Ven-Lan Li, Jing-Sin Ding, Jing Bay, Yang Xu, Xui Song, Sian-Ming Sun, Yu-Bin Ji

Qo'shimcha ma'lumot olish uchun quyidagi manzilga murojaat qiling:Joanna.jia@wecistanche.com

Abstrakt

LC Technology an'anaviy xitoy dori-darmonlari (TCM) sifatini baholash uchun butun dunyoda qo'llaniladigan tan olingan usuldir. TCM sifati uning samaradorligiga bevosita ta'sir qiladi. Shuning uchun, TCM o'z samaradorligini to'liq ochib berish uchun, birinchi navbatda, uning samaradorligining moddiy asoslarini tushunish, so'ngra faol birikmalarning sifatini nazorat qilish kerak. Farmakologik material asosini aniqlash uchun spektr-ta'sir munosabatlari usulini qo'llash juda muhimdir. Ushbu maqolaning maqsadi kimyoviy profillar va estrogenik faollik o'rtasidagi asosiy korrelyatsiyani o'rganish edi.Cistanche, faol birikmalarni aniqlash. Kimyoviy profillarCistancheHPLC/Q-TOF-MS/MS yordamida qayd etilgan va estrogenik faollik Bachadon o'sishi testi va MTT tahlili bilan aniqlangan. Keyin bivariatli tahlil, asosiy komponent tahlili va kulrang korrelyatsiya tahlili usuli natijalarini birlashtirib, o'n beshta faol birikma aniqlandi. Ular 8-epilogan kislotasi, salidrozid, syringalid A 3'- -l-ramnopiranozid, sistanozid A, echinakozid, sistanozid F, sistanozid B, sistanozid C, osmantusid B, akteozid, izoakteozid, tubuloziddir. '-asetilakteozid va ikkita noma'lum birikma. Ushbu tadqiqot in vivo tadqiqotlar uchun asos yaratadiCistanche, va uning klinik qo'llanilishini rivojlantirish uchun.

Cistanchetubulosa

Kalit so‘zlar:Cistanchedesertiko; LC/Q-TOF-MS; estrogen faolligi; asosiy komponentlar tahlili (PCA); Bachadon o'sishi testi.

Qisqartmalar

TCM: an'anaviy xitoy tabobati

HPLC / Q-TOF-MS: Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi / to'rt kutupli parvoz vaqtining massa spektrometriyasi

BA: ikki o'zgaruvchan tahlil

PCA: asosiy komponentlar tahlili

GCAM: kulrang korrelyatsiyani tahlil qilish usuli

MTT: Tripsin, 3-(4, 5-Dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazoliumbromid

DMSO: dimetil sulfoksid

RPMI1640 Roswell Park Memorial instituti 1640

1.Kirish

So'nggi paytlarda TCM o'zining barqaror terapevtik ta'siri va klinikada past toksikligi tufayli Osiyo va G'arb mamlakatlarida tobora ommalashib bormoqda. Natijada, TCMning yangi turlarini ishlab chiqish va ularni klinik qo'llash paytida ishlatiladigan samarali kompozitsiyalarni tushunish kerak [1-6].

Birinchidan, xromatografik barmoq izi va farmakodinamik samaradorlik o'rtasidagi bog'liqlikni aniqlash uchun spektr-ta'sir munosabatlari o'rganiladi. Keyin TCMda samarali komponentlarni izlash va ularning ichki sifatini aks ettirish uchun nazorat standartlarini shakllantirish uchun munosabatlardan foydalaning. Spektr-ta'sir munosabatlari TCM tadqiqotlarining ko'plab sohalarida, masalan, yagona va aralash TCMning moddiy asoslari, komponentlarning mosligi, qayta ishlash mexanizmi, farmakologik ta'sir prognozi va texnologiyani optimallashtirish [7-12] kabilarda qo'llanilgan. Spektr-ta'sir munosabatlari faol moddalarni o'rganish, formulalarni optimallashtirish, tayyorlash jarayonlarini takomillashtirish, maqsadli ingredientlarni kuzatish va ajratish, yangi TCM preparatlarini ishlab chiqish uchun yangi g'oyalar va usullarni ilgari surish uchun ishlatiladi [13-17].

Cistanchejinsiy disfunktsiya, ich qotishi, prostatit va buyrak etishmovchiligini davolashda keng qo'llaniladi. U estrogenik ta'sir, qarishga qarshi, antioksidant va immunitet ta'sirini o'z ichiga olgan keng spektrli bioaktivlikka ega [18-19]. Umuman olganda, feniletanoid glikozidlar (masalan, sistanozid A, tubuloside A), lignanlar va iridoid glikozidlar Cistanche va uning mahsulotlari sifatini nazorat qilish uchun farmakologik tarkibiy qismlar va kimyoviy belgilar sifatida ko'rib chiqildi [20-21]. Turli hududlardagi Cistanche kimyoviy spektrlari Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) [22-23] yordamida qayd etilgan. Ushbu tadqiqotda biz ularning estrogenik faolligini baholash uchun bachadon o'sishi testini va MCF7 hujayra proliferatsiyasi tahlilini tanlaymiz. Estrogenik faollikni alohida komponentlar bilan bog'lash uchun asosiy komponentlar tahlili, ikki o'zgaruvchan tahlil va kulrang korrelyatsiyani tahlil qilish usullari ishlatilgan. Ushbu tadqiqot in vivo estrogen ta'siri uchun mas'ul bo'lgan Cistanche bioaktiv birikmalarini aniqlashga qaratilgan. Tadqiqot Cistanche-ni chuqur o'rganish uchun asos yaratadi.

Barcha eksperimental protseduralar Harbin Savdo Universitetining Hayvonlar etik qo'mitasi tomonidan ko'rib chiqildi va tasdiqlandi.

Cistanchedeserticola (cd-20120227-005) dori bozoridan sotib olingan va uni professor Chjan Delian (Harbin savdo universiteti) aniqlagan. Dietilstilbestrol HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD kompaniyasidan sotib olindi. Fenol qizilsiz RPMI1640 va RPMI1640 HyClone kompaniyasidan (AQSh) sotib olingan. MTT va DMSO hammasi Sigma-Aldrich Co. MChJdan (Sent-Luis, AQSh) sotib olingan. Inson ko'krak saratoni MCF7 hujayra liniyasi Hayot fanlari va atrof-muhit fanlari tadqiqot markazi (Harbin savdo universiteti) tomonidan taqdim etilgan. Amaldagi standartlar quyidagilar edi: akteozid (111530- 200505), echinacoside (111670-200503) va salidrozid (110736-200628) Milliy Farmatsevtika va biologik mahsulotlarni nazorat qilish institutidan (Pekin) olingan. , Xitoy). Asetonitril, metanol va chumoli kislotasi MS darajasida, suv esa o'ta toza edi. Boshqa reagentlar analitik darajada bo'lgan va tijoratda mavjud edi.

2 Eksperimental protsedura

2.1 Materiallar

Agilent 1290 HPLC tizimi, Agilent 6530 Series Quadrupole Time-of-Flight LC/MS (Q-TOF) tizimi va Chemical HPLC-3D ish stantsiyalari analitik kimyo tajribalari va ma'lumotlarni qayta ishlash uchun ishlatilgan. Namunalar va standartlarni tayyorlash uchun Milli-Q o'ta toza suv ishlatilgan. Qo'shimcha asboblar qatoriga AR1140 elektron analitik balansi (Ohaus International Ltd), 680 Microplate Reader (Bio-Rad korporatsiyasi) va 64R yuqori tezlikdagi santrifüj (Beckman Coulter Allegra) kiradi.

Og'irligi (12 ± 2) g bo'lgan yetilmagan urg'ochi Kunming sichqonlari (taxminan 21 kun tug'ilgan, sutdan ajratilgan) Changchun milliy biologik sanoat bazasi laboratoriya hayvonlar markazidan (Changchun, Xitoy) sotib olingan. Sichqonlar haroratni tartibga soluvchi xonada (22 ± 2 daraja) oziq-ovqat va suvga cheklanmagan holda joylashtirildi. Hayvonlar ustida tajriba besh kunlik iqlimlashtirishdan so'ng boshlandi. Sinov eritmalarini yuborishdan oldin sichqonlar suvga erkin kirish imkoniyati bilan bir kechada ro'za tutdilar. Ushbu tadqiqot Milliy sog'liqni saqlash institutlarining Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanmadagi tavsiyalarga qat'iy muvofiq ravishda amalga oshirildi.

2.2 Namuna eritmasini tayyorlash

Cistanchenamunalar Neimeng, Shinjon, Ningxia, Guizhou, Chaidamu, Xizang, Alashan, Qinghai, Sichuan va Xubey provintsiyalari kabi o'nta turli xil yashash joylaridan to'plangan.

eritmasi (1.0 g/ml).CistancheNamuna og'iz orqali yuborish uchun distillangan suvda tayyorlangan. Dietilstilboestrolning konsentratsiyasi 20ug/ml ni tashkil etdi va ijobiy nazorat eritmasi sifatida ishlatilgan. Cistanche namunasining eritmasi (1.0 g/mL) 50% asetonitrilda tayyorlangan. Akteozid, echinacoside va salidrosid (har biri 2,0 mg) 10 ml 50% asetonitril eritmasida eritildi. Namuna va standart eritmalar tahlildan oldin 0.45-mkm filtr yordamida filtrlangan.

2.3 LC-MS shartlari

Namunalarni tahlil qilish uchun Waters Symmetry Shield RP18 (3,9 mm×150 mm, 5 mikron; Waters Corporation, Milford, MA, AQSH) ishlatilgan. Mobil faza asetonitril (A) va 0,2 foiz (h/v) chumoli kislotasi suvli eritmasidan (B) iborat bo'lib, 0,5 ml/min oqim tezligida pompalanadi. Har bir namunaning in'ektsiya hajmi 10 mkl edi. Gradient elutsiya dasturi quyidagicha edi: Mobil faza A 5 foizda boshlangan va 35 daqiqada chiziqli ravishda 23 foizga ko'tarilgan. Keyinchalik A eritmasi 25 foizga ko'tarildi (35 dan 65 minutgacha). Keyin A mobil fazasi yugurishning oxirgi 5 daqiqasida (65 dan 70 minutgacha) 5 foizga kamaydi. Ustunning harorati 30 daraja ushlab turildi. Xromatogrammalar 254 nm da kuzatilgan. Atomizatsiya gazining bosimi 30 psi, kapillyar kuchlanish esa 3,5 kV edi. Quruq gazning oqim tezligi 30 daraja haroratda 8 L / min ga o'rnatildi. Massa spektrlari 100- 3,000 Da skanerlash diapazonida qayd etilgan va salbiy ion skanerlash rejimida edi.

2.4 Barmoq izlarini baholash

10 xil partiyadan olingan namunalarning LC barmoq izlari TCM xromatografik barmoq izi uchun oʻxshashlikni baholash tizimi (2012-versiya; Xitoy Farmakopeya qoʻmitasi, Pekin, Xitoy) yordamida avtomatik tarzda oʻrnatildi va moslashtirildi. Bundan tashqari, median usuli yordamida mos yozuvlar xromatogramma xaritasi yaratildi. Bundan tashqari, o'nta turli xil yashash joylaridan olingan namunalar sifatini baholash uchun klaster tahlili qo'llanildi.

2.5 Asosiy komponentlar tahlili (PCA)

PCA ko'p o'lchovli statistik usuldir. U ma'lumotlarni yig'ishda etarli ma'lumotni saqlab qolishi mumkin. Ushbu tadqiqotda LC xromatogrammalarining xarakterli cho'qqilari PCA tomonidan qo'shimcha ravishda tekshirildi va spektr-ta'sir munosabatlariga asoslangan faol birikmalarni aniqlashga qaratilgan.

2.6 Bachadon o'sishi testi

Sichqonlar 12 ta guruhga boʻlingan (har bir guruhga 10). Cistanchedan tayyorlangan namunali eritmalar o'n xil yashash joylaridan to'plangan va kuniga ikki marta (ertalab va kechqurun) gavaj orqali 30 g / kg tana vazniga to'rt kun davomida yuborilgan. Bo'sh va ijobiy nazorat guruhlari teng hajmdagi distillangan suv va dietilstilboestrol eritmasidan iborat bo'lib, to'rt kun davomida kuniga ikki marta kiritildi. Beshinchi kuni preparatni o'z ichiga olgan qon namunalari behushlik qilingan sichqonlardan olingan. Namunalar santrifüj qilindi (5,{5}} rpm, 10 min) va supernatantlar (dori o'z ichiga olgan sarum namunalari) ajratildi. Preparatni o'z ichiga olgan sarum namunalari 30 daqiqa davomida suv hammomida 56 daraja qizdirilganda faolsizlantirildi va MTT tahlilidan oldin 0.22-mkm filtrdan o'tkazildi. Bir vaqtning o'zida sichqonlarning bachadoni darhol kesilib, bachadon vazni indekslarini hisoblash uchun tortildi. Hayvonlar tajribasi besh kunlik iqlimlashtirishdan so'ng boshlandi. Sinov eritmalarini kiritishdan oldin sichqonlar suvga bepul kirish imkoni bilan tun bo'yi ro'za tutdilar. Ushbu tadqiqot Milliy Sog'liqni saqlash institutlarining Laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish bo'yicha qo'llanmaning tavsiyalariga qat'iy muvofiq ravishda amalga oshirildi. Barcha eksperimental protseduralar Harbin Savdo Universitetining Hayvonlar etik qo'mitasi tomonidan ko'rib chiqildi va tasdiqlandi. Barcha potentsial stressli protseduralar natriy pentobarbital behushlik ostida amalga oshirildi.

2.7 MTT tahlili

MCF7 hujayralari to'rt kun davomida fenol qizil (5 foiz CDT-FBS o'z ichiga olgan) holda RPMI 1640 bilan birgalikda o'stirildi. Hujayralar 96-quduq plastinkalariga 2,000 hujayra/quduq zichligida ekilgan. Yopishqoq kulturaga erishildi va 72 soatlik kulturadan so'ng hujayralar sichqonlardan Cistanche bilan ishlov berilgan sarum namunalarini o'z ichiga olgan RPMI 1640 muhitida birgalikda o'stirildi. Tajribalar olti nusxada o'tkazildi. Keyinchalik, har bir quduqqa 20 mL MTT eritmasi (PBSda 5 mg / ml) qo'shildi va hujayralar 4 soat davomida inkubatsiya qilindi. O'rtacha olib tashlangandan so'ng, formazan mahsulotini ishlab chiqarish uchun 150 µL DMSO qo'shildi va plitalar butunlay erishi uchun qorong'ida chayqatildi. Absorbans Microplate Reader yordamida 570 nm da o'lchandi. Ko'payish tezligi preparatni o'z ichiga olgan sarum guruhining o'rtacha absorbsiya qiymatini bo'sh nazorat guruhining o'rtacha absorbsiya qiymatiga bo'lingan holda hisoblab chiqilgan (zardobsiz RPMI 1640 da birgalikda o'stirilgan hujayralar).

2.8 Statistik tahlil

Bo'sh nazorat va eksperimental guruhlardagi qiymatlar o'rtasidagi statistik jihatdan muhim farqlarni aniqlash uchun juftlashtirilgan namunali t-testi (ikki dumli) ishlatilgan. Farqlar 95 foizlik ishonch darajasida muhim deb hisoblandi (p <>

PCA o'n xil yashash joylaridan olingan namunalarning xromatogrammalarida xarakterli tepalik joylarini baholash uchun ishlatilgan. Tepalik hududlari va ularning estrogen faolligini baholash uchun ikki o'zgaruvchan tahlil va Grey korrelyatsiya tahlili ishlatilgan. Korrelyatsiya SPSS statistik dasturiy ta'minot statistikasi (SPSS for Windows 21.0, SPSS Inc., AQSH) tomonidan hisoblab chiqilgan. Farqlar 95 foizlik ishonch darajasida (ikki dumli) muhim deb hisoblangan.

Axloqiy ma'qullash: O'tkazilgan tadqiqot inson yoki hayvonlardan foydalanish bilan bog'liq emas.

3 Natijalar va muhokama

3.1 Klaster tahlili va o'xshashlikni baholash

Xarakterli cho'qqilarning ushlab turish vaqti va tepalik maydonining nisbiy standart og'ishi aniqlik uchun {0}},58 va 0,34 foizni tashkil etdi, 0,52 va {{8} Qayta ishlab chiqarish uchun },31 foiz va barqarorlik uchun mos ravishda {{10}},19 va 0,13 foiz. Ushbu topilmalar barmoq izini o'rnatish bo'yicha bizning LC usulimiz oqilona va ishonchli ekanligini ko'rsatdi. O'nta namunadagi xromatogrammalarning o'xshashligi 0,9 dan katta edi. Barcha namunalar uchun umumiy cho'qqilar Cistanchening xarakterli tarkibiy qismlarini to'liq ifodalay olmaydi, chunki cho'qqi yo'qolishi mumkin edi. Shuning uchun, aniqroq xromatogramma xaritasini olish uchun namunaning mos keladigan raqami 26 dan 20 gacha o'rnatildi. Hammasi bo'lib 26 ta cho'qqi olindi va ularning maydonlari yig'indisi namunadagi umumiy cho'qqi maydoniga nisbatan 0,8 dan kattaroq edi. Shuning uchun biz ushbu xromatografik cho'qqilar Cistanchening asosiy kimyoviy tarkibiy qismlarini samarali aks ettirishi mumkin degan xulosaga keldik. Klaster tahlili natijalari 1-rasmda ko'rsatilgan. Jami o'nta xilma-xil yashash joylari uchta toifaga bo'lingan: (A) 2, Guychjou; 3, Tsinxay; 4, Chaidamu; 10, Neimeng; 7, Shinjon va 6, Sichuan. (B) 1, Xizang; 8, Ningxia va 5, Alashan. (C) 9, Xubey. Klaster tahlili tendentsiyasi shuni ko'rsatdiki, dorivor o'tlarning yashash joylari chegaraning pastki qismida joylashganda bir xil. Ammo chegaraning oshishi bilan iqlim va yashash joylarining o'sish sharoitlari yaqinlashadi. Bu shuni ko'rsatadiki, klaster tahlili nafaqat turli xil yashash joylarini yaxshi ajrata oladi, balki ular o'rtasidagi yaqinlikni ham aks ettiradi.

3.2 Kimyoviy tarkibiy qismlarni aniqlash

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8). Eigen yukining mutlaq qiymati qanchalik yuqori bo'lsa, birikmalarning estrogen indekslariga ta'siri shunchalik yuqori bo'ladi.

Cistanche xromatogrammalari va standart namunalar bir xil LC-MS sharoitida alohida komponentlarni aniqlash uchun solishtirildi. 1-jadvalda ko'rsatilganidek, saqlash vaqti va MS ma'lumotlari [24-26] asosida jami 26 ta tarkibiy qism aniqlangan. Faol moddalar monomerlar emas, balki aralashmalar shaklida og'iz orqali qo'llaniladi, chunki an'anaviy xitoy tibbiyoti terapevtik rol o'ynash uchun aralashma shaklida. Alohida-alohida ajratilganidan keyin bitta birikma rol o'ynashi topilmadi. Bizning maqsadimiz Cistanche [23-30] ning ma'lum komponentlarida estrogenik faollikka ega bo'lgan birikmalarni aniqlashdir va shuning uchun ularning identifikatorini tasdiqlash uchun NMR va boshqa texnik vositalar tanlanmagan. 1-cho'qqi m/z nisbati 373 (C16H22O10) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu genipozid kislotasining elementar tarkibi bilan bir xil edi. Bu m/z nisbati 211 boʻlgan fragment ionini hosil qilgan glyukoza qismining yoʻqolishi bilan tasdiqlandi. 2-choʻqqisi m/z nisbati 461 (C20H30O12) boʻlgan, elementar tarkibi bilan bir xil boʻlgan ustun deprotonlangan ionni koʻrsatdi. m/z nisbati 315 boʻlgan fragmentatsiyani hosil qiluvchi ramnosil qismining yoʻqolishi bilan qoʻllab-quvvatlandi. 4-choʻqqi m/z nisbati 375 (C16H24O10) bilan bir xil boʻlgan ustun deprotonlangan ionni koʻrsatdi. 8-epilogan kislotaning elementar tarkibi. Glyukoza qismining yo'qolishi, m / z nisbati 213 bo'lgan parchalanishni tashkil etdi, bu xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. Peak 6 m/z nisbati 607 (C29H36O14) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu syringalid A3'- - l-ramnopiranozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi.

m/z nisbati 445 ga teng bo'lgan fragment ionini hosil qilgan kofe qismining yo'qolishi xulosani yanada mustahkamladi. 8 cho'qqisi m/z nisbati 799 (C36H48O20) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu sistanozid A ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Kofe qismining yo'qolishi m/z nisbati 637 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, xulosani yanada qo‘llab-quvvatladi. 11-cho'qqisi m/z nisbati 487 (C21H28O13) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu sistanozid F ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Bu m/z bilan fragment ionini hosil qiluvchi ramnosil qismining yo'qolishi bilan tasdiqlandi. nisbati 341, va boshqa kofe qismining yo'qolishi 179 m / z nisbati bo'lgan fragment ionini hosil qildi, bu xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. 12 cho'qqisi m/z nisbati 813 (C37H50O20) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu sistanozid B ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Glyukoza qismining yo'qolishi m/z nisbati 651 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, xulosani yanada qo‘llab-quvvatladi. 13 cho'qqisi m/z nisbati 827 (C37H48O21) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu tubulozid A ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ramnosil qismining yo'qolishi m/z nisbati 681 bo'lgan fragmentatsiyani hosil qildi. xulosani qo‘llab-quvvatladi. Peak 14 m/z nisbati 637 (C30H38O15) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu tsistanozid C ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ramnosil qismining yo'qolishi m/z nisbati 491 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, xulosani yanada qo‘llab-quvvatladi.

Peak 15 m/z nisbati 591 (C29H36O13) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu osmantusid B ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ramnosil qismining yo'qolishi m/z nisbati 445 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, xulosani yanada qo‘llab-quvvatladi. 16 cho'qqisi m/z nisbati 623 (C29H36O15) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu akteozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. m/z nisbati 461 bo'lgan fragment ionini hosil qilgan kofe qismining yo'qolishi xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. Peak 18 m/z nisbati 623 (C29H36O15) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu izoakteozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Caff qismining yo'qolishi, forepeak 15 m/z nisbati 591 (C29H36O13) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu osmantuzid B ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ramnosil qismning yo'qolishi bilan fragment ioni hosil bo'ldi. m/z nisbati 445, bu xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. 16 cho'qqisi m/z nisbati 623 (C29H36O15) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu akteozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. m/z nisbati 461 bo'lgan fragment ionini hosil qilgan kofe qismining yo'qolishi xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. Peak 17 m/z nisbati 623 (C29H36O15) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu sis-akteozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. m/z nisbati 461 ga teng bo'lgan ion parchasini hosil qilgan kofe qismining yo'qolishi xulosani yanada mustahkamladi. 21 cho'qqisi m/z nisbati 653 (C30H38O16) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu kampneozid Ⅰ ning elementar tarkibi bilan bir xil edi.

Caff qismining yo'qolishi m/z nisbati 491 bo'lgan fragment ionini hosil qildi va boshqa ramnosil qismining yo'qolishi m/z nisbati 345 bo'lgan fragment ionini hosil qildi va bu xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. Peak 22 m/z nisbati 665 (C31H38O16) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu tubuloside B ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. CH3 CO qismining yo'qolishi m/z nisbati 623 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, va boshqa kofe qismining yo'qolishi m/z nisbati 461 bo'lgan fragment ionini hosil qildi va bu xulosani qo'llab-quvvatladi. Peak 23 m/z nisbati 639 (C29H36O16) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu kampneozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. m/z nisbati 493 bo‘lgan fragment ionini hosil qilgan ramnosil qismining yo‘qolishi xulosani yanada mustahkamladi. Peak 24 m/z nisbati 665 (C31H38O16) bo'lgan ustun deprotonatsiyalangan ionni ko'rsatdi, bu 2'-asetillakteozidning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ac qismining yo'qolishi, m/z nisbati 623 bo'lgan fragment ionini hosil qildi va boshqa kofe qismining yo'qolishi 461 m / z nisbati bo'lgan fragment ionini hosil qildi va bu xulosani yanada qo'llab-quvvatladi. 25 cho'qqisi m/z nisbati 445 (C20H30O11) bo'lgan ustun deprotonlangan ionni ko'rsatdi, bu sistanozid G ning elementar tarkibi bilan bir xil edi. Ramnosil qismining yo'qolishi m/z nisbati 299 bo'lgan fragment ionini hosil qildi, xulosani yanada qo‘llab-quvvatladi. Aralashmalarning tuzilmalari 2-rasmda keltirilgan.

3.3 PCA

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9). Bu cho'qqilar quyidagilar edi: 9, 12, 14 va 15. Shunday qilib, estrogen faolligi uchun reprezentativ o'zgaruvchilar sifatida echinacoside, cistanoside B, osmanthuside B va acteosid, jami 4 ta cho'qqiga mos keladigan tanlanganlar (3-rasm).

.

3.4 Estrogen faolligini aniqlash

Bachadon ho'l vaznining har bir sichqonchaning tana vazniga nisbati hisoblab chiqilgan (4-rasm). To'qqizta yashash joyidan Cistanche ta'siriga uchragan hayvonlar, bo'sh nazorat guruhidagi sichqonlar bilan solishtirganda, bachadon og'irligini oshirib, sezilarli estrogenik faollikni namoyish etdilar. 4-rasmda Cistanche bilan davolash qilingan sichqonlarning zardobi bilan ishlov berilgan MCF7 hujayralarining ko'payish tezligi ko'rsatilgan. O'nta yashash joyidan Cistanche yuborilgan sichqonlarning zardoblari bilan ishlov berilgan hujayralar davolashdan mahrum bo'lgan hujayralar bilan solishtirganda sezilarli darajada yuqori o'sishni ko'rsatdi.

3.5 Ikki o‘zgaruvchanlik tahlili

Ushbu tadqiqotda biz balog'atga etmagan Kunming urg'ochi sichqonlarining bachadon og'irligi oshganini va MCF7 inson ko'krak saratoni hujayralarining ko'payishini kuzatdik. Ushbu topilmalar Cistanche ning estrogenik faolligini tasdiqladi. 5-rasmda ushbu tarkibiy qismlarning bachadon indekslari va MCF7 hujayralarining ko'payish tezligi ko'rsatilgan. Namunalarning estrogenik faolligiga mos keladigan nisbiy tepalik hududlarini hisoblash uchun Pearson korrelyatsiya koeffitsienti ishlatilgan. 0.3 dan yuqori korrelyatsiya koeffitsientlari muhim deb topildi (p < 0.05),="" 0.5="" dan="" yuqori="" korrelyatsiya="" koeffitsientlari="" esa="" sezilarli="" (p)="">< 0,01).="" natijalarga="" ko'ra,="" cistanche="" estrogenik="" faollikka="" ega="" ekanligi="">

Jami to'qqizta birikma bachadon og'irligining oshishi bilan sezilarli darajada bog'liq (p < {{0}}.05),="" o'nta="" birikma="" esa="" mcf7="" hujayrali="" proliferatsiyasi="" bilan="" sezilarli="" darajada="" bog'liq="" (p=""><0,05). bachadon="" og'irligi="" va="" hujayra="" proliferatsiyasi="" bilan="" sezilarli="" darajada="" bog'liq="" bo'lgan="" birikmalar:="" 8-epilogan="" kislotasi,="" salidrozid,="" syringalid="" a3'-="" -="" l-ramnopiranozid,="" sistanozid="" a,="" sistanozid="" b,="" sistanozid="" c,="" osmantusid="" b,="" akteozid,="" izoaktozid.="" b,="" 2'-asetilakteozid="" va="" ikkita="" noma'lum="" birikma="" (5-rasm).="" ushbu="" o'n="" uchta="" birikma="" estrogenik="" ta'sir="">

3.6 Kulrang korrelyatsiyani tahlil qilish usuli

6-rasmda 26 ta birikmaning xarakterli cho'qqilarining bachadon indekslari bilan nisbiy bog'liqligi ko'rsatilgan va 7-rasmda 26 ta birikmaning xarakterli cho'qqilarining hujayra ko'payish tezligi bilan nisbiy bog'liqligi ko'rsatilgan. Hammasi bo'lib uchta birikma bachadon indekslari bilan eng yuqori korrelyatsiyani ko'rsatdi, ya'ni 8-epilogan kislotasi, sistanozid F va akteozid (6-rasm, kamayish tartibida); MCF7 hujayra proliferatsiyasi bilan eng yuqori korrelyatsiyani ko'rsatadigan oltita birikma echinacoside, cistanoside F, cistanoside B, osmanthuside B, isoacteosid va tubuloside B edi (7-rasm, kamayish tartibida). Ekinakozid, osmantusid B, akteozid va izoakteozidning nisbiy korrelyatsiyasi 0.5 dan yuqori edi.

3.7 LC-MS shartlarini optimallashtirish

Yaxshiroq xromatogramma xaritasini olish uchun metanol va asetonitril solishtirildi. Nihoyat, suvli chumoli kislotasi (0,2 foiz, v/v) birikmasi - asetonitril ajratish uchun eng yaxshi mobil faza bo'ldi. Toʻliq toʻlqin uzunligi 200-400nm skanerlash oraligʻida 254nm optimal deb tanlandi. Bundan tashqari, MS parametrlari ham yaxshilandi. Salbiy ionlarni skanerlash rejimi tanlangan, chunki u Cistanche tarkibidagi aksariyat ingredientlarning javob qiymatlarini yaxshilagan.

4 Xulosa

LC-Q-TOF-MS texnologiyasi Cistanchening estrogenik faol tarkibiy qismlarini aniqlash uchun ishlatilgan. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, 8-epiloganik kislota, salidrozid, syringalidA3'- -l-ramnopiranozid, sistanozid A, echinakozid, sistanozid F, sistanozid B, sistanozid C, osmantusid B, akteozid, izoakteozid, B, 2'-asetilakteozid va ikkita noma'lum birikma Cistanchening asosiy faol tarkibiy qismlari edi. Biroq, bu topilmalar in vivo ta'sirini va tarkibiy qismlarning ta'sir qilish mexanizmini o'rganish uchun qo'shimcha tadqiqotlarni talab qiladi.

Minnatdorchilik:

Ushbu loyiha Xitoy Milliy Tabiiy Fanlar Jamg'armasi (No 81073015), Heilongjiang provintsiyasi Tabiat ilmiy jamg'armasi (ZD2017014) va Heilongjiang provintsiyasidagi kollejning yosh innovatsion iste'dodlarni tayyorlash rejasi (UNPYSCT-2017209) tomonidan qo'llab-quvvatlandi. . Mualliflar ushbu maqolani chop etishda manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qiladilar.

Ma'lumotnomalar

[1] Vang Z., Xia Q., Liu X., Liu V., Huang V., Mei X., Luo J., Shan M., Lin R., Zou D., Ma Z., fitokimyo, farmakologiya , Forsythia suspensa (Thunb.) Vahlning sifat nazorati va kelajakdagi tadqiqotlari: sharh, J. Ethnopharmacol., 2018, 210, 318- 339.

[2] Shu Y., Liu Z., Chjao S., Song Z., Xe D., Vang M., Zeng X., Lu C., Lu A., Liu Y., qo'llaniladigan integratsiyalashgan va global psevdotargeted metabolomik strategiyasi Sitrus TCMlarining sifat nazorati belgilarini skrining qilish, Anal. Bioanal. Chem., 2017, 409(20), 4849-4865.

[3] Yang B., Vang Y., Shan L., Zou J., Vu Y., Yang F., Chjan Y., Li Y., Chjan Y., roman va amaliy xromatografik "barmoq izi-ROC-SVM" " An'anaviy xitoy tabobati in'ektsiyalarining sifatini tahlil qilishda qo'llaniladigan strategiya: KuDieZi in'ektsiyasidan misol sifatida foydalanish, Molecules., 2017, 22

(7). PII: E1237.[4] Zhuo L., Peng J., Zhao Y., Li D., Xie X., Tong L., Yu Z., Ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi barmoq izlari o'rtasidagi munosabatlarga asoslangan QiShenYiQi tomchilatib yuboriladigan tabletkalarning bioaktiv sifat nazorati belgilarini skrining qilish. va qon tomirlarini himoya qilish faoliyati, J. Sentyabr Sci., 2017, 40 (20), 4076-4084.

[5] Liu N., Li J., Li BG, Xitoy tibbiyoti sifatini nazorat qilishda ko'p o'lchovli statistik tahlil va fikrlashni qo'llash, Zhongguo. Zhong. Yao. Za. Ji., 2014, 39

(21), 4268-4271.

[6] Wang DD, Liang J., Yang WZ, Hou JJ, Yang M., Da J., Wang Y., Jiang BH, Liu X., Wu WY, Guo DA, HPLC/qTOF-MS yo'naltirilgan xarakterli komponentlar ma'lumotlari murakkab TCM preparatlarining yaxlit sifatini nazorat qilish uchun to'plam va kimyometrik tahlil: Niuhuang Shangqing hapiga misol sifatida, J. Pharm. Biomed. Tahlil., 2014, 89, 130-141. [7] Hernaez R., Thrift AP, Yuqori salbiy prognozli qiymat, past tarqalganlik va spektr effekti: izohlashda ehtiyotkorlik, Clin. Gastroenterol. Gepatol., 2017, 15(9), 1355-1358.

[8] Liang J., Chen Y., Ren G., Dong V., Shi M., Xiong L., Li J., Dong J., Li F., Yuan J., Euodia rutaecarpada gepatotoksik komponentlarni tekshirish UHPLC-QTOF/MS Spektr-toksiklik munosabatlariga asoslangan holda, molekulalar., 2017, 22(8). PII: E1264.

[9] Li V., Sun X., Liu B., Chjan L., Fan Z., Ji Y., spektr-ta'sir munosabatlari va UPLC-Q-TOFMS asosida Evodia rutaecarpadagi gepatotoksik komponentni skrining va identifikatsiya qilish, Biomed. . Chromatogr., 2016, 30(12), 1975-1983.

[10] Chopard G., Puyraveau M., Binetruy M., Meyer A., ​​Vandel P., Magnin E., Berger E., Galmiche J., Mauny F., Spektr effekti va skrining sinovi ishlashida spektrning tarafkashligi Amnestik engil kognitiv buzilish: Klinik ta'sirlar qanday?, J. Altsgeymerlar. Dis., 2015, 48(2), 385-393.

[11] Xu GL, Xie M., Yang XY, Song Y., Yan C., Yang Y., Chjan X., Liu ZZ, Tian YX, Vang Y., Jiang R., Liu WR, Vang XH, She GM, Spektr-ta'sir munosabatlari an'anaviy xitoy tibbiyot tadqiqotiga tizimli yondashuv sifatida: hozirgi holat va kelajak istiqbollari, Molecules., 2014, 19(11), 17897-17925.

[12] Chjen Q., Chjao Y., Vang J., Liu T., Chjan B., Gong M., Li J., Liu X., Xan B., Chjan Y., Song X., Li Y. , Xiao X., UPLC barmoq izlari va Aconitum carmichaelii Debeaux (Fuzi) ning xom ikkilamchi ildizlarining bioaktivligi va uning uchta qayta ishlangan mahsuloti mitoxondriyal o'sish va kanonik korrelyatsiya tahlili o'rtasidagi spektral ta'sir munosabatlari, J. Ethnopharmacol., 2014,153() , 615-623.

[13] Shi Z., Liu Z., Liu C., Vu M., Su X., Ma X., Zang Y., Vang J., Chjao Y., Xiao X., Kimyoviy barmoq izlari orasidagi spektr-effekt aloqalari va Lonicerae Japonicae Flos va Lonicerae Flos bazasining UPLC va Mikrokalorimetriyaga qarshi antibakterial ta'siri, Front. Pharmacol., 2016, 7, 12.

[14] Usher-Smit JA, Sharp SJ, Griffin SJ, xavfni bashorat qilish, skrining va diagnostika testlarida spektr effekti, BMJ, 2016, 353, i3139.

[15] Chen Y., Yu H., Vu X., Pan Y., Vang K., Liu L., Jin Y., Chjan C., Flos Sophoraedagi umumiy flavonoidlarni spektr boʻyicha isitish mahsulotlaridan yangi gemostatik birikmalarni kuzatish -effekt munosabatlari va ustun xromatografiyasi, J. Sentyabr Sci., 2015, 38(10), 1691-1699.

[16] Liu X., Vang XL, Vu L., Li X., Qin KM, Cai H., Pei K., Liu T., Cai BC, Da-Huang-Fu-ning spektr-ta'sir munosabatlarini tekshirish UHPLC-ESI-Q-TOF-MS usuli bilan kalamushlarda Zi-Tang, J. Ethnopharmacol., 2014, 154(3), 606-612.

[17] Xie RF, Zhou X., Shi ZN, Li YM, Li ZC, Rhizoma Rhei, korteks Magnoliae Officinalis, Fructus Aurantii Immaturus va ularning formulasining spektral ta'sir munosabatlarini o'rganish, J. Chromatogr. Sci., 2013, 51(6), 524-532. [18] Li F., Yang X., Yang Y., Guo C., Chjan C., Yang Z., Li P., Ovariektomizatsiya qilingan kalamushlarda echinakozidning antiosteoporotik faolligi, Fitomeditsina., 2013, 20(6), { {9}}.

[19] Xiong WT, Gu L., Vang C., Sun HX, Liu X., 2-toifa diabetik DB / DB sichqonlarida Cistanche tubulosa ning anti-giperglisemik va hipolipidemik ta'siri, J. Ethnopharmacol., 2013, 150 (3) , 935- 945.

[20] Morikava T., Ninomiya K., Imamura M., Akaki J., Fujikura S., Pan Y., Yuan D., Yoshikava M., Jia X., Li Z., Muraoka O., Asillangan feniletanoid glikozidlar , Cistanche tubulosa dan echinacoside va acteoside, sichqonlarda glyukoza bardoshliligini yaxshilash, J. Nat. Med., 2014, 68(3), 561-566.

[21] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Chjao MB, Jiang Y., Tu PF, Tarim cho'lida yetishtirilgan Cistanche deserticola poyalaridan yallig'lanishga qarshi ta'sirga ega feniletanoid glikozidlar, Fitoterapia., 2013, 89, {{4] }}.

[22] Lu D., Chjan J., Yang Z., Liu X., Li S., Vu B., Ma Z., Cistanches Herba ning yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasidan foydalangan holda miqdoriy tahlili, shuningdek, diodlar qatorini aniqlash va yuqori kimyometrik usullar bilan birlashtirilgan rezolyutsiya massa spektrometriyasi, J. Sep. Sci., 2013, 36 (12), 1945-1952.

[23] Xan L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Chjan Y., Li V., Song X., Fu F., Gao X., Cistanches deserticola YC Ma dan feniletanoid glikozidlarning strukturaviy tavsifi va identifikatsiyasi. UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochem. Tahlil., 2012, 23(6), 668-676.

[24] Xiang Y., Jing Z., Haixia V., Ruitao Y., Huaixiu V., Zenggen L., Lijuan M., Yiping V., Yanduo T., Lagotis brevituba Maximdan ajratilgan fenilpropanoidlarning antiproliferativ faolligi, Fitoter . Res., 2017, 31(10), 1509-1520.

[25] Yan Y., Song Q., Chen X., Li J., Li P., Vang Y., Liu T., Song Y., Tu P., Keng qutblilik va tarkib diapazoniga ega boʻlgan komponentlarni bir vaqtda aniqlash. Cistanche tubulosa ketma-ket bog'langan teskari faza-gidrofil o'zaro ta'sir kromatografiyasi-tandem massa spektrometriyasidan foydalangan holda, J. Chromatogr. A., 2017, 1501, 39-50.

[26] Zou P., Song Y., Lei V., Li J., Tu P., Jiang Y., turli qismlarni diskriminatsiya qilish uchun 1H NMR-ga asoslangan metabolomikani qo'llash va Cistanche deserticola uchun yangi ishlov berish ish oqimini ishlab chiqish, Acta. Farm. Gunoh. B., 2017, 7(6), 647-656.

[27] Pan YN, yangi Cistanche tubulosa tarkibiy qismlari va bioaktivligi bo'yicha tadqiqotlar, Ph.D. dissertatsiya, Shenyang farmatsevtika universiteti, Shenyang, Xitoy, 2011 yil.

[28] Cui Q., ​​Pan Y., Xu X., Chjan V., Vu X., Qu S., Liu X., inson yoki kalamush ichak bakteriyalari yoki in vitro ichak fermenti tomonidan ishlab chiqarilgan akteozidning metabolik profili UPLC qo'llaniladi. Q-TOF–MS, Fitoterapiya., 2016, 109, 67-74.

[29] Cui Q., ​​Pan Y., Bai X., Chjan V., Chen L., Liu X., Cistanche tubulosa dan echinakozid va akteozid metabolitlarining kalamush plazmasi, safro, siydik va najasga asoslangan tizimli tavsifi. UPLC-ESI-Q-TOF-MS, Biomed. Chromatogr., 2016(9), 1406-1415.

[30] Cui Q., ​​Pan Y., Yan X., Qu B., Liu X., Xiao V., Ultra yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasidan foydalangan holda kalamushlarda izoakteozidni og'iz orqali yuborishda yomon bioavailabilityga olib keladigan tegishli to'siqlarni tekshirishning metabolik usuli. Quadrupole parvoz vaqti tandem massa spektrometriyasi, Tez. Kommun. Mass. Spektr., 2017(4), 371-380.