FGIN-1-27 - sintetik mitoxondrial diazepamni bog'lovchi inhibitor retseptorlari (MDR)proapoptotik, anksiyetega qarshi va steroidogen faollikni ko'rsatgan agonistturli tadqiqotlarda. Bu erda biz hisobot, uchunbirinchivaqt, melanogenga qarshi samaradorlikningFGIN-1-27in vitrovain vivo. FGIN-1-27 sezilarli darajadainhibe qilingan bazal va - melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormon ( -MSH)-, 1-Oleoil-2-asetil-sn-gliserol (OAG)-va hujayra toksikligisiz endotelin-1 (ET-1) sabab bo'lgan melanogenez.Qo'ziqorin tirozinaza faolligi tahlili FGIN-1-27 ni bevosita inhibe qilmasligini ko'rsatditirozinaz faolligi, bu FGIN-1-27 tirozinazaning bevosita inhibitori emasligini ko'rsatadi. ning katalitik faolligini modulyatsiya qila olmasa hamqo'ziqorin tirozinazasiin vitro, FGIN-1-27 ifoda darajalarini pasaytirdimelanogenezda ishlaydigan asosiy oqsillar. FGIN-1-27 bu funksiyalarni bajardiPKA/CREB, PKC-ni bostirish orqali , va MAPK yo'llari. Faolsizlantirilgandan so'ng, uMITF, tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 ekspressiyasini kamaytirdi va inhibe qildi.tirozinaza faolligi,nihoyatmelanogenezni inhibe qiladi. davomidain vivotajribalar,FGIN-1-27 zebra baliqlarining tana pigmentatsiyasini inhibe qildiva UVB ta'sirini kamaytiradigvineya cho'chqasining terisida giperpigmentatsiya, ammo melanotsitlar sonining kamayishi emas.BizningtopilmalarFGIN-1-27 hech qanday sitotoksiklik ko'rsatmasligini va inhibe qilishini ko'rsatdiikkalasida ham melanogenezin vitrovain vivomodellar. Bu juda foydali bo'lishi mumkinxavfsizroq terini oqartiruvchi vosita.

Tegishli tadqiqotlarga ko'ra,cistancheoddiy o't bo'lib, u "hayotni uzaytiradigan mo''jizaviy o't" deb nomlanadi. Uning asosiy komponenti sistanozid bo'lib, u turli xil ta'sirlarga egaantioksidant, yallig'lanishga qarshi, va immun funktsiyasini rag'batlantirish. Cistanche va o'rtasidagi mexanizmterini oqartirishCistanche glikozidlarining antioksidant ta'sirida yotadi.Melanininson terisida katalizlangan tirozinning oksidlanishi natijasida hosil bo'laditirozinaza, va oksidlanish reaktsiyasi kislorod ishtirokini talab qiladi, shuning uchun organizmdagi kislorodsiz radikallar melanin ishlab chiqarishga ta'sir qiluvchi muhim omilga aylanadi. Cistanche tarkibida antioksidant bo'lgan va tanadagi erkin radikallarning paydo bo'lishini kamaytiradigan sistanozid mavjud.melanin ishlab chiqarishni inhibe qiladi.

Cistanche Tubulosa-ni bosing

Batafsil ma'lumot uchun: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

KIRISH

Melanogenez teridagi melanotsitlarning eng muhim funktsiyasidir. Melanogenez bilan bog'liq bir qancha muhim omillar aniqlangan (Raposo va Marks, 2007; Noguchi va boshq., 2014). Melanogenezni tartibga soluvchi asosiy ferment tirozinaza bo'lib, melanin sintezini rag'batlantirish uchun tirozinaza bilan bog'liq protein 1 (TRP1) va tirozinaz bilan bog'liq protein 2 (TRP2) bilan ishlaydi (Zhu va boshq., 2015). Pigmentatsiya bilan bog'liq yana bir muhim omil - bu mikroftalmiya bilan bog'liq transkripsiya omili (MITF), bu nafaqat melanotsitlarning ko'payishi va omon qolishini tartibga solibgina qolmay, balki tirozinaz, TRP1 va TRP2 ifodalarini ham tartibga soladi (Kawasaki va boshq., 2008; Levy va Fisher, 2011). ). Ultrabinafsha (UV) nurlanish kabi atrof-muhit stimullari melanogenezda hal qiluvchi rol o'ynaydi (Abdel-Naser va boshq., 2003). UV nurlanishi ta'sirida faollashtirilgan keratinotsitlar va melanotsitlar - melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormon (-MSH), diatsilgliserol (DAG) va endotelin-1 (ET{20}}) ishlab chiqaradi (D'Mello va boshq., 2016; Bae Harboe va Park, 2012). Melanotsitlarni ogohlantiruvchi gormon (-MSH) melanotsitlardagi melanokortin retseptorlari (MC1R) bilan bog'langanda, u hujayra ichidagi siklik adenozin monofosfat (cAMP) darajasini oshirishi va protein kinaz A (PKA)/ (CREB) faollashishi mumkin. ) yo'l, nihoyat melanogenezni rag'batlantiradi (Corre va boshq., 2004; Rzepka va boshq., 2016). Diatsilgliserol (DAG) melanotsitlarda protein kinaz C- (PKC-) faollashishi uchun zarur bo'lib, bu tirozinaz faolligini oshiradi va pigmentatsiyani keltirib chiqaradi (Kim va boshq., 2006; Kawaguchi va boshq., 2012; Yuan va Jin, 2018). ). 1-Oleoil-2- asetil-sn-gliserol (OAG) sintetik, membrana oʻtkazuvchan DAG analogi boʻlib, PKC-ning farmakologik faollashtiruvchisi sifatida keng qoʻllaniladi (Rainbow va boshq., 2011). Endotelin -1 (ET- 1) mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) yo'lini faollashtirish orqali melanotsitlarda melanogenezni qo'zg'atadi (Park va boshq., 2015; Regazzetti va boshq., 2015).

Melanin terini ultrabinafsha nurlanishining teri saratoni va qarish kabi zararli ta'siridan himoya qilishda muhim rol o'ynaydi (Slominski va boshq., 2004). Shunga qaramay, melaninning haddan tashqari ishlab chiqarilishi va anormal to'planishi terining estetik muammolariga olib keladi, masalan, melazma, sepkillar va qora dog'lar (Jadotte va Schwartz, 2010). Kojik kislota va arbutinni o'z ichiga olgan bir qancha faol oqartiruvchi birikmalar allaqachon kosmetik qo'shimchalar sifatida tasdiqlangan (Kim va boshq., 2008). Ammo arbutinning sitotoksik ta'sirga ega ekanligi va kojik kislota saratonni keltirib chiqarishi mumkinligi haqida xabar berilgan (Singh va boshq., 2016). Shunday qilib, samaraliroq va xavfsizroq terini oqartiruvchi vositalarni kashf qilish muhim ahamiyatga ega.

Mitoxondrial diazepamni bog'lovchi inhibitor retseptorlari (MDR) lipidlar va steroid sintezini tartibga solishda markaziy rol o'ynaydi va periferik to'qimalarda, shu jumladan terida keng tarqalgan (Alho va boshq., 1993). Oldingi tadqiqotlarimizda diazepam, bitta MDR agonisti, pigmentatsiyani PKA/CREB yo'li orqali boshqargan (Lv va boshq., 2019). Bundan tashqari, so'nggi topilmalar MDR faollashuvi zebrafishlarda yangi melanotsitlar sonini biroz oshirganligini ko'rsatdi (Allen va boshq., 2020). Diazepam bilan solishtirganda, FGIN-1-27 (N, N-Diheksil-2-(4-ftorofenil)indol-3- asetamid) MDR (Friman) uchun nisbatan yuqori yaqinlik va o'ziga xoslikni namoyish etadi. va Young, 2000). FGIN-1-27 proapoptotik va steroidogen faollikni ko'rsatdi (Lacapère va Papadopulos, 2003). Yaqinda FGIN{13}} in vivo jonli ravishda tashvish va vahimaga qarshi ta'sir ko'rsatgani haqida xabar berilgan (Lima-Maximino va boshq., 2018). Biroq, FGIN-1-27 ning in vitro va in vivo pigmentatsiyaga ta'siri haqida xabar berilmagan.

MATERIALLAR VA USULLAR

Materiallar

FGIN-1-27(N, N-Diheksil-2-(4-ftorofenil)indol-3-asetamid), OAG (1-Oleoil-2-asetil-sn -glitserin) va PKC-ga (1:200), p-PKA mushukiga (fosfo T197) qarshi antikorlar.(1:200), PKA mushuki (1:500), p-CREB (1:200), CREB (1:200), p-ERK(1:200), ERK (1:200), p-p38 (1:200), p38 (1:200), p-JNK (1:200),va JNK (1:200) Santa Cruz Biotexnologiyasidan olingan(CA, AQSh). Qo'ziqorinlardan tirozinaza, -MSH% 2c ET-1(endotelin-1) va PTU(N-feniltiokarbamid) olindi.Aladdindan (Shanxay, Xitoy). Qarshi antikorlartirozinaza (1:1,000), TRP-1(1:1,000), TRP-2 (1:1,000), MITF(1:2000), va -aktin (1:3,000) Abcamdan olingan(Kembrij, Buyuk Britaniya). Masson-Fontana melanin bo'yash eritmasiSenBeiJia Biological Technology kompaniyasidan (Nankin,Xitoy). RT-qPCR to'plamlari Takara Biomedical kompaniyasidan sotib olinganTexnologiya (Pekin, Xitoy). Hujayra lizis buferi va BCA oqsilitahlil to'plami Beyotime Biotechnology kompaniyasidan olingan (Shanxay,Xitoy).

Hujayralar madaniyati

Hujayra hayotiyligini tahlil qilish

SK-MEL-2 hujayralari va HEMning hayotiyligi MTT tahlili orqali o'lchandi (Chjou va boshq., 2014). SK-MEL-2 xujayralari va HEM mos ravishda har bir quduq uchun 2×104 hujayra zichligidagi 96-quduq plitalariga qo'yildi. FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4, 8, 16 mkM) SK-MEL-2 hujayralari va HEMga 48 soat davomida qo‘llanildi. MTT eritmasi (20 mkl) quduq plastinkasining har bir qudug'iga yana 4 soat qo'shildi. Eritmani olib tashlaganingizdan so'ng, har bir quduqqa DMSO (200 mkl) qo'shildi va absorbans mikroplastinkali spektrofotometr (BioTek Instruments) yordamida 570 nm da tekshirildi.

Melanin tahlili

SK-MEL-2 hujayralari va HEM mos ravishda 6-quduq plastinkalariga 5×105 hujayra konsentratsiyasida qo‘yildi. 24 soat 37 daraja inkubatsiyadan so'ng, SK-MEL-2 hujayralari va HEMga FGIN{7}} (0, 1, 2, 4 mkM) qo'llanildi. Hujayralar yana 48 soat davomida inkubatsiya qilindi, PBS bilan yuvildi, so'ngra 4 daraja C da 20 daqiqa davomida hujayra lizis buferi bilan lizis amalga oshirildi va lizatlar 4 daraja C da 10 daqiqa davomida 13,{18}} aylanish tezligida santrifüj qilindi. Hujayra pelletidagi umumiy melanin 100 mL NaOH eritmasida (1 mol / L, 10% DMSO ni o'z ichiga oladi) 80 daraja C da 1 soat davomida eritildi (Lv va boshq., 2015). Optik absorbans mikroplastinkali spektrofotometr (BioTek Instruments) yordamida 405 nm da o'lchandi.

Tirozinaza faolligini tahlil qilish

Hujayra tirozinaza faolligi yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi (Lv va boshq., 2020). SK-MEL{2}} hujayralari turli konsentratsiyali FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 mkM) yoki OAG (200 mkM) bilan 12 soat yoki 48 soat davomida inkubatsiya qilindi va keyin lizing qilindi. hujayra lizis buferi bilan. Hujayra lizatlari tirozinaz faolligini tahlil qilish uchun supernatantni olish uchun 13,{12}} rpm da 10 daqiqa davomida 4 daraja C da santrifüj qilindi. Protein kontsentratsiyasi standart sifatida sigir zardobi albumini (BSA) bo'lgan BCA to'plami tomonidan aniqlandi. C 1 soat davomida. Optik absorbans mikroplastinkali spektrofotometr (BioTek Instruments) yordamida 475 nm da o'lchandi.

FGIN{0}} ning tirozinaz faolligiga bevosita ta'siri oldingi usulga muvofiq amalga oshirildi (Tomita va boshq., 2010; Lv va boshq., 2020). 100 mL PBS (0,1 M, pH 6,5) tarkibida turli konsentrasiyalarda FGIN{8}} qo‘ziqorin tirozinazasi (10 birlik) va 50 mkl L-tirozin (0,05 foiz) bilan aralashtiriladi va keyin 37 darajada 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Optik absorbans mikroplastinkali spektrofotometr (BioTek Instruments) yordamida 475 nm da o'lchandi.

Masson-Fontana ammiakli kumush bo'yash

Melanin pigmentini aniqlash uchun SK-MEL{1}} xujayralari 2.0 ml madaniy muhitda (10 ta) 13- mm shisha qoplamali 6-quduqli plastinka ustiga qo‘yildi. foiz homila sigir zardobi) har bir quduqda. Qo'llashdan 48 soat o'tgach, hujayralar Formalin (10 foiz neytral tamponlangan) bilan 20 daqiqa davomida mahkamlangan.

Hujayralar va teri slaydlari Masson-Fontana ammiakli kumush bo'yash usuli bo'yicha bo'yalgan (Li va boshq., 2013). Hujayralar va teri slaydlari xona haroratida 16 soat davomida Masson-Fontana melanin bo'yash eritmasi bilan inkubatsiya qilindi. Keyin hujayralar va teri slaydlari 3 marta distillangan suvda yuviladi va gipo eritmasi bilan 7 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Distillangan suvda yaxshilab yuvilgandan so'ng, hujayralar va teri slaydlari 7 daqiqa davomida neytral qizil dog' bilan bo'yalgan. Hujayralar va teri slaydlari Nikon Ti2-U mikroskopi yordamida kuzatildi.

S-100 uchun immunohistokimyo

S-100 immunohistokimyosi yuqorida ta'riflanganidek o'tkazildi (Li va boshq., 2013). Slaydlar xona haroratida 1 soat davomida 5 foizli BSA bilan bloklandi, so‘ngra anti-S-100 birlamchi antikorda (Dako, Karpentaria, CA) blokirovka qiluvchi eritmada kechasi 4 daraja C da suyultirildi. Ertasi kuni Slaydlar TBST bilan 4 marta yuvildi va ikkilamchi antikor bilan inkubatsiya qilindi (Dako, Carpentaria, CA). Keyin bo'limlarni ishlab chiqish uchun slaydlar aminoetil karbazol bilan ishlov berildi. Nikon Ti2-U mikroskopi yordamida teri slaydlari kuzatildi.

Teskari transkripsiya-miqdoriy PCR (RT-qPCR)

RT-qPCR yuqorida tavsiflanganidek amalga oshirildi (Lv va boshq., 2020). Qisqacha aytganda, SK-MEL{3}} hujayraning umumiy RNKsi TRIzol reagenti yordamida ekstraksiya qilindi va spektrofotometrik tarzda miqdori aniqlandi. Yagona zanjirli cDNK ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq SuperScript II teskari transkriptaza yordamida sintez qilindi. SYBR-Green miqdoriy PCR tahlili ABI PRISM Sequence Detection System (Applied Biosystems) va oldindan tasdiqlangan primer to'plamlari bilan amalga oshirildi. Barcha namunalar uch nusxada o'tkazildi. Eshik davrlari kuchaytirish egri chizig'ining logarifmik qismiga joylashtirildi va natijalar GAPDH ga normallashtirildi. Ikki namuna orasidagi burmalar farqi delta-delta Cq usuli bilan aniqlandi. Mitf genining primerlar ketma-ketligi 5′-AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG-3', 5′-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGTC-3'.

Western Blot tahlili

Protein suspenziyasi yuqorida aytib o'tilgan usul sifatida olingan. Ekstraksiya qilingan hujayra ichidagi oqsillar (30 ug) SDS-PAGE (10 foiz) bilan ajratilgan va keyin nam uzatish standart protokoli bo'yicha poliviniliden L ftorid (PVDF) membranasiga o'tkazilgan. Membrana xona haroratida 2,5 foiz BSA yordamida 1 soat davomida bloklandi, bir kechada 4 daraja C da tegishli asosiy antikorlarga ta'sir qildi va 4 marta TBST bilan yuvildi. Membranalar 1 soat davomida xona haroratida HRP yorlig'i bo'lgan Goat Anti-Rabbit IgG (1:1,000) yoki Echki Anti-Sichqon IgG (1:1,000) bilan 1 soat davomida ta'sirlangan va yuvilgan. TBST 4 marta (Liao va boshq., 2017). Keyin membranalar ko'p funktsiyali kimilyuminesans ko'rish tizimi (Tanon 4600) yordamida vizualizatsiya qilindi. Xuddi shu dog'dan olingan ichki nazorat anti-aktin bilan tekshirildi.

Zebrafishdagi melanin tarkibini fenotipga asoslangan baholash va aniqlash

Voyaga yetgan zebra baliqlari quyidagi shartlarga ega boʻlgan akvariumda saqlanadi: 28,5 daraja, yorugʻlik/qorongʻulik davri 14/10 soat. Embrionlar ertalab yorug'likni yoqish orqali paydo bo'lgan tabiiy yumurtlamadan olingan. Embrionlarni yig'ish 30 daqiqa ichida yakunlandi. Fenotipga asoslangan baholash yuqorida tavsiflanganidek o'tkazildi (Choi va boshq., 2007). Qisqacha aytganda, sinxronlangan embrionlar yig'ildi va pipetka orqali joylashtirildi (har bir quduqqa 3-4 embrion, 200 ul embrion muhiti bo'lgan 96-quduq plastinkalarida). FGIN-1-27 va PTU 0,1% DMSOda eritildi, so'ngra embrion muhitiga 35 dan 60 soatgacha (25 soat ta'sir qilish) qo'shildi. Stereomikroskop ostida zebrafishning melanogeneziga ta'siri kuzatildi.

UVB-induktsiyali giperpigmentatsiya Gvineya cho'chqasi modeli

Sakkiz jigarrang gvineya cho'chqasi (6 hafta, taxminan 3{6}} g) Laboratoriya hayvonot fanlari institutidan (Pekin, Xitoy) olingan. Gvineya cho'chqalari standart laboratoriya sharoitida, 12 soat yorug'lik/12 soat qorong'u tsiklda (chiroqlar 9:{8}} AM dan 21:{32}}0 PMgacha) standart laboratoriya sharoitida harorat nazorat qilinadigan xonada alohida joylashtirildi. doimiy harorat (23 ± 3 daraja) va namlik (50 ± 10 foiz). Har bir hayvonning orqa qismining alohida joylari (1 sm diametrli doira) kuniga bir marta 1 hafta davomida 500 mJ/sm2 UVB (Sigma SH-4, Shanxay, Xitoy) ta'siriga uchradi (Fujimoto va boshq., 1988; Li va boshqalar, 2013). Keyin vosita (PEG400/ EtOH 7:3) va FGIN{23}} (1 foiz) giperpigmentatsiyalangan joylarga (har bir doira uchun 20 ul eritma) kuniga ikki marta 3 hafta davomida berildi. Pigmentatsiya darajasi Spektrofotometr bilan o'lchandi (YS3010, 3nh, Shenzhen, Xitoy). DL-qiymati spektrofotometr tomonidan o'lchangan L-qiymatiga ko'ra quyidagicha aniqlandi: DL L (o'lchangan har bir kunda) -L (0-kun). Ushbu tadqiqot uchun barcha hayvonlar protseduralari "NIH laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanma" ga muvofiq amalga oshirildi va Changzhou universitetining hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

Statistik tahlil

NATIJALAR

FGIN-1-27 inhibe qilingan -MSH, OAG yoki ET-1-SK-MEL-2 hujayralarida induktsiya qilingan melanin sintezi

FGIN-1-27 ning pigmentatsiyaga ta'sirini o'rganishdan oldin (1A-rasm) FGIN-1-27 ning SK-MEL-2 hujayra o'sishiga ta'sirini tekshirish uchun hujayra hayotiyligi tahlili o'tkazildi. 1B-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN{6}} 48 soatdan keyin 1-16 mkM dozalash oralig'ida SK-MEL- 2 hujayralarining o'sishiga ta'sir ko'rsatmadi. Melanin tarkibini tahlil qilishda FGIN-1-27 bazal melanogenezni inhibe qildi (1C-rasm). -MSH hujayra ichidagi cAMP ning elevatoridir, bu melanogenezni sezilarli darajada qo'zg'atadi (Rzepka va boshq., 2016; Corre va boshq., 2004; Li va boshqalar, 2013). FGIN-1-27, shuningdek, -MSH bilan bog'liq melanin sintezini inhibe qildi (1C-rasm). Masson-Fontana ammiakli kumush bilan bo'yash doimiy ravishda FGIN-1-27 -MSH bo'lgan yoki bo'lmagan SK-MEL-2 hujayralarida melanin kontsentratsiyasini sezilarli darajada kamaytirganini ko'rsatdi (1D-rasm). Bundan tashqari, OAG PKC elevatoridir va ET{27}} MAPK yo'lining faollashtiruvchisi bo'lib, ikkalasi ham melanin sintezini rag'batlantirishi mumkin (Kim va boshq., 2006; Park va boshq., 2015; Regazzetti va boshq., 2015). 1E va 1F-rasmlarda ko'rsatilganidek, FGIN-1-27 shuningdek, OAG yoki ET-1-qo'zg'atgan melanogenezni sezilarli darajada inhibe qilgan.

FGIN-1-27 tirozinaza, TRP-1, TRP-2 ifodasini bostirdi va hujayrali tirozinaza faolligini pasaytirdi

Melanogenez uchta muhim ferment tomonidan boshqariladi: tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 (Zhu va boshq., 2015). -MSH va ET -1 uchta muhim melanogen fermentlar ifodasini oshirish orqali melanin sintezini rag'batlantirdi (Regazzetti va boshq., 2015; Li va boshq., 2013). FGIN-1-27 ning oqartiruvchi ta'siri ushbu oqsillar ifodasi bilan bog'liqligini tekshirish uchun biz FGIN-1-27 ning tirozinaza, TRP-1 va TRP{{10} ifodasiga ta'sirini o'rgandik. }} western-blot tahlili orqali. 2A-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN{13}} tirozinaza, TRP-1 va TRP{15}} ifodasini -MSH bilan yoki bo'lmagan holda bostirdi. FGIN-1-27 shuningdek, ET{18}} induksiyalangan tirozinaz, TRP-1 va TRP-2 ifoda ortishini doimiy ravishda qaytardi (2B-rasm). -MSH va ET-1 dan farqli o'laroq, OAG hujayrali tirozinaz faolligini to'g'ridan-to'g'ri oshirish orqali melanogenezni rag'batlantirdi (D'Mello va boshq., 2016). 2C va 2D-rasmlarda ko'rsatilganidek, FGIN{27}} davolash 12 soat davomida OAG tomonidan qo'zg'atilgan hujayrali tirozinaza faolligi oshishini inhibe qildi va tirozinaza ifodasiga ta'sir qilmadi. Bundan tashqari, FGIN-1-27 ning tirozinaza faolligiga bevosita ta'sirini o'rganish uchun qo'ziqorin tirozinaza faolligi tahlili o'tkazildi. 2E-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN-1-27 qo'ziqorin tirozinazasining fermentativ faolligiga ta'sir qilmadi. Bu natijalar shuni ko'rsatdiki, FGIN-1-27 tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 ifodasini bostiradi va hujayrali tirozinaza faolligini pasaytirdi, ammo tirozinazaning fermentativ faolligiga bevosita ta'sir ko'rsatmadi.

FGIN-1-27 MITF ifodasini kamaytirdi

MITF tirozinaz, TRP-1 va TRP-2 ifodasini qo'zg'atuvchi asosiy transkripsiya omilidir (Kawasaki va boshq., 2008; Levy va Fisher, 2011). 3A-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN-1-27 MITF transkripsiyasini inhibe qildi. Shuningdek, SK-MEL-2 hujayralari FGIN-1-27 mavjudligi yoki yo'qligida -MSH bilan ishlov berilgandan keyin MITF ifodasini o'lchadik. 3B-rasmda ko'rsatilganidek, -MSH MITF ifodasini sezilarli darajada oshirdi. Qizig'i shundaki, MITF ifodasi FGIN-1-27 mavjudligida sezilarli darajada kamaydi. FGIN{13}}, shuningdek, ET-1-induktsiya qilgan MITF ifodasi o'sishini doimiy ravishda bostirdi (3C-rasm). Bu natijalar FGIN-1-27 MITF ifodasini inhibe qilganligini ko'rsatdi.

FGIN-1-27 PKC-, p-PKA Cat, p-CREB, p-p38 va p-ERK ifodalarini kamaytirdi

PKA, PKC va MAPK melanogenezda muhim transduksiya yo'llaridir (D'Mello va boshq., 2016). Ikkinchi messenjer cAMP PKA ni faollashtirishi mumkin, u CREB ni fosforlaydi va nihoyat MITF ifodasini targ'ib qiladi (Corre va boshq., 2004; Rzepka va boshq., 2016). PKC{3}}bog'liq yo'li tirozinazni faollashtirish orqali melanogenezni tartibga soladi (Kim va boshq., 2006; Kawaguchi va boshq., 2012; Yuan va Jin, 2018). MAPK, shu jumladan p38, hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan protein kinaz (ERK) va c-jun N-terminal kinaz (JNK) pigmentatsiyani tartibga solishi haqida xabar berilgan (Chjou va boshq., 2014). FGIN-1-27 orqali melanogenezni tartibga solishning molekulyar mexanizmlarini batafsilroq tushunish uchun biz pigmentatsiyada ishtirok etadigan transduksiya yo‘llarini o‘lchadik. 4-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN{14}} PKC-, p-PKA cat, p-CREB, p-p38 va p-ERK ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi.

FGIN-1-27 Inson melanotsitlarida melanogenezni inhibe qilgan

FGIN-1-27 ning melanogenezga inhibisyoni inson epidermis melanotsitlarida (HEM) baholandi. Qo'shimcha S1-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN -1-27 48 soatdan keyin 1-16 mkM dozalash oralig'ida HEM o'sishiga ta'sir ko'rsatmadi. 5A-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN-1-27 HEMda melanogenezni sezilarli darajada inhibe qildi. Western blotting tahlili shuni ko'rsatdiki, FGIN{8}} HEMda tirozinaza, TRP-1 va TRP-2 ifoda darajasini pasaytirgan (5B-rasm). Qo'shimcha S2-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN{13}} davolash 12 soat davomida HEMda OAG tomonidan qo'zg'atilgan hujayrali tirozinaz faolligini oshirishni inhibe qildi. Bundan tashqari, biz FGIN mavjudligi yoki yo'qligida HEMni -MSH bilan davolashdan keyin MITF ifodasini o'lchadik-1-27. 5C-rasmda ko'rsatilganidek, FGIN-1-27 mavjudligida MITF ifodasi sezilarli darajada kamaydi. Bundan tashqari, SK-MEL-2 hujayralarida bo'lgani kabi, HEMda ham PKC-, PKA va MAPK ning FGIN vositachiligida{23}}melanogenga qarshi ishtiroki tasdiqlangan (5D-rasm).

Batafsil ma'lumot uchun: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501