Makrofaglarning kamayishi H omiliga bog'liq bo'lgan immun kompleks vositachiligidagi glomerulonefritda kasallik patologiyasini kamaytiradi

Komplement omilH (FH) odam va sichqonchada komplementning muqobil yo'lining asosiy regulyatoridir. Ilgari, bizning tadqiqotlarimiz shuni ko'rsatdiki, FH yo'qligi C57BL6 sichqonchasiga sezgir bo'lishiga olib keladi.surunkali sarum kasalligi(CSS) ning ortishi bilan birgabuyrakdaFimakrofaglarni filtrlashboshqaruv elementlari bilan solishtirganda. Makrofaglarning ko'payishi yoki yo'qligini tushunish uchun (Mϕs) buyragiga haydab kirdiflurish va targ'ibot jarohati, biz e ko'rib chiqdiko'nva boshqalar Mϕ CSS bilan FH nokautli sichqonlarda klodronat bilan tükenme. Sakkiz haftalik FHKO sichqonlari 5 hafta davomida apoferritin (4 mg / sichqoncha) va transport vositasi (PBS) yoki klodronat (so'nggi 3 hafta davomida 50 mg / kg ip, 3 marta / hafta) bilan davolashdi. ma'muriyatiklodronat monositlar va M.ni kamaytiradiϕbuyraklarda stomonidan>80%. 

Buyrak funktsiyasiBUN tomonidan baholangan va albumin M ning kamayishi bilan normaga yaqinroq bo'lib qoldiϕs. Klodronat bilan davolash sitokinlar, TNF o'zgarishini oldini oldi va IL-6 va biriktiruvchi to'qima o'sish omili (CTGF), TGF gen ekspressiyasining oshishi -1, matritsa metalloproteinaz-9 (MMP9),FiCSS bilan FHKO sichqonlarida bronektin, laminin va kollagen (P < 0:05). Klodronat bilan davolash nisbiy himoyaga olib keldiimmun kompleksi- (IC-) tomonidan baholangan CSS davomida kasallik patologiyasi vositachiligibelgisiFiglomerulyar patologiyani sezilarli darajada kamaytiradi(GN) va hujayradan tashqari matritsa. Natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, komplement faollashuvi makrofag landshaftini tartibga soluvchi mexanizmlardan biri va shu bilanFibroz. Aniq mexanizmni hal qilish kerak. Qisqasi, bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, Mϕs FHga bog'liq ICGN va M.da hal qiluvchi rol o'ynaydiϕ kamayishikasallikning rivojlanishini pasaytiradi.

BUYRAK FONKSIYASI UCHUN 25% EKINAKOSID VA 9% AKTEOSID BILAN TABIY ORGANIK SİSTANCHE EKSTRAKTINI OLISH UCHUN SHU YERGA BOSING

1.Kirish

Surunkali buyrak kasalligi(CKD) global sog'liq muammosi; Ulardan 10% immun kompleks- (IC-) vositachiligida bo'lib, sarum kasalligi, infektsiyalar va otoimmün kasalliklarda uchraydi. [1]. Bu haqda AQShning Renal Data System yillik hisobotida aytiladiCKD bilan kasallangan shaxslar"o'lim xavfi aniq" bo'lib, o'ttiz yil ichida kasallanish 10- barobar ortdi, bunda ta'sirlangan bemorlar umrining 70 foizini yo'qotdi. NIDDK ma'lumotlariga ko'ra, kattalar aholisining taxminan 14% buyrak kasalligiga tashxis qo'yilgan va bu o'limning 9-o'rinda turadi [2]. Buyrak, ayniqsa otoimmün va yallig'lanish sharoitida komplement vositachiligidagi shikastlanishga juda sezgir.

Komplement tizimi tug'ma va adaptiv immunitet reaktsiyalarida ishtirok etadi va mikroorganizmlarga qarshi birinchi himoya chizig'ini ta'minlaydi [5, 6]. U noyob yo'llar bilan boshlangan va 30 dan ortiq plazma va hujayralar bilan bog'liq bo'lgan oqsillardan tashkil topgan uchta faollashtirish yo'lidan iborat [7]. Muqobil yo'l doimo ogohlantiriladi va H (FH) komplement omili kabi oqsillar tomonidan tartibga solinadi. FH asosan jigar tomonidan sintezlanadigan aylanma oqsildir [8]. Apoferritin bilan davolangan FH yetishmaydigan (fh-/-) sichqonlarda surunkali zardob kasalligi (CSS) rivojlanadi, bu esa davolanishdan keyingi 5 hafta ichida diffuz proliferativ glomerulonefrit (GN) ga olib keladi, H (FH) omili yetarli bo'lgan C57BL/6 sichqonlarida esa juda kam kasallik mavjud. glomerulyar yallig'lanish [9]. F4/{14}} makrofag infiltratsiyasi buyrakda sodir bo'ladi va fh-/- sichqonlarida IC konlari atrofida kuzatiladi. Komplementning faollashuvi anafilatoksinlarni, C3a va C5a ni hosil qiladi, ular yallig'lanish joyiga MU larni olib o'tishda ishtirok etadilar. C5a/C5aR1 signalizatsiyasini inhibe qilish buyraklardagi MU ni kamaytirdi [10]. Ushbu sozlamada,buyrak shikastlanishibuyrak infiltratsiyasi bilan bog'liq, ammo sabab bo'lishi mumkin bo'lgan mexanizmlarbuyrak shikastlanishinoma'lum qoladi.

1-rasm: FH FHga bog'liq ICGN bilan sichqonlarning buyragidagi makrofag marker genlarini o'zgartiradi. 5 haftalik sho'r suv yoki apoferritindan so'ng buyraklardan ajratilgan mRNK yordamida CD204 va CD206 uchun real vaqtda miqdoriy PCR. Ifoda GAPDH ga normallashtiriladi (n=6/guruh). ∗P < 0:01. Grafiklarda apoferritin bilan davolash qilingan fh-/- sichqonlarda (n=6) sho'r suv bilan ishlov berilgan fh-/- sichqonlarga (n=6) nisbatan genlarning burma o'zgarishi tasvirlangan.

Gematopoetik hujayralar [11] tomonidan hosil bo'lgan monositlar (Mo) endoteliy orqali to'qimalarga ko'chib o'tadi va u erda MU larga differensiallanadi. F4/80, CD11b, CD68 va Fc retseptorlari kabi markerlar MU ni aniqlay oladi. MUs buyrak kasalliklarining turli eksperimental modellarida buyrak shikastlanishi, tiklanishi va fibrozda muhim rol o'ynaydi [12, 13]. Yaqinda bizning tadqiqotlarimiz FHga bog'liq bo'lgan ICGNda buyrak shikastlanishi MUsning buyrak infiltratsiyasi bilan bog'liqligini ko'rsatdi. Bundan tashqari, oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, buyrak MU infiltratsiyasini inhibe qilish arterial bosimni pasaytiradi va nefropatiyaning turli hayvonlar modellarida glomerulyar shikastlanish va fibrozning oldini oladi [14, 15]. Biroq, bizning ma'lumotlarimizga ko'ra, FH ga bog'liq bo'lgan ICGN bilan bog'liq bo'lgan buyrak shikastlanishi paytida MU susayishi ta'siri ko'rib chiqilmagan. Shu sababli, ushbu tadqiqot lipozoma klodronatidan foydalangan holda FHga bog'liq ICGN bilan bog'liq bo'lgan buyrak shikastlanishida MUlarning rolini o'rganib chiqdi. Klodronat (klodronik kislota) gidrolizlanmaydigan ATP analogiga metabollangan bifosfonatdir [16]. Bizning tajribalarimiz shuni ko'rsatadiki, komplementlarning tartibga solinmagan faollashuvi sharoitida buyrak funktsiyasining yo'qolishida MU asosiy rol o'ynaydi. Shuning uchun, MU larni kamaytirish yoki tuzatish fenotipini qabul qilishni ko'rsatma kasallik patologiyasini kamaytirishi va terapevtik tarzda ishlatilishi mumkin.

2. Materiallar va usullar

2.1. Eksperimental hayvonlar.

Fh−/− sichqoncha shtammi ishlab chiqarilgan va doktor tomonidan taqdim etilgan. Metyu Pikering va Marina Botto (London Imperial kolleji) va bizning laboratoriyamizda 10 avloddan ko'proq vaqt davomida doimiy ravishda C57BL/6 shtammiga o'tishdi. Littermate FH-yetarli sichqonlar nazorat sifatida xizmat qildi (n=8/guruh) Genotiplash PCRga asoslangan yondashuvlar yordamida amalga oshirildi. Sichqonlar 20-22 daraja haroratda 12 soat yorug'lik-12 soat qorong'i yorug'lik davrida, oziq-ovqat va suv ad lib bilan steril, ventilyatsiya qilingan kataklarda saqlangan. Chikago universiteti va Buffalo universiteti hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qo'mitalari barcha tadqiqotlarni tasdiqladi.

2.2. Surunkali sarum kasalligi protokoli.

CSS 6-8 haftalik fH−/− yoki yovvoyi tipdagi sichqonlarda 5 hafta davomida adjuvantsiz 4 mg ot taloq apoferritini (Calzyme Laboratories) kunlik intraperitoneal yuborish bilan induktsiya qilingan. Nazorat qiluvchilar bir vaqtning o'zida qorin bo'shlig'iga sho'rlangan vositani yuborishdi

2.3. Buyrak faoliyatini baholash.

Qondagi karbamid azot (BUN) konsentratsiyasi Beckman Autoanalyzer (Beckman Coulter, Fullerton, CA) yordamida aniqlandi. Siydikdagi albumin kontsentratsiyasi sichqoncha albomini Elishay to'plami (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) bilan o'lchandi va yuqorida tavsiflanganidek, kolorimetrik tarzda o'lchangan siydik kreatininiga (Stanbio Laboratory, Boerne, TX) normallashtirildi [19].

Shakl 2: Klodronat FHga bog'liq ICGN bilan sichqonlarda buyrak makrofaglarini tobora ko'proq kamaytiradi. 0, 2, 4 va 7-kunlardagi F4/80+ monotsit/Mularning oqim sitometriya profili berilgan. F4/{9}} hujayralarining ifodasi oqim sitometriyasi bilan aniqlandi. Ma'lumotlar FlowJo V10 dasturi yordamida tahlil qilindi. F4/{12}} katakchalar har bir vaqt nuqtasida sezilarli darajada kamayadi va 7-kunga kelib 10% dan kamroqga etadi. Har bir vaqt nuqtasi n=6.

2.4. Gistologiya.

Buyraklar kerosinga solingan va malin bilan biriktirilgan va to'rt mikrometrli kesmalar hosil qilingan. Bo'limlar Periodic Acid-Schiff bilan bo'yalgan va buyrak patologi (AC) tomonidan ko'r-ko'rona tekshirilgan. Har bir slayd uchun proliferativ glomerulonefrit va glomerulo-skleroz avval tavsiflanganidek 0 dan 4 gacha baholandi [20]. Immunofluoresan mikroskopiya uchun buyrak to'qimasi quruq muzda oldindan sovutilgan 2-metilbutanda tez muzlatilgan. To'rt mikronli kriostat bo'limlari immunofluoresans (IF) bo'yash uchun ishlangan. Bo'limlar 4% paraformaldegidda mahkamlangan va Alexa{12}}konjugatsiyalangan sichqonchaga qarshi C3 (Cappel) va Alexa 555 sichqonchaga qarshi IgG bilan bo'yalgan. Bo'yash intensivligi va taqsimotning 0 dan 4 gacha bo'lgan yarim miqdoriy ko'rsatkichi ilgari ta'riflanganidek ko'r-ko'rona berilgan [19].

2.5. qRT-PCR.

Buyraklar yig'ib olindi va ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq (Invitrogen, AQSh) TRIzol reagenti yordamida to'qimalardan umumiy RNK ajratildi. cDNK SuperScript III teskari transkriptaza (Invitrogen) yordamida sintez qilingan. qRT-PCR ABI 7700 ketma-ketlik detektorida (Applied Biosystems) Power SYBR Green PCR Master aralashmasi yordamida amalga oshirildi. PCR kuchaytirilishi 12,5 ul 2x TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), 6,25 ul nukleazsiz suv, 5 ul cDNK va 1,25 ul tegishli primerlarni (IDT) o'z ichiga olgan umumiy hajm 25 ul hajmda amalga oshirildi. Barcha qPCR primerlari (1-jadval) o'ziga xoslik va sezgirlikni ta'minlash uchun Primer3 dasturidan (Whitehead Institute for Biomedical Research) foydalangan holda ishlab chiqilgan. mRNK darajasini aniqlash uchun maqsadli genlarning glitseraldegid{14}} fosfatdehidrogenaza ifodasini normallashtirdik. Nisbiy mRNK ifoda darajalari 2 - DACt usuli yordamida hisoblab chiqilgan va GAPDH ifoda darajalariga normallashtirilgan.

2.6. Statistika.

Barcha natijalar har bir guruhdagi kamida {0}} sichqonning oʻrtacha ± SD. GraphPad Prism 5 orqali 2 guruhni solishtirish uchun juftlashtirilmagan ikki dumli test (normal taqsimotga ega maʼlumotlar) yoki Mann-Whitney U testi (normal taqsimlanmagan maʼlumotlar) ishlatilgan.0. Statistik ahamiyatlilik quyidagicha ifodalanadi: ∗P < 0:05; ∗∗P < 0:01; va ns: muhim emas.

Wecistanche-ning qo'llab-quvvatlovchi xizmati - Xitoydagi eng yirik cistanche eksportchisi:

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp% 2fTel:+86 15292862950}

Batafsil texnik xususiyatlar uchun xarid qiling:

https://ww.xjcistanche.com/cistanche-shop