida hisoblangan:

Bu erda A nazorat - nazorat elementining absorbsiyasi (namunasiz DPPH eritmasi), A namunasi - sinov namunasining absorbsiyasi (DPPH eritmasi va sinov namunasi), A namunasi - faqat namunaning absorbsiyasi (DPPH eritmasisiz namuna) ) va Ametanol blankasi faqat metanolning absorbsiyasidir. Ijobiy nazorat sifatida tijorat antioksidantlar (askorbin kislota, gallik kislota va -tokoferol) ishlatilgan.

3.8.2. Temir ionini kamaytiruvchi antioksidant quvvat (FRAP) tahlili

FRAP faolligi Benzi va Strain [95] usuli bo'yicha o'lchandi. Qisqacha aytganda, asetat buferi (300 mM, pH3.6), 2,4, 6-tripiridil-s-triazin (TPTZ) 10 mM 40 mM HCl va FeCl3 · 6H2O (20 mM) nisbatda aralashtiriladi. ishchi FRAP reaktivini olish uchun 10:1:1 nisbatda. Reaksiya aralashmasi 37C da 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Har bir ekstraktdan olingan A50 mkl namunasi xona haroratida 8 daqiqa davomida 150 mkl ishlaydigan FRAP eritmasi bilan aralashtiriladi. Rangli mahsulot, Ferrous-TPTZ ning absorbsiyasi 593 nm to'lqin uzunligida o'lchandi. Dengiz o'tlari ekstraktining FRAP qiymatlari quruq materialning grammiga Trolox ekvivalentlarining mM (TE) sifatida ifodalangan.

3.8.3.2,2 Azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonik kislota)(ABTS) tahlili

Tahlil ABTS dekolorizatsiya protokoli[76] yordamida ba'zi o'zgartirishlar bilan amalga oshirildi. ABTS (66 mg) ni 10 ml kaliy persulfat eritmasi (2,45 mM) bilan reaksiyaga kiritish natijasida ABTS radikal kationi (ABTS plyus) hosil boʻldi. Aralash xona haroratida qorongʻi joyda 12-16 davomida qoldirildi. foydalanishdan oldin h. ABTS plyus eritmasi suv bilan 734 nm da 0,700 absorbansga suyultirildi. Reaksiya aralashmasi (200 ul) mikroplastinkaga o'tkazildi, 50 uL namuna va keyin 150 uL reagent eritmasi qo'shildi. Plastinka o'rtacha tezlikda 10 soniya davomida chayqatildi va xona haroratida 5 minut inkubatsiyadan keyin absorbans 734 nm da o'lchandi. Trolox standartlarining A734nm kontsentratsiyasining funksiyasi sifatida inhibisyonini chizish orqali standart egri chizilgan. Namunalarning Trolox ekvivalent antioksidant sig'imi (TEAC) qiymati har bir namuna uchun A734nm qiymatlari almashtirilgan standart egri chiziqning chiziqli regressiyasidan olingan tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

Antioksidant faolligi TEAC konsentratsiyasi, umol/g quruq vaznli suv o'tlari bilan ifodalangan.

3.9. Dengiz o'tlari ekstraktining fermentlarga qarshi faolligi 3.9.1. Kollagenazni inhibe qilish tahlili

Sigma-Aldrichdan sotib olingan kollagenaza faolligi kolorimetrik tahlil to'plami (MAK293) dengiz o'tlari ekstraktining kollagenaza inhibisyonini aniqlash uchun ishlatilgan. To'plam kollagen tuzilishini taqlid qiluvchi sintetik peptid (FALGPA) yordamida kollagenaza faolligini o'lchadi. Jarayon to'plamdagi ko'rsatmalarga muvofiq amalga oshirildi.

3.9.2. Elastazni inhibe qilish tahlili

Dengiz o'tlari ekstraktining elastaz inhibisyonu TRIS bufer eritmasida avvalroq tasvirlanganidek o'zgartirilgan usul bilan tekshirildi 【96】. Qisqacha aytganda, 100mL 0,1 M TRISbufer eritmasi (pH8,0), 25 mkl elastaz (TRISbufferda 1 U/mL) va 25 mkL namuna ekstraktlari aralashtirildi va 30 daqiqa davomida 15 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Reaksiyani boshlash uchun substratni qo'shishdan oldin C. Inkubatsiya vaqtidan keyin 50 uL 2 mM AAAPVN eritmasi qo'shildi. Keyin 420 nm chastotada absorbans 20 daqiqa davomida 30 C doimiy haroratda mikroplyonka o'quvchi yordamida kuzatildi. Nihoyat, elastaz inhibisyonu tenglama yordamida foizda hisoblab chiqildi:

Bu erda Abs nazorati - bu inhibitor (namuna) o'rniga bufer yordamida tahlilning absorbsiyasi va Abssample - namuna ekstraktining absorbsiyasi. Quercetin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. Tris buferi bo'sh sifatida ishlatilgan.

3.9.3. Tirozinazni inhibe qilish tahlili

Tirozinaz inhibitör tahlili L-DOPA substrat sifatida 【66】 tomonidan ilgari tasvirlangan usulga muvofiq amalga oshirildi. 20 mkl namuna, 10 mkl qo'ziqorin tirozinaza eritmasi (50 U/mL fosfat tamponida) va 80 mkl fosfat tamponi (pH =6,8) mikroplyonkada aralashtiriladi va 37 daraja oldindan inkubatsiya qilinadi. 5 min. Keyin 90 mL L-DOPA (2 mg/ml) qo'shildi. Dopakrom shakllanishi darhol 37 daraja doimiy haroratda mikroplaka o'quvchida 475 nm da 20 daqiqa davomida kuzatildi. Tirozinaza fermentining foiz inhibisyoni tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

Bu erda Abs nazorati - bu inhibitor (namuna) o'rniga bufer yordamida tahlilning absorbsiyasi va Abs namunasi - namuna ekstraktining absorbsiyasi. Quercetin ijobiy nazorat sifatida ishlatilgan. Blank sifatida fosfat buferi ishlatilgan.

3.9.4. Gialuronidazani inhibe qilish tahlili

Gialuronidazani ingibitor faolligi ilgari [66] tomonidan tavsiflanganidek, bir nechta modifikatsiyalar bilan o'lchandi. 100 ulof turi-1-qoʻy moyaklar gialuronidazasi (2100 U/ml） 0.1 M.da erigan hajm asetat buferi (pH 3,5) 100 mkl ekstrakt bilan aralashtiriladi va 37 darajada 20 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Reaksiya aralashmasiga 200 mL hajmdagi 6 mM kaltsiy xlorid qo'shildi va keyin aralash 20 daqiqa davomida 37 daraja inkubatsiya qilindi. Ushbu Ca2 plyus faollashtirilgan gialuronidaza 0,1 M asetat tamponida (pH 3,5) eritilgan 250 mkl natriy gialuronat (1,2 mg/ml) bilan ishlov berildi va keyin 37 daraja suv hammomida 40 min.A 509 mkl gidroksidi uchun inkubatsiya qilindi. va 100 mL 0,2 M natriy borat reaksiya aralashmasiga qo'shildi va keyin qaynoq suv hammomida 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Xona haroratiga sovutilgandan so'ng, reaktsiya aralashmasiga 250 mL p-dimetilaminobenzaldehvde (DAMB) eritmasi qo'shildi. DAMB eritmasi 0,25 g DAMB ni 21,88 ml 100% sirka kislotasi va 3,12 ml 10N xlorid kislotada eritib tayyorlandi. Nazorat guruhi ekstrakti o'rniga 100 mkl 5 foiz suv bilan ishlov berildi. Absorbans 45 daqiqadan so'ng 585 nm to'lqin uzunligida o'lchandi. Enzim inhibisyonining foiz nisbati quyidagi tenglama yordamida hisoblab chiqilgan:

Bu erda Abs nazorati - bu inhibitor (namuna) o'rniga bufer yordamida tahlilning absorbsiyasi va Abs namunasi - namuna ekstraktining absorbsiyasi. Tanin kislotasi mos yozuvlar standarti sifatida ishlatiladi.

3.10. Statistik tahlil

Har bir ekstraktning uch martalik tahlilining o'rtacha qiymati hisoblab chiqildi va har bir guruh uchun o'rtacha qiymatlar va standart og'ishlarni topish uchun foydalanildi (n=3). Ruxsat etilgan omillar uchun umumiy chiziqli modellar (GLM) o'lchangan o'zgaruvchilarga eksperimental omillarning (turlar va ekstraktsiya usullari) asosiy ta'siri va ikki tomonlama o'zaro ta'sirini baholash uchun qo'llanildi. Bundan tashqari, ahamiyatlilikni aniqlash uchun ANOVA va Tukey-Kramer testi ishlatilgan<0.05)differences between="" the="" groups.="" pearson="" correlation="" was="" used="" to="" evaluate="" the="" linear="" relationship="" between="" the="" variables.="" principal="" component="" analysis(pca)was="" used="" to="" detect="" structure="" in="" the="" relationship="" between="" measured="" variables="" and="" experimental="" factors.="" the="" pca="" reduces="" voluminous="" data="" to="" a="" small="" set="" of="" linear="" combinations="" of="" related="" variables="" (i.e.,="" factors)="" based="" on="" patterns="" of="" correlation="" among="" the="" original="" variables.="" the="" resulting="" linear="" attribute="" combinations="" can="" be="" used="" for="" profiling="" specific="" product="" characteristics="" based="" on="" the="" variables="" studied.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" ncss="" 2020="" statistical="" software="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

4. Xulosalar

Ushbu birinchi skrining tajribasi natijalari bir necha yo'llar orqali samarali foydali ta'sir ko'rsatish orqali uchta Islandiya dengiz o'tlari turlarining salohiyatini ko'rsatdi. Suvli impulsli elektr maydonlari yordamida ishlab chiqilgan yashil yondashuv an'anaviy issiq suvni qazib olish bilan o'xshash natijalarni ko'rsatdi, bu uning termal bo'lmagan tabiati va qisqaroq qazib olish vaqti (10 minut va 45 minut) kabi bir qancha afzalliklarni ko'rsatdi. Yosunlarning uchta turi orasida jigarrang makroalg A.esculenta TPC va TFC ning eng yuqori miqdorini ko'rsatdi, shuningdek, eng katta antioksidant imkoniyatlarni namoyish etdi. Bundan tashqari, A. esculenta suv ekstrakti P. palmaria va U. Lactuca ga qaraganda kollagenaza, elastaz, tirozinaz va gialuronidaza terini oqartirish, qarishga qarshi va terining sog'lig'ini yaxshilashda qo'llash uchun ajoyib antienzimatik ta'sirga ega bo'lgan eng istiqbolli dengiz o'tlari turidir. Qizig'i shundaki, PEF usuli bilan ishlab chiqarilgan A. esculenta ekstraktlari kollagenazning 91 foizga inhibisyonini ko'rsatdi, bu an'anaviy issiq suv ekstraktsiyasi tomonidan ko'rsatilgan inhibisyon faolligidan yuqori va hatto savdo to'plami tomonidan taqdim etilgan inhibitordan ham yuqori. Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, bizning dastlabki tadqiqotimiz shuni ko'rsatadiki, Islandiya dengiz o'tlari asosidagi ekstraktlar, ayniqsa, suvli impulsli elektr maydonlari yordamida ekstraksiya natijasida hosil bo'lgan jigarrang so'l o'tlari A.esculenta ekstraktlari kosmetik va kosmetik formulalar uchun faol birikmalar sifatida ishlatilishi mumkin bo'lgan potentsial funktsional ingredientlardir. yaqin kelajakda.

Ushbu maqola Mar. Drugs 2021, 19, 662 dan olingan. https://doi.org/10.3390/md19120662 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs