Inson amniotik mezenximali ildiz hujayralari ichak mikrobiotasi va ichak immuniteti o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarni tartibga solish orqali Allo-HSCTdan keyin AGVHDni engillashtiradi.
Oct 18, 2023
Abstrakt
Allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasidan so'ng o'tkir graft-xost kasalligi (aGVHD) eng og'ir muammolardan birini keltirib chiqaradi. Ichak mikrobiotasi disbiyozi aGVHD bilan davom etishi mumkin va mezenximal ildiz hujayralari (MSC) aGVHD uchun istiqbolli terapevtik salohiyatga ega. Biroq, aGVHDni yumshatish paytida hAMSClar ichak mikrobiotasiga ta'sir qiladimi yoki yo'qmi noma'lumligicha qolmoqda. Shunga ko'ra, biz aGVHDda ichak mikrobiotasini va ichak immunitetini tartibga soluvchi inson amniotik membranasidan olingan MSCs (hAMSC) ning ta'siri va asosiy mexanizmlarini aniqlashga harakat qildik. Sichqonchaning insoniylashtirilgan aGVHD modellari va hAMSC davolashni o'rnatish orqali biz hAMSCs aGVHD simptomlarini sezilarli darajada yaxshilaganini, T hujayralarining pastki to'plamlari va sitokinlarining immun muvozanatini o'zgartirganini va ichak to'sig'ini tiklaganini aniqladik. Bundan tashqari, hAMSCs bilan davolash natijasida ichak mikrobiotasining xilma-xilligi va tarkibi yaxshilandi. Spearmanning korrelyatsiya tahlili shuni ko'rsatdiki, ichak mikrobiotasi va qattiq birikma oqsillari, immun hujayralari va sitokinlar o'rtasida korrelyatsiya mavjud. Bizning tadqiqotimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSClar ichak mikrobiotasini normalizatsiya qilish va ichak mikrobiotasi va ichak to'sig'i, immunitet o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarni tartibga solish orqali aGVHD ni engillashtiradi.
Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi
Kalit so'zlar
O'tkir greft-xost kasalligi · Amniotik mezenxima ildiz hujayralari · Ichak mikrobiotasi · Ichak to'sig'i · Ichak immuniteti
Kirish
Allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasining (allo-HSCT) asosiy afzalligi - bu bemor va bemor o'rtasidagi genomik polimorfizmlardagi farqlardan kelib chiqadigan peptidlarni tanib olish natijasida yuzaga keladigan greftga qarshi leykemiya (GVL) ta'siri tufayli kuchli o'smaga qarshi javobdir. donor. Biroq, o'tkir greftga qarshi xost kasalligi (aGVHD) allo-reaktiv donor T-hujayralarining hujumi tufayli retsipient to'qimalarining shikastlanishining rivojlanishi atrofida aylanadi va alloHSCTda hayot uchun xavfli asosiy asoratdir [1, 2]. Ichak mikrobial buzilishi yallig'lanish reaktsiyalarini keltirib chiqarishi va yallig'lanish bilan bog'liq kasalliklar bilan bog'liqligi haqida xabar berilgan [3, 4]. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ichak mikrobiotasidagi buzilishlar allo-HSCTdan keyin aGVHD ni qo'zg'atuvchi muhim omil bo'lib, davolashning yangi maqsadiga aylanadi [5, 6]. Xususan, aGVHDda ichak mikrobiotasi disbiyozi odatda ichak bakterial xilma-xilligini yo'qotish va opportunistik patogenlarning ko'payishi bilan tavsiflanadi [6]. Oshqozon-ichak traktining GVHD da buzilgan shilliq qavat tolerogen regulyator T- hisobiga patogen tip-1 va{20}} paradigmalar bo'yicha T-hujayralarining differentsiatsiyasi bilan yakunlangan xost antijeni taqdim qiluvchi hujayralar va donor T hujayralarining faollashuvini boshlaydi. hujayra naqshlari [7]. Asosan 16S ribosomali RNK (16S rRNK) sekvensiyasi asosida ichak mikrobiotalarining koʻp turlari GVHD bilan bogʻlanganligini koʻrsatdi va masalan, butirat ishlab chiqaruvchi klostridiyalar epitelial toʻsiq funksiyasini saqlab turish va oʻtkir GVHD ning susayishi bilan bogʻliq. ]. So'nggi o'n yillikda mezenximal ildiz hujayralari (MSC) o'z-o'zini yangilash va ko'p qatorli differentsiatsiya potentsiallari, shuningdek, immunomodulyatorlik xususiyatlari tufayli katta e'tibor qozondi [9]. MSClar kuchli yallig'lanish mavjud bo'lganda muvozanatli yallig'lanish va regenerativ mikro-muhitdan shikastlangan to'qimalarni ta'minlaydi deb ishoniladi va immunitetga asoslangan kasalliklarni davolashda keng qo'llaniladi, bunda eng muvaffaqiyatli klinik qo'llanilishi GVHD davolashda ishtirok etadi [10]. Inson amniotik mezenximali ildiz hujayralari (hAMSCs) embrion ildiz hujayralariga o'xshash differentsiatsiya qobiliyatiga va kattalardagi ildiz hujayralariga o'xshash immunomodulyatorlik xususiyatlariga ega bo'lgan perinatal ildiz hujayralaridir. Oddiy MSClarga o'xshash fenotiplarni almashish, hAMSC'lar to'qimalarni olishning qulayligi, invaziv bo'lmaganligi va xavfsizligi, ko'p hujayra hosildorligi va boshqa manbalardan olingan ildiz hujayralari bilan solishtirganda juda past axloqiy va axloqiy nizolar tufayli ildiz hujayralarining istiqbolli manbasiga aylandi. Inson AMSC'lari past immunogenlik va o'simtaning yo'qligi afzalliklariga ega, bu ularni hujayra terapiyasi uchun ideal hujayra manbai qiladi [11, 12]. In vitro tajribalari shuni tasdiqladiki, hAMSClar suyak iligidan olingan MSClarga qaraganda yuqori proliferativ qobiliyat va ko'proq uzoq muddatli o'sish qobiliyatini namoyish etadi [13, 14]. Ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, hAMSClar ko'plab yallig'lanish kasalliklarini, shu jumladan yallig'lanishli ichak kasalligi, osteoartrit va otoimmün kasalliklarni yaxshilash potentsialiga ega. Bizning yaqinda o'rganishimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSClar T effektor va Treg hujayralarining muvozanatini tartibga solish orqali aGVHD ni yaxshilagan [15]. Biroq, hAMSClarning GVHDdagi ichak mikrobial buzilishiga ta'siri va mexanizmi noma'lum. Bu erda biz hAMSC ning aGVHD va ichak mikroekotizimiga potentsial ta'sirini o'rganishni maqsad qilganmiz. Bu aGVHD ni hAMSC davolashdan keyin ichak mikrobiotasini va uning ichak immuniteti bilan bog'liqligini ochib beradigan birinchi tadqiqot bo'ladi.
Materiallar va usullar
HAMSClarning izolyatsiyasi, madaniyati va identifikatsiyasi
HAMSClar ilgari tasvirlanganidek ekstraksiya qilingan [15]. Uchinchi o'tish (P3) hujayralari CD34 (581, BD Pharmingen, AQSh), CD45 (HI30, BD Pharmingen, AQSh), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingenga qarshi antikorlar bilan bo'yash orqali fenotip identifikatsiyasidan olingan. , AQSh), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, AQSH), CD90 (5E10, BD Pharmingen, AQSH), CD73 (AD2, BD Pharmingen, AQSh) va CD105 (SN6, bioscience, AQSH) va keyin oqim sitometri bilan tahlil qilingan ( BD FACS Canto II). Hujayralar o'ziga xos induksion muhit (BGscience, Xitoy) yordamida ularning ko'p naslli farqlanishi uchun tekshirildi va mos ravishda adipogenez va osteogenik differentsiatsiya uchun Oil Red-O va Alizarin Red bilan bo'yaldi. Tajribalar uchun 3 dan 6 gacha bo'lgan hAMSClar ishlatilgan.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Inson PBMCs to'plami
Plazma namunalari yozma roziligi bilan sog'lom ko'ngillilardan sotib olindi. Inson periferik qon mononuklear hujayralari (PBMCs) Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Xitoy) zichligi santrifüjlash orqali periferik qondan ajratilgan, PBS bilan yuvilgan, qizil qon lizis tamponida (Solarbio, Xitoy) 4 daraja 15 daqiqa davomida to'xtatilgan. Yana yuving va keyin NPG sichqonlariga quyruq venasini yuborish uchun PBSda to'xtating.
Sichqoncha
8-10 haftalik va 25-30 g erkak va urg'ochi NPG sichqonlari Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd.dan sotib olindi va SPF sharoitida 12 soat yorug'lik-qorong'u tsiklda doimiy harorat va namlik bilan o'stirildi. Hayvonlarning barcha protseduralari Janubiy Tibbiyot Universitetining Hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish bo'yicha institutsional qo'mitasi (No L2019132) tomonidan Xitoyning Milliy sog'liqni saqlash va tibbiy tadqiqot kengashining hayvonlarni eksperiment qilish bo'yicha ko'rsatmalariga muvofiq tasdiqlangan.
O'tkir GVHD hayvon modeli va davolash
aGVHD sichqoncha modeli avval tavsiflanganidek yaratilgan [15]. Davolash uchun har bir sichqoncha uchun 5 × 105 hAMSC (bu erda hAMSCs guruhi) va PBS (bu erda aGVHD guruhi) transplantatsiyadan keyingi uchinchi kuni har bir sichqonchaga quyruq venasi orqali AOK qilingan. Sichqonchaning barcha modellarida sichqonlar har ikki kunda kasallanish va vazn o'zgarishi uchun tekshirildi. Har bir sichqonchani vazn yo'qotish, bukilgan holat, jingalak mo'yna, teri lezyonlari, harakatchanlikning pasayishi va diareya kabi patologik xususiyatlar uchun ball oldi va keyin Kuk [16] tomonidan tasvirlangan aGVHD klinik baholash tizimiga muvofiq baholandi. Ba'zi hollarda, aGVHD guruhidagi sichqonlar og'ir aGVHD bilan kasallangan va davolashdan keyingi uchinchi kuni hAMSCs guruhidagi sichqonlar periferik qon va maqsadli organlarni, shu jumladan jigar, taloq, o'pka va ichaklarni yig'ish uchun qurbon qilingan. Ushbu sichqonlarning najaslari qurbonlik qilishdan oldin yig'ilgan.
GFP bilan belgilangan hAMSC va in vivo kuzatish
GFP etiketli hAMSClar o'rnatildi va ilgari tasvirlanganidek aniqlandi [15]. Qisqacha aytganda, biz yashil floresan oqsil (GFP) genini vektor sifatida lentivirus bilan hAMSClarga transfektsiya qildik. 500 mL PBSda to'xtatilgan 5 × 105 GFP etiketli hAMSC'lar aGVHD sichqonlariga quyruq venasi orqali AOK qilingan. 24 soat va 72 soatdan keyin sichqonlar ichaklarni yig'ish uchun evtanizatsiya qilindi va keyin muzlatilgan bo'laklarni hosil qildi. Qabul qiluvchi hujayralarni farqlash uchun DAPI qarshi bo'yash ishlatilgan.
Gistopatologik baholash
aGVHD maqsadli organlar o'lim vaqtida yig'ildi va keyin gematoksilin va eozin bo'yash (H&E) uchun 5-mkm qalinlikdagi bo'laklarni yaratish uchun kerosin o'rnatilgan bloklarga ishlov berildi. Gistologik ko'rsatkichlar to'qimalar strukturasini yo'q qilish va limfotsitlar infiltratsiyasi asosida baholandi [17]. Immunohistokimyo uchun bo'limlar endojen peroksidaza faolligini inaktivatsiya qilish uchun 20 daqiqa davomida metanolda 3% H2O2 bilan deparafizatsiyalangan, regidratlangan va ishlov berilgan. Keyin bo'limlar antigen olishdan o'tkazildi va 1 soat davomida sarum albumin bilan ishlov berildi. Keyinchalik, bo'limlar quyonning insonga qarshi CD45 antikorlari (EP322Y, Abcam, Angliya) yoki ZO-1 antikorlari ((EPR19945-296, Abcam, Angliya) bilan 37 darajada 1 soat davomida inkubatsiya qilindi. antikorlar HRP-konjugatsiyalangan ikkilamchi antikor (Genentex, AQSH) bilan aniqlandi va DAB bilan vizualizatsiya qilindi.Ijobiy maydon Image J tomonidan tahlil qilindi.
cistanche o'simlik - immunitet tizimini oshiradi
Fekal mikrobiotaning 16S rRNK ketma-ketligi
Najas genomik DNKsi 0.1 g muzlatilgan najas namunalaridan EZNA® axlat DNK to'plami (Omega BioTek, Norcross, GA, AQSH) yordamida ishlab chiqaruvchining protokoli asosida chiqarildi. Shablon sifatida genomik DNKdan foydalanib, shtrix-kodlar va PremixTaq (TaKaRa, Xitoy) bilan maxsus primerlar (338F: 5′-ACTCCTACGGGGAGCAGCA-3' va 806R: 5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') kuchaytirildi. bakterial 16S rRNK genining V3-V4 giperoʻzgaruvchan hududlari. Amplifikatsiya va tozalashdan so'ng, FASTQ formatida xom ma'lumotlarni olish uchun namunaning butun genomi Magigene Technology Co., Ltd. (Guanchjou, Xitoy) tomonidan Illumina Hiseq yoki Miseq yuqori o'tkazuvchanlik sekvensiyasi platformasida ketma-ketlashtirildi. Ketma-ket ma'lumotlarni tahlil qilish asosan Magichand platformasi yordamida amalga oshirildi.
Oqimning sitometrik tahlili
Sichqonlarning aGVHD maqsadli organlari va periferik qonlari olingan va bitta hujayrali suspenziyaga tayyorlangan. Hujayralar CD3 (UCHT1, Biolegend, AQSH), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, AQSH), CD8 (RPA-T8, Biolegend, AQSH), CD25 (BC96, Biolegend, AQSh) yoki izotipga mos keladigan monoklonal antikorlar bilan bo'yalgan. IgG (eBioscience, AQSH) ni 30 daqiqa davomida xona haroratida qorong'i joyda nazorat qiling. Keyin hujayralar Lysing buferi (BD Pharm Lyse ™) bilan 4 daraja qorong'ida 15 daqiqa davomida qayta ishlandi. Hujayra ichidagi Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, AQSh) bo'yash ishlab chiqaruvchining tavsiyalariga muvofiq amalga oshirildi (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Keyin polikromatik oqim sitometrik tahlillari Oqim sitometrida o'tkazildi.
Sitokinlar miqdori
Sichqonlarning zardobidagi va to'qimalarining supernatantidagi sitokinlar darajasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 sitokinlar to'plami (BD Pharmingen, AQSH) yordamida aniqlandi. Qisqacha aytganda, supernatant namunalarining har biridan 50 mkl 50 mkl aralash Th1/Th2/Th17 sitokin tutqich boncuklari va 50 mkl inson Th1/Th2/Th17 PE aniqlash reagenti bilan qorong'uda xona haroratida inkubatsiya qilindi, so'ngra to'xtatildi. 3 soatdan keyin oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun.
Miqdoriy real vaqtda PCR
Trizol reagenti (TaKaRa, Xitoy) yordamida izolyatsiya qilingandan so'ng, umumiy RNK sichqonchaning yo'g'on ichak to'qimasidan olingan. Jami RNK cDNKni teskari transkripsiya qilish uchun shablon sifatida ishlatilgan. -aktin ichki ma'lumotnoma sifatida ishlatilgan. mRNK ifodasi qPCR yordamida quyidagi primerlar yordamida o‘lchandi: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' va ZO{5}}R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' va OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -aktin-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' va -aktin-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. RNK ifoda darajasini o'lchash uchun 2-ct usuli ishlatilgan.
Ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlili (ELISA)
Plazmadagi D-LA va DAO darajalari ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Elishay to'plamlari (Jingmei, Xitoy) yordamida o'lchandi. Qisqacha aytganda, to'plangan plazma supernatantlari mos ravishda 96-yaxshi maxsus antikor bilan qoplangan plastinkalarga joylashtirildi. Absorbsiya 450 nm da mikroplastinka o'quvchi (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific) yordamida qayd etilgan.
Statistik tahlil
Ma'lumotlar o'rtacha ± SD sifatida taqdim etildi. Mustaqil namunalar t-testi GraphPad Prism8 yordamida amalga oshirildi va vizualizatsiya qilindi.0. 16S rRNK ketma-ketligi ma'lumotlarini tahlil qilish Magichand platformasi yordamida amalga oshirildi (http% 3a//cloud.magigenecom/). Ichak mikrobiotasi va immunitet o'rtasidagi korrelyatsiya tahlili korrelyatsiya matritsasini ko'rsatish uchun R paketlari (v3.6.3) tomonidan o'tkazildi. P qiymatlari<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.
Natijalar
HAMSC ni aniqlash
HAMSC'lar madaniyatda ko'pburchak yoki fibroblastga o'xshash morfologiyani ko'rsatdi (1A-rasm) va MSC-ga xos bo'lgan CD90, CD105 va CD73 belgilarining sirt ifodasi uchun kuchli ijobiy, ammo CD34, CD45, HLA-DR va CD11b uchun salbiy edi (1-rasm). 1C). Ko'p qatorli differentsiatsiyaga kelsak, bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSCs adipotsitik va osteoblastik differentsiatsiyani ko'rsatdi (1B-rasm).
hAMSCs sichqonlarda aGVHD belgilarini sezilarli darajada engillashtirdi
Biz birinchi navbatda hAMSC ning aGVHD ga terapevtik ta'sirini baholadik. aGVHD guruhi bilan solishtirganda, hAMSCs aGVHD ni sezilarli darajada yaxshilagan, buning dalili sezilarli darajada kamaygan vazn yo'qotish (2B-rasm) va aGVHD klinik ko'rsatkichining pasayishi (2C-rasm). Bundan tashqari, hAMSCs guruhi aGVHD sichqonlari bilan solishtirganda ancha yuqori omon qolish darajasiga ega edi (2D-rasm). Patologik gistologik tahlil shuni ko'rsatdiki, aGVHD to'qimalarning jiddiy shikastlanishiga va leykotsitlar infiltratsiyasiga olib keldi. hAMSCs, H&E tomonidan ko'rsatilgandek, aGVHD maqsadli organlarda to'qimalarning buzilishi va ekzogen T hujayralarining infiltratsiyasini susaytirdi (2E-rasm). Izchil ravishda, IHC natijalari ham hAMSClarning g'ayritabiiy patologik ko'rinishlarni yaxshilaganligini tasdiqladi (2F-rasm). Ushbu natijalar hAMSC'larning aGVHD sichqonlarida aGVHD belgilarini yaxshilash potentsialiga ega ekanligini ko'rsatdi.
hAMSCs aGVHD sichqonlarida xost immunitetiga ta'sir ko'rsatdi
HAMSClar aGVHD ni kamaytiradigan asosiy immunomodulator mexanizmlarni tushunish uchun biz periferik qon va maqsadli organlarda T hujayralarining faollashishi va kengayishini o'lchadik. Oqim sitometriyasi tahlili shuni ko'rsatdiki, hAMSClar qon va maqsadli organlardagi CD3+CD4+T va CD{2}}CD8+T hujayralari sonini sezilarli darajada inhibe qilgan (3A-rasm, B). Bundan tashqari, hAMSCs guruhidagi sichqonlarning qondagi va maqsadli organlaridagi CD4+CD25+Foxp3+Tregs ulushi aGVHD guruhidagiga qaraganda ancha yuqori edi (3C-rasm). . Keyinchalik hAMSClarning sitokin profiliga ta'sirini o'rganib chiqdik (4-rasm). hAMSC qo'llanilishi aGVHD guruhiga nisbatan maqsadli organlar va qondagi IL-17A, IFN-, TNF, IL{12}} va IL-2 darajalarining aniq pasayishiga olib keldi, taloqdagi TNF darajasi bundan mustasno. Ayni paytda, jigardagi IL{14}} darajalariga qo'shimcha ravishda, hAMSC bilan davolash sichqonlarida maqsadli organlar va qonda IL-10 va IL-4 darajasi sezilarli darajada oshgan. Birgalikda hAMSC'lar T-hujayra pastki to'plamlarining immun muvozanatini va sitokin bo'ronini bartaraf etish orqali aGVHDda himoya rolini o'ynadi.
Cistanche tubulosa foydalari- immunitet tizimini mustahkamlash
Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing
【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
hAMSCs aGVHD sichqonlarida ichak to'sig'ining shikastlanishini yaxshilaydi
HAMSClar aGVHDda ichak to'sig'ini tiklay oladimi yoki yo'qligini tekshirish uchun biz birinchi navbatda hAMSClarning ichaklarga o'tishi mumkinligini kuzatdik. 5A-rasmda ko'rsatilganidek, GFP-belgilangan hAMSC'lar hAMSC'larga in'ektsiya qilinganidan keyin ichaklarda aniqlangan va ichaklarga o'ralishi va infiltratsiyasi mumkin edi. Keyin biz ingichka ichak to'qimasini gistopatologik baholashni ishlab chiqdik. aGVHD guruhida ichak eroziya va nekrozga uchragan, ichak villi aniq nobud bo'lgan, villi singan va massiv leykotsitlar ichak shilliq qavati, shilliq osti va lamina propriyaga infiltratsiya qilingan. Ichak villi muntazam ravishda tartibga solingan va hAMSCs davolashdan keyin ichak villusining sinishi yoki villi epiteliyning ajralishi kuzatilmagan (5B-rasm). Inson limfotsitlari infiltratsiyasi aGVHD guruhida ichaklarda immunohistokimyoviy usulda ham kuzatilgan, hAMSCs bilan davolash esa ularning infiltratsiyasini kamaytirishi mumkin (5C-rasm). HAMSClarning ichak shilliq qavatining yaxlitligiga himoya ta'sirini baholash uchun biz ZO-1 ga ta'sirini aniqlash uchun immunohistokimyoni o'tkazdik. HAMSC davolash guruhida ZO -1 qattiq birikma oqsilining ifoda darajasi aGVHD guruhiga nisbatan sezilarli darajada oshdi (5D-rasm). Shuningdek, ichak to'sig'i funktsiyasini va ichak o'tkazuvchanligini aniqlash uchun ichakning qattiq birikma oqsillari (TJs) va D-laktik kislota (D-LA) va diamin oksidaz (DAO) ning plazma darajasini mRNK ifodalash darajasini o'rganib chiqdik. Vena ichiga yuborilganda, hMASClar TJ ning asosiy oqsillari bo'lgan ZO -1 va Okcludinning mRNK ifoda darajasini sezilarli darajada oshirishi mumkin (5E, F-rasm), D-LA va DAO (5G-rasm, 5G-rasm) darajasini pasaytiradi, H). Shunday qilib, aGVHD paydo bo'lganda, ichak to'sig'i ichakning qattiq birikmasi oqsillarining kamayishi va ichak o'tkazuvchanligining oshishi bilan zararlangan. Shu bilan birga, hAMCSs ichak to'sig'ining buzilishini sezilarli darajada bekor qilishi mumkin.
1-rasm HAMSClarning fenotipik va funksional xarakteristikasi. (A) 0 o'tish joyidan 3 gacha bo'lgan hAMSClarning reprezentativ mikrograflari (bo'yashsiz, 100 ×). (B) hAM SClarning ko'p qatorli farqlash qobiliyati. HAMSClarning adipogenik tabaqalanishi (chapda) Oil Red-O bilan bo'yalgan va hAMSClarning osteoblastik farqlanishi (o'ngda) Alizarin Red (bo'yash, 100 ×) bilan bo'yalgan. (C) CD90, CD105 va CD73 uchun ijobiy hAMSC, CD34, CD45, CD11b va HLA-DR uchun manfiy ekanligini ko'rsatadigan oqim sitometrik tahlili
2-rasm hAMSC NPG sichqonlarida aGVHD ni engillashtirdi. (A) aGVHD sichqoncha modellarida hAMSClarni boshqarish jadvalini ko'rsatadigan sxematik diagramma. (B) Turli guruhlardagi tana vaznining o'zgarishi (n=10). (C) turli guruhlarda (n=10) aGVHD klinik ko'rsatkichi (vazn yo'qotish, egilgan holatda, jingalak mo'yna, terining shikastlanishi, harakatchanlikning pasayishi va diareya asosida). (D) Turli guruhlarda omon qolish (n=10). (E) H&E bo'yashining mikroskopik tasvirlari (400×) va gistologik ko'rsatkich (to'qimalarning tuzilishi va limfotsitlar infltratsiyasiga asoslangan) (n=4). (F) Immunohistokimyoning vakillik mikroskopik rasmlari (400 ×) va CD45 musbat maydonining nisbati (n =4). Qiymatlar o'rtacha±SD sifatida taqdim etildi
3-rasm hAMSC donor T-hujayra kengayishini inhibe qildi, shu bilan birga Treglarning hosil bo'lishini yoki in vivo kengayishini kuchaytirdi. (A) CD3+CD4+T hujayralari(n=6) oqim sitometriyasi tahlili, (B) CD3+CD8+ oqim sitometriyasi tahlili T hujayralari (n=6), (C) CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6) oqim sitometriyasi tahlili. Qiymatlar o'rtacha±SD sifatida taqdim etildi
4-rasm hAMSC yallig'lanishga qarshi sitokinlar IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 ni va yuqori tartibga solinadigan yallig'lanishga qarshi sitokinlar IL-10 va ILni kamaytiradi. -4 in vivo (n=5). Qiymatlar o'rtacha±SD sifatida taqdim etildi
aGVHD sichqonlarida hAMSC davolashdan keyin ichak mikrobiotalarining o'zgarishi
16S rRNK ketma-ketligi sichqonlarning turli guruhlaridan ajratilgan najasli bakteriyalar DNKida amalga oshirildi. OUT, Chao1 va Shannon indekslarini o'z ichiga olgan xilma-xillik indekslari shunga o'xshash tendentsiyalarni namoyon qildi va hAMSC davolash sichqonlari aGVHD guruhiga nisbatan ancha yuqori xilma-xillikka ega mikrobiotani o'z ichiga oldi (6A-rasm). Un vaznli-unifrac masofasi, Manxetten masofasi va Bray-Kurtis metrik masofasiga asoslangan asosiy koordinata tahlili (PCoA), farq muhim bo'lmaganiga qaramay, ikki guruhning uchastkalarida tarqalgan ma'lumotlar nuqtalarini berdi (6B-rasm). Keyinchalik, ikkala guruh o'rtasidagi potentsial tarkib farqini yanada o'rganish uchun ichak mikrobiotasi landshaftini baholadik. Jami 773 ta OTU hisoblab chiqilgan va hAMSC guruhi aGVHD guruhiga nisbatan yuqori OTUga ega (6C-rasm). Filum darajasidagi bakterial tarkibga ko'ra, Firmicutes va Bacteroides eng ko'p ustunlik qilgan ikkita filum edi (6D-rasm). Ikki guruh o'rtasida ichak mikrobiotasini tahlil qilish uchun taqqoslash issiqlik xaritasini ham tashkil qildik (6E-rasm). Odoribacter va Ruminococcus_1 jinsi ichak gomeostazini saqlash uchun muhim mikroblar bo'lgan hAMSCs guruhida nisbatan yuqori ko'pligini ko'rsatdi (6F, G-rasm). Qaysi bakteriya hAMSCs bilan davolash orqali o'zgartirilganligini va o'z navbatida aGVHD ga qarshi kasallikning rivojlanishiga ta'sir qilganligini tasdiqlash uchun biz ta'sir hajmining chiziqli diskriminant tahlili (LDA) (LEfSe) yordamida yuqori o'lchamli sinflarni taqqosladik, bu bakterial jamoalarning ustunligida sezilarli farqlarni aniqladi. ikki guruh. (6H, I-rasm) ko'rsatilganidek, Streptococaceae (oilasi va Streptococcus jinsi), Paludibacteraceae, F0058 va Delftia aGVHD guruhida ichak mikrobiota disbiyoziga hissa qo'shadigan bakteriyalarning asosiy turlari edi. Shunga qaramay, foydali bakteriyalar Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter va Clostridia (Clostridiales sinfi va tartibi) hAMSCs guruhida nisbiy boyitishni ko'rsatdi, bu hAMSCs vositachiligida aGVHD ning engillashishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Birgalikda, ichak mikrobiotalarining xilma-xilligi va tarkibi hAMSClarni qabul qilgandan so'ng yaxshilandi va tanaga foydali bo'lgan umumiy tendentsiyaga o'tdi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
hAMSCs ichak mikrobiotasi va ichak immuniteti o'rtasidagi o'zaro ta'sirni tartibga solgan
Ichak mikrobiotasi va ichak shilliq qavati o'rtasidagi potentsial munosabatlarni tushunish uchun TJ va ichak mikrobiotasi o'rtasidagi jins darajasidagi korrelyatsiya Spearmanning korrelyatsiya tahlili orqali tahlil qilindi. 7-rasmda ko'rsatilganidek, ZO-1 va foydali bakteriyalar, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 va Ruminiclostridium_9 o'rtasida ijobiy munosabat mavjud edi. Foydali bakteriyalar, Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 va Ruminococcaceae_UCG.014 ning nisbiy ko'pligi Okludin bilan keskin ijobiy korrelyatsiyani ko'rsatdi. Keyinchalik Spearmanning darajali korrelyatsiya usuli bo'yicha ichak mikrobiotasi va ichak immun to'sig'i o'rtasidagi korrelyatsiya tahlilini o'tkazdik (7-rasm). Roseburia, Muribaculum va Ruminococcus _1 koʻpayishi CD3 +CD4+T hujayralari ulushi bilan salbiy bogʻliqligini kuzatdik. Bundan tashqari, foydali bakteriyalar, Ruminococcus_1 va Ruminiclostridium _9 koʻpayishi Treglar ulushi bilan ijobiy, IL-17 bilan salbiy korrelyatsiya qilingan. Lactobacillus va Candidatus{16}}Artromitusning ko'pligi IFN- bilan salbiy bog'liq edi. Muribaculum va IL-2 ko'pligi o'rtasida salbiy bog'liqlik mavjud edi. Candidatus{19}}Saccharimonasning ko'payishi va Escherichia'ning kamayishi. Shigella ko'pligi IL-10 darajasi bilan ijobiy bog'liq edi (7-rasm). Korrelyatsiya tahlili natijalari shuni ko'rsatdiki, hAMSClar uy egasining yallig'lanish muhitini yaxshilagan va ichak mikrobiota modulyatsiyasi bilan bog'liq bo'lishi mumkin bo'lgan ichak gomeostazini tartibga solgan va natijada aGVHD ning oldini olgan.
5-rasm hAMSCs aGVHD sichqonlarida ichak to'sig'i disfunktsiyasini yaxshilagan. (A) Ichaklarga infiltratsiya qilingan GFP etiketli hAMSClar. (B) Ichaklarning H&E bo'yalishi (400×) va gistologik ko'rsatkichlar (to'qimalarning tuzilishi va limfotsitlar infiltratsiyasiga asoslangan) vakili mikroskopik rasmlari (n=4). (C) Ichaklarning immunohistokimyosining (400×) va CD45 musbat maydonining ulushi (n=4) bo'yicha vakillik mikroskopik rasmlari. (D) Ichaklarning immunohistokimyosining (400×) va ZO-1 musbat maydonining (n=4) ulushining mikroskopik tasviri. (E) ZO-1 va Okludin (n=3) ning mRNK ifoda darajalari. (F) plazmadagi D-LA va DAO darajalari (n=4).Qiymatlar o'rtacha±SD sifatida taqdim etildi
Munozara
Murakkab mikrobial tahlillar xost va ichak mikrobiotasi o'rtasidagi murakkab o'zaro ta'sirlar haqida yangi tushunchalar berdi [18]. Ichak mikrobiotasi allo-HSCTdan keyin o'zgarishi mumkin va aGVHD bilan chambarchas bog'liq bo'lib, ichak mikrobiotasi aGVHD davolash uchun yangi maqsad bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi [5]. Ko'pgina tadqiqotlar, shu jumladan bizning yaqinda o'tkazilgan tadqiqotimiz MSClarning aGVHD ga terapevtik ta'sirini o'rganib chiqdi va tasdiqladi [15, 19, 20]. Biroq, bu davrda ichak mikrobiotasiga ta'siri noaniq bo'lib qolmoqda. Ushbu tadqiqotda biz hAMSClarning aGVHD ga ta'sirini va in vivo jonli mexanizmlarini tekshirdik. Oldingi tadqiqotlarga muvofiq [15, 21-23], bizning natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSCs sichqonlarda aGVHD ga ijobiy himoya ta'siriga ega, bu zaiflashgan aGVHD belgilari va uzoq umr ko'rish bilan tasdiqlanadi. Shuningdek, biz hAMSClar donor T-hujayra kengayishini kamaytirish orqali aGVHDda Treglar hosil bo'lishini kuchaytirish orqali immunosupressiv ta'sir ko'rsatishini ko'rsatdik. Shu bilan birga, hAMSC'lar yallig'lanish reaktsiyalarini inhibe qilish uchun in vivo jonli ravishda yallig'lanishga qarshi sitokinlarni kamaytirishi va yallig'lanishga qarshi sitokinlarni kuchaytirishi mumkin. Ichak to'sig'i, ichak epiteliya hujayralarining bir qatlamidan tashkil topgan zich tuzilma, uning yaxlitligini saqlaydi va luminal mikrobiotaning sog'lom holatda joylashishini oldini oladi [24]. Allo-HSCT paytida konditsioner rejimlar ichak to'sig'iga zarar etkazadi, bu aGVHD rivojlanishining dastlabki bosqichidir, chunki u bakteriyalarni to'siq bo'ylab ko'chirishga imkon beradi va ichak immun gomeostazini buzishga olib keladi [24, 25]. To'plangan dalillar shuni ko'rsatadiki, MSC to'qimalarni tiklash qobiliyatiga ega, bu kolit sichqonlarida ichak to'sig'ining yaxlitligini tiklashi isbotlangan [26]. Qattiq birikma oqsillari, shu jumladan ZO-1 va Okcludin, ichak to'sig'i funktsiyasida muhim rol o'ynaydi va ichak mikrobiotasini buzilgan ichak to'sig'i orqali ko'chirish yallig'lanishni keltirib chiqaradi [27]. D-LA ichak bakteriyalaridan olinadi va DAO asosan ichak shilliq qavatida kontsentratsiyalanadi. Shunday qilib, plazmadagi D-LA va DAO ning yuqori konsentratsiyasi qisman ichak o'tkazuvchanligi va ichak to'siqlari funktsiyasidagi o'zgarishlarni aks ettirishi mumkin [28]. Hozirgi vaqtda biz hAMSClarni qabul qilgandan so'ng TJ ning ifoda darajalari keskin oshganligini aniqladik, D-LA va DAO ning plazma darajasi sezilarli darajada kamaydi, bu hAMSCs ichak to'siqni disfunktsiyasini yaxshilashi va ichak o'tkazuvchanligini tiklashi mumkinligini ko'rsatadi. Ichak aGVHD dan eng qattiq ta'sirlangan organlardan biri bo'lib, tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bakteriya, xususan, ichak mikrobiotasi aGVHD patogenezi va rivojlanishida markaziy rol o'ynaydi [5, 6]. Oldingi tadqiqotlarda xabar qilinganidek, allo HSCT bemorlarining bakterial xilma-xilligini yo'qotish aGVHD dan o'limning oshishi bilan bog'liq edi [29, 30]. Oportunistik patogenlar Enterococcus va Proteobacteria tomonidan najasning hukmronligi ham GVHD ning oshishi bilan bog'liq [6, 31]. So'nggi o'n yilliklarda yallig'lanish kasalliklarida ichak mikrobiotasi va MSCni davolash o'rtasidagi bog'liqlikka ko'proq e'tibor qaratildi. MSClar revmatoid artrit, sepsis va yallig'lanishli ichak kasalliklarining ichak mikrobiota disbiyozini yaxshilashi isbotlangan [32-34]. HAMSClarning aGVHD ni yaxshilash mexanizmini batafsil o'rganish uchun biz hAMSClarning ichak mikrobiotasiga ta'sirini o'rganib chiqdik. Joriy tadqiqotda hAMSClarni qabul qilish transplantatsiya qilinmagani bilan solishtirganda mikrobial jamoalarning xilma-xilligiga sezilarli ta'sir ko'rsatdi, bu esa hAMSC bilan davolashdan keyin ichak mikrobiotasining ko'pligi o'zgarishi mumkinligini ko'rsatdi. Shu bilan birga, turli xillik o'lchovlarida sezilarli farq yo'q edi, ehtimol ikkala guruhning kichik namuna o'lchamlari yoki hAMSClarni davolash siklining etarli emasligi sababli. Jinslar darajasida taqqoslash issiqlik xaritasidan foydalangan holda tahlil shuni ko'rsatdiki, hAMSC qo'llanilishi ichak florasida foydali bakteriyalar, Odoribacter va Ruminococcus_1 ko'pligini oshirdi, ular yallig'lanishga qarshi xususiyatlarga ega qisqa zanjirli yog' kislotalari (SCFAs) ishlab chiqaruvchilari [35]. , 36]. HAMSC transplantatsiyasi orqali vositachilik qiladigan asosiy dominant bakteriyalarni aniqlash uchun ikki guruh o'rtasida LEfSe tahlili o'tkazildi. aGVHD guruhi bilan solishtirganda, hAMSCs bilan davolash yallig'lanishga qarshi ta'sirga bog'liq bo'lgan ba'zi foydali mikroblarning ko'pligini sezilarli darajada oshirdi, masalan, Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, ularning barchasi gut metabolitlari uchun foydali deb ta'riflangan. 37–42]. Shu sababli, bizning kuzatishlarimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSC qo'llanilgandan so'ng, ichak mikrobiotasi disbiyozi yaxshilangan, bu yaxshilangan xilma-xillik va foydali bakteriyalarning nisbiy ko'pligi bilan namoyon bo'ladi.
6-rasm aGVHD sichqonlarida ichak mikrobiotalarining almashinuvi. (A) -xilma-xillikni solishtirish. (B) -xilma-xillikni solishtirish. (C) OTUlarning Venn diagrammasi. (D) Filum darajasida bakteriyaning nisbiy ko'pligi. (E) jins darajasida turlar ko'pligining issiqlik xaritasi. (F) Odoribacterning jins darajasida nisbiy ko'pligi. (G) Ruminococcus_1 ning jins darajasida nisbiy ko'pligi. (H) LEfSe tahliliga asoslangan kladogramma. (I) LDA balli aGVHD va hAMSC guruhlari o'rtasida farq qiluvchi xususiyatlardan hisoblangan. (AI) har bir guruhga n=3 ta sichqon. Qiymatlar o'rtacha±SD sifatida taqdim etildi
aGVHD murakkab yallig'lanish jarayoni bo'lib, u ichak to'sig'ining yaxlitligini buzish, so'ngra ichak mikrobiotasi va ularning tarkibiy qismlarini ko'chirish bilan boshlanadi. Zarar bilan bog'liq molekulyar naqshlarni va patogen bilan bog'liq molekulyar naqshlarni antigen taqdim qiluvchi hujayralar tomonidan tan olinishi yallig'lanishga qarshi javobni, shu jumladan T hujayralarining faollashishini va ichak to'sig'ining shikastlanishini kuchaytirishi va aGVHD rivojlanishini rag'batlantirish uchun sitokin bo'ronini keltirib chiqaradi [24, 43]. Boshqa tomondan, ichak mikrobiotasi va SCFAs kabi mikrobiotadan olingan metabolitlar ichak to'sig'ining yaxlitligi va ichak gomeostazini saqlashda, shuningdek, shilliq qavatning immunitet tizimini shakllantirishda va mikrobial komponentlar va metabolitlar bilan xost himoyasini muvozanatlashda muhim rol o'ynaydi [24, 44] . Ichak to'sig'idagi mezbon va ichak mikrobiotasi o'rtasidagi o'zaro aloqa shilliq qavat va tizimli immunitet reaktsiyalarini tartibga soladi va patologik holatlarda GVHD ga olib kelishi mumkin [6, 45, 46]. Ichak mikrobiotasi qattiq birikma oqsillari ifodasi bilan chambarchas bog'liqligini ko'rsatdi [47]. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, TJs ZO-1 va Okcludinning mRNK ifodasi zararli bakteriyalarning nisbiy ko'pligi bilan salbiy bog'liq bo'lib, foydali bakteriyalar bilan ijobiy korrelyatsiyaga ega, bu ichak mikrobiotasining butunligini saqlash uchun muhim ekanligini ko'rsatadi. ichak to'sig'i. Bundan tashqari, ichak mikrobiotasi ham ichak immun to'sig'ini saqlashda juda muhimdir [47]. Biz ba'zi foydali bakteriyalar CD3+CD4+T hujayralari foizi bilan salbiy bog'liqligini, lekin Treglar foizi bilan ijobiy bog'liqligini kuzatdik. Bu erda biz foydali bakteriyalar, asosan SCFA ishlab chiqaruvchilari yallig'lanishga qarshi sitokinlar bilan salbiy bog'liqligini, ammo yallig'lanishga qarshi sitokinlar bilan ijobiy bog'liqligini aniqladik, zararli bakteriyalar esa aksincha. Xulosa qilib aytganda, davolash usullari o'rtasidagi ichak mikrobiotasidagi sezilarli farq ichak mikrobiotasi va ichak to'sig'i, immunitet o'rtasidagi o'zaro ta'sirning to'liq rasmini taklif qildi. Tajribalarimizda muhokama qilishga arziydigan bir qancha cheklovlar mavjud edi. Birinchidan, bizning tadqiqotimiz aGVHDda hAMSClarning immunitet, ichak to'sig'i va ichak mikrobiotasiga ta'sirini o'rgangan bo'lsa-da, asosiy mexanizm hali ham keyingi tadqiqotlarda tekshirilishi kerak. Ikkinchidan, ichak mikrobiotasi, ichak to'sig'i va immunitet o'rtasidagi sababiy bog'liqlikni bartaraf etish uchun ichak mikrobiotasini yo'qotish va najas mikrobiotasini transplantatsiya qilish kerak. Uchinchidan, hAMSClarning mikrobiotadan olingan SCFA va boshqa metabolitlarga ta'sirini o'rganadigan keyingi tadqiqotlar kafolatlanadi. Xulosa qilib aytganda, bizning tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, hAMSClar ichak mikrobiotasini normallashtirishni rag'batlantirish va ichak mikrobiotasi va ichak to'sig'i, immunitet o'rtasidagi o'zaro ta'sirlarni tartibga solish orqali aGVHD ni engillashtiradi. Bizning tadqiqotimiz aGVHDda ichak mikrobiotasini va ichak immunitetini tartibga soluvchi hAMSClarning ta'siri va asosiy mexanizmlarini muntazam ravishda aniqlaydigan birinchi tadqiqotdir.
7-rasm Ichak mikrobiotasi va ichak immuniteti o'rtasidagi korrelyatsiya tahlili. Spearmanning korrelyatsiya tahlili 15 xil ichak mikrobiotalarining nisbiy ko'pligi (jins darajasida) va TJlarning mRNK ifoda darajasi, immun hujayralar foizi, shuningdek, ikki guruh o'rtasida ichaklardagi sitokinlar kontsentratsiyasi o'rtasida o'tkazildi. Spearman r qiymatlari -0.5 (koʻk) dan 0.5 (qizil) gacha boʻladi.
Ma'lumotnomalar
1. Shmid, C. (2021). GVHD holda GVLga bir qadam yaqinroq. Qon, 137 (19), 2565-2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132
2. Chang, Y., Zhao, X. va Huang, X. (2018). Leykemiyaga qarshi ta'sirni kuchaytirish va saqlash strategiyasi, graft versus-host kasalligini kuchaytirmasdan. Immunologiyadagi chegaralar, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041
3. Zhu, V., Qish, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Xyuz, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018). Ichak mikrobiotasini aniq tahrirlash kolitni yaxshilaydi. Tabiat, 553 (7687), 208-211. https://doi.org/10.1038/nature25172
4. Chjao, L., Chjan, F., Ding, X., Vu, G., Lam, YY, Vang, X., Fu, X., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, X., Chju, X., Shi, Y., Shen, Q., … Chjan, C. (2018). Oziq-ovqat tolalari tomonidan tanlab olingan ichak bakteriyalari 2-toifa diabetni engillashtiradi. Fan (Nyu-York, NY), 359 (6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774
5. Shono, Y. va van den Brink, MRM (2018). Allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasida ichak mikrobiotasining shikastlanishi. Tabiat sharhlari. Saraton, 18 (5), 283-295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10
6. Stafas, A., Burgos da Silva, M. va van den Brink, MRM (2017). Allogenik gematopoetik hujayra transplantatsiyasi va graft-xost kasalligida ichak mikrobiotasi. Qon, 129 (8), 927-933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394
7. Vu, K., Yuan, Y., Yu, X., Dai, X., Vang, S., Sun, Z., Vang, F., Fei, X., Lin, Q., Jiang, H. ., va Chen, T. (2020). Ichak mikrobial metaboliti trimetilamin N-oksidi sichqonlarda M1 makrofag polarizatsiyasini keltirib chiqarish orqali GVHD ni kuchaytiradi. Qon, 136 (4), 501-515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990
8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Shmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Ichak mikrobiomasidan olingan metabolitlar ichak epiteliya hujayralarining shikastlanishini modulyatsiya qiladi va greftga qarshi xost kasalligini yumshatadi. Tabiat immunologiyasi, 17 (5), 505-513. https://doi.org/10.1038/ni.3400
9. Deyv, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK va Tomar, GB (2022). Odamning gingival mezenximasining ildiz hujayralari donor yoshidan qat'iy nazar o'sishi va immunomodulyator xususiyatlarini saqlab qoladi. Ilm-fan yutuqlari, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504
10. Zhao, K. va Liu, Q. (2016). Gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasida mezenximal stromal hujayralarning klinik qo'llanilishi. Gematologiya va onkologiya jurnali, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z
11. Liu, Q., Huang, Q., Vu, X., Zuo, G., Gu, H., Deng, K. va Xin, H. (2021). Inson amnionidan olingan ildiz hujayralarining xususiyatlari va terapevtik salohiyati. Xalqaro molekulyar fanlar jurnali, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970
12. Li, J., Chjou, Z., Ven, J., Jiang, F. va Xia, Y. (2020). Inson amniotik mezenximasining ildiz hujayralari endogen suyak yangilanishiga yordam beradi. Endokrinologiyadagi chegaralar, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623
13. Diaz-Prado, S., Muinos-Lopes, E., Hermida-Gomes, T., Cicione, C., Rendal-Váskes, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanko, FJ ( 2011). Inson amniotik membranasi regenerativ tibbiyot uchun ildiz hujayralarining muqobil manbai sifatida. Differentsiatsiya; Biologik xilma-xillikni tadqiq qilish, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005
14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, V., Sun, H. va Ping, B. (2016). Insonning amniotik mezenximal ildiz hujayralari va inson suyak iligi mezenximal ildiz hujayralari o'rtasidagi biologik xususiyatlar va immunosupressiv faollikni taqqoslash. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041
15. Gao, Y., Li, V., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y. ., Xu, X., Liu, Q., Jin, X., Vang, Q. va Ping, B. (2021). Inson amniotik mezenximali ildiz hujayralari Treg va T efektor hujayralari muvozanatini tartibga solish orqali aGVHD ni inhibe qiladi. Yallig'lanish tadqiqotlari jurnali, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054
16. Kuk, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Krouford, JM va Ferrara, JL (1996). Suyak iligi transplantatsiyasidan keyin idiopatik pnevmoniya sindromining eksperimental modeli: I. Kichik H antijenlari va endotoksinning roli. Qon, 88 (8), 3230-3239.
17. Yañez, R., Lamana, ML, Garsiya-Kastro, J., Kolmenero, I., Ramírez, M. va Bueren, JA (2006). Yog 'to'qimasidan olingan mezenxima hujayralari in vivo immunosupressiv xususiyatlarga ega bo'lib, greftga qarshi xost kasalligini nazorat qilish uchun qo'llaniladi. Ildiz hujayralari (Dayton, Ogayo), 24 (11), 2582-2591.
18 Huper, LV, Littman, DR va Macpherson, AJ (2012). Mikrobiota va immunitet tizimining o'zaro ta'siri. Fan (Nyu-York, NY), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ Science.1223490
19. Kelly, K. va Rasko, JEJ (2021). Graft versus host kasalligini davolash uchun mezenximal stromal hujayralar. Immunologiyadagi chegaralar, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616
20. Macías-Sánches, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Kuesta-Casas, M. A., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martin-Calvo , C., Jurado, M., Peres-Simon, JA, Espigado, I., Garzon Lopez, S., Carmona Sánches, G., Mata-Alcazar-Caballero, R., & Sanches-Pernaute, R. (2022) ). Ukolga chidamli o'tkir va surunkali greftga qarshi xost kasalligini davolash uchun mezenximal stromal hujayralar: ko'p markazli rahmdil foydalanish tajribasi. Ildiz hujayralari tarjima tibbiyoti, 11 (4), 343-355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003
21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Vada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Xayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, X. va Ueda, Y. (2021). Inson amnionidan olingan mezenximal ildiz hujayralari T hujayralarining faollashishi va ko'payishini oldini olish orqali ksenogenik greft-xost kasalligini susaytiradi. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y
22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, X., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogava, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K. va Ikeda, T. (2014). Odamning amnion va xoriondan olingan mezenximal ildiz hujayralarining angiogen, sitoprotektiv va immunosupressiv xususiyatlarini taqqoslash. PLoS One, 9(2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319
23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, X., Kaida, K. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, X., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Xashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y. (2019). Allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasidan so'ng steroidga chidamli o'tkir graft-xost kasalligi bo'lgan bemorlarda amniondan olingan mezenximal ildiz hujayralarining (AM01) xavfsizligi va samaradorligi: I/II fazali yapon sinovi uchun o'rganish protokoli. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop uz-2018-026403
24. Lin, D., Xu, B., Li, P., Chjao, Y., Xu, Y. va Vu, D. (2021). O'tkir GVHDda ichak mikrobiotasi va mikrobial metabolitlarning roli. Eksperimental gematologiya va onkologiya, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3
25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Vang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017). GvHD va boshqa HSCT bilan bog'liq asosiy asoratlarning patofiziologiyasi. Immunologiyadagi chegaralar, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079
26. Xu, J., Vang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, X., Bai, Y. va Chji, F. (2020). Embrion ildiz hujayralaridan olingan mezenximal ildiz hujayralari kolit sichqonlarida aylanma IGF -1 ni ko'tarish orqali yo'g'on ichak epiteliya yaxlitligi va yangilanishiga yordam beradi. Teranostika, 10(26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683
27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Chjan, S., Wen, C. va Vang, L. (2022). Berberin ichak mikrobiotasini qayta qurish, TLR4 signalizatsiyasini bostirish va NLRP3 yallig'lanish inhibisyonu uchun yo'g'on ichak to'sig'ini tiklash orqali aGVHD ni yaxshilaydi. Uyali va molekulyar tibbiyot jurnali, 26 (4), 1060-1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158
28. Yuan, M., Lin, L., Cao, X., Zheng, V., Vu, L., Zuo, H., Tian, X. va Song, H. (2022). Ichak mikrobiotasi kalamushlarda steatotik jigar greftlari bilan jigar transplantatsiyasida HO{2}}/BMMSCs ning himoya ta'sirida ishtirok etadi. Mikrobiologiyadagi chegaralar, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567
29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M. va Pamer, EG (2014). Ichak traktidagi bakterial xilma-xillikning allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasidan keyingi o'limga ta'siri. Qon, 124 (7), 1174-1182. https://doi.org/10.1182/ qon-2014-02-554725
30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Pits, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Intestinal Blautia graft-versus-host kasalligidan o'limning kamayishi bilan bog'liq. Qon va ilik transplantatsiyasining biologiyasi: Qon va ilik transplantatsiyasi Amerika jamiyati jurnali, 21 (8), 1373-1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016
31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Allogenik gematopoetik ildiz hujayralari transplantatsiyasida ichak mikrobiomasi va o'tkir greft va xost kasalligi bilan bog'liq o'ziga xos o'zgarishlar. Jahon gastroenterologiya jurnali, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792
32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Chjao, X., Xu, X., Chju, Y., Li, J., Liu, H. ., & Xiao, C. (2020). Inson kindik mezenximasining ildiz hujayralari aril uglevodorod retseptorlari orqali immunitet va ichak mikrobiotasi o'rtasidagi o'zaro ta'sirni tartibga solish orqali revmatoid artritda terapevtik potentsialni namoyish etadi. Hujayra va rivojlanish biologiyasida chegaralar, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131
33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H., & Sun, T. (2020). Yog 'oliy mezenxima hujayralari o'tkir o'pka shikastlanishini susaytiradi va septik kalamushlarda ichak mikrobiotasini yaxshilaydi. Ildiz hujayralari tadqiqoti va terapiyasi, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5
34. Soontararak, S., Chow, L., Jonson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Sichqoncha yallig'lanishli ichak kasalligi modelida ichakni davolash va mikrobiomani normallashtirishni rag'batlantirishda yog'dan olingan MSC ga ekvivalent bo'lgan Induced pluripotent ildiz hujayralaridan (iPSC) olingan mezenximal ildiz hujayralari (MSC). Ildiz hujayralari tarjima tibbiyoti, 7 (6), 456-467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305
35. Li, J., Zou, C. va Liu, Y. (2022). Sianidin -3-O-glyukozidni maqsadli rektal va yo'g'on ichak orqali yuborish orqali sichqonlarda ovalbumin bilan bog'liq oziq-ovqat allergiyasini yaxshilash. Oziq-ovqatlar (Bazel, Shveytsariya), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542
36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Xosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, X., Konishi, K., Miyachi, M., Kavashima, X., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z. va Kunisawa, J. (2022). Arpa iste'moli bilan bog'liq ichak bakteriyalariga asoslangan dislipidemiya paydo bo'lishining tasnifi. Oziqlanishdagi chegaralar, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469
37. Li, SH, Park, X., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Li, KY, Cho, X. va Li, SJ ( 2022). Mushak ichiga D3 vitaminining yuqori dozasini qo'shish clostridioides difcile infektsiyasi bo'lgan bemorlarning ichak mikrobiotasiga ta'sir qiladi. Hujayra va infektsiya mikrobiologiyasi chegaralari, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987
38. Meyer, RK, Leyn, AI, Veninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D. va Duka, FA (2022). Oligofruktoza yuqori yog'li oziqlantirish paytida ovqatdan keyin qisqa zanjirli yog 'kislotalari darajasini tiklaydi. Semirib ketish (Silver Spring, Md.), 30 (7), 1442-1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456
39. Sang, J, Zhuang, D, Chjan, T, Vu, Q, Yu, J, Chjan, Z (2022) Odamlar va noinsoniy primatlarda ichak mikrobiota xilma-xilligining konvergent va divergent yoshi naqshlari. M-tizimlari: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21
40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, V., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C. va Liu, B. (2022). Biokimyoviy mexanizmlar va ichak mikrobiotalarining o'zaro ta'siri orqali 8-guanidil luteolin xinon-xrom muvofiqlashtirish, 6-roman orqali 2-toifa diabetni yaxshilash. Ilg'or tadqiqotlar jurnali, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003
41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Juge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 ichak fora gomeostazini tiklash orqali sichqonlarda surunkali alkogolli jigar steatozini va jigar shikastlanishini engillashtiradi. Food Research International (Ottava, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259
42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quaishi, MN (2022). Yarali kolit bilan og'rigan bemorlarda najas mikrobiota transplantatsiyasiga javob berishning donor va qabul qiluvchi prognozli biomarkerlarini tizimli ko'rib chiqish. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088
43. Li, A., Abraham, C., Vang, Y. va Chjan, Y. (2020). O'tkir greftga qarshi-xost kasalligining asosiy biologiyasi bo'yicha yangi tushunchalar. Gematologica, 105 (11), 2540-2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R. va Takeda, K. (2020). Ichakdagi mikrobiota, epiteliya va immun hujayralari o'rtasidagi o'zaro ta'sir. Immunologiyaning yillik sharhi, 38, 23-48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104
45. Schluter, J., Peled, JU, Teylor, BP, Markey, KA, Smit, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti , LA, Rayt, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Ichak mikrobiotasi odamlarda immunitet hujayralari dinamikasi bilan bog'liq. Tabiat, 588 (7837), 303-307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8
46. Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Ichak mikrobiota, mikobiota va xost immuniteti o'rtasidagi uch tomonlama o'zaro ta'sir. Oziq-ovqat fanlari va ovqatlanish bo'yicha tanqidiy sharhlar: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888
47. An, J., Liu, Y., Vang, Y., Fan, R., Xu, X., Chjan, F., Yang, J. va Chen, J. (2022). Otoimmün kasallikda ichak shilliq qavatining o'rni: potentsial maqsad. Immunologiyadagi chegaralar, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713