Ser389 da fosforillanish orqali GSK3 inhibisyoni neyroyallig'lanishni nazorat qiladi
Oct 24, 2023
Abstrakt: Ser9 fosforillanishi bilan glikogen sintaza kinaz 3 (GSK3) ning inhibisyonu ko'plab fiziologik jarayonlarga, shu jumladan immunitetga ta'sir qiladi. Biroq, muqobil Ser389 fosforillanishi bilan GSK3 inhibisyonining oqibatlari yomon tavsiflanganligicha qolmoqda. Bu erda biz Ser389 GSK3 fosforillanishi buzilgan GSK3 Ser389 knock-in (KI) sichqonlarida neyroyallig'lanishni ko'rib chiqdik. Ushbu hayvonlarda faollashtirilgan mikrogliya/infiltrlangan makrofaglar, astrositlar va infiltrlangan neytrofillar soni C57BL/6J yovvoyi tipdagi (WT) hamkasblariga nisbatan ancha yuqori bo'lgan, bu esa GSK3 ni Ser389 fosforillanishi bilan inaktivatsiya qilmaslik past darajadagi barqarorlikka olib kelishini ko'rsatadi. neyro yallig'lanish. Bundan tashqari, GSK3 Ser389 KI sichqonlarida glial hujayra faollashuvi va lipopolisakkaridga (LPS) javoban immun hujayralarining miya infiltratsiyasi muvaffaqiyatsiz tugadi. Bunday ta'sirlar miyaga xos edi, chunki periferik immunitet ham xuddi shunday ta'sir qilmagan. Bundan tashqari, LPSga javoban IkB kinaz kompleksining (IKK) fosforillanishi GSK3 Ser389 KI sichqonlarida muvaffaqiyatsizlikka uchragan, STAT3 fosforilatsiyasi esa to'liq saqlanib qolgan, bu NF-kB signalizatsiya yo'liga ushbu GSK3 tartibga solish yo'lidan ayniqsa ta'sir qilishini ko'rsatadi. Umuman olganda, bizning topilmalarimiz Ser389 fosforillanishi bilan GSK3 inaktivatsiyasi miyaning yallig'lanish reaktsiyasini nazorat qilishini ko'rsatadi, bu uning neyroinflamatuar patologiyalarning rivojlanishidagi rolini baholash zarurligini oshiradi.
cistanche tubulosa - yallig'lanishga qarshi
Kalit so'zlar: neyroyallig'lanish; mikrogliya; astrositlar; neytrofillar; NF-kB signalizatsiyasi; oqim sitometriyasi
Cistanche o'ti nima qiladi - Anti- yallig'lanish
Cistanche mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing
【Ko'proq so'rang】Elektron pochta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1.Kirish
Glikogen sintaza kinaz 3 (GSK3) keng o'ziga xoslikka ega serin-treonin kinazdir. GSK3 yallig'lanish, hujayra o'sishi, hujayra differentsiatsiyasi va energiya almashinuvi kabi turli xil jarayonlarni tartibga soladi va diabet, Altsgeymer kasalligi va saraton kabi yoshga bog'liq kasalliklarda ishtirok etadi [1]. GSK3 va GSK3 izoformlarining ikkalasi ham hamma joyda ifodalanadi, ammo ularning funktsiyalari bir-biriga to'liq mos kelmaydi [2]. GSK3 konstitutsiyaviy faoldir, ammo uning faolligi sitozolik komplekslarga sekvestrlanish hamda Ser9 va Ser389 qoldiqlarida fosforlanish orqali inhibe qilinishi mumkin [3]. Ser9 da GSK3 ning Akt-induktsiyali fosforillanishi ko'pgina hujayra turlarida mavjud bo'lgan GSK3 tartibga solish yo'lidir va bu GSK3 faollashuvini cheklash va hujayra o'limini oldini olish uchun standart yo'ldir. Bundan farqli o'laroq, biz p38 MAPK tomonidan qo'zg'atilgan Ser389 fosforillanishi miya, timus va taloq [4] kabi o'ziga xos to'qimalar bilan cheklanganligini va fosfo-Ser389 GSK3 ning miya ifodasi rivojlanish bilan tartibga solinishini aniqladik [5]. GSK3 ning Ser389 tomonidan fosforlanishi, birinchi navbatda, DNKning ikki zanjirli uzilishlari reaktsiyasi bilan tetiklanadi va DNKni ta'mirlashga ruxsat berish juda muhimdir [6,7]. Shunday qilib, Ser9da fosforillanish sitoplazmatik GSK3 inaktivatsiyasining asosiy yo'li bo'lsa-da, Ser389 fosforilatsiyasi DNK DSB ta'miri paytida omon qolishni oshirish uchun GSK3 yadro hovuzini inaktivatsiya qilish uchun ishlatiladi [8]. DSB ga javoban Ser389 fosforillanishi orqali GSK3 ni faolsizlantirmaslik nekroptoz tufayli hujayra o'limining kuchayishiga olib keladi [6,7]. Bu juda dolzarb, chunki o'limning nekroptotik turi ko'proq yallig'lanishli va yallig'lanish kasalliklarida topilgan [9]. Biroq, Ser9 fosforlanishidan farqli o'laroq, GSK3 fosforillanishining Ser389ga ta'siri hali ham yomon tavsiflangan. Bir qator tadqiqotlar GSK3 va yallig'lanish o'rtasidagi bog'liqlikni qo'llab-quvvatladi. Shunday qilib, stress, infektsiya yoki travma kabi yallig'lanish stimullari bilan GSK3 faollashishi IL-6, IL-1 va IFN kabi yallig'lanishga qarshi sitokinlarning ishlab chiqarilishiga yordam beradi, GSK3 inhibisyoni esa sintezini bostiradi. yallig'lanishga qarshi vositachilar va immun hujayralari tomonidan IL{52}} ishlab chiqarishni oshiradi [10]. GSK3 gram-manfiy bakteriyalarning asosiy immunostimulyator endotoksinlaridan biri bo'lgan lipopolisakkarid (LPS) tomonidan faollashtirilishi mumkin [11,12]. Bakterial LPS ni Toll-o'xshash retseptorlari (TLR) bilan bog'lagandan so'ng, GSK3 tug'ma immun tizimining hujayralarida yallig'lanish sitokinlarini chiqarishga vositachilik qiladi [13]. Bundan tashqari, LPS ning o'ldiradigan dozasi bilan davolash qilingan sichqonlarga GSK3 inhibitörlerini qo'llash hayvonlarning omon qolishini sezilarli darajada oshiradi [14]. GSK3 bilan bog'liq bu yallig'lanishga qarshi ta'sirlarga qaramasdan, yallig'lanishga qarshi ta'sirlar ham hujjatlashtirilgan [15,16]. Shunday qilib, GSK3 regulyatsiyasi TLR faollashuvidan keyin yallig'lanishga qarshi va yallig'lanishga qarshi sitokinlar o'rtasidagi muvozanatni saqlash uchun juda muhimdir [17]. Yadro omili kB (NF-kB) yallig'lanishga qarshi sitokinlarni ishlab chiqarishga vositachilik qiladi va TLRlar tomonidan faollashtirilgan asosiy transkripsiya omillaridan biridir. Bir nechta mualliflar GSK3 ning IkB kinaz kompleksini (IKK) fosforillanishi orqali NF-kB signalizatsiyasini faollashtirishi mumkinligini tasdiqladilar, bu IkB ni fosforlaydi va faol NF-kB chiqaradi. GSK3 tomonidan fosforlangan yana bir transkripsiya omili septik shok kontekstida neyroyallig'lanishga vositachilik qiluvchi signal transduser va transkripsiya faollashtiruvchisi-3 (STAT3)dir [18]. GSK3 tomonidan STAT3 fosforillanishi yadro translokatsiyasi va faollashuviga olib keladi. Bundan tashqari, GSK3 yallig'lanishga qarshi CREB va AP{85}} transkripsiya faoliyatini inhibe qilib, proinflamatuar sitokinlarning ifodasini kuchaytiradi [10,19]. Mikrogliya hujayralari markaziy asab tizimidagi doimiy makrofaglardir. Infiltratsiyalangan leykotsitlar bilan birgalikda mikrogliya faollashuvi neyroyallig'lanishda hal qiluvchi rol o'ynaydi. Astrositlar, shuningdek, neyroimmun funktsiyalariga ega bo'lgan glial hujayralardir, chunki ular mikrogliya, leykotsitlar va endotelial hujayralar bilan o'zaro aloqada bo'lib, tug'ma va adaptiv immunitet reaktsiyalarini modulyatsiya qiladi [20]. Yallig'lanish stimullariga javoban mikrogliya va astrositlarning faollashishi (glioz) ko'payish, gipertrofiya va sitokinlarning chiqarilishini o'z ichiga olgan asosiy hujayra o'zgarishlari bilan tavsiflanadi [21]. GSK3 LPS ga javoban yoki asabiy GSK3 ning haddan tashqari ko'payishi natijasida glioz rivojlanishida ishtirok etgan [22]. GSK3 tomonidan qo'zg'atilgan glial reaktivlik va neyroyallig'lanish miyadagi NF-kB yo'lining faollashuvi orqali vositachilik qilishi mumkinligi haqida dalillar ham mavjud [19,23]. Aksincha, GSK3 ning inaktivatsiyasi glial reaktivlikni pasaytiradi, neyroinflamatuar javobni cheklaydi va asab hujayralarida yallig'lanishga qarshi CREB faolligini oshiradi [24]. Shunday qilib, GSK3 Altsgeymer kasalligi va ko'p skleroz kabi neyroinflamatuar kasalliklarning rivojlanishida asosiy rol o'ynashi taklif qilindi [25]. Fosforlanish - bu GSK3 faolligini tartibga solish mexanizmi bo'lib, immun javobni nazorat qilish uchun asosiy ta'sir ko'rsatadi. Shunday qilib, klassik Ser9 fosforillanishi bilan GSK3 inhibisyonu yallig'lanishga qarshi vositachilar ishlab chiqarishni tartibga soladi va yallig'lanishga qarshi sitokinlarning chiqarilishini kamaytiradi [26], garchi u trinitrobenzol sulfonik kislotasi tomonidan qo'zg'atilgan eksperimental kolit modelida yallig'lanishni bartaraf etishda ham ishtirok etadi. [27]. Miya ichida GSK3 ning Ser9 fosforillanishi bilan nuqsonli inhibisyonu Parkinson kasalligi [28] va shizofreniya [29] kabi yallig'lanish nevropatologiyalari bilan bog'liq. Aksincha, miyada topilgan fosfo-Ser389 GSK3 ning yuqori darajalariga qaramay [4], GSK3 inaktivatsiyasining ushbu yo'li neyroinflamatsiyani sozlashda rol o'ynaydimi yoki yo'qmi, noma'lumligicha qolmoqda. Bu erda biz GSK3 ning C-terminal fosforillanishini oldini olish uchun GSK3 Ser389 Ala bilan almashtirilgan GSK3 KI sichqonlari yordamida neyroinflamatsiyada Ser389 fosforilatsiyasi vositachiligidagi GSK3 inaktivatsiyasining mumkin bo'lgan rolini tekshiramiz [7,8]. Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, fiziologik sharoitda Ser389 da fosforlanish orqali faol bo'lmagan GSK3 ning etishmasligi surunkali past darajadagi neyroinflamasyonga, shuningdek, LPS kabi yallig'lanish stimullariga javob yo'qligiga olib keladi. Ushbu surunkali yallig'lanish miyaga xos ko'rinadi, chunki periferik immunitet tizimi deyarli ta'sir qilmaydi. Shuningdek, biz GSK3 KI sichqonlarining miyasida fosfo-Ser389 GSK3 yo'qligi NF-kB signalizatsiyasini tartibga solishini ko'rsatamiz, bu neyroinflamatsiyani nazorat qilishda markaziy hodisadir. Shu sababli, bizning topilmalarimiz yallig'lanish nevropatologiyalarida Ser389 fosforillanishi orqali GSK3 inaktivatsiyasini qo'llashni qo'llab-quvvatlaydi.
2. Natijalar
2.1. Ser389 fosforillanishi bilan GSK3 ni faolsizlantirmaslik bazal neyroyallig'lanishning kuchayishiga olib keladi.
Ser9da fosforillanish orqali GSK3 inaktivatsiyasi miyada yallig'lanishga qarshi bosqich bilan bog'liq [30]. Ser389da fosforillanish orqali GSK3 ning inaktivatsiyasi miyadagi DNK ikki zanjirli uzilishlari natijasida kelib chiqqan neyronlarning o'limini kamaytirish uchun muhim bo'lsa-da, bu yo'l neyroinflamatuar javobni ham tartibga sola oladimi yoki yo'qmi, hech qanday tadqiqotlar o'rganilmagan. Shunday qilib, biz Ser389 fosforillanishini oldini olish uchun ilgari tasvirlangan GSK3 Ser389 KI sichqonlaridan foydalandik, ularda Ser389 Ala bilan almashtiriladi. Biz rezident va infiltratsiyalangan hujayralarning muvozanatli aralashmasini olish uchun oldindan optimallashtirilgan protokolga rioya qilgan holda, to'qimalarning mexanik dissotsiatsiyasi va Percoll gradienti orqali WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlarining butun miyadagi rezident va infiltratsiyalangan immun hujayralarini (serebellum va hid bilish lampalaridan tashqari) tekshirdik. miyada, shu jumladan mikroglia/makrofaglar, astrositlar, infiltratsiyalangan neytrofillar va limfotsitlar [31]. Keyin hujayralar standart markerlar yordamida oqim sitometriyasi bilan tahlil qilindi (Qo'shimcha materiallardagi S1-rasm) [31-33]. Faollashtirilgan va dam oluvchi mikrogliya/makrofaglar mos ravishda CD11b+CD45yuqori va CD11b+CD45past, limfotsitlar esa CD45+CD11b− [32,34] sifatida belgilangan. Neytrofillar CD45+Ly6G+ hujayralari sifatida tavsiflangan; va astrositlar CD45− populyatsiyasida hujayra yuzasi antijeni-2 (ACSA-2) ifodasi orqali aniqlangan. Bu marker rivojlanayotgan va katta yoshdagi astrositlarni aniqlash uchun ishlatiladi [35]. Yallig'lanish holatlari bilan bog'liq reaktiv astrositlarda ACSA-2 ning ko'tarilishi kuzatilgan, masalan, autoimmun demiyelinatsiya [36]. Ilgari biz sichqonlar miyasida ACSA{36}} astrositlari soni LPS bilan davolashdan so‘ng ortib borishini aniqlagan edik, bu esa ACSA{37}} ifoda darajasi yallig‘lanish stimuliga javoban astrositlar faollashuvi bilan bog‘liqligini ko‘rsatadi [31]. ACSA-2 mikrogliya va makrofaglarning kichik subpopulyatsiyasida ham ifodalanishi mumkin [35], bu hujayralar CD45+ populyatsiyasi ichida. Fiziologik sharoitda sichqonlardan olingan miya hujayralari izolatlarining oqim sitometriyasi tahlili WT sichqonlariga nisbatan GSK3 Ser389 KI sichqonlarida faollashtirilgan mikrogliya/makrofaglar fraktsiyasining sezilarli o'sishini aniqladi (1a-rasm). Aksincha, GSK3 Ser389 KI sichqonlarining miyalarida dam mikrogliya foizi kamaydi (1b-rasm). Bundan tashqari, GSK3 Ser389 KI sichqonlarida ACSA{48}} astrositlari (ya'ni faollashtirilgan astrositlar) mavjudligi sezilarli darajada oshdi (1c-rasm). Miyadagi immun hujayra infiltratsiyasiga kelsak, WT sichqonlariga nisbatan GSK3 Ser389 KI sichqonlarining miyasida neytrofillarning aniq to'planishi kuzatildi (1d-rasm), bu fiziologik ta'sir ostida GSK3 Ser389 KI sichqonlarining miyasida davom etayotgan yallig'lanish reaktsiyasining mavjudligini ko'rsatdi. sharoitlar. Biroq, miyadagi CD45+CD11b- leykotsitlar (asosan limfotsitar hujayralar) chastotasi GSK3 Ser389 KI sichqonlarida ta'sirlanmagan (1e-rasm). Birgalikda, bu natijalar Ser389 da fosforillanish orqali GSK3 ni inhibe qilmaslik miyada mikrogliya va astrositlar o'rtasida reaktivlikni keltirib chiqaradigan surunkali tug'ma yallig'lanish reaktsiyasiga olib kelishini ko'rsatadi.
Shakl 1. GSK3 ning Ser389 fosforillanishi bilan inaktivatsiyasi neyroinflamatsiyaga aloqador bo'lgan miya hujayralari populyatsiyalariga ta'sir qiladi. WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlarining miyalari olib tashlandi va (a) CD11b++CD45 yuqori faollashtirilgan mikrogliya/makrofaglar, (b) CD11b++CD45 past dam mikrogliya, (c) ACSA oqim sitometriyasi tahlili uchun qayta ishlandi. -2+ astrositlar, (d) Ly6G+ neytrofillar va (e) CD11b- limfotsitlar. Gistogrammalar CD45− hujayralar (astrositlar) yoki CD{16}} hujayralari (barcha boshqa populyatsiyalar) ulushi sifatida ifodalangan hujayralar sonini ifodalaydi. Ma'lumotlar o'rtacha ± SEM sifatida ko'rsatilgan (n=7–9). Genotiplarni solishtirish uchun talabalarning t-testi qo'llanildi. *, p < {{20}}.05; **, p <0,01. WT, yovvoyi turdagi; KI va GSK3 Ser389 taqillatadi.
2.2. Ser389 da GSK3 fosforillanishining taloq hujayralariga ta'siri yo'qligi
GSK3 Ser389 KI sichqonlarida aniqlangan o'zgargan yallig'lanish holati miya bilan cheklanganmi yoki ta'sir tizimlimi yoki yo'qligini o'rganish uchun biz taloqdagi turli hujayra populyatsiyalari uchun oqim sitometriyasi tahlilini o'tkazdik. Neytrofillar Ly6G + hujayralari sifatida aniqlandi. Ly6G ifodasi juda o'zgaruvchan edi, chunki u ilgari ko'rsatilganidek, hujayralarning etilish bosqichiga bog'liq edi [37]. Bundan tashqari, monositik miyeloid hujayralar Ly6G–CD38+CD11b+ hujayralari sifatida belgilandi. Bu monotsitlar/makrofaglar, avval xabar qilinganidek, CD38 ifodasi darajasiga ko'ra aniq ikki xil populyatsiyani taqdim etdi [38]. CD8+ hujayralar, CD{13}} hujayralar va B220+ hujayralar (B hujayralar) ham baholandi (Qo'shimcha materiallardagi S2-rasm).
Shakl 2. Oqim sitometriyasi tahlili WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlarida o'xshash taloq hujayralari populyatsiyasini ko'rsatadi. Taloq hujayralarining dissotsiatsiyasidan so'ng, oqim sitometriyasi (a) Ly6G+ neytrofillar, (b) CD38+CD11b+ monositlar/makrofaglar, (c) CD4+ hujayralari, (d) sonini baholash uchun ishlatilgan. CD8+ katak va (e) B{10}} katak. Gistogrammalar jami hujayralarning foizi sifatida ifodalangan hujayra raqamlarini ko'rsatadi. Ma'lumotlar o'rtacha ± SEMga mos keladi (n=5–7). Genotiplarni solishtirish uchun talabalarning t-testi qo'llanildi. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatadi.
2.3. LPS GSK3 Ser389 KI sichqonlarida neyroyallig'lanishni kuchaytira olmaydi
Keyinchalik, biz Ser389 fosforillanishini bekor qilish bazal tonik yallig'lanishni keltirib chiqarishdan tashqari, LPS tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish reaktsiyasiga ham ta'sir qilishi mumkinligini tekshirdik. WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlariga bakterial lipopolisakkaridning (LPS) subletal dozasi (0,5 mg/kg) bilan qorin bo'shlig'iga yuborildi. Miyaning yallig'lanish reaktsiyasi uch kundan keyin tekshirildi, chunki bunday davolash ilgari sichqonlarning miyasida past darajadagi yallig'lanishni keltirib chiqarishi ko'rsatilgan edi [39,40]. Ushbu LPS javobi, shuningdek, depressiya, tashvish va Parkinson kasalligi [41,42] kabi bir qancha nevrologik kasalliklarda kuzatilgan surunkali yallig'lanish holatiga o'xshaydi. Kutilganidek, LPS WT sichqonlarida glial reaktivlikni keltirib chiqardi, bu faollashtirilgan mikrogliya/makrofaglar chastotasining ortishi (3a-rasm) va dam mikrogliya chastotasining pasayishi (3b-rasm). Bundan farqli o'laroq, LPS GSK3 Ser389 KI sichqonlarida boshqa yallig'lanish reaktsiyasini keltirib chiqara olmadi (3a, b-rasm). 1-jadval to'g'ridan-to'g'ri ikkita genotip o'rtasidagi LPS javoblarining kattaligini taqqoslaydi. Bundan tashqari, ushbu LPS bilan davolash WT sichqonlarida ACSA{16}} astrositlari foizini, avval xabar qilinganidek [31] oshirdi, lekin GSK3 Ser389 KI sichqonlarida emas (3c-rasm). Immunitet hujayralarining miya infiltratsiyasiga kelsak, LPS WT sichqonlarida neytrofillarning to'planishiga olib keldi, lekin GSK3 Ser389 KI sichqonlarida hech qanday ta'sir ko'rsatmadi (3d-rasm). Nihoyat, LPS administratsiyasi WT yoki GSK3 Ser389 KI sichqonlarida miyada limfotsitlar to'planishiga yordam bermadi (3e-rasm). Umuman olganda, bu kuzatuvlar shuni ko'rsatadiki, GSK3 ning Ser389 fosforillanishi bilan inaktivatsiyasi miyada tonik yallig'lanish holatini oldini olish uchun muhim, ammo LPS kabi stimullarga javoban o'tkir miya yallig'lanishiga yordam beradi.
Jadval 1. WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlari o'rtasidagi LPS effektlaridagi farqlar. Qiymatlar har bir genotipda LPS bilan davolashdan keyingi hujayralar sonini ifodalaydi va transport vositasi bilan ishlov berilgan nazorat elementlariga nisbatan o'sish sifatida ifodalanadi (o'rtacha ± SEM). Yulduzchalar WT va GSK3 Ser389 KI hayvonlarida LPS ta'siri o'rtasidagi statistik jihatdan muhim farqlarni ko'rsatadi. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatish; LPS, lipopolisakkarid. *, p < 0.05; **, p <0,01.
Shakl 3. GSK3 Ser389 KI sichqonlarining neyroimmun hujayralari LPSga javob bera olmaydi. Voyaga etgan WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlariga LPS (0,5 mg/kg) intraperitoneal AOK qilingan. Uch kundan keyin (a) CD11b++CD45 yuqori faollashtirilgan mikrogliya/makrofaglar, (b) CD11b+CD45 past dam mikrogliya, (c) ACSA{13}} astrositlar, (d) Ly6G+ neytrofillar va () miya populyatsiyalari. e) CD11b- limfotsitlar oqim sitometriyasi bilan baholandi. Gistogrammalar ikkala genotipdagi hujayralar soniga LPS ta'sirini ko'rsatadi. Ma'lumotlar CD45− hujayralari (astrositlar) yoki CD{18}} hujayralari (barcha boshqa populyatsiyalar) foizlari sifatida taqdim etilgan va qiymatlar o'rtacha ± SEMga to'g'ri keladi (n=7-9). Har bir genotipda LPS tomonidan qo'zg'atilgan o'zgarishlarning ahamiyatini baholash uchun talaba t-testi qo'llanildi. ** p < 0.01. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatish; LPS, lipopolisakkarid.
Keyinchalik, biz hipokampal GSK3 Ser389 fosforillanishining bazal glial faollashuviga va yallig'lanish stimullariga glial javobga ta'sirini ko'rib chiqdik. Shu maqsadda Iba{2}} yorlig'i tishli girusda mikroskop yordamida baholandi (4a-rasm). Birinchidan, WT sichqonlari baholandi. Mikrografiklar bazal glial faollashuvning pastligini, ammo LPS in'ektsiyasiga javoban glial immunoreaktivlikning kuchli o'sishini ko'rsatadi (0.5 mg/kg, 3 kun) (4b-rasm). Iba{8}} immuno-bo'yash uchun integratsiyalashgan zichlik miqdori davolashdan keyin WT sichqonlarida 53% ga yuqori bo'lgan qiymatlarni ko'rsatdi (4d-rasm). Ushbu o'zgarishlar statistik jihatdan ahamiyatli bo'lib, ilgari xabar qilingan sichqonchaning hipokampusida LPS tomonidan yuzaga kelgan sezilarli hujayra gipertrofiyasiga mos keladi [43,44].
Shakl 4. LPSga javoban glioz GSK3 Ser389 KI sichqonlarida o'zgartiriladi. Voyaga etgan WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlari LPS yoki vosita (C) bilan intraperitoneal AOK qilingan. 3 kundan keyin miyalar floresan mikroskopiya uchun qayta ishlandi. (a) Sichqonchaning miya atlasidan [45] moslashtirilgan koronal gipokampus qismi tishli girusni o'z ichiga olgan tasvirlarning lokalizatsiyasini ko'rsatadi. (b) Iba-1 mikrogliya/makrofag markerlari uchun miya bo'limlari immuno-belgilangan. Grafiklarda Iba{8}} immunoreaktivligining integratsiyalashgan zichligi tasvirlangan, bu glial reaktivlikning o'lchovi bo'lib, glial bo'yashning intensivligi va kengayishini aks ettiradi. (c) nazorat WT va KI hayvonlarini solishtirish. (d) Har bir sichqon genotipida LPS javobi. Barcha qiymatlar avtomobil bilan ishlov berilgan WT boshqaruv elementlariga nisbatan ortib ketgan holda ifodalanadi (o'rtacha ± SEM, n=4–5). Talaba t-testi qo'llanildi. *, p < 0.05. Masshtab paneli, 100 mkm. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatish; C, avtomobil; LPS, lipopolisakkarid.
Ser389 KI sichqonlarining hipokampusini tahlil qilish WT sichqonlariga nisbatan bazal mikroglial faollashuvdagi farqlarni aniqladi. Shunday qilib, mikrografiyalarni vizual tekshirish mutant hayvonlarda o'rtacha glial faollashuvni ko'rsatgan bo'lsa-da (4b-rasm), integratsiyalashgan zichlik o'lchovlari glial immunoreaktivligining o'sishi statistik ahamiyatga ega ekanligini ko'rsatdi (4c-rasm). Qizig'i shundaki, Ser389 KI sichqonlari LPS bilan davolashdan so'ng keyingi faollashuv belgilarini ko'rsatmadi (4b-rasm) va miqdoriy tahlil LPS gipokampusda Iba{5}} immuno-bo'yashni oshira olmasligini tasdiqladi (4d-rasm), bu glial hujayra faollashishini ko'rsatadi. GSK3 Ser389 fosforillanishi bo'lmaganda LPS buziladi.
Cistanche qo'shimchasining afzalliklari - Anti-yallig'lanish
2.5. GSK3 Ser389 KI sichqonlarida LPSga periferik immun javob ta'sir qilmagan
Oldingi tajribalarimiz ser389 fosforillanishi orqali GSK3 inaktivatsiyasining miyaning LPSga bo'lgan javobiga chuqur oqibatlarini ochib beradi. Keyinchalik, tizimli immunitetda shunga o'xshash ta'sirlar mavjudligini ko'rib chiqdik. LPS taloqning tug'ma immun hujayralarining faollashishiga olib kelishi ma'lum bo'lganligi sababli [46], WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlarining taloq hujayralari populyatsiyalari LPS in'ektsiyasidan 3 kun o'tgach baholandi (0,5 mg/kg). Ly6G+ neytrofillari (5a-rasm) va CD38++CD11b++Ly6G− monotsitlar/makrofaglar soni (5b-rasm) LPS bilan davolashga javoban WT sichqonlarida sezilarli darajada oshdi. WT sichqonlarida kutilgan ushbu LPS effektlari GSK3 Ser389 KI sichqonlarida ham kuzatilgan (5a,b-rasm). Taloqdagi limfotsitlar populyatsiyalari tahlil qilinganda ham genotiplar o'rtasida farq olinmadi, chunki taloq CD4+ hujayralari (5c-rasm) va CD8+ hujayralari (5d-rasm) LPS tomonidan ham kamaygan. har ikkala sichqon zanjiri (mutant sichqonlarning kamayishi faqat CD4+ hujayralari uchun statistik ahamiyatga ega edi); va B 220+ B hujayralari genotipdan qat'iy nazar LPS ta'siridan ta'sirlanmagan (5e-rasm). Ushbu kuzatishlar ikkala genotipning miyasida joylashgan LPS ning differentsial ta'siridan farqli o'laroq. Shunday qilib, GSK3 Ser389 KI sichqonlari LPS tomonidan qo'zg'atilgan neyroyallig'lanishga chidamli bo'lsa-da, bu sichqonlar LPSga tizimli desensitizatsiyalanmagan. Shuning uchun, GSK3 Ser389 fosforillanishining ta'siri miyaga selektiv ko'rinadi.
Shakl 5. GSK3 Ser389 KI va WT sichqonlarida LPSga o'xshash periferik immun javob. Voyaga yetgan WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlariga LPS in'ektsiya qilingan. 3 kundan keyin taloq hujayralari ekstraksiya qilindi va oqim sitometriyasi yordamida (a) Ly6G+ neytrofillar, (b) CD38+CD11b+ monositlar/makrofaglar, (c) CD8+, sonini baholash uchun qayta ishlandi. (d) CD4+ va (e) B220+ katakchalar. Gistogrammalar LPS ning hujayralar soniga, shu jumladan WT va KI sichqonlariga ta'sirini ko'rsatadi. Har bir genotipda LPS tomonidan qo'zg'atilgan o'zgarishlarning ahamiyatini baholash uchun talaba t-testi qo'llanildi. O'rtacha ± SEM ko'rsatilgan (n=5–7). *, p < 0.05; **, p <0,01. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatish; ip, intraperitoneal; C, avtomobil; LPS, lipopolisakkarid.
2.6. GSK3 Ser389 KI sichqonlarida gippokampda LPS-induktsiyalangan NF-kB yo'li faollashuvi bekor qilindi
NF-kB LPS uchun yallig'lanishni qo'zg'atish uchun zarur bo'lgan transkripsiya omilidir [47]. Bundan tashqari, NF-kB miyada GSK3 tomonidan boshqarilishi ko'rsatilgan [2,19,23]. Shuning uchun biz NF-kB faollashtirish yo'lining dastlabki bosqichi bo'lgan IKK fosforillanishini tahlil qilish orqali LPSga javoban miyadagi NF-kB faollashuvini tekshirdik. WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlariga LPS (0.5 mg/kg) bilan ip yuborildi va 4 soatdan keyin gippokamp yig'ib olindi. Butun hujayrali ekstraktlar fosfo-IKK / va umumiy IKK / ni Western blotting orqali tekshirish uchun ishlatilgan. Kutilganidek, LPS WT sichqonlarida hipokampusda IKK fosforillanishini oshirdi (6a, b-rasm). Aksincha, LPS GSK3 Ser389 KI sichqonlarida IKK fosforillanishini keltirib chiqara olmadi (6a, b-rasm). STAT3 ning faollashishi LPS tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish bilan ham bog'liq [48]. Shuning uchun biz STAT3 ning fosforlanishini Western blot tahlili bilan tekshirdik. NF-kB faollashuvidan farqli o'laroq, LPS ga javoban STAT3 ning fosforillanishi WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlarining hipokampusida kuchli tarzda indüklendi (6a, c-rasm). Shunday qilib, Ser389 fosforillanishi bilan GSK3 inaktivatsiyasining oldini olish NF-kB signalizatsiyasini tanlab buzadi, bu GSK3 uchun hipokampusdagi NF-kB yo'lining yuqori oqimi regulyatori sifatidagi roliga mos keladi. Ushbu natijalar GSK3 yo'li NF-kB kabi asosiy yallig'lanish vositachilarini nazorat qilish orqali neyroinflamatsiyaga ta'sir qilishini ko'rsatadi.
Shakl 6. Ser389 fosforillanishi bilan GSK3 ni faolsizlantirmaslik LPS bilan davolash qilingan sichqonlarda NF-kB va STAT3 signalizatsiyasiga boshqacha ta'sir qiladi. NF-kB va STAT3 yo'llarining faollashuvi ikkalasida LPS ({{10}}.5 mg/kg) yoki transport vositasi (C) ni in'ektsiyadan 4 soat o'tgach, hipokampusdagi butun hujayrali lizatlarda tekshirildi. WT va GSK3 Ser389 KI sichqonlari. Blotlar fosfor-IKK / , jami IKK / , fosfor-STAT3 va jami STAT3 ning Western blot tahlilini ko'rsatadi. (a) -tubulinni aniqlash yuklash nazorati sifatida kiritilgan. Bog'langan grafiklar (b) fosfo-IKK / /IKK / va (c) fosfo-STAT3/STAT3 nisbatlariga mos keladi, Western blot bantlarining densitometrik tahlilidan olingan. Har bir genotipda (o'rtacha ± SEM, n=5-6) ishlov berilmagan nazorat (C) va LPS bilan ishlov berilgan hayvonlarni solishtirish uchun talaba t-testi qo'llanildi. *, p < 0.05; ***, p <0,001. Ma'lumotlar pIKK/IKK uchun to'rtta mustaqil tajriba va pSTAT3/STAT3 uchun uchta mustaqil tajribani ifodalaydi. WT, yovvoyi turdagi; KI, GSK3 Ser389 taqillatish; ip, intraperitoneal; C, avtomobil; LPS, lipopolisakkarid.
3. Munozara
Miyada GSK3 faolligining buzilishi ko'plab nevropatologiyalar bilan bog'liq bo'lib, unda surunkali yallig'lanish umumiy belgidir [25]. Katta adabiyotlar GSK3 ning Ser9 fosforillanishi bilan inhibe qilinishi yallig'lanishga qarshi vositachilarni ko'tarib, yallig'lanishga qarshi sitokinlarni [23,28,30] tartibga solishini qo'llab-quvvatlaganligi sababli, neyroyallig'lanish patologiyalarida nuqsonli GSK3 inaktivatsiyasini tushuntirish uchun keng tarqalgan mexanizm taklif etiladi. Ser9 fosforillanishining buzilishi [3]. Biroq, miyada fosfo-Ser389 GSK3 ning g'ayrioddiy yuqori darajalari aniqlangan [4], bu GSK3 inaktivatsiyasining muqobil yo'li ham miyada muhim rol o'ynashi mumkinligini ko'rsatadi. Bu erda taqdim etilgan tajribalar neyroyallig'lanishda GSK3 Ser389 fosforillanishining ta'sirini ochib beradi, bu esa ushbu yo'lning miya DNKsini tiklash va neyronlarning omon qolishida ishtirok etishini ko'rsatadigan oldingi dalillarga qo'shimcha qiladi [6,7]. Ushbu ishdagi asosiy topilmalardan biri shundaki, GSK3 Ser389 KI sichqonlarining miyasida barqaror glioz va immunitet hujayralari infiltratsiyasi kuchaygan, bu Ser389 fosforillanishi orqali GSK3 inaktivatsiyasining oldini olish neyroinflamatsiyaga olib keladi degan tushunchaga mos keladi. Oqim sitometriyasi bo‘yicha o‘tkazilgan tajribalarimiz ma’lumotlari bu hayvonlarda neyroyallig‘lanishning kuchayganini aniq ko‘rsatib turibdi, chunki Ser389 GSK3 KI sichqonlarining miyasida faollashgan mikrogliya/makrofaglar, ACSA 2+ astrositlari va infiltratsiyalangan neytrofillar soni sezilarli darajada yuqori edi. Biroq, mikro-astroglioz oqim sitometriyasi orqali aniq kuzatilganiga qaramay, Ser389 GSK3 KI sichqonlarining miya qismlaridan olingan hipokampus mikrografiyalarini tahlil qilish mikrogliya/makrofaglarning gipertrofiyasi faqat engil ekanligini ko'rsatdi. Shunga o'xshash natijalar gliozning darajasi va intensivligini baholash uchun miyaning boshqa hududlari tahlil qilinganda kuzatilgan (ko'rsatilmagan). Shu sababli, yallig'lanishga qarshi stimullar bo'lmasa, GSK3 Ser389 fosforillanishining etishmasligi past darajadagi deb tasniflanishi kerak bo'lgan neyroinflamasyon darajasiga olib keladi degan xulosaga keldik. Ko'pgina tadqiqotlar GSK3 giperaktivligi va nevrologik kasalliklarda neyrodegeneratsiya o'rtasidagi bog'liqlikni qo'llab-quvvatlaydi [25]. Shu nuqtai nazardan, biz Ser389 GSK3 KI sichqonlarida kuzatilgan yallig'lanish reaktsiyasi neyrodegeneratsiyaning oqibati bo'lishi mumkin, chunki oldingi tadqiqotlar bu hayvonlarning korteksi va hipokampusida neyronlarning o'limini aniqlagan [6]. Bu DNKning shikastlanishi hujayra o'limini oldini olish va DSB ta'mirlashni rag'batlantirish mexanizmi sifatida Ser389 fosforillanishi orqali GSK3 ni faolsizlantirishi haqidagi kuzatuvga muvofiqdir [7,8]. Natijada, Ser389 fosforillanishining oldini olgan KI sichqonlarining miyasi DSB tomonidan qo'zg'atilgan neyronlarning o'limidan himoyalanmagan. Fosfor-Ser389 GSK3 ifodasi va hujayraning omon qolishi o'rtasidagi bog'liqlik adaptiv immun javobda ishtirok etadigan mexanizm sifatida birinchi marta limfotsitlarda taklif qilingan. Shunday qilib, KI sichqonlarida GSK3 Ser389 fosforillanishining yo'qligi B hujayralarida uning kechikish davrida nekroptozni keltirib chiqarishi aniqlandi, bu bir nechta patologiyalar bilan bog'liq bo'lgan hujayra o'limining juda yallig'lanishli turidir [9]. Shunisi qiziqki, DNKning shikastlanishiga javoban GSK3 ni faolsizlantirish uchun nafaqat Ser389 fosforillanishi, balki Ser9 fosforillanishi ham ishga tushirilishi mumkin. Biroq, Ser389 GSK3 KI sichqonlari Ser9 GSK3 KI sichqonlarida [49,50] mavjud bo'lmagan neyrodegenerativ fenotipni [6] taqdim etadi, bu Ser389 fosforillanishi GSK3 faolligini nazorat qilishda o'ziga xos rol o'ynashini va Ser9 fosforilatsiyasini qoplamaydigan stsenariylar mavjudligini ko'rsatadi. Ser389 fosforillanishini yo'qotish uchun. Shunga ko'ra, Ser389 GSK3 deregulyatsiyasi, neyroyallig'lanish va neyrodegeneratsiya o'rtasidagi qiziqarli bog'lanish Ser389 da o'zgartirilgan GSK3 fosforilatsiyasi Altsgeymer kasalligi kabi surunkali yallig'lanish o'ziga xos bo'lgan neyropatologiyalarda asosiy omil bo'lishi mumkinligini aniqlash uchun qo'shimcha ravishda o'rganilishi kerak. Bundan tashqari, GSK3 Ser389 KI sichqonlarida kuzatilgan neyroimmun hujayralarining engil, ammo doimiy faollashuvi Ser389 fosforillanmasligi immunosensensiya bilan bog'liq bo'lishi mumkinligi haqidagi gipotezaga mos keladi. Bu yoshga bog'liq jarayon bo'lib, immun funktsiyalarining pasayishi bilan birga proinflamatuar vositachilarning ifodalanishining oshishi bilan tavsiflanadi; surunkali, past darajadagi yallig'lanishga olib keladi [1,51]. Bir nechta mualliflar yoshga bog'liq yallig'lanishda GSK3 deregulyatsiyasining ishtirokini ta'kidladilar [1,52]. Bundan tashqari, miya immunosensensiyasi kontekstida kuzatilgan mikrogliyaning g'ayritabiiy funktsiyasi oxir-oqibat neyrodegeneratsiyaga olib kelishi mumkinligi taklif qilingan [53]. Shunday qilib, Ser389 GSK3 KI sichqonlarida tezlashtirilgan immunosensensiya bu hayvonlarda ilgari xabar qilingan neyronlarning yo'qolishiga yordam berishi mumkin [6]. LPS "in vivo" va "in vitro" modellarida yallig'lanishni qo'zg'atish uchun keng qo'llanilgan. Biroq, qo'llaniladigan LPS dozasi asosan yallig'lanish reaktsiyasining turini aniqlaydigan dalillar mavjud [54-56]. LPS ning yuqori dozalari septik shokka o'xshash reaktsiyalarni keltirib chiqaradi; O'rtacha LPS dozalari esa ko'plab surunkali kasalliklarda kuzatiladiganga yaqinroq past darajadagi doimiy yallig'lanishni keltirib chiqaradi [42]. Shu nuqtai nazardan shuni ta'kidlash kerakki, bizning tajribalarimiz uchun tanlangan LPS dozasi (0,5 mg / kg, ip) o'rtacha va sichqonlarda LPS uchun bildirilgan LD50 dan uzoqdir (10-25 mg / kg) [57,58] ]. Oldingi hisobotlar [40,59] bilan kelishilgan holda, biz bunday LPS dozasi halokatli emasligini va WT hayvonlarida glioz va neytrofillarning miya infiltratsiyasini oshirish uchun etarli ekanligini aniqladik, limfotsitlar infiltratsiyasi esa ta'sir qilmaydi. Shunisi e'tiborga loyiqki, bunday mo''tadil (lekin muhim) LPS reaktsiyasi KI sichqonlarining miyasida GSK3 ning Ser389 fosforillanishi bilan buzilgan inaktivatsiyasi bilan bekor qilindi. Ushbu kuzatuvga ko'ra, miyadagi kengaytirilgan GSK3 giperaktivatsiyasi, oxir-oqibat, yallig'lanishga qarshi haqoratlarga nisbatan sezgirlikni kamaytirishi mumkin. Shunisi e'tiborga loyiqki, mutant sichqonlarda LPSga nuqsonli javob immunotolerans yoki qarshilik mexanizmiga mos keladi, bu markaziy asab tizimida glial hujayra faollashuvini kamaytirishga va ortiqcha yallig'lanishdan miya shikastlanishini cheklashga qaratilgan keng tarqalgan jarayon [60,61]. Ushbu g'oyaga muvofiq, oldingi tadqiqot sichqonlarda GSK3 faollashuvi immunotoleransni keltirib chiqarishi va LPS javoblarini bostirishi mumkinligini ko'rsatdi [62].
Cistanche tubulosa foydalari- immunitet tizimini mustahkamlash
Ushbu tadqiqotda tasvirlangan miya ta'siri yuqori o'ziga xoslikni ko'rsatishi ham qiziq. Shunday qilib, miyadan farqli o'laroq, WT va Ser389 GSK3 KI hayvonlarida baholangan ko'pchilik taloq hujayralari populyatsiyalari stimullanmagan sharoitlarda bir xil profilni, shuningdek, LPSga o'xshash javobni taqdim etdi. Bu shuni ko'rsatadiki, Ser389 fosforillanishiga bog'liq bo'lgan GSK3 inaktivatsiyasi yo'li neyroinflamatsiyani tartibga solishda o'ziga xos rol o'ynaydi. Ushbu gipotezaga muvofiq, miya hujayralari boshqa to'qimalarga nisbatan fosfo-Ser389 GSK3 ning yuqori ifodasini ko'rsatadi va bu ifoda miya rivojlanishi paytida qattiq tartibga solinadi [5]. Nihoyat, bizning topilmalarimiz bo'yicha, Ser389 da fosforillanish orqali GSK3 regulyatsiyasi NF-kB signalizatsiya yo'li orqali amalga oshiriladi, chunki STAT3 faollashuvi Ser389 GSK3 KI da ta'sirlanmagan. Ko'pgina quyi oqimdagi yallig'lanish vositachilari NF-kB faollashuvi bilan tartibga solinadi, jumladan sitokinlar, retseptorlar, transkripsiya omillari va fermentlar. Ushbu NF-kB maqsadlaridan qaysi biri Ser389 GSK3 fosforillanishiga ta'sir qilishini aniqlash bizning ishimiz doirasidan tashqarida, ammo bu neyroinflamasyon mexanizmlarini oydinlashtirishga qaratilgan kelajakdagi tadqiqotlar uchun qiziqarli maqsad bo'ladi.
4. Materiallar va usullar
4.1. Hayvonlar
C57BL/6J Wild-tip (WT) sichqonlari Jekson Laboratories kompaniyasidan sotib olingan. C57BL/6 GSK3 Ser389 KI sichqonlari, ularda GSK3 ning Ser389 qoldig'i fosforlanishni oldini olish uchun Ala bilan almashtirilgan, ilgari tasvirlanganidek [8] yaratilgan. Barcha sichqonlar Albacete tibbiyot maktabi bilan bog‘liq bo‘lgan hayvonot muassasasiga 12-yorug‘lik/qorong‘i tsikl ostida joylashtirildi. Oziq-ovqat va suv ad libitum bilan ta'minlangan. Tajribalar uchun to'rt-olti oylik kattalar sichqonlari ishlatilgan.
4.2. LPS ma'muriyati
Yallig'lanish reaktsiyasini qo'zg'atish uchun sichqonlar bir martalik intraperitoneal (ip) {0}},5 mg/kg LPS in'ektsiyasini oldilar. Salmonella enterica LPS (serotip typhimurium, L7261 Sigma Aldrich, Madrid, Ispaniya) steril, endotoksinsiz 0,9% tuzli eritmada 10 mg/ml da eritildi. Davolanishdan uch kun o'tgach, sichqonlar evtanizatsiya qilindi va miya va taloq immunohistokimyo yoki glial hujayralar va infiltratsiyalangan immun hujayralarining oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun olib tashlandi. Western blotting tahlili uchun hayvonlar 0,5 mg/kg LPS ni ip in'ektsiyasidan keyin 4 soat o'tgach evtanizatsiya qilindi, chunki LPS sichqonchani va kalamush miyasida yallig'lanish oqsillarini ipni yuborishdan 2-4 soat o'tgach kuchaytirganligi haqida xabar berilgan edi [63,64].
4.3. Oqim sitometriyasi
Miya to'qimalari va taloq hujayralarining oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun hayvonlar o'tkir terminal tadqiqotlari uchun tavsiya etilgan tribromoetanolning ip in'ektsiyasi bilan behushlik qilindi. Qo'llaniladigan tribromoetanolning past dozasi (200 mg / kg) jiddiy nojo'ya ta'sirlarsiz yoki yallig'lanish sitokinlarining ekspressiyasiga ta'sir qilmasdan engil behushlikni ta'minlaydi [65]. Reflekslarning yo'qligini tekshirgandan so'ng hayvonlarning protseduralari amalga oshirildi.
4.3.1. Miya to'qimalarining dissotsiatsiyasi va asab hujayralarining Perkol gradient izolyatsiyasi
Miya qon tomirlaridan aylanib yuruvchi hujayralarni olib tashlash uchun to'qimalarni yig'ishdan oldin sichqonlarga 50 ml 0,9% NaCl bilan intrakardial perfuziya qilingan. Perfüzyondan so'ng miyalar olib tashlandi, meninges va xoroid pleksus ehtiyotkorlik bilan ajratildi va serebellum va olfaktor lampalar tashlandi. Qolgan to'qimalar kaltsiy xlorid va magniy xloriddan xoli sovuq Hankning muvozanatli tuz eritmasiga joylashtirildi (HBSS [-] CaCl2 / [-] MgCl2: Gibco, Madrid, Ispaniya, 14175). Keyin to'qimalar namunalari hazm qilishdan oldin skalpel bilan mayda tug'ralgan. Keyin tug'ralgan to'qimalar MACS C naychalariga (Miltenyi Biotec, Pozuelo de Alarcón, Ispaniya, 130-093-237) umumiy hajmi 5 ml ga joylashtirildi va 30 daqiqa davomida 6 aylanish tezligida mexanik dissosiator bilan qayta ishlandi. Enzimatik dissotsiatsiya Earl Balanced Salt Solution (EBSS [+]CaCl2) da papain (100 U; Worthington, LK003178) va dispase II (6 U; Sigma-Aldrich, Madrid, Ispaniya, D4963) yordamida o'z protokolimiz [31] bo'yicha amalga oshirildi. /[+]MgSO4; Gibko, Madrid, Ispaniya, 24010). DNKaz I (100 U; Sigma-Aldrich, Madrid, Ispaniya, DN25) hujayra hayotiyligiga salbiy ta'sir ko'rsatadigan DNK shilliq qavatini olib tashlash uchun eritmaga qo'shildi [66]. Foydalanishdan oldin papain 5% CO2 da 37 ◦C da 30 daqiqa davomida faollashtirildi. Ovqat hazm qilishni to'xtatish uchun namunalar sovuq HBSS bilan suyultirildi va muz ustiga qo'yildi. Keyin bu eritma 5 ml li pipetkalar yordamida 10 marta pipetkaga solingan va 70 mkmlik hujayra filtri (BD, 352350) orqali filtrlangan. Olingan bitta hujayrali suspenziya RT da 10 daqiqa davomida 300 × g da santrifüj qilindi. 30% PercollTM (GE Healthcare, Madrid, Ispaniya, 17-0891-01) gradienti miyelinni olib tashlash va gomogenatni hayotiy glial hujayralarga boyitish uchun ishlatilgan. Shu maqsadda izotonik Percoll (SIP) eritmasi tayyorlandi (9:1 Percoll 10× HBSS [-]CaCl2/[-]MgCl2; Gibco, 14185) va hujayra pelletlari 30% (v/) da qayta suspenziya qilindi. v) SIP (1× HBSS da). 30% Percoll gradienti 14 ml polipropilen naychada hujayra suspenziyasini o'z ichiga olgan 7 ml 1 × HBSS ga 3 ml SIP qo'shish orqali amalga oshirildi. Har bir gradient 18 ◦C da 30 daqiqa davomida 300 × g da tormozsiz santrifüj qilindi. Santrifüjdan so'ng, pastki qatlamdagi hujayralar yig'ildi, 1 × HBSS bilan yuvildi, 300 × g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi va 4 ◦C da 10 ml 1 × qizil qon hujayralari lizis buferida qayta suspenziya qilindi. Lizisdan so'ng hujayra suspenziyasi 300 × g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi va natijada hosil bo'lgan hujayra pelleti oqim sitometriyasi uchun bo'yashdan oldin nihoyat 50 µL blokirovka buferida qayta suspenziya qilindi.
4.3.2. Taloq hujayralari dissotsiatsiyasi
Dalaklar RPMI 1640 ni o'z ichiga olgan Petri idishiga joylashtirildi va mayda bo'laklarga bo'linadi. Olingan to'qimalar 70 mkm hujayrali filtrga (BD, 352350) o'tkazildi va shprits pistonining qovurg'ali tepasi bilan dumaloq harakatda parchalandi. Keyin RPMI 1640 filtrdan o'tkazildi. Parchalangan to'qimalar 50 ml naychalarga (Sarstedt, Barselona, Ispaniya, 62.547.254) o'tkazildi va 100 g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Keyin hujayra suspenziyasini o'z ichiga olgan supernatant yig'ildi va yana 300 g da 10 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Olingan supernatant olib tashlandi va pellet mikroskop ostida hujayralar sonini hisoblash uchun 1% FBS bilan 10 ml fosfat-buferli sho'r suvda (PBS) qayta suspenziya qilindi, shundan so'ng u 300 g da 5 daqiqa davomida qayta santrifüj qilindi. Har bir namuna uchun atigi 500,{19}} hujayra ishlatilgan. Keyin har bir namuna oqim sitometriyasi uchun bo'yashdan oldin 50 mkL blokirovkalash tamponida qayta suspenziya qilindi.
4.3.3. Hujayradan tashqari oqim sitometriyasini bo'yash
Jadval 2. Oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun ishlatiladigan antikorlar va reagentlar.
4.4. Immunogistokimyo
Sichqonlar chuqur anesteziya qilingan va intrakardial sho'r suv bilan perfuziya qilingan {{0}},9% (w/v). Ularning miyalari to'plangan va 24 soat davomida 4% paraformaldegid bilan biriktirilgan. Fiksatsiyadan so'ng ular 30% saxaroza bilan kriyoprotektsiya qilindi va kesilgunga qadar -20 ◦C da muzlatildi. To'qimalarning bo'laklari (20 mkm) kriyostat (ThermoFisher, Microm™ HM550) yordamida kesildi, eritish Superfrost Plus slaydlariga (ThermoFisher, J1800AMNZ) o'rnatildi va nihoyat binoni bo'lguncha -20 ◦C da saqlanadi. To'qimalarning bo'limlarini immunohistokimyoviy bo'yash avval tavsiflanganidek amalga oshirildi [67]. Birlamchi va ikkilamchi antikor eritmalari 1% BSA bilan 1 × PBS da suyultirildi. Bo'limlar quyonlarga qarshi asosiy antikor Iba-1 (1:500 suyultirish; Wako Chemicals, Barselona, Ispaniya, 019-19741) bilan inkubatsiya qilindi. Ikkilamchi antikor sifatida Alexa Fluor 488-konjugatsiyalangan echkiga qarshi quyon IgG (1:2000 suyultirish; ThermoFisher, Madrid, Ispaniya, A11031) ishlatilgan. Tegishli ijobiy nazorat to'qimalari, shuningdek, asosiy va ikkilamchi salbiy nazoratlar kiritilgan. Floresan yorliqli tasvirlar ZEISS Apotome yordamida olingan. Axiom 503 mono raqamli kamerali 2 mikroskop va Zen Blue boshqaruv dasturining 2.3 versiyasi (Carl Zeiss). Hippokampusni ko'rish uchun 10 × ob'ektiv (Plan-APOCHROMAT, V10 ×, NA 0,45, AIR) ishlatilgan. Qiziqarli hududlardagi integratsiyalashgan zichlik ImageJ dasturi yordamida hisoblab chiqilgan. Ushbu parametr tanlangan hududdagi har bir piksel uchun intensivlik qiymatlarining yig'indisiga mos keladi. Shuning uchun u har bir hujayraning bo'yash intensivligi bilan birgalikda bo'yalgan hujayralar sonini aniqlash uchun ishlatiladi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
4.5. Western Blot tahlili
Sichqonchaning miyalari tezda olib tashlandi va gippokamplar darhol parchalanib, muzlatildi. To'qimalar ilgari tavsiflanganidek, proteaz inhibitörlerini o'z ichiga olgan gipertonik lizis buferi yordamida tayyorlangan [68]. Birlamchi antikorlar quyonlarga qarshi fosfor-IKK / (1:1000 suyultirish; Cell Signaling, Alcobendas, Ispaniya, 2861), quyonlarga qarshi IKK / (1:1000 suyultirish; Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Germaniya, sc{{ 9}}), antiquyon fosfor-STAT3 (1:1000 suyultirish; Hujayra signalizatsiyasi, 9145) va sichqonchaga qarshi STAT3 (1:1000 suyultirish; Santa Cruz Biotechnology, sc-8019). Yuklash nazorati sifatida anti-sichqoncha -tubulin (1:2000 suyultirish; Santa Cruz Biotechnology, sc-32293) ishlatilgan. Ikkilamchi antikor sifatida quyonlarga qarshi HRP (1:5000 suyultirish; Jekson ImmunoResearch Laboratories, Baltimor, AQSh, 111-035-144) va anti-sichqonchani HRP (1:5000 suyultirish; Jekson ImmunoResearch Laboratories, 115-035-003) ishlatilgan. . Protein diapazoni miqdorini aniqlash NIH ImageJ dasturiy ta'minoti yordamida tarmoqli densitometriya tahlili orqali amalga oshirildi (versiya 1.50i, https://imagej.nih.gov/ij/, 2022 yil 1 martda kirilgan). Teng yuklarni ta'minlash uchun har bir band uchun olingan integral zichlik tegishli uy yukini nazorat qilish bo'yicha nisbiy qiymat sifatida ifodalangan.
4.6. Statistik tahlil
Natijalar GraphPad Prism dasturi (San-Diego, CA, AQSh) yordamida statistik tahlil qilindi. Ma'lumotlar odatda to'rtta mustaqil tajribaning o'rtacha ± standart xatosi (SEM) sifatida taqdim etiladi (n {0}}–9). Shapiro-Wilk testi bilan ma'lumotlarning normal taqsimlanishini tasdiqlaganidan so'ng, parametrik ma'lumotlar uchun ikki guruh o'rtasidagi statistik ahamiyatga ega Student t-testi bilan aniqlandi. Farqlar ehtimollik (p) qiymatlari 0.05 (*), 0,01 (**) yoki 0,001 (***) dan kichik bo‘lganda statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblanadi. Rasmlar vakillik tajribalarini ko'rsatadi.
5. Xulosalar
Xulosa qilib aytganda, bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatadiki, GSK3 ni Ser389 fosforillanishi bilan inaktivatsiya qilmaslik surunkali yallig'lanish va endotoksinlarga chidamlilikka olib keladi va GSK3 ning Ser9 va Ser389 fosforillanishi bilan inhibe qilinishi neyroimmun javobda ortiqcha emas, balki qo'shimcha rol o'ynaydi. Shuning uchun nevropatologiya va miya qarishi uchun GSK3 Ser389 fosforillanishining o'ziga xos oqibatlarini o'rganish kerak.
Ma'lumotnomalar
1. Souder, DC; Anderson, RM Kengayayotgan GSK3 tarmog'i: qarish tadqiqotlari uchun ta'sir. Geroscience 2019, 41, 369–382. [CrossRef] [PubMed]
2. Xoeflich, KP; Luo, J.; Rubi, EA; Tsao, M.; Jin, O.; Vudgett, JR Hujayra omon qolishi va NF-kB faollashuvida glikogen sintaza kinaz-3ga bo'lgan talab. Tabiat 2000, 406, 86–90. [CrossRef] [PubMed]
3. Jope, RS; Jonson, GV Glikogen sintaza kinazining jozibasi va ma'yusligi-3. Trends Biochem. Sci. 2004, 29, 95–102. [CrossRef]
4. Tornton, TM; Pedraza-Alva, G.; Deng, B.; Yog'och, CD; Aronshtam, A.; Klements, JL; Sabio, G.; Devis, RJ; Metyus, DE; Dobl, B.; va boshqalar. GSK3beta inaktivatsiyasi uchun muqobil yo'l sifatida p38 MAPK tomonidan fosforillanish. Fan 2008, 320, 667–670. [CrossRef]
5. Kalvo, B.; Tornton, TM; Rinkon, M.; Tranque, P.; Fernandez, M. Neyron rivojlanish jarayonida Ser 389 fosforillanishi bilan GSK3 ni tartibga solish. Mol. Neyrobiol. 2020, 58, 809–820. [CrossRef] [PubMed]
6. Tornton, TM; Quyon, B.; Colie, S.; Pendlebury, WW; Nebreda, AR; Falls, V.; Javorski, DM; Rincon, M. Ser 389-fosforlanish bilan yadro GSK3 inaktivatsiyasi fokal neyronlarning o'limiga va uzoq davom etgan qo'rquv reaktsiyasiga olib keladi. Neyropsikofarmakologiya 2018, 43, 393-405. [CrossRef] [PubMed]
7. Quyon, BD; Tornton, TM; Rinkon, M.; Golijanin, B.; King, SB; Javorski, DM; Falls, WA Ikki haftalik o'zgaruvchan stress stria terminalisning sichqoncha to'shagi yadrosida gamma-H2AX darajasini oshiradi. Neuroscience 2018, 373, 137–144. [CrossRef]
8. Tornton, TM; Delgado, P.; Chen, L.; Salas, B.; Krementsov, D.; Fernandes, M.; Verniya, S.; Devis, RJ; Heimann, R.; Teuscher, C.; va boshqalar. Ser (389) fosforillanishi bilan yadroviy GSK3beta ning inaktivatsiyasi DNKning ikki zanjirli uzilish reaktsiyasi vaqtida limfotsitlarning moslashishiga yordam beradi. Nat. Kommun. 2016, 7, 10553. [CrossRef]
9. Pasparakis, M.; Vandenabeele, P. Nekroptoz va uning yallig'lanishdagi roli. Tabiat 2015, 517, 311–320. [CrossRef]
10. Jope, RS; Cheng, Y.; Louell, JA; Uorten, RJ; Sitbon, YH; Beurel, E. Stressli va yallig'langan, GSK3ni ayblash mumkinmi? Trends Biochem. Sci. 2017, 42, 180–192. [CrossRef]
11. Beutler, B.; Rietschel, ET Tug'ma immunitetni sezish va uning ildizlari: Endotoksin hikoyasi. Nat. Rev. Immunol. 2003, 3, 169–176. [CrossRef] [PubMed]
12. Morris, MC; Gilliam, EA; Button, J.; Li, L. Inson monositik hujayralarida lipopolisakkaridning (LPS) o'zgaruvchan dozalari orqali tug'ma immun javobning dinamik modulyatsiyasi. J. Biol. Kimyo. 2014, 289, 21584–21590. [CrossRef]
13. Lu, YC; Ha, WC; Ohashi, PS LPS/TLR4 signal uzatish yo'li. Sitokin 2008, 42, 145-151. [CrossRef] [PubMed]
14. Ko, R.; Jang, HD; Li, SY GSK3 inhibitori peptidi sichqonlarni LPS bilan bog'liq endotoksin zarbasidan himoya qiladi. Immun tarmoq. 2010, 10, 99. [CrossRef] [PubMed]
15. Piatsi, M.; Bavelloni, A.; Cenni, V.; Faenza, I.; Blalock, WL Idiopatik inklyuziya tanasi miyozitida tug'ma immunitet modulyatori bo'lgan GSK3 rolini qayta ko'rib chiqish. Hujayralar 2021, 10, 3255. [CrossRef] [PubMed]
16. Uzumzorlar, A.; Kahoon, S.; Goldberg, I.; Saksena, U.; Pillarisetti, S. Glikogen sintaza kinaz-3beta uchun yangi yallig'lanishga qarshi roli, o'simta nekrozi omili-alfa-va interleykin-1beta-induktsiyali yallig'lanish gen ifodasini inhibe qilishda. J. Biol. Kimyo. 2006, 281, 16985–16990. [CrossRef]
17. Xoffmeister, L.; Diekmann, M.; Brend, K.; Huber, R. GSK3: Kinaz muvozanatini targ'ib qilish va yallig'lanishni bartaraf etish. Hujayralar 2020, 9, 820. [CrossRef]
18. Beurel, E.; Jope, RS Lipopolisaxarid tomonidan induktsiya qilingan interleykin-6 ishlab chiqarilishi miyadagi glikogen sintaza kinaz-3 va STAT3 tomonidan boshqariladi. J. Neyroinflamm. 2009, 6, 9. [CrossRef]
19. Vang, M.; Xuan, X.; Chen, V.; Chang, H.; Kuo, J. Glikogen sintaza kinaz -3 inaktivatsiyasi yadro omili KB va MLK3/JNK signal kaskadlarini modulyatsiya qilish orqali mikrogliyada o'simta nekrozi omilini ishlab chiqarishni inhibe qiladi. J. Neyroinflamm. 2010, 7, 99. [CrossRef]
20. Priego, N.; Valiente, M. Miya o'smalarida immun modulyator sifatida astrositlarning salohiyati. Old. Immunol. 2019, 10, 1314. [CrossRef]
21. Vandenbark, AA; Offner, X.; Matejuk, S.; Matejuk, A. Microglia va astrositlarning neyrodejeneratsiya va miya saratoniga qo'shilishi. J. Neyroinflamm. 2021, 18, 298. [CrossRef] [PubMed]
22. Lukas, JJ; Ernandes, F.; Gomes-Ramos, P.; Moran, MA; Hen, R.; Avila, J. GSK-3beta shartli transgenik sichqonlarda yadro beta-katenin, tau giperfosforiya va neyrodegeneratsiyaning kamayishi. EMBO J. 2001, 20, 27–39. [CrossRef] [PubMed]
23. Xorxe-Torres, OK; Shchesna, K.; Roa, L.; Kasal, C.; Gonsales-Somermeyer, L.; Soler, M.; Velasco, CD; Martinez-San Segundo, P.; Petazzi, P.; Saez, MA; va boshqalar. Gsk3b ning inhibisyoni Nfkb1 signalini pasaytiradi va Mecp2-nokaut sichqonlarida Rett sindromi fenotipini yaxshilash uchun sinaptik faollikni qutqaradi. Hujayra. Rep. 2018, 23, 1665–1677. [CrossRef] [PubMed]
24. Martin, M.; Rehani, K.; Jope, RS; Michalek, SM Tollga o'xshash retseptorlar vositachiligida sitokin ishlab chiqarish glikogen sintaza kinaz tomonidan differentsial tartibga solinadi. Nat. Immunol. 2005, 6, 777–784. [CrossRef]
25. Rippin, I.; Eldar-Finkelman, H. Neyrodejeneratsiyani davolashda GSK-3 ning mexanizmlari va terapevtik ta'siri. Hujayralar 2021, 10, 262. [CrossRef]
26. Androulidaki, A.; Iliopulos, D.; Arranz, A.; Doxaki, C.; Shvorer, S.; Zachariudaki, V.; Margioris, AN; Tsichlis, PN; Tsatsanis, C. Akt1 kinazasi mikroRNKlarni tartibga solish orqali lipopolisakkaridga makrofaglarning javobini nazorat qiladi. Immunitet 2009, 31, 220–231. [CrossRef]
27. Fixtner-Feygl, S.; Kesselring, R.; Martin, M.; Obermeyer, F.; Ruemmele, P.; Kitani, A.; Brunner, SM; Xaymerl, M.; Geissler, EK; Strober, W. IL-13 surunkali ichak yallig'lanishini glikogen sintaza kinazasi-3 fosforillanishi orqali bartaraf qiladi. J. Immunol. 2014, 192, 3969–3980. [CrossRef]
28. Nagao, M.; Hayashi, H. Glikogen sintaza kinaz-3beta Parkinson kasalligi bilan bog'liq. Nevrologlar. Lett. 2009, 449, 103–107. [CrossRef]
29. Nadri, C.; Kozlovskiy, N.; Agam, G.; Bersudskiy, Y. Shizofreniya bilan og'rigan bemorlarning limfotsitlarida GSK-3 parametrlari. Psixiatriya Res. 2002, 112, 51–57. [CrossRef]
30. Jope, RS; Yuskaitis, CJ; Beurel, E. Glikogen sintaza kinaz-3 (GSK3): Yallig'lanish, kasalliklar va terapevtika. Neyrokimyo. Res. 2007, 32, 577–595. [CrossRef]
31. Kalvo, B.; Rubio, F.; Fernandes, M.; Tranque, P. Neonatal va kattalar sichqonlari miyasini oqim sitometriyasi bilan mikrogliya, astrositlar va infiltratsiya qiluvchi limfotsitlarni bir vaqtning o'zida tahlil qilish uchun dissotsiatsiyasi. IBRO Rep. 2020, 8, 36–47. [CrossRef] [PubMed]
32. Legroux, L.; Pittet, CL; Beauseigle, D.; Deblois, G.; Prat, A.; Arbour, N. Nerv hujayralari va leykotsitlarni oqim sitometriyasi orqali bir vaqtning o'zida tahlil qilish uchun sichqonchaning markaziy asab tizimini qayta ishlashning optimallashtirilgan usuli. J. Neurosci. Usullar 2015, 247, 23–31. [CrossRef] [PubMed]
33. Batiuk, MY; de Vin, F.; Duque, SI; Li, C.; Saito, T.; Saido, T.; Fiers, M.; Belgard, TG; Holt, MG. ACSA-2 antikori tomonidan ATP1B2 nishoniga asoslangan o'ta toza kattalar astrositlarini izolyatsiya qilish uchun immunoaffinityga asoslangan usul. J. Biol. Kimyo. 2017, 292, 8874–8891. [CrossRef] [PubMed]
34. Stivens, SL; Bao, J.; Hollis, J.; Lessov, NS; Klark, V.M.; Stenzel-Poore, MP Sichqonlarda fokal miya ishemiyasidan keyin yallig'lanish hujayralarida vaqtinchalik o'zgarishlarni baholash uchun oqim sitometriyasidan foydalanish. Miya Res. 2002, 932, 110–119. [CrossRef] [PubMed]
35. Kantzer, CG; Butin, C.; Herzig, ID; Vittver, C.; Reiss, S.; Tiveron, MC; Drewes, J.; Rockel, TD; Ohlig, S.; Ninkovich, J.; va boshqalar. Anti-ACSA-2 tirik neonatal va kattalar astrositlarini istiqbolli izolyatsiya qilish uchun yangi monoklonal antikorni belgilaydi. Glia 2017, 65, 990–1004. [CrossRef]
36. Moreno-Garsiya, A.; Bernal-Chiko, A.; Kolomer, T.; Rodriges-Antiguedad, A.; Matute, C.; Mato, S. Otoimmün demyelinatsiya paytida astrosit va mikroglia endokannabinoid signalizatsiyasining gen ekspressiyasi tahlili. Biomolekulalar 2020, 10, 1228. [CrossRef] [PubMed]
37. Deniset, JF; Surewaard, BG; Li, V.; Kubes, P. Splenic Ly6Ghigh etuk va Ly6Gint yetilmagan neytrofillar S. pneumoniae ni yo'q qilishga yordam beradi. J. Exp. Med. 2017, 214, 1333–1350. [CrossRef]
38. Ng, HHM; Li, RY; Goh, S.; Tay, ISY; Lim, X.; Li, B.; Chaynash, V.; Li, H.; Tan, B.; Lim, S.; va boshqalar. CD38 ning o'simta mikro-muhitida immunohistokimyoviy bahosi gepatotsellyulyar karsinomada anti-PD-1/PD-L1 immunoterapiyasiga javob berishini taxmin qiladi. J. Immunother. Saraton 2020, 8, e000987. [CrossRef]
39. Okuyama, S.; Makixata, N.; Yoshimura, M.; Asakura, Y.; Yoshida, T.; Nakajima, M.; Furukawa, Y. Oenothein B sichqonchaning miyasida lipopolisakkarid (LPS) tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanishni bostiradi. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 9767–9778. [CrossRef]
40. Karnevale, D.; Mascio, G.; Ajmone-Cat, MA; D'Andrea, I.; Cifelli, G.; Madonna, M.; Cocozza, G.; Frati, A.; Karullo, P.; Carnevale, L.; va boshqalar. Gipertenziyadan kelib chiqqan miya amiloid patologiyasida neyroinflamatsiyaning roli. Neyrobiol. Qarish 2012, 33, e19–e205. [CrossRef]
41. Chjan, J.; Syue, B.; Jing, B.; Tyan, X.; Chjan N.; Li, M.; Lu, L.; Chen, L.; Diao, X.; Chen, Y. LPS Parkinson kasalligiga o'xshash holatda depressiyani keltirib chiqarish uchun neyroinflamatuar yo'llarni faollashtiradi. Old. Farmakol. 2022, 13, 961817. [CrossRef] [PubMed] 4
2. Tarr, AJ; Chen, Q.; Vang, Y.; Sheridan, JF; Quan, N. Past darajadagi yallig'lanishga asabiy va xulq-atvor javoblari. Xulq-atvor. Miya Res. 2012, 235, 334–341. [CrossRef] [PubMed]
43. Kang, J.; Park, D.; Shoh, M.; Kim, M.; Koh, P. Lipopolisakkarid kattalar sichqonlarining miya yarim korteksida neyrogliya faollashuvi va NF-kB faollashuvini keltirib chiqaradi. Laboratoriya. Anim. Res. 2019, 35, 19. [CrossRef]
44. Xan, MS; Ali, T.; Abid, MN; Jo, MH; Xon, A.; Kim, MV; Yoon, GH; Cheon, EW; Rehman, SU; Kim, MO Litiy kattalar kalamush miyasining korteksi va hipokampusida lipopolisakkaridlar keltirib chiqaradigan neyrotoksiklikni yaxshilaydi. Neyrokimyo. Int. 2017, 108, 343–354. [CrossRef] [PubMed]
45. Paxinos, G.; Franklin, KB Stereotaksik koordinatalarda sichqoncha miyasi. 2001. Internetda mavjud: https://books.google.es/books/ about/The_Sichqoncha_Miya__Stereotaksik_Koordinatsiyada .html?id=tZdjQgAACAAJ&redir_esc=y (2022-yil 1-martda kirilgan).
46. Bronte, V.; Pittet, MJ Immunitetni mahalliy va tizimli tartibga solishda taloq. Immunitet 2013, 39, 806–818. [CrossRef]
47. Liu, T.; Chjan, L.; Ju, D.; Quyosh, S. Yallig'lanishda NF-kB signalizatsiyasi. Signal uzatish. Maqsad. U erda. 2017, 2, 17023. [CrossRef] [PubMed]
48. Balich, JJ; Albargi, X.; Luu, K.; Kirbi, FJ; Jayasekara, WSN; Mansel, F.; Garama, DJ; De Nardo, D.; Baschuk, N.; Louis, C. STAT3 serin fosforillanishi TLR4 metabolik qayta dasturlash va IL-1 ifodasi uchun talab qilinadi. Nat. Kommun. 2020, 11, 3816. [CrossRef]
49. Xongisto, V.; Vainio, JK; Tompson, R.; Kortni, MJ; Coffey, ET Glikogen sintaza kinaz 3betaning Wnt hovuzi trofik-deprivatsiyadan kelib chiqqan neyronlarning o'limi uchun juda muhimdir. Mol. Hujayra. Biol. 2008, 28, 1515–1527. [CrossRef]
50. Eom, T.; Jope, RS Glikogen sintaza kinaz-3ning inhibe qiluvchi serin-fosforilatsiyasini bloklaydi / in vivo jonli nerv prekursorli hujayralar proliferatsiyasini buzadi. Biol. Psixiatriya 2009, 66, 494–502. [CrossRef] 5
1. Franceschi, C.; Campisi, J. Surunkali yallig'lanish (yallig'lanish) va uning yoshga bog'liq kasalliklarga potentsial hissasi. J. Gerontol. Ser. Biomed. Sci. Med. Sci. 2014, 69, S4–S9. [CrossRef]
52. Enioutina, EY; Bareyan, D.; Daynes, RA. Immunitetning qarishida etuk bo'lmagan miyeloid hujayralar uchun rol. J. Immunol. 2011, 186, 697–707. [CrossRef] [PubMed]
53. Tang, Y.; Le, W. Neyrodegenerativ kasalliklarda M1 va M2 mikrogliyalarining differentsial rollari. Mol. Neyrobiol. 2016, 53, 1181–1194. [CrossRef] [PubMed]
54. Hoogland, IC; Hubolt, C.; van Vesterloo, DJ; van Gool, VA; van de Beek, D. Tizimli yallig'lanish va mikroglial faollashuv: Hayvonlar tajribalarini tizimli ko'rib chiqish. J. Neyroinflamm. 2015, 12, 114. [CrossRef] [PubMed]
55. Furube, E.; Kavay, S.; Inagaki, X.; Takagi, S.; Miyata, S. Miya mintaqasiga bog'liq bo'lgan heterojenlik va vaqtinchalik mikrogliya populyatsiyasining dozaga bog'liq farqi Lipopolisakkaridlar tomonidan qo'zg'atilgan yallig'lanish paytida o'sish. Sci. Rep. 2018, 8, 2203. [CrossRef]
56. Brandi, E.; Torres-Garsiya, L.; Svanbergsson, A.; Xaykal, C.; Liu, D.; Li, V.; Li, J. Tizimli lipopolisakkaridlar ta'siriga javoban miya mintaqasiga xos mikroglial va astrositik faollashuv. Old. Qarish nevrologiyasi. 2022, 14, 910988. [CrossRef]
57. Radulovich, K.; Mak'Anyengo, R.; Kaya, B.; Shtaynert, A.; Niess, JH. Ichak to'sig'i buzilganidan keyin mikroblardan olingan mahsulotlarning kirishini taqlid qilish uchun sichqonlarga lipopolisakkarid in'ektsiyalari. J. Vis. Exp. 2018, 135, e57610. [CrossRef]
58. Fink, MP Sepsisning hayvonlar modellari. Virulentlik 2014, 5, 143–153. [CrossRef]
59. Chjou, X.; Andonegui, G.; Vong, CH; Kubes, P. Tizimli yallig'lanishda markaziy asab tizimining mikrotomirlariga neytrofillarni jalb qilish uchun endotelial TLR4 ning roli. J. Immunol. 2009, 183, 5244–5250. [CrossRef]
60. Beurel, E. HDAC6 astrositlarda LPS-tolerantlikni tartibga soladi. PLoS ONE 2011, 6, e25804. [CrossRef]
61. Yao, L.; Lab.; Chen, Q.; Xu, A.; Vu, Y.; Li, B. Endotoksin tolerantligining periferik lipopolisakkaridlardan kelib chiqqan neyroinflamasyon va dopaminerjik neyron shikastlanishiga himoya ta'siri. Immunofarmakol. Immunotoksikol. 2022, 44, 326–337. [CrossRef] 62. Park, SH; Park-Min, KH; Chen, J.; Xu, X.; Ivashkiv, LB O'simta nekrozi omili GSK3 kinaz vositachiligida makrofaglarda endotoksinga o'zaro chidamlilikni keltirib chiqaradi. Nat. Immunol. 2011, 12, 607–615. [CrossRef] [PubMed]
63. Yamavaki, Y.; Shiravachi, S.; Mizokami, A.; Nozaki, K.; Ito, X.; Asano, S.; Oue, K.; Aizava, X.; Yamavaki, S.; Hirata, M. Fosfolipaz C bilan bog'liq katalitik faol bo'lmagan protein sichqonlarda lipopolisakkaridlar keltirib chiqaradigan gipotalamus yallig'lanishi vositachiligidagi anoreksiyani tartibga soladi. Neyrokimyo. Int. 2019, 131, 104563. [CrossRef] [PubMed]
64. Shah, SA; Xon, M.; Jo, M.; Jo, MG; Amin, FU; Kim, MO Melatonin postnatal kalamush miyasini qutqarish uchun lipopolisakkarid (LPS) tomonidan qo'zg'atilgan oksidlovchi stressga qarshi ta'sir qiluvchi SIRT 1 / Nrf2 signalizatsiya yo'lini rag'batlantiradi. CNS nevrologiyasi. U erda. 2017, 23, 33–44. [CrossRef] [PubMed]
65. Cho, YJ; Li, YA; Li, JW; Kim, J.I; Xan, JS ICR sichqonlarida tribromoetanol va tribromoetanol / ksilazin kombinatsiyasining intraperitoneal in'ektsiyasidan keyin yallig'lanishga qarshi sitokinlarning kinetikasi. Laboratoriya. Anim. Res. 2011, 27, 197–203. [CrossRef] [PubMed]
66. Posel, C.; Moller, K.; Boltze, J.; Vagner, DC; Weise, G. Ishemik sichqoncha miyasidan immun hujayralarining izolyatsiyasi va oqim sitometrik tahlili. J. Vis. Exp. 2016, 108, 53658. [CrossRef] [PubMed]
67. Serrano-Peres, MC; Martin, ED; Vaquero, CF; Azkoitia, I.; Kalvo, S.; Kano, E.; Tranque, P. NFATc3 transkripsiya omilining eksitotoksik va travmatik miya insultlariga javobi: reaktiv astrositlarning subpopulyatsiyasini aniqlash. Glia 2011, 59, 94–107. [CrossRef]
68. Fradejas, N.; Serrano-Peres Mdel, C.; Tranque, P.; Kalvo, S. Miya shikastlanishidan keyin reaktiv astrositlarda Selenoprotein S ifodasi. Glia 2011, 59, 959–972. [CrossRef]
