Abstrakt

Fon:Dermal hujayradan tashqari matritsani (ECM), birinchi navbatda kollagenni aniq ajratish va miqdorini aniqlash uchun tasvirlash va tasvirni qayta ishlash usullarining etishmasligi mavjud. Ushbu tadqiqot gistokimyoviy tasvirlash, aks ettiruvchi konfokal mikroskopiya (RCM) va atom kuchlari mikroskopiyasi (AFM) yordamida makro, mikro va nano-miqyosda kollagenni qayta qurishni vizualizatsiya qilish va miqdorini aniqlash uchun yaxlit tasvirlash va tasvirni qayta ishlash yondashuvini ishlab chiqish va namoyish etishga qaratilgan. , mos ravishda.

Sistanx glikozidi, shuningdek, yurak va jigar to'qimalarida SOD faolligini oshirishi va har bir to'qimalarda lipofusin va MDA tarkibini sezilarli darajada kamaytirishi, turli xil reaktiv kislorod radikallarini (OH-, H₂O₂ va boshqalar) samarali tozalash va DNKning shikastlanishidan himoya qilishi mumkin. OH-radikallar tomonidan. Cistanche feniletanoid glikozidlari erkin radikallarni kuchli tozalash qobiliyatiga ega, S vitaminiga qaraganda yuqori darajada kamaytirish qobiliyatiga ega, sperma suspenziyasida SOD faolligini yaxshilaydi, MDA tarkibini kamaytiradi va sperma membranasi funktsiyasiga ma'lum bir himoya ta'siriga ega. Cistanche polisaxaridlari D-galaktoza sabab bo'lgan eksperimental qarigan sichqonlarning eritrotsitlari va o'pka to'qimalarida SOD va GSH-Px faolligini oshirishi, shuningdek o'pka va plazmadagi MDA va kollagen miqdorini kamaytirishi va elastin miqdorini oshirishi mumkin. DPPHga yaxshi tozalash ta'siri, qarigan sichqonlarda gipoksiya vaqtini uzaytirish, sarumdagi SOD faolligini yaxshilash va eksperimental qarigan sichqonlarda o'pkaning fiziologik degeneratsiyasini kechiktirish Hujayra morfologik degeneratsiyasi bilan tajribalar Cistanche yaxshi antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi. va terining qarish kasalliklarini oldini olish va davolash uchun dori bo'lish potentsialiga ega. Shu bilan birga, Cistanchedagi echinacoside DPPH erkin radikallarini tozalashning muhim qobiliyatiga ega va reaktiv kislorod turlarini tozalash va erkin radikallar keltirib chiqaradigan kollagen degradatsiyasini oldini olish qobiliyatiga ega, shuningdek, timin erkin radikal anionining shikastlanishiga yaxshi ta'sir ko'rsatadi.

Antioksidant Cistanche-dan qanday foydalanishni bosing

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Materiallar va usullar:Kontseptsiyani isbotlash uchun kollagen neo-sintezi va qayta tashkil etilishini qo'zg'atishi ma'lum bo'lgan tijorat anti-aging mahsuloti ikki keksa ayolning inson terisi biopsiyalarida ex vivo sinovdan o'tkazildi.

Natijalar:Davolanmagan teriga nisbatan kollagen tolalari (RCM) va fibrillalar (AFM) davolashdan keyin uzunroq va hizalanadi. Davolashdan keyin kollagen va elastin (histokimyoviy ko'rish va Elishay) tarkibi statistik jihatdan yaxshilandi.

Xulosa:Bizning topilmalarimizga asoslanib, biz quyidagi xulosaga kelishimiz mumkin: (1) AFM, RCM va gistokimyoviy ko'rish teridagi boshqa ECM komponentlaridan kollagenni aniq ajrata oladi va (2) tasvirni qayta ishlash usullari miqdorni aniqlashga imkon beradi va shuning uchun kollagenni qayta qurishda kichik yaxshilanishlarni qayd etadi. davolash (kontseptsiya isboti sifatida kollagen organizator texnologiyasiga ega tijorat kosmetik mahsuloti). Xabar qilingan yaxlit tasvirlash yondashuvi olimlar va dermatologlar uchun terini o'rganish va diagnostika qilishda tez, real vaqtda va aniq qarorlar qabul qilish uchun bevosita klinik ta'sirga ega.

KALİT SO'ZLAR

qarishga qarshi, atom kuchi mikroskopiyasi, kollagenni qayta tashkil etish, terini qayta qurish, hujayradan tashqari matritsa, aks ettiruvchi konfokal mikroskop (Vivascope)

1.KIRISH

Dermal hujayradan tashqari matritsaning (ECM) boshqariladigan qayta tuzilishi terining va boshqa organlarning normal rivojlanishi va gomeostazi uchun juda muhimdir. ECM remodelingi terining qarishi, yaralarning bitishi va ba'zi o'lik kasalliklar, shu jumladan saraton va fibrozning patofiziologiyasining o'ziga xos belgisidir.2 Ushbu teri kasalliklarini davolashning ko'plab estetik va tibbiy variantlari mavjud, ammo tasvirlash usullari juda kam. ECM remodelingining real vaqt rejimida vizualizatsiyasi, birinchi navbatda dermal ECMning eng keng tarqalgan tarkibiy qismi bo'lgan kollagen. Ishlab chiqilayotgan bo'lsa-da, kollagen va uning tuzilishini vizualizatsiya qilish uchun real vaqt rejimida invaziv bo'lmagan klinik ko'rishning ba'zi yangi usullari ikkinchi garmonik avlodga ega ko'p fotonli mikroskopiya (MPM-SHG), 3 aks ettiruvchi konfokal mikroskop (RCM), 4 optik kogerent tomografiyadir. (OCT),5,6 Lindfild konfokal optik kogerens tomografiyasi (LC-OCT) RCM va OCT,7 magnit-rezonans tomografiya (MRI),8 va ultratovush tomografiyasining kombinatsiyasiga asoslangan.9 Ulardan RCM, MPM va LC-OCT - bu Idoralar tomonidan sertifikatlangan teri tasvirlash asboblari. Biroq, ularning barchasi orasida RCM texnikasi (Lucid, Inc. AQShdan Vivascope® 1500 va 3000) FDA tomonidan tasdiqlangan yagona klinik dermatologik diagnostika usulidir (510(k)# K080788), u ham ko'pgina sug'urtalar bilan qoplanadi. Teri lezyonlarini tashxislash uchun AQSH.10 Bu teri saratoni va ularni davolash diagnostikasi va monitoringi uchun klassik biopsiya va gistopatologiya usullariga invaziv bo'lmagan va tejamkor alternativ hisoblanadi. AFM), 11 elektron mikroskop, 11,12 floresan mikroskopiya yordamida gistokimyoviy tasvirlash, 13 qutblangan yorug'lik mikroskopiyasi, 14 konfokal lazerli skanerlash mikroskopiyasi (CLSM), 15,16 multimodal konfokal aks ettirish va flüoresan mikroskop, 17 va kichik burchakli rentgen nurlari18. yaxshi tanilgan.

Yuqorida aytib o'tilgan klinik tasvirlash usullaridan foydalanishni cheklaydigan asosiy ogohlantirishlardan biri shundaki, bu zerikarli qo'lda baholashni talab qiladi, chunki teri tuzilmalarining qora va oq tasvirlarini aniq tahlil qilish uchun mavzu bo'yicha tajriba va tajriba zaruriy shartdir.19,20 Shu sababli, ko'proq harakat qilish kerak. Tahlilni avtomatlashtirish uchun algoritmlar va dasturiy ta'minotni ishlab chiqish va tasdiqlash,5 talqin qilish oson raqamli bo'yalgan tasvirlarni ishlab chiqarish,16,17 va kasallikning rivojlanishi va terapiyasini kuzatish uchun miqdoriy ma'lumotlarni olish, shu jumladan bizning kontekstda kollagenni tashkil qilish uchun tasvirni qayta ishlash sohasida talab qilinadi. tadqiqot.3,6,12–14 Bu dermatolog bo'lmagan va dermatologlarga tezroq va ko'proq ishonch bilan qaror qabul qilish imkonini beradi, chunki qarorlar tasodifiy tasvirlarning kattaroq namunasi bo'yicha qabul qilinadi. Ba'zi fundamental tadqiqotlar RCM va MPM dan foydalanishni ko'rsatish uchun amalga oshirilgan yoshga nisbatan yoshga bog'liq teri o'zgarishlarini (jumladan, kollagen tarkibini) qari yoki foto-yoshlarga nisbatan.21,22 Biroq, quvvatni kengaytirishda cheklangan harakatlar mavjud. miqdoriy ma'lumotni olish uchun murakkab tasvirni qayta ishlashni talab qiladigan davolashning yaxshilanishini qo'lga kiritish uchun ushbu tasvirlash texnikasi.3,13,16

Ushbu tadqiqot terini qayta qurishda (birinchi navbatda kollagen) yaxshilanishlarni ko'rish va aniqlash uchun yaxlit tasvirlash va tasvirni qayta ishlash yondashuvini ishlab chiqish va namoyish etishga qaratilgan. Kontseptsiyani isbotlash uchun davolashdan oldin va keyin kollagendagi kichik o'zgarishlarni aniqlash uchun tasvirni qayta ishlashdan foydalanishning maqsadga muvofiqligini baholash uchun kollagen organizator texnologiyasiga ega klinik jihatdan tasdiqlangan tijorat anti-aging kosmetik mahsuloti ishlatilgan.

2 MATERIALLAR VA USULLAR

2.1 Teri biopsiyalari va ularni davolash

Ushbu tadqiqotda qo'llanilgan teri biopsiyalari qorin bo'shlig'idagi plastik jarrohlikdan qolgan materiallar bo'lib, ularning roziligidan so'ng ikkita donordan olingan (klinikalar tomonidan olingan rozilik). №1 donor (62 yosh) va №2 donor (52 yosh) ayollar va Fitspatrik terisining II turi edi. Biopsiya standart madaniyat sharoitida saqlanadi va har kuni 6 kun davomida sinov mahsuloti yoki nazorat (davolanmagan yoki platsebo) bilan davolanadi va 7-kuni tasvirlash va Elishay uchun yig'ib olinadi. №1 donordan olingan biopsiya ELISA, RCM va AFM uchun, №2 donordan olingan biopsiya esa gistokimyoviy tasvirlash uchun ishlatilgan.

2.2 RCM va AFM tasviri

№1 donordan olingan teri biopsiyalari 7-kuni yig'ib olindi va to'g'ridan-to'g'ri hech qanday kesilmasdan va bo'yalmagan holda tasvirlangan. AFM (Bruker, Multimode 8 AFM) va RCM (Vivascope® 1500) sinov mahsuloti bilan ishlov berilgan teridagi kollagenning yuqori aniqlikdagi nano- va mikro-miqyosdagi tasvirlarini olish uchun ishlatilgan va nazorat sifatida ishlov berilmagan. Barcha tajribalar uchun AFM kichik konsol bilan jihozlangan (PPP-FMR- 20, Nanosensorlar): prujina doimiysi, k=0,5–9,5 N/m, rezonans chastotasi, f {{13} }–115 kHz havoda va xona haroratida teginish rejimida ishladi. Teri namunalari magnit diskga (1 mm × 1 mm) lateral tarzda o'rnatildi va sahnaga qo'yildi. AFM tasvirlari bo'linishning oldini olish uchun teri biopsiyalarining lateral/yon ko'rinishi orqali olingan. RCM tasviri uchun yuqori sifatli kollagen tasvirlarini olish uchun yuqoridan (Stratum corneum tomoni) va pastki (dermis tomoni) tomonidan davolangan va ishlov berilmagan biopsiyalardan ettita tasodifiy tasvir olingan. RCM tasvirlari o'rtacha parchalanish indeksini bildirish uchun kollagen tuzilishi uchun ConfoScan® yordamida qayta ishlandi va tahlil qilindi. Parchalanish indeksi ob'ektlar maydonini kollagen to'qimalari uchun xom tasvirlarni qayta ishlashdan keyin olingan ob'ektlar soniga bo'lingan holda aniqlanadi. S1-rasmda kollagen parchalanish indeksi (CFI) bo'yicha miqdoriy qiymatlarni olish uchun ConfoScan® yordamida tasvirni qayta ishlash ko'rsatilgan.

2.3 Gistokimyoviy tasvirlash

Qarishga qarshi mahsulotning qarigan terini davolashga ta'sirini tekshirish uchun (fotosurat bilan shikastlangan kollagen va elastinni tiklash) №2 donordan olingan biopsiyalarga simulyatsiya qilingan ultrabinafsha nurlanish dozasi (6 J/sm2, 96 foiz UVA bilan) ta'sir qilindi. ). Tajribalarda sinovdan o'tgan namunalar va shartlar quyidagilar edi: (A) salbiy nazorat (davolanmagan, UV yo'q va sinov mahsuloti yo'q), (B) musbat nazorat (terining ultrabinafsha nurlanishiga duchor bo'lgan, ammo sinov mahsuloti yo'q) va (C) davolash qilingan ( UV ta'siriga duchor bo'lgan teri, so'ngra sinov mahsuloti bilan kunlik davolash). Teri biopsiyalari 7-kuni yig'ib olindi, qismlarga bo'lindi, kollagen (Pikosirius bo'yalishi) va elastin (immuno-bo'yoq) uchun bo'yaldi va tasvirga tushirildi. Papiller dermisdagi kollagen va elastin miqdori to'g'risida miqdoriy ma'lumot olish uchun tasvirlar xususiy tasvirni tahlil qilish algoritmi yordamida qayta ishlandi va tahlil qilindi. Qisqacha aytganda, kollagen va elastin tarkibi to'g'risida miqdoriy ma'lumot olish uchun tahliliy jarayon RGB tasvirlarini LAB rang maydoniga aylantirish, kollagen va elastinning aniq tasvirlarini olish uchun fonni filtrlash va keyin papiller dermisdagi kollagen va elastin tarkibini normallashtirishni o'z ichiga oladi. bir xil maydon yoki bir nechta piksel. Har bir holat uchun oltita biopsiya yoki teri namunalari va har bir namunadan ikkita bo'lim yoki tasvir mavjud bo'lib, natijada statistik test uchun N=12 ta rasm va ma'lumotlar nuqtalari mavjud edi. S2-rasmda kollagen tarkibi bo'yicha miqdoriy qiymatlarni olish uchun tasvirni qayta ishlash yondashuvining sxemasi ko'rsatilgan.

2.4 Elishay

7-kuni to'qimalarni yig'ib olgandan so'ng, kichikroq biopsiyalarni olish uchun 4 mm diametrli zarba ishlatildi va ~ 25 mg / biopsiya bilan ikkita biopsiya tanlandi. Teshilgan biopsiyalar (umumiy og'irligi 5{4}} mg) tarkibida 0,1% Triton va proteaz inhibitori kokteyli bo'lgan lizis tamponida aralashtiriladi, so'ngra to'qimalarni to'liq lizislash uchun mexanik va ultratovushli avtomatlashtirilgan qo'sh ishlov beruvchi gomogenizator yordamida gomogenizatsiya qilinadi. to'qima. Lizislangan to'qimalar santrifüj qilindi, supernatant yig'ildi, ikkiga bo'lindi va foydalanilgunga qadar -80 ° C da saqlanadi. Og'irligi (50 mg) bo'yicha normalizatsiyaga qo'shimcha ravishda, namunalar supernatantdagi umumiy protein miqdoriga ham normallashtirildi. Supernatant savdo Elishay to'plamlari yordamida Pro-Kollagen 1, Elastin, Alpha-Smooth Muscle Actin (A-SMA), Tenascin-X va Gialuron kislotasi uchun tahlil qilindi. Statistikalar N=6 ma'lumot nuqtasida amalga oshirildi (3 biopsiya × 2 alikvot).

3 NATIJA

Gistokimyoviy ko'rish (1-rasm) kollagen va elastinning tarqalishi va miqdori haqida makroskopik ma'lumotlarni taqdim etdi. Teri biopsiyalarini UV bilan davolashdan keyin kollagen va elastin tolalari to'plamlarining qizil rangining aniq pasayishi kuzatildi.

1-jadvalda uchta davolash sharoitida kollagen va elastin tarkibining miqdoriy qiymatlari ko'rsatilgan. Ushbu qiymatlar bizga kollagen va elastin tarkibidagi yaxshilanishlarni o'lchash va statistik taqqoslashlarni amalga oshirish imkonini berdi. UV ta'siridan keyin kollagen (-23 foizga nisbatan ishlov berilmagan) va elastin (-30 foizga nisbatan ishlov berilmagan) miqdorining pasayishi sezilarli bo'ldi (2-rasm). 6 kun davomida sinov mahsuloti bilan davolangandan so'ng, ultrabinafsha nurlanishiga duchor bo'lgan teri biopsiyalari kollagen (plus UV bilan ishlov berilganga nisbatan 18 foiz) va elastinni (plus UV bilan ishlov berilganga nisbatan 46 foiz) tiklashga muvaffaq bo'ldi. Gistokimyoviy tasvirlarda kollagenning tashkil etilishi aniq bo'lmasa-da (chunki kollagen terida eng ko'p va zich joylashgan), epidermis tomon o'tadigan elastin tolalarining xarakterli perpendikulyar tekislanishi mahalliy (1A-rasm) va ultrabinafsha nurlanishidan keyin shikastlangan terida kuzatiladi. sinov mahsuloti bilan ishlov berish (1C-rasm).

Elishay (3-rasm) test mahsuloti yoki platsebo bilan davolash qilingan teri biopsiyalari bilan ifodalangan biomarkerlar darajasini solishtiradi (bu terini qayta qurish uchun ma'lum bo'lgan faol moddalar kokteyli yo'q). Platsebo bilan solishtirganda, elastin va kollagen, xususan, 1-turdagi pro-kollagen (sinov mahsuloti platseboga nisbatan) 2-3 baravar ko'paygan. Muhim bo'lmasa-da, gialuron kislotasi va tenascin-X ning sezilarli o'sishi (P < 0.1) ham kuzatildi.

RCM teridagi kollagen tolalarining (kollagen fibrillalari to'plami) tashkil etilishini muvaffaqiyatli ochib bera oldi (4-rasm). Konfokal va chorak to'lqin plitasining optik xususiyatlari tufayli texnika kollagenni (ikki sinishi bilan kuchli endogen kontrast agenti) terini bo'linmasdan va bo'yamasdan muvaffaqiyatli ajrata oldi. Qisqa bo'laklangan kollagen va uning to'plangan joylashuvi (qari/foto-qari terida shikastlangan va yomon tashkil etilgan kollagenga xos) davolanmagan teri biopsiyasida kuzatiladi. Sinov mahsuloti bilan 6 kun davomida davolangandan so'ng, bu 62- yoshli ayol teri biopsiyasida (donor №1) kollagen tolalarining joylashishi ishlov berilmagan, uzunligi 100 mkm dan ortiq bo'lgan kollagen tolalariga qaraganda nisbatan tartibliroq ko'rinadi. bir-biriga parallel. Kambag'al kontrast bo'lsa-da, biz fibroblastlarning shakli va hajmini (4-rasmdagi o'qlar bilan ta'kidlangan), katta va tarqalgan fibroblastlarni davolash qilingan teriga nisbatan muntazam shaklga ega bo'lgan terini kuzatishimiz mumkin. 4C-rasmdagi yorqin dumaloq hujayralar alohida qiziqish uyg'otadi. Ular mast hujayralari yoki yallig'lanish hujayralari bo'lishi mumkin. Ushbu yallig'lanish hujayralari terining normal holatini ifodalaydimi yoki kollagenning yuqori sifatli tasvirini olish uchun lazer boshi va teri o'rtasida yaxshiroq aloqa qilish uchun lazer boshiga qo'llaniladigan sezilarli kuchga javoban ifodalanganmi yoki yo'qmi aniq emas. tolalar.

2-jadvalda davolangan va davolanmagan terining ettita tasodifiy tasvirining ConfoScan® tahlili orqali aniqlangan o'rtacha parchalanish indeksi ko'rsatilgan. Kollagen, ishlov berilgan va davolanmagan guruhning parchalanish indeksi mos ravishda 0 edi.032 va 0,064. Parchalanish indeksidagi pasayish kollagen tashkilotining yaxshilanishini ko'rsatadi.

Kollagen tuzilishini chuqurroq o'rganish uchun nano miqyosda kollagen tuzilishini ko'rish uchun AFM tasvirlari olingan (5-rasm). Biz nanometr qalinlikdagi individual kollagen fibrillalarini (kollagen tolasini hosil qiluvchi to'plam) ko'rishimiz mumkin. Bundan tashqari, adabiyotga mos keladigan kollagen fibrillalarining (D ~ 68 nm) xarakterli shpal tarmoqli naqshini ham ko'rishimiz mumkin11 va AFM kollagenni boshqa ECM tolalaridan ajrata olishini tasdiqlaydi. RCM bilan konsensusda kollagen fibrillalarining nisbatan parallel tashkil etilishi AFM ostida davolangan va davolanmagan teri uchun ham kuzatildi.

4 MUHOKAZA

Ushbu tadqiqotda biz kollagenni qayta qurishga olib kelishi ma'lum bo'lgan ba'zi benchmark sintetik peptidlarni o'z ichiga olgan tijorat anti-aging mahsuloti bilan davolash qilingan inson terisi biopsiyalarida kollagendagi o'zgarishlarni ko'rish uchun uchta tasvirlash texnikasidan foydalanish imkoniyatlarini o'rgandik. Gistokimyoviy tasvirlash va RCM tasvirlash usullari kollagen tarkibi va parchalanish to'g'risida yarim miqdoriy ma'lumotni olish uchun qarishga qarshi mahsulot bilan davolashdan keyin kollagenning yaxshilanishini baholash uchun indeks sifatida tasvirni qayta ishlash bilan birlashtirildi.

Qizig'i shundaki, bizning tadqiqotimiz sinov mahsuloti bilan davolashdan keyin kollagen va elastin darajasining sezilarli darajada oshishi haqida xabar berish uchun gistokimyoviy ko'rish va Elishay o'rtasida juda kuchli korrelyatsiyani ko'rsatdi. 1-toifa pro-kollagen yangi sintez qilingan kollagenning belgisidir va uning Matrixyl® (Sederma/Croda) ga javoban fibroblastlar tomonidan haddan tashqari ifodalanishi qarishga qarshi ta'sirning yaxshi tavsiflangan mexanizmi hisoblanadi.23,24 Shuningdek, sezilarli o'sish kuzatildi. maxsus tabaqalashtirilgan fibroblast hujayralari bo'lgan miofibroblastlarga xos bo'lgan A-SMA belgisini ifodalashda. Fibroblast vositachiligida ECM qisqarishi va qayta tuzilishida A-SMA ning roli yaxshi tushunilgan25 va A-SMA ifodasi va fibroblast qisqarish faolligi o'rtasida to'g'ridan-to'g'ri bog'liqlik haqida xabar berilgan.26 Gialuron kislotasining ko'payishi, garchi ahamiyatsiz bo'lsa ham, birinchi navbatda Anti-aging mahsulotida namlovchi tarkibiy qism sifatida gialuron kislotasi mavjudligi bilan bog'liq. TNSX yangi ECM oqsili bo'lib, teri dermisidagi kollagen fibrillalari o'rtasida yoki yuzasida lokalizatsiya qilinadi27 va TNSX dozaga bog'liq kollagen fibrilogenezini qo'zg'atadi, 28,29 TNSX ning maxsus kollagen turiga bog'lanishi haqida bahslar mavjud. 1 yoki boshqa kollagen va ECM biomolekulalari.28,29 Qarishga qarshi sinov mahsulotining faol moddasi boʻlgan SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) ga javoban TNSX ning dozaga bogʻliq ortishi haqida xabar berilgan (Xalqaro patent talabnomasi # PCT /IB2017/056370). Shu sababli, sinov mahsulotidagi Matrixyl® (Sederma/Croda) va SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) yangi sintezlangan kollagen, 1-turdagi prokollagen sintezi va moslashuvini osonlashtirish uchun birgalikda ishlaydi, deb taxmin qilish mumkin. Kollagen va elastinning sezilarli darajada pasayishi. UV nurlari bilan davolashdan so'ng (foto shikastlangan teri modeli), so'ngra ularni qarishga qarshi vosita bilan davolashdan so'ng ta'mirlash (UV ta'siriga duchor bo'lmagan mahalliy terining darajalari) gistokimyoviy tasvirlash (polarizatsiyalangan mikroskop) va tasvirni qayta ishlash texnikasining qobiliyatini ko'rsatadi. ECM komponentlari tarkibidagi kichik o'zgarishlarni o'lchash (1 va 2-rasm). Yangi sotib olingan Thunder Leica floresan tasvirlash tizimi yordamida kollagen va elastin tuzilishini (immunofluoressensiya belgilaridan keyin) tasvirlashga harakat qilish uchun jiddiy harakatlar qilindi. Biroq, rezolyutsiya etarlicha yuqori emas edi va shuning uchun tashkilot haqida ishonchli xulosaga kelish mumkin emas edi. Flüoresansga asoslangan CLSM ko'rish kollagen va elastin tuzilishini aniq ko'rish imkonini beruvchi an'anaviy keng maydonli floresan tasvirga qaraganda yuqori aniqlikni taklif qiladi. An'anaviy keng maydonli floresan tasvirlash ikkilamchi floresansning ustunligi va CLSM uchun tashvish tug'dirmaydigan namunalarning qalinligi bilan cheklangan.

Biz RCM yordamida kollagen tuzilishini tasavvur qila oldik (4-rasm). RCM CLSMga qaraganda yaxshiroq tanlovdir, chunki (1) RCM hech qanday yorliq yoki bo'yashdan foydalanmaydi (immunofluoresans yorlig'ini talab qiluvchi floresan-CLSMdan farqli o'laroq) yorliqlar tufayli noaniqlik yoki noaniqlik ehtimolini yo'q qiladi va (2) RCM keng tarqalgan. kollagen uchun klinik dermal tasvirlash texnikasidan foydalangan. Qarishga qarshi vosita bilan ishlov berilgandan so'ng kollagen tolasi, uzun va ingichka tolalar to'qimalarining yaxshilanishi (davolanmagan teridagi zich va qisqa bo'lakli kollagen tolalariga nisbatan) uning strukturaviy darajada ta'sir qilish tartibini ko'rsatadi. RCM o'lchamlari terining kollagen sintezi zavodi bo'lgan fibroblast hujayralarini ham qo'lga kiritish uchun etarlicha yuqori edi. Fibroblastlar atrofida o'ralgan kollagen tolalari yangi sintez qilingan kollagen tolalari bo'lishi mumkin, chunki u atrofdagi kollagen tolalari va ularning to'plamlariga qaraganda ingichkaroqdir (4-rasm). Randomize RCM tasvirlarining ConfoScan® tahliliga asoslanib, ishlov berilmagan terida ishlov berilgan teriga nisbatan parchalangan kollagen indeksi ancha yuqori degan xulosaga kelishimiz mumkin. RCM tasvirlarida biz sinov mahsuloti bilan ishlov berilgandan so'ng kollagen tolalarining parallel tekislanishini ko'rishimiz mumkin bo'lsa-da, izotropiya / anizotropiya nisbati hisoblanmaguncha, bu tadqiqot doirasidan tashqarida edi. Biroq, nano o'lchovdagi AFM ultra yuqori ruxsati bitta fibrillalar darajasida kollagen moslashuvining dalillarini ochib beradi. RCM va AFM tasvirlari o'rtasidagi kollagen tolalarining parallel tekislanishi (davolanmagan va ishlov berilgan) o'rtasidagi ijobiy korrelyatsiyaga asoslanib, qarishga qarshi mahsulot da'vo qilingan kollagenni qayta tashkil etish xususiyatiga ega bo'lish ehtimoli kuchli. Kelajakdagi tadqiqotlar uchun, mavjud kollagen yoki yangi sintezlangan kollagen tolalarining mos kelishini tekshirish uchun sinov mahsuloti bilan davolashdan oldin va keyin vaqt o'tishi bilan bir xil joyni (kollagen tolalari) kuzatish uchun tadqiqot o'tkazilishi kerak (uzunlamasına o'rganish). ko'proq moslashtirilgan. Biroq, bunday bo'ylama tadqiqot RCM va AFM asboblarini jonli to'qimalarni tasvirlash qobiliyatiga va kollagenni qayta qurishdagi real vaqtda o'zgarishlarni olish uchun vaqt oralig'ida tasvirga integratsiyalashni talab qiladi.

5 XULOSA

Ushbu kontseptsiyani isbotlovchi tadqiqot natijalariga asoslanib, biz AFM, RCM va gistokimyoviy tasvirlash usullari kollagen tarkibidagi o'zgarishlarni mos ravishda nano, mikro va makro miqyosda kuzatishga qodir degan xulosaga kelishimiz mumkin. AFM va RCM tasvirlari sinov mahsuloti bilan ishlov berilgandan so'ng nano va mikro miqyosda kollagen moslashuvining dalillarini ko'rsatadi. Randomize RCM va gistokimyoviy tasvirlarning xususiy tasvirni qayta ishlash usullaridan foydalangan holda tahlili shuni ko'rsatadiki, sinov mahsuloti bilan ishlov berilgandan so'ng terining kollagen parchalanishi pastroq va kollagen zichligi davolanmaganga nisbatan yuqori bo'ladi. Tasvirni qayta ishlash algoritmlarini ishlab chiqish va tasdiqlash uchun ma'lum harakatlar qilingan bo'lsa-da3,5,6,12-14,16,17 ma'lumotlarga asoslangan klinikadan oldingi va klinik tadqiqotlar va diagnostika qarorlariga erishish uchun ushbu yo'nalishda qo'shimcha tadqiqotlar talab etiladi. Yuqori aniqlikdagi va yuqori kontentli tasvirlash usullarini kuchli va mustahkam tasvirni qayta ishlash algoritmlari va dasturiy taʼminotlari bilan birgalikda qoʻllash boʻyicha bizning yaxlit yondashuvimiz bu yoʻnalishdagi qadamdir.

Ushbu tadqiqot doirasi inson terisi biopsiyasida qarishga qarshi sinov mahsulotiga javoban kollagen tarkibini tekshirish bilan cheklangan bo'lsa-da, bu tasvirlash usullari normal rivojlanishning o'ziga xos belgisi bo'lgan ECM remodelingini kuzatish va miqdorini aniqlashga ta'sir qiladi. jarohatni davolash, shuningdek, nazoratsiz ECM remodelingidan kelib chiqadigan fibroz va saraton kabi hayot uchun xavfli vaziyatlarning patofiziologiyasida asosiy belgidir.2

MANFATLAR to'qnashuvi

Mualliflarning ta'kidlashicha, hech qanday manfaatlar to'qnashuvi xabar qilingan tadqiqotning xolisligiga putur yetkazuvchi sifatida qabul qilinishi mumkin emas.

ADABIYOTLAR

1. Shin JW, Kvon SH, Choi JY, Na JI, Choi HR, Park KC. Dermal qarishning molekulyar mexanizmlari va qarishga qarshi yondashuvlar. Int J Mol Sci. 2019;20(9):2126.

2. Cox TR, Erler JT. Hujayradan tashqari matritsaning qayta tuzilishi va gomeostazi: fibrotik kasalliklar va saraton uchun oqibatlari. Dis Model Mech. 2011;4(2):165–78

3. Pittet JC, Freis O, Vazquez-Duchene MD, Perie G, Pauly G. In-vivo inson dermisida elastin / kollagen tarkibini multifoton tomografiya orqali baholash - chuqurlik va qarish bilan bog'liqlik bilan o'zgaruvchanlik. Kosmetika. 2014;1(3):211–21

4. Longo C, Casari A, Beretti F, Cesinaro AM, Pellacani G. Terining qarishi: konfokal mikroskopiya yordamida epidermal va dermal o'zgarishlarni mikroskopik baholash. J Am Acad Dermatol. 2013;68(3):e73–82.

5. Yamazaki K, Li E, Miyazawa A, Kobayashi M. Ko'p kontrastli Jones matritsali optik kogerens tomografiyasi bilan ko'z burchagi sohalarida bir nechta optik xususiyatlar va ajinlar morfologiyasini chuqur hal qilingan tadqiqot. Skin Res Technol. 2020;27(3):435–443.

6. Yow AP, Cheng J, Li A, Srivastava R, Liu J, Wong DWK va boshqalar. Avtomatlashtirilgan in vivo 3D yuqori aniqlikdagi optik kogerent tomografiya teri tizimi. Annual Int Conf IEEE Eng Med Biol Soc. 2016; 2016: 3895–8

7. Ruini C, Schuh S, Sattler E, Welzel J. Dermatologiyada chiziqli konfokal optik kogerent tomografiya-amaliy ilovalar va belgilangan tasvirlash usullari bilan taqqoslash. Skin Res Technol. 2021;27:340–52.

8. Tal S, Maresky HS, Bryan T, Ziv E, Klein D, Persitz A, va boshqalar. MRI yuz kosmetik in'ektsion plomba moddalarini aniqlashda. Head Face Med. 2016;12(1):27.

9. Mandava A, Ravuri PR, Konathan R. Teri lezyonlarining yuqori aniqlikdagi ultratovush tekshiruvi. Indian J Radiol Imaging. 2013;23(3):269–7.

10. Edvards SJ, Mavranesouli I, Osei-Assibey G, Marceniuk G, Wakefield V, Karner C. Vivascope 1500 va 3000 tizimlari teri lezyonlarini aniqlash va monitoring qilish: tizimli ko'rib chiqish va iqtisodiy baholash. Sog'liqni saqlash texnologiyasini baholash. 2016;20(58):1–260.

11. Ushiki T. Kollagen tolalar, retikulyar tolalar, elastik tolalar. Morfologik nuqtai nazardan keng qamrovli tushuncha. Arch Histol Cytol. 2002;65(2):109–26

12. Starborg T, Kalson NS., Lu Y, Mironov A, Cootes T, Holmes D va boshqalar. Kollagen fibril hajmini va uch o'lchovli tashkilotni aniqlash uchun transmissiya elektron mikroskopiya va 3view (R) dan foydalanish. Nat Protoc. 2013;8(7):1433–48.

13. Wegner KA, Keyxosravi A, Eliceiri AW, Vezina CM. To'qimalar bo'limlarida kollagen miqdorini baholash uchun immunohistokimyo bilan multiplekslangan pikosirius qizilining floresansi. J Histochem Cytochem. 2017;65(8):479–90.

14. Changoor A, Tran-Khanh N, Methot S, Garon M, Hurtig MB, Shive MS va boshqalar. Kıkırdak ta'mirlashda kollagen tashkilotini aniq va ishonchli tasniflash uchun polarizatsiyalangan yorug'lik mikroskopiyasi usuli. Osteoartr xaftaga. 2011;19(1):126–35.

15. Bernstein EF, Chen YQ, Kopp JB, Fisher L, Brown DB, Hahn PJ va boshqalar. Uzoq muddatli quyosh ta'sirida papiller dermisning kollagenini o'zgartiradi. Shimoliy tahlil, immunohistokimyoviy bo'yash va konfokal lazerli skanerlash mikroskopiyasi bilan quyoshdan himoyalangan va foto-yog'langan terini solishtirish. J Am Acad Dermatol. 1996;34(2 pt 1):209–18.

16. Schuurmann M, Stecher MM, Paasch U, Simon JC, Grunewald S. Ex-vivo konfokal lazerli skanerlash mikroskopi uchun raqamli bo'yashni baholash. JEADV. 2020;34(7):1496–9.

17. Gareau DS. Gistopatologiyani simulyatsiya qilish uchun raqamli bo'yalgan multimodal konfokal mozaikaning maqsadga muvofiqligi. J Biomed opt. 2009;14(3):034050.

18. Chjan Y, Ingham B, Cheong S, Ariotti N, Tilley RD, Naffa R va boshqalar. Haqiqiy vaqtda Synchrotron kichik burchakli rentgen nurlanishining terini qayta ishlash jarayonida kollagen tuzilishini o'rganish. Ind Eng Chem Res. 2018;57(1):63–9.

19. Tasvirdan ma'lumotga: Dermatologiya va teri biologiyasida tasvirni qayta ishlash. In: Hamblin, M., Avci, P., Gupta, G., muharrirlar. Dermatologiyada tasvirlash, 1-nashr. Akademik matbuot: Amsterdam, Niderlandiya; 2016. p. 519–35.

20. Schneider SL, Kohli I, Hamzavi IH, Council ML, Rossi AM, Ozog DM. Dermatologiyada rivojlanayotgan tasvirlash texnologiyalari, II qism: Ilovalar va cheklovlar. J Am Acad Dermatol. 2019;80(4):1121–31.

21. Guida S, Pellacani G, Ciardo S, Longo C. Qarish teri va teri saratonini aks ettiruvchi mikroskopiya tasviri. Dermatol amaliyoti kontseptsiyasi. 2021;11(3):2021068.

22. Vang H, Shyr T, Fevola MJ, Cula GO, Stamatas GN. Inson terisidagi dermal matritsaning yoshga bog'liq morfologik o'zgarishlari multifoton mikroskop yordamida in vivo hujjatlashtirilgan. J Biomed opt. 2018;23(3):1–4.

23. Jons RR, Castelletto V, Connon CJ, Hamley IW. C16-KTTKS peptid amfifilining inson fibroblastlariga kollagen stimulyator ta'siri. Mol Pharm. 2013;10(3):1063–9.

24. Gorouhi F, Maibach HI. Qarigan terining oldini olish yoki davolashda topikal peptidlarning roli. Int J Cosmet Sci. 2009;31(5):327–45.

25. Shinde AV, Humeres C, Frangogiannis NG. Fibroblast vositachiligida matritsaning qisqarishi va qayta tuzilishida a-silliq mushak aktinining roli. Biochim Biophys Acta. 2017;1863(1):298–309.

26. Hinz B, Coletta G, Tomasek JJ, Gabbiani G, Chaponnier C. Alfa silliq mushak aktin ifodasi fibroblast kontraktil faolligini oshiradi. Mol Biol hujayra. 2001;12(9):2730–41.

27. Valcourt U, Alcaraz LB, Exposito JY, Lethias C, Bartholin L. Tenascin-X: Arxitektura funktsiyasidan tashqari. Cell Adh Migr. 2015;9(1–2):154–65.

28. Egging D, van den Berkmortel F, Taylor G, Bristow G, Schalkwijk J. Inson tenascin-X domenlarining dermal hujayradan tashqari matritsa molekulalari bilan o'zaro ta'siri. Arch Dermatol Res. 2007;298(8):389–96.

29. Minamitani T, Ikuta T, Saito Y, Takebe G, Sato M, Sawa H va boshqalar. Tenascin-X va VI turdagi kollagen tomonidan kollagen fibrillogenezini modulyatsiya qilish. Exp Cell Res. 2004;298(1):305–15

QO'LLABCHA MA'LUMOT

Qo'shimcha ma'lumotni nashriyot veb-saytidagi maqolaning onlayn versiyasida topish mumkin.

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】