Inson TH17 hujayralari NLRP3 yallig'lanish faollashuvida IL-1 ni chiqarish uchun Gasdermin E teshiklarini bog'laydi
Nov 30, 2023
Tug'ma immunitet reaktsiyalari xotira kabi adaptiv xususiyatlarni qabul qilishi mumkinligi ko'rsatilgan. T hujayralari o'zlarining effektor funktsiyalari repertuarini diversifikatsiya qilish uchun tug'ma immun signalizatsiya yo'llaridan foydalanadimi yoki yo'qmi noma'lum. Gasdermin E (GSDME) membrana bo'shlig'ini hosil qiluvchi molekula bo'lib, u piroptotik hujayralar o'limini amalga oshirishi va shuning uchun potentsial saraton tekshiruvi punkti bo'lib xizmat qilishi ko'rsatilgan. Ushbu tadqiqotda biz inson T-hujayralari GSDME ni ifodalashini va ajablanarlisi shundaki, bu ifoda barqaror yashovchanlik bilan bog'liqligini va signalin interleykinini (IL) chiqarish uchun qayta maqsadli ekanligini ko'rsatamiz-1 . Bu xususiyat Candida albicans uchun o'ziga xos xususiyatga ega bo'lgan 17-turdagi inson yordamchi T hujayralarining kichik to'plami bilan cheklangan va T-hujayraga xos NLRP3 yallig'lanishi va uning ketma-ket kaspaza-8, kaspaza{{6{6}ning proteolitik kaskadi bilan bog'lanishi bilan tartibga solingan. }} va T-hujayra retseptorlari stimulyatsiyasi va pro-IL-1 shaklining kaltsiy-litsenziyali kalpain pishishidan keyin GSDME bo'linishi. Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, T hujayralarida GSDME gözenek shakllanishi noan'anaviy sitokinlarni chiqarish mexanizmidir. Ushbu topilma T hujayralarining funktsional repertuari va mexanik jihozlari haqidagi tushunchamizni diversifikatsiya qiladi va antifungal immunitetga ta'sir qiladi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Yordamchi T hujayralari (TH hujayralari) aniq sitokinlarni sekretsiyasi orqali antigenga xos effektor reaktsiyalarining muhim qo'zg'atuvchisi hisoblanadi. Yordamchi tipdagi 17 T hujayralari (TH17 hujayralari), xususan, RAR bilan bog'liq etim retseptorlari (ROR) transkripsiya omili tomonidan boshqariladigan IL{3}}A imzo sitokinini sekretsiyasi orqali antifungal funktsiyalari uchun tan olinadi. t1. Ular, shuningdek, autoimmun kasalliklarning patogenezida asosiy aybdorlardir2. TH1Ilgari 7 ta hujayra funktsional heterojenlikni ko'rsatishi uchun tan olingan3. Yallig'lanishga qarshi yoki yallig'lanishga qarshi funktsiyalar IL-17 ning mos ravishda interferon (IFN)- yoki IL-10 bilan differentsial birgalikda ifodalanishi orqali amalga oshiriladi4-7. Umuman olganda, bu TH17 hujayra dualizmi kontseptsiyasini shakllantirdi va terapevtik ilovalar uchun ikkita funktsional TH17 hujayra natijalari o'rtasidagi dixotomiyani boshqaradigan signallar va molekulyar maqsadlarni o'rganishni rag'batlantirdi3,4,8,9. Biroq, patogen va immunoregulyatsion TH17 hujayra taqdirining o'ziga xosligi va mexanik asoslarini chuqur tushunish qiyinligicha qolmoqda. IL{19}} ishlab chiqarishdan tashqari qo'shimcha, hali topilmagan effektor mexanizmlari antifungal yoki antibakterial maqsadli o'ziga xos xususiyatlarga ega TH17 hujayralarida ham ishlashi mumkin. IL-1 sitokinlari, ulardan IL-1 va IL-1 eng ko'zga ko'ringan a'zolarni ifodalaydi, chuqur yallig'lanish ta'sirini ko'rsatadi. Antigen taqdim qiluvchi hujayralardan (APC) chiqarilganda ular nafaqat tez tug'ma yallig'lanish reaktsiyalarini qo'zg'atadilar, balki TH17 hujayra polarizatsiyasini va T hujayralarining patogenligini ularning umumiy IL-1R1 retseptorlari bilan bog'lanishini rag'batlantirish orqali adaptiv immunitetni tartibga soladi4,10,11 . Ilgari tasvirlangan IL{31}}mustaqil TH17 hujayralarini tayyorlash natijasida yallig'lanishga qarshi TH17 hujayralari4 ishlab chiqariladi. Tug'ma hujayra manbalaridan IL-1 shuning uchun yallig'lanishga qarshi TH17 hujayra taqdiri dixotomiyasi uchun o'zgaruvchan omil bo'lib xizmat qiladi. Ko'pgina boshqa sitokinlardan farqli o'laroq, IL{40}} sitokinlari signal peptidiga ega emas va shuning uchun noan'anaviy, endoplazmatik retikulum (ER) - Golji-mustaqil mexanizm tomonidan chiqariladi.
Pro-IL{1}} hujayradan tashqari bo'shliqqa chiqarilishi va uning retseptorlari bilan bog'lanishidan oldin fermentativ bo'linishni talab qiladi. NLRP3 yallig'lanishi multimerik sitozolik oqsil kompleksi bo'lib, u mikrob infektsiyasi va hujayra shikastlanishini yig'adi va keyingi pro-IL-1 bo'linish uchun kaspaza-1 ni jalb qiladi12. IL{7}} chiqishi, shuningdek, hujayra nobud bo'lishining yallig'lanish shakli bo'lgan piroptoz deb ataladigan jarayonda kaspaz-1-vositalangan gaz dermin D (GSDMD) parchalanishi va gözenek shakllanishini talab qiladi13,14. Boshqa tomondan, IL{11}} NLRP3 yallig'lanishidan mustaqil ravishda tartibga soluvchi nazorat punktlari orqali qayta ishlanadi, deb ishoniladi, ular hali ham yaxshi tushunilmagan10. IL-1 va IL-1 ning kamolotga yetishi va chiqarilishining mutlaqo aniq yoʻllariga qaramay, ikkala sitokin ham tugʻma immun tizimining hujayralari tomonidan birgalikda ishlab chiqariladi va bu hali aniqlanmagan sitokinlarning mavjudligiga ishora qiladi. birgalikda tartibga soluvchi yo'nalishlar. Ushbu tadqiqotda biz inson TH17 hujayralarining bir qismi NLRP{21}}bog'liq signalizatsiya kaskadini GSDME tomonidan membrana teshiklari hosil bo'lishini induktsiya qilishini ko'rsatamiz, bu yallig'lanish proinflamatuar IL-1 ning avtokrin chiqarilishiga xizmat qiladi. Ushbu topilma inson T hujayralari tomonidan sitokin sekretsiyasining noan'anaviy usulini ochib beradi va shu bilan T hujayralarining funktsional va mexanik repertuarini diversifikatsiya qiladi.
Cistanche erkaklar uchun foydalari-immun tizimini mustahkamlaydi
Natijalar
IL-1 ishlab chiqarish inson TH hujayralariga xos xususiyatdir
Odamning TH17 hujayralari to'plamining heterojenligini o'rganish va aniq funktsiyalarni va ularning molekulyar nazoratini aniqlash uchun biz periferik qondan ex vivo ajratilgan faollashtirilgan inson TH17 hujayralarining bir hujayrali RNK ketma-ketligini (scRNA-seq) o'tkazdik. ularning kimyoviy retseptorlari sirt belgilarining noyob ifodasi15. Barcha TH17 hujayralarining yagona ko'p qirrali yaqinlashuvi va proyeksiyasi (UMAP) va Leyden klasteri orqali tadqiqot tahlili oltita alohida klasterni aniqladi (1a-rasm). IL1A ifodalovchi TH17 hujayralarining aniq va kam uchraydigan (6%) populyatsiyasi 1-klasterda tanlab boyitilgan (1a,b-rasm). 1-klasterdagi barcha genlarni boshqa barcha klasterlar bilan solishtirish IL1A ning sezilarli darajada ko'tarilganligini aniqladi (qo'shimcha jadval 1). Bu kutilmagan edi, chunki IL-1 T hujayralarining kanonik effektor sitokin repertuariga tegishli emas, balki tug'ma xavf signalini ifodalaydi16. Biroq, IL1A 1-klasterdagi eng yuqori differentsial ifodalangan genlar (DEG) qatoriga kirmadi, bu esa TH17 hujayralari subpopulyatsiyasida uning sezilarli darajada ko'tarilishini yashirish uchun chuqurroq qidirish strategiyasini talab qildi (qo'shimcha 1-rasm). Protein darajasida TH17 hujayra klonlari ham alohida IL-1 + va IL-1 - T-hujayra klonlariga ajratilgan va shu bilan bir hujayra darajasida IL{26}} protein ifodasining heterojenligini qo'llab-quvvatlaydi. TH17 hujayra populyatsiyasi (1c-rasm). TH17 hujayralari tomonidan IL1A ifodasini boshqa immun hujayra turlaridagi, ayniqsa IL{32}} ning vijdonli ishlab chiqaruvchilari bilan solishtirish uchun biz inson periferik qon mononuklear hujayralarining (PBMC) bir nechta ommaviy scRNA-seq ma'lumotlar to'plamini so'roq qildik. Ajablanarlisi shundaki, bu T-hujayralari, B hujayralari, tabiiy qotil (NK) hujayralari, NKT hujayralari, monositlar va dendritik hujayralarni o'z ichiga olgan dam olish PBMClarining turli xil immun hujayralarida IL1A ifodasini aniqlamadi (Qo'shimcha rasm. 2a, b). Hatto monotsitlar bitta hujayra darajasida hech qanday IL1A ifodasini ko'rsatmadi, agar bu hujayralarga ma'lum bir IL1A qo'zg'atuvchi stimul, xususan, lipopolisakkarid (LPS) qo'llanilmasa (Qo'shimcha 2c, d-rasm), bu ularning IL1A ishlab chiqarish qobiliyatini yashirdi. va IL1A ifodasining davom etayotgan yallig'lanishli tug'ma immunitet reaktsiyasi bilan bog'lanishi (Qo'shimcha rasm 2e). Qizig'i shundaki, TH17 hujayralaridan IL1A+ va IL1A- hujayralari o'rtasidagi DEGlarning bir hujayrali transkriptomik taqqoslanishi, genlarning birgalikda ifodalanishida (IL1A va CCL3) deyarli bir-biriga mos kelmasligini ko'rsatmadi, bu Tda IL1A regulyatsiyasining boshqacha usulini ko'rsatadi. hujayralar monositlarga nisbatan (1d-rasm). Birgalikda bu natijalar TH17 hujayralar quyi toʻplamida IL{54}}ekspressiv hujayralarning alohida subpopulyatsiyasi mavjudligini koʻrsatadi.
TH17 hujayralarining IL-1 -ishlab chiqaruvchi quyi to'plami yallig'lanishga qarshidir
Inson TH17 hujayralarida IL1A ifodasining fiziologik ahamiyatini o'rganish uchun biz scRNA-seqdan keyin IL1A + va IL1A- TH17 hujayralarini xolis transkriptomik taqqoslashni amalga oshirdik. TH17 hujayralarida IL1A bilan birgalikda ifodalangan genlar uchun gen to'plamini boyitish tahlili (GSEA), shuningdek DEG yordamida boyitish tahlili barcha mavjud gen ontologiyasi (GO) atamalarini xolis so'rovdan so'ng IL1A ning T hujayra faollashuvi va ko'payishi bilan ajoyib bog'lanishini aniqladi. 2a-rasm va qo'shimcha 3-rasm). Bu topilma IL{12}} ning yangi T hujayralari17 kontekstida qarish va hujayra o'limida ilgari tayinlangan rolini shubha ostiga oldi. Boyitish tahlili, shuningdek, "yallig'lanish" bilan bog'liq bo'lgan bir nechta GO atamalarining kuchli haddan tashqari ifodalanishini aniqladi, bu TH17 hujayralari tomonidan IL1A ifodasi yallig'lanish kasalliklarida rol o'ynagan patogen T hujayralarining o'ziga xosligiga hissa qo'shganligini ko'rsatdi (2a-rasm). Bu g‘oya “interleykinga hujayrali javob-1” GO atamasi bilan izohlangan genlarning yuqori regulyatsiyasi bilan qo‘llab-quvvatlandi, bunda IL-1 ning umumiy TH17 hujayra funksiyasiga4 va supressiv ta’siriga ilgari xabar qilingan yallig‘lanishga qarshi o‘tish ta’siri hisobga olindi. IL{21}} ifodasidagi avtokrin IL-10 (Kengaytirilgan ma'lumotlar 1a-c-rasm). Barcha klasterlarda IL1A+ va IL1A– TH17 hujayralarini to‘g‘ridan-to‘g‘ri taqqoslash shuni ko‘rsatdiki, IL1A+ TH17 hujayralari sezilarli darajada yallig‘lanishga qarshi kuchaygan, ammo yallig‘lanishga qarshi belgilarni kamaytirgan (2b-rasm). GSEA tomonidan ko'rsatilgandek, boshqa barcha beshta klasterlarga qaraganda sezilarli darajada ko'proq yallig'lanishga qarshi va kamroq yallig'lanishga qarshi. Yallig'lanishga qarshi yallig'lanishga qarshi TH17 hujayra kichik to'plamlarini ommaviy transkriptomik taqqoslash IL1A ning hatto proinflamatuar TH17 hujayralar to'plamida yuqori tartibga solinadigan genlar qatoriga kirishini aniqladi (2c, d-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 2-rasm). Buning o'rniga IL10, oldingi hisobotlarga ko'ra, kutilganidek, juda pastga tushirildi4,7. TH17 hujayralari tomonidan IL-1 va IL-10 ifodasining bu oʻzaro korrelyatsiyasi, shuningdek, oqim sitometriyasi orqali oqsil darajasida kuzatildi (2e-rasm). DEGlar bilan boyitish tahlili KEGG (Kyoto genlar va genomlar entsiklopediyasi) yo'llarining "revmatoid artrit" va "ichakning yallig'lanish kasalligi" (2f-rasm) kabi otoimmün kasalliklar uchun haddan tashqari ko'rsatilishini ko'rsatdi, bu IL117TH ning proinflamatuar tabiatini qo'llab-quvvatladi. hujayra kichik to'plami. Aslida, patogenezi ilgari tug'ma IL-1 va IL-1 1819 bilan bog'liq bo'lgan bolalarda romatoid artritning o'ta yallig'lanishli shakli bo'lgan juvenil idiopatik artrit (JIA) bilan og'rigan bemorlar sezilarli va kuchli tarzda aniqlangan. sog'lom nazorat qonidagi IL{63}} TH hujayralari bilan solishtirganda IL{62}} TH hujayralari tomonidan yuqori IL-1 ifodasi (2g-rasm). JIA bilan kasallangan bemorlarning qonida IL{66}} TH hujayralarida nazorat donor qoni bilan solishtirganda, IFN-ning TH17 hujayra patogenligi bilan bogʻliqligi haqida avval xabar berilganiga qaramay, IFN- koʻpayishi kuzatilmadi (2g-rasm, oʻng panel). 4. Bundan tashqari, qonga mos keladigan sinovial suyuqlik tahlili IL-1 + TH hujayralarining juda yuqori chastotalarini ko'rsatdi, bu esa tug'ma hujayralardan tashqari T hujayralari ham kasallik bilan bog'liq bo'lgan IL{{74}ning tegishli hujayra manbai bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi. } yallig'lanish joyida.
Cistanche tubulosa foydalari- immunitet tizimini mustahkamlash
IL-1 ifodasi TH17 dasturi tomonidan tartibga solinadi
IL{0}} ifodasi T hujayralarining umumiy xossasi ekanligini tekshirish uchun biz PBMC larning TH hujayralarining alohida to‘plamlarini kimyokin retseptorlarining differentsial ifodasiga ko‘ra boyitganmiz (kengaytirilgan ma’lumotlar 3-rasm) va ularning IL-1 sekretsiya. IL-1 maxsus TH17 hujayralar to‘plami tomonidan ishlab chiqarilgan, lekin TH1 hujayralar to‘plami, TH2 hujayralar quyi to‘plami yoki tartibga soluvchi T hujayralari (Treg hujayralari) emas (3a-c-rasm). Ajablanarlisi shundaki, uning anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan stimulyatsiya qilingan sekretsiyasi darajasi LPS va nigeritsin bilan qo'zg'atilgan inson monotsitlari darajasiga mos keldi, bu inson TH17 hujayralari, ularning adaptiv immunitetiga qaramay, IL xavfli signalining asosiy manbai bo'lib xizmat qilishini ko'rsatadi. -1 (3a-rasm). Hujayra ichidagi IL{15}} oqsili ifodasi yangi ajratilgan tinch TH hujayralarida yo'q edi, lekin T hujayra retseptorlari (TCR) faollashuvida induksiyalangan, TH1, TH2 va Treg hujayralari bilan boyitilgan TH hujayralari bilan solishtirganda TH17 hujayralarida sezilarli boyitilgan (3b-rasm). ,c). Bu topilmalar inson immun tizimiga xos ko'rinadi, chunki oldingi hisobotlarda sichqon T hujayralari tomonidan IL{21}} ishlab chiqarilmagan16. IL{23}} ning TH17 hujayralar to'plami bilan noyob assotsiatsiyasi bizni ushbu sitokinning regulyatsiyasini mexanik ravishda ajratishga undadi. Qizig'i shundaki, IL{25}} ifodasi TH17 hujayralarining asosiy transkripsiya omili bo'lgan ROR-t ning o'ziga xos inhibisyoni tufayli kamaygan (3d,e-rasm). Bu ma'lumotlar uchun taxminiy bog'lanish joylari mavjud IL1A promotor va kuchaytiruvchi hududlarida ROR- t va ROR- (Kengaytirilgan ma'lumotlar 4a, b-rasm). Muayyan TH hujayralari to'plamining taqdiri sodda T hujayralarini stimulyatsiya qilish paytida aniq polarizatsiya qiluvchi sitokin mikromuhiti bilan belgilanadi. TH17 hujayra polarizatsiyasi sharoitida (IL-1 va transformatsiya qiluvchi o'sish omili (TGF)- ) sodda T hujayralarida IL-1 ning eng yuqori hujayra ichidagi ifodasi va sekretsiyasini kuzatdik (3f,g-rasm). Faqatgina IL-1 yoki TGF- bilan bir martalik muolajalar sodda T hujayralarida sezilarli IL-1 ifodalanishiga olib kelmadi, bu TH17 hujayra astarlovchi sitokinlarning de novo induktsiyasiga sinergik ta'sirini ta'kidladi. IL-1 (Qoʻshimcha 4-rasm). TH1 (IL-12) va TH2 (IL{-4) hujayralarni tayyorlash sharoitlari, aksincha, polarizatsiya qiluvchi sitokinlar bo'lmaganda stimulyatsiya ostidagi holatga nisbatan IL{52}} sekretsiyasini sezilarli darajada o'zgartirmadi. Bu topilmalar birgalikda shuni ko'rsatadiki, sodda T hujayralari TH17 hujayra polarizatsiya qiluvchi sitokinlar orqali IL{53}} ishlab chiqarish qobiliyatiga ega bo'ladi. Xotira TH hujayralari, shuningdek, IL-1 effektor sitokinini IL-1 va TGF- mikro muhitida sezilarli darajada oshirishni ko'rsatdi (3h-rasm).
1-rasm|Inson TH17 hujayralarining alohida to'plami IL-1 ni ifodalashi mumkin.
TH hujayra kichik to'plamlarining o'ziga xosligi, shuningdek, kimyokin retseptorlarining differentsial ifodasi bilan bog'liq bo'lgan aniq migratsiya xususiyatlari bilan tavsiflanadi20. Biz IL{1}} ifodasi CCR6+da boyitilganini, ammo CCR6-T hujayralarida emasligini va CXCR3+ T hujayralari bilan solishtirganda CXCR3-T hujayralarida kamayganini kuzatdik, garchi bunda farq yoʻq edi. CCR4+ va CCR4– T hujayralari orasidagi IL-1 ifodasi (3i-rasm). Bu maʼlumotlar shuni koʻrsatadiki, IL{10}}yaratuvchi hujayralar IL{11}}yaratuvchi hujayralar15 uchun avval tayinlangan migratsiya naqshini aks ettiradi. Birgalikda bu maʼlumotlar IL-1 inson TH17 hujayralarining oʻziga xos funktsiyasi ekanligini koʻrsatadi.
2-rasm|IL{1}} ishlab chiqaruvchi TH17 hujayralari proinflamatuardir
3-rasm|T hujayralari tomonidan IL-1 ishlab chiqarilishi TH17 hujayra taqdiri bilan cheklangan
Kalpain TH17 hujayralari tomonidan IL-1 sekretsiyasi uchun zaruriy shartdir
IL-1 sekretsiyasi mexanizmini oʻrganish uchun biz TH17 hujayralarini oqsil eksporti inhibitori brefeldin A (BFA) bilan davolashdik va anʼanaviy sitokinlardan farqli oʻlaroq IL{2}} sekretsiyasiga taʼsir qilmasligini aniqladik. IL-17A sifatida (Kengaytirilgan maʼlumotlar 5a–c-rasm). Bu T hujayralari tomonidan IL{6}} sekretsiyasi uchun noan'anaviy ER-Golji-mustaqil yo'l mavjudligini qo'llab-quvvatlaydi va tug'ma hujayra turlari bo'yicha oldingi hisobotlarga mos keladi21,22. Ilgari IL-1 ga berilgan noyob xususiyat uning sitoplazma va plazma membranasida bir vaqtda joylashishidir23. Biroq, biz TH17 hujayralari, monotsitlardan farqli o'laroq, membrana bilan bog'langan IL-1 ni ko'rsatmasligini aniqladik (Kengaytirilgan ma'lumotlar 5d-rasm). Pro-IL-1 ning ajralishi bioaktiv hujayradan tashqari IL-1 hosil qilish uchun zarur bo'lsa-da, IL-1 hujayra o'limida passiv ravishda ajralib chiqishi va IL{ bilan bog'langandan so'ng o'zining bioaktiv salohiyatini namoyon qilishi ma'lum. {19}}RI ajralmagan yoki yorilib ketgan shaklda24. Pro-IL{22}} inson T-hujayralari tomonidan boshqariladigan chiqarish uchun hujayra ichidagi ishlovdan o'tishini aniqlash uchun faollashtirilgan TH17 hujayralarining supernatantidagi IL-1 ning to'liq uzunlikdagi va etuk shakllarini baholadik. Har qanday ifloslantiruvchi monotsitlarni sekretsiyalangan IL{26}} ning potentsial manbai sifatida istisno qilish uchun biz 2 hafta davomida TH17 hujayra klonlarini hosil qildik va immunoblotingdan oldin ularni anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan yana 5 kun davomida qayta stimulyatsiya qildik. Barcha oltita sinovdan o'tgan TH17 hujayra klonlarida biz kultura supernatantlarida IL -1 ning ajralgan shaklini imtiyozli boyitishini topdik (4a-rasm). TH17 hujayra lizatlari, aksincha, kutilganidek, ajratilmagan pro-IL{39}} shaklini imtiyozli boyitishini ko'rsatdi (Qo'shimcha rasm 5a). Bu natijalar T hujayralarida standart IL-1 chiqish usuli sifatida hujayra nekrozi paytida pro-IL-1 ning passiv chiqarilishini istisno qiladi va buning o'rniga, inson TH17 hujayralari pro-IL{{ uchun molekulyar mexanizmga ega bo'lishi kerakligini ko'rsatadi. 46}} tug'ma hujayralardan farqli o'laroq, bu kuchli bioaktiv molekulaning yashovchan T hujayralari tomonidan boshqariladigan hujayradan tashqari chiqarilishini ta'minlash uchun bo'linish (Qo'shimcha rasm. 5b). Biroq, bu T-hujayra nekrozining IL ning bioaktiv pro-formasini chiqarishga qo'shimcha hissasini istisno etmaydi (Qo'shimcha rasm 5a). Pro-IL{52}}ni alohida parchalanish joylarida qayta ishlash bir nechta proteazlar tomonidan katalizlanishi mumkin17,25,26. Kalpain kaltsiyga bog'liq bo'lgan sistein proteazasi bo'lib, biz bu erda aniqlagan etuk IL-1 p17 fragmentini26 hosil qilishi mumkin. Biz TH17 hujayralarida kalpain faolligini aniqladik. Anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan faollashganda ko'paydi (4b-rasm). TH17 hujayralari tomonidan IL-1 sekretsiyasi T hujayraning ichki kalpain faolligiga bog'liq edi, chunki farmakologik kalpain inhibisyonu faollashtirilgan TH17 hujayralari tomonidan hujayradan tashqari bo'shliqqa dozaga bog'liq holda IL{69}} sekretsiyasini kamaytirdi (4c-rasm). . Shunga mos ravishda, kalpain inhibisyonu pro-IL-1 ning hujayra ichidagi to'planishiga olib keldi (4d-rasm). IL{76}} sekretsiyasining kalpainga bog'liqligini tasdiqlash uchun biz, shuningdek, klasterlangan muntazam intervalgacha qisqa palindromik takrorlar (CRISPR) – Cas9 yordamida inson TH17 hujayralarida kalpainni genetik jihatdan nokaut qildik. Bu inson TH17 hujayralari tomonidan IL{81}} sekretsiyasida CAPN1 emas, balki CAPN2 rolini ochib berdi (4e-rasm). Aksincha, monotsitlar tomonidan LPS-/nigeritsin tomonidan qo'zg'atilgan IL{86}} sekretsiyasi kalpainga bog'liq emas edi (4f-rasm). Ushbu ma'lumotlar CAPN2 ning imtiyozli ifodasi bilan mos edi, lekin CAPN1 emas, balki dendritik hujayralardan farqli o'laroq, inson T-hujayralari pastki to'plamlari tomonidan teskari kalpain genini ifodalash naqshini ko'rsatdi (6-qo'shimcha rasm). TH17 hujayralarida IL{91}} sekretsiyasi kaltsiyning hujayra ichidagi to'planishi va sarko-/ER Ca2+ ATPazini tapsigargin bilan inhibe qilish (4g.-rasm) va (etilenbis (oksinitrid) bilan hujayradan tashqari kaltsiy xelyatsiyasi natijasida kamayishi) )tetra-atsetat (EGTA) (4h-rasm), kalpainning kaltsiyga bog'liq funktsiyasi va TCRga bog'liq IL-1 sekretsiyasi bilan mos keladi26. Bu maʼlumotlar birgalikda koʻrsatdiki, kaltsiyga bogʻliq boʻlgan kalpain proteolitik faolligi TCR faollashtirilgan inson TH17 hujayralari tomonidan noanʼanaviy IL-1 sekretsiyasi uchun zaruriy shartdir.
TH17 hujayralari tomonidan IL{0}} sekretsiyasi NLRP3 yallig'lanish faollashuvi bilan tartibga solinadi.
Kalpainning pro-IL{1}} kamolotidagi muhim roliga qaramay, parchalangan IL-1 ning hujayradan tashqariga chiqishiga olib keladigan mexanizm noma'lumligicha qoldi va shuning uchun keyingi muhokama qilindi. Miyeloid hujayralar tomonidan hujayradan tashqari IL{3}} chiqishi ilgari NLRP3 yallig'lanish faollashuvi, kaspazaning noenzimatik faolligi-1 va IL-1 16,27 chiqishi bilan bog'liq edi. Biz insonning TH17 hujayralari NLRP3 yallig'lanishining molekulyar iskalasiga egami yoki yo'qligini sinab ko'rdik va NLRP3 va adapter molekulasining oqsil ifodasini topdik, CARD (ASC) o'z ichiga olgan apoptoz bilan bog'liq dog'ga o'xshash oqsil inson TH17 hujayralarida (Kengaytirilgan ma'lumotlar 6a-rasm), b). Biz ImageStream texnologiyasidan foydalangan holda ASC dog'larini aniqlash orqali TCR bilan faollashtirilgan TH17 hujayralarida davom etayotgan yallig'lanish faollashuvini kuzatdik (5a,b-rasm) 28,29. Ajablanarlisi shundaki, ASC dog'larining ko'tarilgan chastotalari noyob TH17 hujayralar to'plami bilan chegaralangan (5b-rasm, chap). TH17 xujayralari hatto LPS- va ATP-rag'batlantiruvchi makrofaglarning ASC-belgi hosil bo'lishini taxmin qildi (5b-rasm, o'ng). TH1 va TH2 hujayra kichik to'plamlari, aksincha, fon ASC-belgi darajalarini ko'rsatdi (5b-rasm, chap). Bundan tashqari, TH17 hujayralarida davom etayotgan NLRP3 yallig'lanish faollashuvi mavjudligini tasdiqlovchi o'ziga xos NLRP3 yallig'lanish ingibitori MCC950 ishtirokida ASC-belgi va NLRP{32}}belgi hosil bo'lishi butunlay bekor qilindi (5b-rasm, chap va kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm). 6c). NLRP3 yallig'lanishining TH17 hujayralari tomonidan tanlab qo'shilishi, TH17 hujayra polarizatsiya qiluvchi sitokinlar IL-1 va TGF- ishtirokida T hujayralarini stimulyatsiya qilishda NLRP3 transkriptlarining kuchli induktsiyasi bilan qo'llab-quvvatlandi (5c-rasm). Muhimi shundaki, TH17 hujayralari tomonidan IL-1 sekretsiyasi MCC950 bilan NLRP3 yallig'lanishining o'ziga xos inhibisyoni tufayli sezilarli darajada kamaydi (5d-rasm), shu tariqa NLRP3 yallig'lanishining IL-1 sekretsiyasida muhim rolini ko'rsatdi. inson TH17 hujayralari. Kaspaza{55}} NLRP3 yallig'lanish kompleksidagi kanonik effektor oqsildir30. Biz faollashtirilgan inson TH17 hujayralarida pro-kaspaz{59}} ifodasini kuzatdik (5e-rasm). Biroq, LPS va nigeritsin bilan stimulyatsiya qilingan monotsitlardagi topilmalardan farqli o'laroq, inson TH17 hujayra lizatlarida ajralgan kaspaza-1 aniqlanmadi (5e-rasm). Bu kuzatuv sitokin stimulyatorlarini rag'batlantiruvchi IL{69}} borligi yoki yo'qligida rag'batlantirilgan TH17 hujayralarida kaspaza-1 FLICA bo'yalishining yo'qligi bilan tasdiqlangan (Kengaytirilgan ma'lumotlar 7a-e-rasm). Biz TH17 hujayralarini anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan 5 kun davomida stimulyatsiya qilgandan so'ng, Elishay tomonidan kaspazaning hujayradan tashqari chiqarilishini istisno qildik (5f-rasm). IL{79}} IL{80}} rag'batlantiruvchisi bo'lgan taqdirda ham kaspaza{81}} sekretsiyasi induksiyalanmaydi va tinch monositlardagidek past bo'lib qoldi (5f-rasm). Kaspaza-1ning Ac-YVAD-CMK bilan farmakologik inhibisyoni IL{88}} tomonidan IL{87}} induktsiyasi bor yoki yo'qligida IL{86}} sekretsiyasini kamaytirmadi. Aksincha, biz kaspazani inhibe qilishda IL{89}} sekretsiyasining biroz ortganini kuzatdik (Qo'shimcha 7a,b-rasm). Muhimi shundaki, TH17 xujayralari CRISPR-Cas tomonidan ishlab chiqilgan CASP1 ifodasini yo'qotishda IL{93}} sekretsiyasida hech qanday o'zgarish ko'rsatmadi (5g-rasm). Biologik faol kaspaza-1 yo'qligi sababli, biz inson TH17 hujayralari tomonidan IL{98}} sekretsiyasini kuzatmadik. Bu LPS va ATP bilan stimulyatsiyada kaspazaga bog'liq IL-1 sekretsiyasini ko'rsatgan monotsitlardagi holatdan farqli edi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 7f-rasm). Bundan tashqari, TH17 hujayralarida yoki TH17 hujayra klonlarida IL polarizatsiya qiluvchi sitokinlar tomonidan hujayra ichidagi IL-1 aniqlanmadi yoki induktsiya qilinmadi yoki scRNA-seq tahlili orqali faollashtirilgan TH17 hujayralarida aniqlanmadi (Kengaytirilgan ma'lumotlar-rasm. 7g, h, i). Bu bitta hujayra darajasida IL{110}} va IL-1 ni birgalikda ifodalovchi monotsitlar boʻyicha topilmadan farqli oʻlaroq, ikkala IL-1ning ilgari tavsiya etilgan sekretsiya va taxminiy koregulyatsiya sxemasiga mos keladi. sitokinlar (Kengaytirilgan ma'lumotlar 7g-rasm)16,27. Kümülatif ravishda bu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, NLRP3 yallig'lanishi aniq ishtirok etishiga qaramay, inson TH17 hujayralari monositlar va, ehtimol, boshqa tug'ma immun hujayralaridan farqli o'laroq, kaspaza-1 va IL-1 dan mustaqil ravishda IL{118}} ishlab chiqaradi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Cistanche Enhance Immunity mahsulotlarini ko'rish uchun shu yerni bosing
【Batafsil ma'lumot so'rang】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
IL-1a TH17 hujayralaridan GSDME teshiklari orqali chiqadi
Gazlightminlar yallig'lanish meditatorlarini chiqarishga imkon beradigan yaqinda aniqlangan asarlashtirilgan effor molekulalariga tegishli. Bizning transkriptom tahlilimiz proinflamatuar IL-1 -stimulyatsiya qilingan TH17 hujayralar quyi to'plamida GSDME ifodasining tanlab ko'tarilishini aniqladi, ammo gastrinlar oilasining boshqa a'zolarining regulyatsiyasi yo'q (6a-rasm). GSDME iborasi boshlang'ich t hujayralarda hech qachon xabar qilinmaganligini hisobga olgan holda ajablantirdi. Bundan farqli o'laroq, NLRP3 yallig'lanishi bilan tartibga solinishi va kaspazaning nishoni bo'lishi ma'lum bo'lgan GSDMD -1 (ref. 31) yuqori tartibga solinmagan, bu NLRP3 yallig'lanishli signalizatsiyasi g'oyasini qo'llab-quvvatlagan. Ilgari GSDME tug'ma immun hujayralarida membrana teshiklarini hosil qilishi ko'rsatilgan, ular signalinlarning hujayradan tashqari chiqarilishi uchun kanal bo'lib xizmat qilishi va GSDMD32 ga o'xshash piroptotik hujayralar o'limini boshlashi mumkin. GSDME assotsiatsiyasini Th17 hujayralari bilan sinash uchun biz 201sdme gsdme-ni corgeulyatsiyasini qo'llab-quvvatladik. Faqat TGF-ning IL-1 (TH17) bilan birikmasi, lekin IL-12 (TH1) yoki IL-4 (TH2) emas, teskari transkripsiya-miqdori bilan baholangan GSDME transkript darajasini oshirdi. PCR (RT-QPCR) (6b-rasm). Bu GSDME promotor hududlarida ROR- va BATF (asosiy leysin fermuar transkripsiyasi omili, ATF o'xshash) TH17 hujayra bilan bog'liq transkripsiya omillari uchun taxminiy bog'lanish joylari mavjudligi bilan qo'llab-quvvatlandi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 8a, b)33. GSDMD iborasi, qarama-qarshi, rostokzinlar (8-rasm) tomonidan tartibga solinmagan. Ushbu natija bizni inson th17 hujayralarida oqsil darajasida GSDME ifodasini baholashimizga undadi. GSDME Pro-formasi TCCni faollashtirishda amalga oshirildi. Ushbu adaptiv immun signaliga javoban GSDME oqsilining induktsiyasi kutilmagan edi, lekin keyinchalik GSDME promotor hududlarida NFAT, FOS, JUN va RELA kabi TCR signalizatsiyasiga javob beruvchi transkripsiya omillarining taxminiy bog'lanish joylari mavjudligi bilan qo'llab-quvvatlandi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 8a-rasm). , b). GSDME politslonal stimulyatsiyasidan keyin 24 soat boshida ifodalandi. Cleed N-Terminal Preoriting GSDME tc17 hujayralarini start stritsiyasini o'chirgandan so'ng, 3-4 d dan keyin 3-4 d dan keyin aniqlangan (6c-rasm). To'liq uzunlikdagi GSDMD t uyali faollikni birlashtirdi. Aksincha, kaspaza-1 va IL-1 sekretsiyasi yo'qligidan bashorat qilinganidek, GSDMD ajralishi kuzatilmadi, bu esa TH17 hujayralarida GSDMD rolini keyingi tahlil qilish uchun ochiq qoldirdi (6c-rasm). Keyin biz GSDME xujayralari Il -1 tabrikada illy -1 ning hujayralarini ekstrakelulali nashr etish uchun zarurmi? Shuning uchun biz GSDME CRISPRA CASE texnologiyasi bilan taqillatdik va Il {48}} Elisa tomonidan vaqt davomida supernatantga chiqdi. GSDME, ammo GSDMD bo'lmagan GSDMD ning yo'qligi Il -1 EL -1 ning chiqarilishini sezilarli ravishda to'xtatib qo'ydi (6D-rasm). Bu GSDME g'ovaksiyasini shakllantirish noan'anaviy Il -1 Inson tomonidan chiqarilgan modernizatsiya qilish mexanizmi sifatida xizmat qiladi.
4-rasm|CALIPAIN - bu inson th17 hujayralari tomonidan yorilgan il {{1} {{1} {{1} ni chiqarishni amalga oshirish uchun shar'iy shartdir
5-rasm|Noan'anaviy NLRP3 yallig'lanish faollashuvi inson TH17 hujayralari tomonidan IL{2}} ishlab chiqarishni tartibga soladi
Kaspaz-8/3 GSDME ajralish kaskadi NLRP3-bog'liq IL-1 sekretsiyasini ta'minlaydi
Keyinchalik biz NLRP3 yallig'lanish faollashuvi va inson TH17 hujayralarida GSDME bo'linishi o'rtasidagi mexanik o'zaro bog'lanish imkoniyatini o'rganib chiqdik. Kaspaz-3 yaqinda GSDME ni parchalashi ko'rsatildi, bu esa o'z navbatida NLRP3 yallig'lanish interaktor kaspazasining nishoni hisoblanadi-8 (34,35-raqamlar). Haqiqatan ham, TH17 hujayralarida pro-caspase-8 va pro-caspase-3 aniqlangan. Biz ikkala kaspazning bo'linishi TCR stimulyatsiyasida va GSDME bo'linishidan oldin sodir bo'lganligini aniqladik (6e-rasm). Bundan farqli o'laroq, nigeritsin va LPS bilan stimulyatsiya qilingan monositlarda kaspaza-8 va kaspaza-3ning parchalangan mahsulotlari aniqlanmadi (6e-rasm). GSDME parchalanishida va T hujayralari tomonidan IL{18}} sekretsiyasida bu kaspazalarning sababchi rolini aniqlash uchun biz Z-DEVD inhibitori yordamida kaspaza-3 yoki kaspaza{20}} faolligini farmakologik jihatdan blokladik. -FMK yoki Z-IETD-FMK, mos ravishda. Kaspaza-8 faolligini Z-IETD-FMK bilan inhibe qilish, boshqa hujayra turlari bo‘yicha oldingi hisobotlarga muvofiq, quyi oqimdagi maqsadli kaspaza-3 ajralishini bekor qildi36. Ikkala muolaja ham GSDME ajralishini kamaytirdi, shu bilan birga IL{30}} sekretsiyasini bekor qildi (6f-i-rasm va kengaytirilgan ma'lumotlar 9a,b-rasm). Kaspaza-1 ni inhibe qilish, aksincha, kaspaza-3 yoki GSDME bo'linishiga ta'sir qilmadi (Qo'shimcha rasm. 9). Bu ma'lumotlar kaspaza-8-kaspaz-3-GSDME o'qi TCR faollashuvida inson TH17 hujayralarida ishlayotganini va bu hujayralardagi IL{39}} sekretsiyasini tartibga solayotganini aniq ko'rsatdi. Nihoyat, bu proteolitik parchalanish kaskadi va NLRP3 yallig'lanishi o'rtasidagi bog'liqlikni o'rnatish uchun biz MCC950 ni stimulyatsiya qilingan TH17 hujayralariga qo'lladik, bu haqiqatan ham 5-kuni kaspaza-3 va GSDME bo'linishini sezilarli darajada kamaytirdi (6f,g-rasm). va kengaytirilgan ma'lumotlar 9c-rasm). Kaspaza{47}} bo'linishining qisqarishi tahlilning bir vaqtning o'zida kamroq sezildi, bu uning oldingi faollashuv vaqti oynasiga to'g'ri keldi (6e,f-rasm). Xulosa qilib aytadigan bo'lsak, har bir molekulyar o'yinchining maqsadli inhibisyoni NLRP3 inflamasoma-kaspaza-8-kaspaza-3-GSDME kaskadini inson tomonidan bioaktiv IL-1ning hujayradan tashqari chiqarilishida ishtirok etadigan proteolitik yo'l sifatida belgiladi. TH17 hujayralari.
6-rasm|NLRP3–casp8/3 ajralish kaskadi IL-1 chiqishi uchun GSDME teshiklariga olib keladi.
TH17 xujayralari GSDME teshiklariga qaramay piroptozga chidamli
Gasdermin g'ovaklarining shakllanishi ilgari turli xil hujayra turlarida piroptotik hujayralar o'limi bilan bog'liq edi13,14,37. Biz plazma membranasida g'ovak hosil qiluvchi N-GSDME birligining ifodasini topdik, ammo T hujayralarida GSDME ning teshik hosil qiluvchi funktsiyasini qo'llab-quvvatlovchi sitozol emas (7a-rasm). Ajablanarlisi shundaki, GSDME-buzilma va CRISPR-Cas9 genida tahrirlangan, GSDME-kam odamning TH17 hujayralarini GSEA tomonidan transkriptomik taqqoslash hujayra o'limining turli shakllaridagi farqlarni istisno qildi; ammo, ayniqsa, GSDME etishmovchiligi bo'lgan TH17 hujayralaridagi ta'sirlangan jarayonlar va yo'llar, asosan, N-GSDME tomonidan hosil bo'lgan teshik hosil qiluvchi o'tkazgichlarga muvofiq, transmembran tashishni boshqaruvchi genlar bilan bog'liqligini aniqladi (7b-rasm va qo'shimcha 10-rasm). . GSDME ifodasi yo'qligi va mavjudligi uchun tanlangan individual TH17 hujayralarining bir hujayrali transkriptomik taqqoslashi GSDME ifodalovchi TH17 hujayralarining ko'payish uchun gen to'plamini boyitish orqali hayotiyligini qo'llab-quvvatladi (7c-rasm). Nihoyat, CRISPR-Cas9 genida tahrirlangan, GSDME etishmovchiligi va GSDME-buzilmagan TH17 hujayralarida laktat dehidrogenaza (LDH) chiqarilishida hech qanday farq yo'qligini ko'rsatib, inson GSDME-ni ifodalovchi TH17 hujayralarining piroptozga chidamliligini tasdiqladik (TCR stimulyatsiyasidagi 7d). Keyin biz IL-1 + va IL-1 - TH17 hujayralarini hayotiyligi va ko'payish potentsialiga ko'ra solishtirdik, chunki TH17 hujayralari IL-1dan farqli ravishda IL{35}} sirt ifodasini ko'rsatmadi. }} monositlar kabi boshqa uyali nasllarning hujayralarini ishlab chiqaradi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 5d-rasm). IL-1 + va IL-1 - TH17 hujayralarini taqqoslash uy qurilishi IL{41}}sekretsiyasi tahlilini o'rnatishni talab qildi, bu sekretsiyani ushlash orqali IL{42}}yashovchan TH17 hujayralarini izolyatsiya qilish imkonini beradi. forbol-12-miristat-13-atsetat (PMA) va ionomisin stimulyatsiyasidan keyin avtokrin IL-1 hujayra yuzasiga. Yuzaki IL-1 mavjudligi yoki yo'qligi uchun saralangandan so'ng bitta hujayra sifatida joylashtirilgan TH17 hujayralarining klonlash samaradorligida hech qanday farq kuzatilmadi (Qo'shimcha rasm. 11). Bu topilma bitta hujayra darajasida IL-1 + va IL-1 - TH17 hujayralarining hayotiyligi va kengayishidagi farqlarni istisno qildi. Biz hujayra ichidagi IL{55}} ifodasining turli darajalari asosida tekshirilgan TH17 klonlarini qayta klonladik va ularning tegishli klonlash samaradorligini kuzatdik. Agar GSDME faollashtirilgan IL-1 chiqishi piroptotik hujayralar oʻlimi bilan bogʻliq boʻlsa, T-hujayra klonlarida IL-1 ifodasi va ularning individual qayta klonlanishida oʻsayotgan klonlarning chastotasi (klonlash samaradorligi) oʻrtasidagi teskari korrelyatsiya kutiladi. Biroq, T hujayralarini qayta klonlash samaradorligi TH17 hujayra klonlaridagi IL-1 ifoda darajasidan mustaqil edi va buning o‘rniga IFN-ning yo‘qligida turli ifoda darajalari asosida tanlangan nazorat T hujayralari klonlarinikiga o‘xshash edi. IL{62}} birgalikda ifodalash (7e-rasm). Muhimi, IL-1 + TH17 hujayra klonlari IL{67}} ni takroriy TCR restimulyatsiya sikllarida qayta ifodalashda davom etdi (7f-rasm). Shunday qilib, qayta stimulyatsiya qilinganda ularning tegishli klonal T-hujayralari populyatsiyasidan IL{70}hosil qiluvchi hujayralarning hujayra o'limi bilan bog'liq yo'qolishi chiqarib tashlandi. Shunisi e'tiborga loyiqki, bu topilma induksiyalangan IL-1 uchun T hujayra sitokin xotirasini ko'rsatadi. Biz ommaviy IL-1 + va IL-1 - TH17 hujayralari o'rtasida transkriptomik taqqoslash o'tkazdik va IL-1 - TH17 hujayralari bilan solishtirganda IL{75}}da proliferatsiya genlari to'plamining yanada ko'proq boyitilishini kuzatdik. klonlar (7g-rasm). IL1A + ni IL1A- TH17 hujayralari bilan bir hujayrali transkriptomik taqqoslash proliferatsiya uchun transkriptomik boyitishni tasdiqladi. Bu, shuningdek, IL1A ifodalovchi TH17 hujayralari va yallig'lanish imzolari uchun boyitilgan Leiden klasteri 1ni boshqa barcha klasterlar bilan taqqoslash uchun ham shunday bo'ldi (7h-rasm). IL-1 + TH17 xujayralari oqim sitometrik tahliliga ko'ra, IL-1ga qaraganda yuqori Ki67 ifodasini ko'rsatdi - 5 kunlik poliklonal stimulyatsiyadan so'ng (7i-rasm), bu yana insonning TH17 hujayralarida IL{ bor degan fikrni tasdiqlaydi. {96}} chiqish tug'ma hujayralardagidan farqli ravishda hujayra o'limi bilan bog'liq emas. Kümülatif ravishda bu ma'lumotlar IL{97}} ishlab chiqarilishining (piroptotik) hujayralar o'limi bilan bir hujayrali darajasida ham bog'lanishini istisno qiladi va inson T hujayralarida takroriy TCR qayta stimulyatsiyasida IL{99}} ishlab chiqarish uchun sitokin xotirasiga ega ekanligini ko'rsatadi. .
T xujayrasidan olingan IL-1 antifungal xost himoyasiga hissa qo'shadi
Inson TH17 hujayralari IL-1 tug'ma xavf signalini ishlab chiqarishi va uning hujayradan tashqari chiqarilishi uchun tug'ma signalizatsiya mexanizmini o'zgartirishi haqidagi topilmamiz adaptiv va tug'ma immun javoblarning farqini yo'qotadi va shu bilan T hujayralarining umumiy funktsional repertuarini kengaytiradi. Moslashuvchan xotira javoblarining xarakteristikasi bo'lib qoladigan muhim xususiyat bu TCR bilan ta'minlangan antigen o'ziga xosligi. Shuning uchun biz inson TH17 hujayralarining IL-1 ishlab chiqarish qobiliyati o'ziga xos antigen o'ziga xosliklari bilan chegaralanganligini tekshirdik. TH17 hujayralari avval C. albicans va Staphylococcus aureus antigenlari15 uchun xos bo'lgan hujayralar ichida yuqori darajada boyitilganligi ko'rsatilgan. Qizig'i shundaki, biz S. aureusga xos TH17 hujayra klonlariga qaraganda C. albicansga xos bo'lgan IL{7}} ifodasi va sekretsiyasini sezilarli darajada ko'proq kuzatdik (8a-rasm). Keyin biz S. aureus emas, balki C. albicansni taniydigan sodda T hujayralari IL-1 ni tanlab ishlab chiqarish uchun ularning qarindosh antijeni tomonidan astarlantirilishini tekshirdik. Sodda (CD45RA+ CCR7+) TH hujayralari issiqlik bilan inaktivlangan C. albicans yoki S. aureus antijenlari bilan impulslangan otologik monotsitlar bilan kokulturatsiya qilingan yoki anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan poliklonal tarzda stimulyatsiya qilingan va keyin 7-kuni klonlangan. allogenik oziqlantiruvchi hujayralar bilan. Barcha klonlar 14-kuni anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan 5 kun davomida ularning supernatantlarining Elishay uchun qayta stimulyatsiya qilindi. Ajablanarlisi shundaki, biz S. aureus yoki poliklonal TCR faollashuvi emas, balki C. albicans insonning TH17 hujayralarida de novo IL{28}} ishlab chiqarilishini keltirib chiqarganini aniqladik (8b-rasm). Bizning birlashgan ex vivo eslash va in vitro priming yondashuvimiz IL-1 ishlab chiqarish qobiliyati C. albicans uchun TCR o'ziga xosligi bo'lgan T hujayralari bilan chegaralanganligini aniqlaydi. Nihoyat, biz C. albicansga xos TH17 hujayralarining IL-1 ishlab chiqarishdagi o'ziga xos qobiliyati antifungal xost mudofaasidagi fiziologik rol bilan bog'liqligini sinab ko'rdik. Buning uchun biz 5 kun davomida anti-CD3 va anti-CD28 monoklonal antikorlari bilan poliklonal qayta stimulyatsiya qilinganidan so'ng, inson monotsitlarini inson TH17 hujayralaridan supernatantlar bilan kokultura qildik. Biz oqim sitometriyasi yordamida monositlar tomonidan FITC bilan belgilangan C. albicans fagotsitozining sezilarli darajada oshishini kuzatdik. Muhimi, C. albicans fagotsitozining TH17 hujayra supernatantlari tomonidan ortishi IL-1 ga bog'liq bo'lib, C. albicans fagotsitozining sezilarli darajada bekor qilinishi bilan ko'rsatilgan, agar TH17 hujayra supernatantlarida immunoabsorbtsiya yoki CRISPR-C as-1 so'ng IL-1 yo'q bo'lsa. TH17 hujayralarida {46}}maqsadli IL-1 kamayishi (8c-rasm). Jonli hujayraning in vitro tasviri TH17 hujayra supernatantlarini o'z ichiga olgan IL{50}}mavjudligida monositlar tomonidan C. albicansning ko'payishi va yo'q qilinishini yanada tasdiqladi (8d-rasm, video ma'lumotlar). Bu topilmalar birgalikda TH17 xujayralari C. albicans infektsiyasini faqat ilgari o'ylanganidek IL-17 ishlab chiqarish orqali emas38, balki sezilarli darajada noyob TH17 hujayralar to'plamining ajralish qobiliyati orqali ham tozalashini qat'iy tasdiqlaydi. IL-1 hosil qiladi. Kümülatif ravishda, yallig'lanishga qarshi IL-1 uchun chiqish strategiyasi sifatida T hujayralarida GSDME g'ovaklarining shakllanishini aniqlaydigan topilmalar va GSDME ning NLRP3 yallig'lanish-kaspaza-8-kaspaza-3 o'qi tomonidan tartibga solinishi aniqlangan. antifungal TCR o'ziga xos xususiyatlariga ega TH17 hujayralarining yallig'lanishga qarshi pastki to'plami bilan bog'liq bo'lgan T hujayralari sitokin sekretsiyasi rejimi. Bu antifungal xost himoyasi uchun tegishli bo'lgan va surunkali yallig'lanish kasalliklari patogenezida ishtirok etishi mumkin bo'lgan inson TH17 hujayralarini modulyatsiya qilish uchun yangi terapevtik maqsadlarni beradi.
cistanche tubulosa - immunitet tizimini yaxshilaydi
Munozara
Xulosa qilib aytganda, bizning topilmalarimiz T hujayralari populyatsiyasining umumiy funksionalligini diversifikatsiya qiluvchi inson T hujayralarida ilgari noma'lum biologik yo'l va sitokin sekretsiyasi usulini ochib beradi. Biz IL-1 ifodasi TH17 hujayra taqdiri bilan oʻziga xos tarzda chegaralanganligini aniqladik, bu uning IL-17A bilan birgalikda ifodalanishi, ROR-t bilan tartibga solinishi, TH17 hujayrani qoʻzgʻatuvchi sitokinlar IL{{ tomonidan induksiyasi bilan isbotlangan. 6}} va TGF- va uning TH17 hujayra bilan bog'langan kimyokin retseptorlari ekspresyon profili bilan. Ushbu topilmalar ushbu tadqiqotda ta'riflanganidek, IL1a kuchaytirgich va promotor hududlarida ROR-t va ROR- uchun bog'lanish joylari mavjudligiga va NLRP3 promotor mintaqasida ilgari xabar qilingan ROR-t-bog'lanish joylariga mos keladi39. Bundan tashqari, biz TH17 hujayrali sitokinlarning NLRP3 va GSDME ifodasini oshirganini kuzatdik. Shunga ko'ra, ROR- va BATF kabi TH17 hujayra taqdirining asosiy regulyatorlari, shuningdek, bir nechta TCR-induktsiyali transkripsiya omillari GSDME kuchaytiruvchi hududlarida taxminiy bog'lanish joylarini ko'rsatdi. Shuning uchun TH17 hujayra polarizatsiyasi nafaqat IL{24}} ifodasini, balki uning hujayradan tashqari chiqishini ham targ'ib qildi (Kengaytirilgan ma'lumotlar 10-rasm, grafik xulosa). Kutilmaganda biz NLRP3 inflamasomasining faol ekanligini va TCR bilan faollashtirilgan TH17 hujayralarida IL{28}} o‘rniga IL-1 ni chiqarish uchun mo‘ljallanganligini topdik. Tug'ma hujayralardan farqli o'laroq, T hujayralari tug'ma xavfni sezish uchun ixtisoslashgan emas, bu NLRP3 yallig'lanish komponentlarini yig'ishni boshlashi ma'lum. Biroq, ilgari sitoplazmatik Ca2+ ning ko'tarilishi NLRP3 yallig'lanishi faollashuvi uchun tug'ma xavf signalini chetlab o'tishi ko'rsatilgan edi16,40. Bu kaltsiy oqimi bilan birga bo'lgan TCR faollashuvi inson TH17 hujayralari tomonidan IL{36}} chiqarilishi uchun zarur bo'lgan talab ekanligi haqidagi xulosamizga mos keladi. Biz TH17 xujayralari kaspaza-8 orqali muqobil NLRP3 quyi oqim signalizatsiya kaskadiga kirishganini kuzatdik. Bunga kaspaza-1 bo'linishning yo'qligi yordam bergan bo'lishi mumkin, chunki raqobatbardosh kaspaza-1 va kaspaza-8 yallig'lanishli ishga kirishi ilgari ko'rsatilgan34,41. Shuningdek, biz inson TH17 hujayralarida prokaspaza-1 va bo‘linmagan GSDMDni topdik, ammo ularning NLRP3 yallig‘lanishi bilan boshqariladigan bo‘linishi yoki IL-1 ishlab chiqarilishiga dalil yo‘q. Ularning prekursorlarining ifodasi, muqobil hali aniqlanmagan stimullar qo'llanilsa, klassik NLRP3 yallig'lanish signalizatsiyasi va IL{53}} chiqishi inson TH17 hujayralarida ham ishlashi mumkinmi degan savolni tug'diradi. Bu shuni anglatadiki, kaspaza-8- va kaspazaga-1-bog'liq bo'lgan qarama-qarshi tartibga solish mexanizmlari NLRP3 yallig'lanishi uchun ilgari tavsiya etilgan rollarni birlashtirib, T hujayralari tomonidan IL{60}} va IL{61}} ishlab chiqarilishining dixotomiyasini nazorat qilishi mumkin. inson TH1 hujayralari42 va sichqoncha TH17 hujayralari43da IL{63}} chiqarilishida. Tadqiqotimizning qiziqarli kuzatuvi T hujayralarida GSDME ifodasi va bo'linishini aniqlash edi. Bu membrana teshiklari orqali noan'anaviy sitokin sekretsiyasi T hujayralarida paydo bo'lishi mumkinligini ko'rsatdi. Yaqinda GSDME ga tayinlangan ba'zi funktsiyalar piroptoz va keyinchalik o'simta hujayralarining o'limining kuchayishi va yallig'lanish mikro muhiti bilan bog'liq 32,44. Ajablanarlisi shundaki, biz GSDME-ni ifodalovchi TH17 hujayralari o'rniga GSDME-tanqisligi bo'lgan T hujayralari bilan solishtirganda takroriy TCR stimulyatsiyasida saqlanib qolgan hayotiylikni va davomli proliferatsiyani ko'rsatdi. Xuddi shu natijalar IL-1 + uchun IL-1 - T hujayralari bilan solishtirganda kuzatildi. Bu topilmalar kutilmagan edi, chunki IL{75}} ishlab chiqarilishi shu paytgacha qarilik va shu tariqa replikatsiya toʻxtatilgan yoki oʻlayotgan hujayralar45 belgisi hisoblangan. Bu IL{78}} xavfli signali T-hujayra bilan bog'langan sitokin xotirasining bir qismi bo'lishi mumkin, degan fikrni keltirib chiqaradi, u antigenni tanib olishda qayta qo'zg'aladi46. Bundan tashqari, GSDME teshiklari TH17 hujayralariga IL-1 dan tashqari, ularning o'lchamlari yoki zaryadlari bilan belgilanadigan qo'shimcha noma'lum molekulalarni chiqarishga imkon beruvchi fiziologik funktsiyani bajarishi mumkin. Bu GSDME-intakt yoki CRISPR-Cas{88}}injiniringi, GSDME-niqisligi bo'lgan TH17 hujayralarini xolis transkriptomik taqqoslashimiz natijalariga mos keladi, bu esa hujayra o'limida emas, balki transmembran tashishda GSDME uchun bir nechta rolni aniqladi. GSDME teshiklari bo'lgan T hujayralarida yashovchanlik va uzoq muddatli IL{92}} sitokin xotirasini saqlab qolish mexanizmi kelajakda o'rganilishi kerak. Turli xil hujayra manbalaridan, xususan, tug'ma APClardan olingan IL-1 mavjudligi T-hujayrasidan olingan IL-1 ning inson salomatligi va kasalliklariga nisbiy hissasi haqida savol tug'diradi. IL{96}} T-hujayralari T-hujayra nasl-nasabining faqat kichik bir qismini tashkil qilsa-da, ularning IL{97}} ishlab chiqarish qobiliyati miqdoriy jihatdan LPS-stimulyatsiya qilingan monotsitlar bilan solishtirish mumkin edi, bu T hujayralari xizmat qilishi mumkinligi haqidagi yangi tushunchani qo'llab-quvvatlaydi. yallig'lanish IL ning tegishli manbai sifatida-1 . Transkriptomik va funktsional tahlillarimiz natijalari IL{100}} TH17 hujayralarining yallig'lanishga qarshi taqdiri bilan bog'liqligini ko'rsatdi. Inson TH17 hujayralarining IL-1 + subpopulyatsiyasida yallig‘lanish patogenligi va surunkali yallig‘lanish kasalliklari bilan bog‘liqligining transkriptomik belgilari namoyon bo‘ldi. JIA bilan og'rigan bemorlarning TH17 hujayralarini aylanib o'tish orqali IL-1ning sezilarli darajada yaxshilangan ifodasi va ularning yallig'langan sinovial suyuqlikda ko'p joylashishi TH17 hujayralarining IL-1 + quyi to'plamining ushbu patogen potentsialini qo'llab-quvvatlaydi. TH17 hujayralarini ishlab chiqaradigan IL-1 -va JIA patogenezi o'rtasidagi jiddiy sabab-oqibat aloqasi hali ham o'rnatilishi va IL{110}} TH17 hujayralarining nisbiy ta'siri kelajakdagi klinik sinovlarda tasdiqlangan. Ajablanarlisi shundaki, T hujayralari tomonidan IL{112}} ishlab chiqarilishi ularning TCR o'ziga xosligi bilan bog'liq. Tug'ma hujayra manbalari tomonidan IL{114}} ishlab chiqarilishi o'ziga xos bo'lmagan stress stimullari16 tomonidan qo'zg'atilgan bo'lsa-da, biz inson TH17 hujayralari tomonidan IL{116}} ishlab chiqarilishi C. albicans uchun TCR o'ziga xosligi bilan bog'liqligini aniqladik. Buning o'rniga S. aureusga xos TH17 hujayralarida IL{120}} ishlab chiqarish sezilarli darajada kamaygan. Bu topilmalar avval xabar qilinganidek, S. aureusga xos TH17 xujayralari emas, balki C. albicans avlodi uchun IL-1 ning differentsial talabiga mos keladi4 va shunga mos ravishda ILning muhim roli{{126} } IL{127}} ifodasining induksiyasi uchun, bu yerda xabar qilinganidek. Bundan tashqari, biz IL{128}} sekretsiyasi TCR stimulyatsiyasi va kaltsiy signallariga bog'liqligini aniqladik, bu uning TCR orqali o'ziga xos adaptiv immun signalizatsiyasi bilan qattiq bog'lanishini ta'kidladi. TH17 xujayralari IL-17 sekretsiyasi orqali C. albicans infektsiyalarini tozalashning bosh qahramoni ekanligi ma'lum, bu genetik yoki terapevtik IL-17 kamchiliklari sharoitida C. albicans dysbiosis misolida ko'rsatilgan38. Biz TH17 hujayra mahsuloti IL-1 C. albicans klirensida ishtirok etishini aniqladik, chunki uning TH17 hujayra supernatantlarida yo'qligi monotsitlar tomonidan C. albicans fagotsitozini sezilarli darajada kamaytirdi. Bu shuni ko'rsatadiki, antifungal TH17 hujayra effektor funktsiyalari ilgari taklif qilinganidek, nafaqat IL{137}}A/F, balki TCRga xos tarzda IL{138}} orqali ham amalga oshiriladi. TH17 hujayralari tomonidan IL{140}} ishlab chiqarilishiga olib keladigan molekulyar yo'lning anormal regulyatsiyasi buzilgan antifungal xost mudofaasiga moyil bo'lishi mumkinmi, shuning uchun kelajakda sinovdan o'tish kerak bo'ladi. Birgalikda bizning topilmalarimiz turli yallig'lanish kasalliklarida TH17 hujayralarini ishlab chiqaradigan IL-1 -va zamburug'larga qarshi xostlar himoyasini tizimli tekshirishga yo'l ochadi. TCR-NLRP3 inflamasoma-kaspaza-8-kaspaz-3-GSDME o'qi nafaqat TH hujayralarida immun signalizatsiyasi va taqdir ko'rsatmalarining ilgari e'tibordan chetda qolgan rejimini ifodalaydi, balki patogen TH17 hujayrasini buzish uchun molekulyar maqsadlarni ham beradi. identifikatsiya qilish yoki uni mezbon himoyasi uchun ishlatish.
7-rasm|TH17 hujayralari GSDME plazma membranasi g'ovaklariga qaramasdan piroptozga chidamli.
8-rasm|TCR o'ziga xosligi IL-1 ishlab chiqarishni nazorat qiladi va C. albicans klirensiga hissa qo'shadi
Ma'lumotnomalar
1. Ivanov, II va boshqalar. Yetim yadro retseptorlari RORgammat yallig'lanishga qarshi IL-17+ T yordamchi hujayralarining differentsiatsiya dasturini boshqaradi. 126-uya, 1121–1133 (2006).
2. Zwicky, P., Unger, S. & Becher, B. Surunkali yallig'lanish kasalliklarida interleykin-17ni maqsad qilib olish: klinik nuqtai nazar. J. Exp. Med. 217, e20191123 (2020).
3. Stockinger, B. & Omenetti, S. T yordamchi 17 hujayraning dixotomiyasi. Nat. Rev. Immunol. 17, 535–544 (2017).
4. Zielinski, CE va boshqalar. Patogen tomonidan qo'zg'atilgan inson TH17 hujayralari IFN-gamma yoki IL-10 hosil qiladi va IL-1beta tomonidan boshqariladi. Tabiat 484, 514–518 (2012).
5. Ghoreschi, K. va boshqalar. TGF-beta signalizatsiyasi bo'lmaganda patogen TH17 hujayralarini yaratish. Tabiat 467, 967–971 (2010).
6. Noster, R. va boshqalar. Otoinflamatuar Shnitsler sindromida yallig'lanishga qarshi va yallig'lanishga qarshi odamning TH17 hujayralari funktsiyalarining disregulyatsiyasi. J. Allergiya klinikasi. Immunol. 138, 1161–1169.e1166 (2016).
7. Aschenbrenner, D. va boshqalar. Inson TH17 hujayralarida c-MAF tomonidan modulyatsiya qilingan immunoregulyatsion va to'qimalarda rezidentlik dasturi. Nat. Immunol. 19, 1126–1136 (2018).
8. Wu, C. va boshqalar. Patogen TH17 hujayralarini induksiyalangan tuzni sezuvchi kinaz SGK1 tomonidan induktsiya qilish. Tabiat 496, 513–517 (2013).
9. Mattias, J. va boshqalar. Tuz yallig'lanishga qarshi Th17 hujayralarini hosil qiladi, ammo yallig'lanishga qarshi sitokin mikro muhitida patogenlikni kuchaytiradi. J. Klin. Invest. 130, 4587–4600 (2020).
10. Kavalli, G. va boshqalar. Interleukin 1alpha: IL{2}}alfa ning otoimmün va yallig'lanish kasalliklarining patogenezi va davolashdagi roli haqida keng qamrovli sharh. Otoimmün. Vahiy 20, 102763 (2021).
11. Acosta-Rodriguez, EV, Napolitani, G., Lanzavecchia, A. & Sallusto, F. Interleukins 1beta va 6, lekin transformatsiyalanmaydigan o'sish omili-beta inson T-yordamchi hujayralarini ishlab chiqaruvchi interleykin 17-differensiatsiyasi uchun zarurdir. . Nat. Immunol. 8, 942–949 (2007).
12. Latz, E., Xiao, TS & Stutz, A. Yallig'lanishlarni faollashtirish va tartibga solish. Nat. Rev. Immunol. 13, 397–411 (2013).
13. Shi, J. va boshqalar. Yallig'lanish kaspazlari tomonidan GSDMD ning bo'linishi piroptotik hujayra o'limini aniqlaydi. Tabiat 526, 660–665 (2015).
14. Liu, X. va boshqalar. Yallig'lanish bilan faollashtirilgan gaz dermin D membrana teshiklarini hosil qilib, piroptozni keltirib chiqaradi. Tabiat 535, 153–158 (2016).
15. Acosta-Rodriguez, EV va boshqalar. Inson interleykinini 17-yordamchi xotira hujayralarini hosil qiluvchi sirt fenotipi va antigenik o'ziga xosligi. Nat. Immunol. 8, 639–646 (2007).
16. Gross, O. va boshqalar. Yallig'lanish faollashtiruvchilari interleykin{1}}alfa sekretsiyasini kaspazaning proteaz funktsiyasi uchun turli talablarga ega bo'lgan turli yo'llar orqali-1 qo'zg'atadi. Immunitet 36, 388–400 (2012).
17. Malik, A. & Kanneganti, TD Yallig'lanish kasalliklari va saraton kasalliklarida IL{1}}alfa funktsiyasi va regulyatsiyasi. Immunol. Vahiy 281, 124–137 (2018).
18. Cimaz, R. Tizimli boshlangan balog'atga etmagan idyopatik artrit. Otoimmün. Vahiy 15, 931–934 (2016).
19. Fong, KY, Boey, ML, Koh, WH & Feng, PH Romatoid artritli bemorlarning sinovial suyuqligi va plazmasidagi sitokin kontsentratsiyasi: suyak eroziyasi bilan korrelyatsiya. Klin. Exp. Revmatol. 12, 55–58 (1994).
20. Eyerich, S. & Zielinski, Idoralar Th-hujayra pastki to'plamlarini klassik va to'qimalarga xos tarzda aniqlash: teridan misollar. Yevro. J. Immunol. 44, 3475–3483 (2014).
21. Monteleone, M., Stow, JL & Schroder, K. IL-1 oilasi sitokinlarining noan'anaviy sekretsiyasi mexanizmlari. Sitokin 74, 213-218 (2015).
22. Keller, M., Ruegg, A., Verner, S. & Beer, HD Active kaspaz-1 noan'anaviy oqsil sekretsiyasining regulyatoridir. 132-uya, 818–831 (2008).
23. Kurt-Jons, EA, Beller, DI, Mizel, SB & Unanue, ER. Makrofaglarda membrana bilan bog'langan interleykin 1 ni aniqlash. Proc. Natl akad. Sci. AQSH 82, 1204–1208 (1985).
24. Mosley, B. va boshqalar. Interleykin-1 retseptorlari inson interleykin-1 alfa prekursorini bog'laydi, lekin interleykin-1 beta prekursorini bog'lamaydi. J. Biol. Kimyo. 262, 2941–2944 (1987).
25. Carruth, LM, Demczuk, S. & Mizel, SB. Sichqoncha interleykin 1alfa prekursorini qayta ishlashda kalpainga o'xshash proteazning ishtiroki. J. Biol. Kimyo. 266, 12162–12167 (1991).
26. Kobayashi, Y. va boshqalar. Kaltsiy bilan faollashtirilgan neytral proteazni inson interleykin 1 alfani qayta ishlash fermenti sifatida aniqlash. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 87, 5548–5552 (1990).
27. Fettelschoss, A. va boshqalar. Yallig'lanish faollashuvi va IL{1}}beta maqsadli IL{2}}alfa, sirt ifodasidan farqli ravishda sekretsiya uchun. Proc. Natl akad. Sci. AQSh 108, 18055–18060 (2011).
28. Franklin, BS, Latz, E. & Schmidt, FI ASC dog'larining hujayra ichidagi va hujayradan tashqari funktsiyalari. Immunol. Vahiy 281, 74–87 (2018).
29. Nagar, A., DeMarko, RA va Xarton, J.A. Yallig'lanish va kaspaza{1}} faolligini tavsiflash va baholash: yallig'lanish dog'lari va kaspaza-1 faolligini tasvirlash oqimi sitometri asosida aniqlash va baholash. J. Immunol. 202, 1003–1015 (2019).
30. Rathinam, VA & Fitzgerald, KA Inflammasome komplekslari: paydo bo'ladigan mexanizmlar va effektor funktsiyalari. 165-uya, 792–800 (2016).
31. Broz, P., Pelegrin, P. & Shao, F. Boshlovchi - hujayra o'limi va yallig'lanishini amalga oshiradigan oqsil oilasi. Nat. Rev. Immunol. 20, 143–157 (2020).
32. Chjan, Z. va boshqalar. Gasdermin E o'smaga qarshi immunitetni faollashtirib, o'simta o'sishini bostiradi. Tabiat 579, 415–420 (2020).
33. Schraml, BU va boshqalar. AP-1 transkripsiya faktori BATF TH17 differensiatsiyasini boshqaradi. Tabiat 460, 405–409 (2009).
34. Antonopoulos, C. va boshqalar. Kaspaz{1}} NLRP3 yallig'lanish signalizatsiyasining effektori va regulyatori sifatida. J. Biol. Kimyo. 290, 20167–20184 (2015).
35. Vajjhala, PR va boshqalar. Yallig'lanish adapteri ASC prokaspaz{1}} o'lim efektori domen filamentlarini keltirib chiqaradi. J. Biol. Kimyo. 290, 29217–29230 (2015).
36. Stennicke, HR va boshqalar. Pro-kaspaz{2}} kaspaza-8 ning asosiy fiziologik maqsadi hisoblanadi. J. Biol. Kimyo. 273, 27084–27090 (1998).
37. Deng, W. va boshqalar. Streptokokkning pirojenik ekzotoksini B GSDMA-ni parchalaydi va piroptozni qo'zg'atadi. Tabiat 602, 496–502 (2022).
38. Puel, A. va boshqalar. Interleykin{1}} immunitetining tug'ma nuqsonlari bo'lgan odamlarda surunkali shilliq teri kandidozi. Fan 332, 65–68 (2011).
39. Billon, C., Murray, MH, Avdagic, A. & Burris, TP RORgamma NLRP3 yallig'lanishini tartibga soladi. J. Biol. Kimyo. 294, 10–19 (2019).
40. Li, GS va boshqalar. Kaltsiyni sezuvchi retseptor NLRP3 yallig'lanishini Ca2+ va cAMP orqali boshqaradi. Tabiat 492, 123–127 (2012).
41. Gao, Y. va boshqalar. Transkripsiyaviy profillash kaspazani -1 Th17 differensiatsiyasining T hujayralarining ichki regulyatori sifatida aniqlaydi. J. Exp. Med. 217, e20190476 (2020).
42. Arbore, G. va boshqalar. T yordamchi 1 immuniteti CD4+ T hujayralarida komplement tomonidan boshqariladigan NLRP3 yallig'lanish faolligini talab qiladi. Fan 352, aad1210 (2016).
43. Martin, BN va boshqalar. T-hujayra-intrinsik ASC TH17- vositachiligida eksperimental otoimmün ensefalomielitni tanqidiy ravishda qo'llab-quvvatlaydi. Nat. Immunol. 17, 583–592 (2016).
44. Vang, Y. va boshqalar. Kimyoterapiya preparatlari bosh miyaning kaspaz-3 yorilishi orqali piroptozni keltirib chiqaradi. Tabiat 547, 99–103 (2017).
45. Wiggins, KA va boshqalar. Kanonik bo'lmagan yallig'lanish kaspazalarining IL{1}} bo'linishi qarilik bilan bog'liq bo'lgan sekretor fenotipini nazorat qiladi. Qarish xujayrasi 18, e12946–e12946 (2019).
46. Helmstetter, C. va boshqalar. Individual T yordamchi hujayralari miqdoriy sitokin xotirasiga ega. Immunitet 42, 108-122 (2015).
47. Xia, S. va boshqalar. Gasdermin D gözenek tuzilishi etuk interleykinning imtiyozli chiqarilishini ko'rsatadi-1. Tabiat 593, 607–611 (2021).
