Ko'pgina tadqiqotlar allergik kasalliklar nafaqat tug'ma immunitet faollashuvining natijasi ekanligini tasdiqladi.

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

Annotatsiya:Mast hujayralari teri allergiyasi va yallig'lanishida, shu jumladan atopik dermatit va psoriazda juda muhim rol o'ynaydi. Ilgari, ma'lumotnomaning teriga yallig'lanishga qarshi va qarishga qarshi ta'siri borligi aniqlangan, ammo uning mast hujayralariga ta'siri hali batafsil o'rganilmagan. Ushbu tadqiqotda biz mast hujayralari (RBL-2H3 xujayralari) va sichqoncha modellaridan ma'lumotnomaning antiallergik va yallig'lanish ta'sirini o'rganish uchun foydalandik. Birinchidan, biz mos yozuvlar mast hujayralarining degranulyatsiyasini va sitokinlarning ifodalanishini inhibe qilishini aniqladik. Bundan tashqari, biz mast hujayralari A23187/forbol 12-miristat-13-atsetat (PMA) bilan rag'batlantirilganda, hujayra ichidagi kaltsiyning ko'tarilishi mos yozuvlar orqali inhibe qilinganligini kuzatdik. MAPK/NF-KB yo'lining fosforillanishi ham mos yozuvlar bilan oldindan ishlov berish bilan kamayadi. In vivo tadqiqotlar natijalari shuni ko'rsatadiki, mos yozuvlar dinitroklorobenzol (DNCB) tufayli kelib chiqqan dermatit va mast hujayralari infiltratsiyasining ko'rinishini yaxshilashi mumkin. Bundan tashqari, teridagi to'siq oqsillarining ifodasi ham tiklanadi.sistanchNihoyat, ma'lumotnoma 48/80 birikmasidan kelib chiqqan tirnalgan harakatni kamaytirishi mumkinligi aniqlandi. Birgalikda olingan natijalar shuni ko'rsatadiki, havola juda yaxshi antiallergik va yallig'lanishga qarshi tabiiy mahsulotdir. Uning mast hujayralariga ta'siri uning farmakologik mexanizmiga yordam beradi.

Kalit so‘zlar:ma'lumotnoma; tabiiy mahsulot; mast hujayra; dermatit; qichishish

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

1.Kirish

Ko'pgina tadqiqotlar allergik kasalliklar nafaqat tug'ma immunitet faollashuvi, balki adaptiv faollashuvning natijasi ekanligini tasdiqladi. Ular orasida mast hujayralari allergik rinit, astma va allergik dermatit kabi turli xil allergik kasalliklarda juda muhim rol o'ynaydi. Mast hujayralari o'zlarining hujayra membranalarida IgE retseptorlarini (FceRI) ifodalaydi va FceRI retseptorlari IgE antikorlari uchun yuqori yaqinlikka ega [1,2]. Antigenga xos IgE FceRI bilan bog'langanda, o'zaro ta'sir sodir bo'ladi va allergik reaktsiya paydo bo'ladi. FceRI ning agregatsiyasi retseptorlari tirozin kinazlarini faollashtirishi, quyi oqim reaktsiyalarini boshlashi va turli xil asosiy oqsillarning (masalan, mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz; MAPK) fosforlanishini rag'batlantirishi mumkin, natijada kaltsiy ionlarining (Ca2 plus) kirib kelishiga olib keladi. mast hujayra degranulyatsiyasidagi asosiy voqea [3].Cistanche AvstraliyaFaollashtirilgan mast hujayralari degranulyatsiya qiladi va kimyoviy vositachilarni chiqaradi. Allergiya reaktsiyalarida ishlatiladigan ushbu kimyoviy vositachilar yallig'lanishni keltirib chiqarishi mumkin [4], shuning uchun allergik simptomlarni davolash mast hujayra degranulyatsiya inhibitörlerini o'z ichiga oladi. Shuning uchun, IgE vositachiligida mast hujayra degranulyatsiyasini inhibe qilish ko'pincha allergik kasalliklarning oldini olish va davolash uchun yangi birikmalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Anti-dinitrofenil (DNP) IgE antikorlari va antigenlari zudlik bilan yuqori sezuvchanlikning tipik in vivo modeli sifatida va anti-antigenik allergiya potentsialini tadqiq qiluvchi dori sifatida passiv teri yuqori sezuvchanligi (PCA) reaktsiyalarini qo'zg'atishi aniqlandi [5,6]. ]. Bundan tashqari, mast hujayra degranulyatsiyasi 48/80 va A23187 birikmalari kabi immunitetga ega bo'lmagan stimulyatorlardan ham kelib chiqishi mumkin. A23187 kaltsiy ionofori uzoq vaqtdan beri mast hujayralari sekretsiyasini gistamin kabi granulalaridan ajralib chiqishi bilan rag'batlantirishi ma'lum bo'lib, misol sifatida xizmat qiladi [4] 48/80 birikmasi p-metoksi-N-metilfenetilaminning aralash polimeridir. formaldegid bilan o'zaro bog'langan bo'lib, u mast hujayralarini mustaqil ravishda stimulyatsiya qilish uchun keng qo'llaniladi [7,8]Shuning uchun allergik reaktsiyalar mexanizmini o'rganish uchun reaktivlar sifatida 48/80 va A23187 birikmalarining tegishli miqdori keng tarqalgan. Statistik ma'lumotlarga ko'ra, aholining taxminan 15-20 foizi atopik dermatitdan aziyat chekadi. Bu kasallikdan aziyat chekadigan bolalar yoki kattalar bo'ladimi, to'g'ri davolanmasa, atopik dermatit bemorlarga ruhiy tushkunlikka olib kelishi va ularning oila va ijtimoiy salomatlik xarajatlarini og'irlashtirishi mumkin [9]. Afsuski, allergik dermatitni davolash uchun mos davolash usuli yo'q. Hozirgi davolash usullari hali ham kasallikni qo'zg'atuvchi allergenlardan qochadi va steroidlardan doimiy foydalanish davolashning oltin standarti hisoblanadi. Muqarrar allergenlar va dorilarning nojo'ya ta'sirlari yangi terapevtik preparatlarni shoshilinch ravishda ishlab chiqishga turtki bo'ldi. Dorivor o'tlar va o'simliklardan ajratilgan tabiiy birikmalar yallig'lanish kasalliklarini oldini olish va davolash va allergik kasalliklarga chalingan bemorlarning hayot sifatini yaxshilash uchun terapevtik vositalarning potentsial manbalari hisoblanadi.

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

Malumot Nelumbo nucifera o'simligining lotus yadrosidan (urug'ning embrionidan) olingan va asosiy bisbenzilizokinolin alkaloididir. Ma'lumotnoma ko'plab kasalliklarda saratonga qarshi, antioksidant, yallig'lanishga qarshi va neyroprotektiv ta'sirlar kabi keng farmakologik xususiyatlarga ega ekanligi haqida dalillar mavjud [10-15].cistanche foydalariXon va boshqalar. Ma'lumotnoma inson keratinotsitlari va fibroblastlaridagi ROS va malondialdegid (MDA) darajasining UV-vositachiligida o'sishini inhibe qilish orqali fotosuratga qarshi ta'sir ko'rsatishini aniqladi[16,17]Yaqinda biz ma'lumotnoma atopik davolash uchun muqobil dori sifatida potentsialga ega ekanligini aniqladik. dermatit yoki teri bilan bog'liq boshqa yallig'lanish kasalliklari [18]. Biroq, ma'lumot mast hujayralarida teriga qarshi allergiya ta'sirini o'ynaydimi yoki yo'qmi hali ham noaniq. Ushbu tadqiqotda biz mast hujayralar vositasida bo'lgan allergik kasalliklarga murojaat qilishning ta'sirini, inson mast hujayra chiziqlari (RBL-2H3 hujayralari) va birikma 48/80-va DNCB tomonidan qo'zg'atilgan anafilaksi yordamida o'rganishni maqsad qildik. sichqonlar modeli.

La Referencia proviene del nucleo de lotto (el embrión de la semiilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Farmakolojikalar, antikanserogenlar, antioksidantlar, yallig'lanishga qarshi va neyroprotektorlar [10-15] va ko'plab enfermedadlar uchun tegishli dalillar mavjud. Beneficios de la cistanche Khan va boshqalar. Encontró que la referencia produce efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS va malondialdehído (MDA) mediado por UV va queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descutive paramediiente recientemente, desculamoacula. de atopik dermatit u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencia tiene un tasir contra la alergia cutánea en los mastocitos. Este studio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de rataxy NC80y in NC80y .

2. Natijalar

2.1.Kalamush mast hujayralarida neferin sitotoksiklik testi (RBL-2H3)

Sichqonlarning bazofil leykemiyasi (RBL)-2H3 hujayralari, gistamin chiqaradigan mast hujayralar analogi, mast hujayralar vositasida yallig'lanish ta'sirini tekshirish uchun mos hujayralar [19], biz bu hujayralardan antiallergik ta'sirni o'rganish uchun foydalandik. mos yozuvlar ta'siri. Birinchidan, biz ma'lumotnoma mast hujayralarida sitotoksiklikni keltirib chiqarishi mumkinligini sinab ko'rdik. Hujayralar 24 soat davomida 1 dan 30 mkM gacha mos yozuvlar bilan oldindan ishlov berilganda, hujayralarning hujayra hayotiyligi mos yozuvlar bilan ishlov berishdan ta'sirlanmaydi (1-rasm).

2.2.Neferin RBL{2}}H3 ning turli faollashtiruvchilar tomonidan stimulyatsiya qilingan degranulyatsiya ta'sirini kamaytiradi

RBL-2H3 hujayralari odatda degranulyatsiyani in vitro tadqiqotlari uchun ishlatiladi [20-22]RBL-2H3 hujayralarini antidinitrofenol (DNP)IgE va DNP bilan konjugatsiyalangan inson sarum albumini bilan stimulyatsiya qilish (HSA) degranulyatsiyani qo'zg'atadi. Bundan tashqari, mast hujayralari sintetik birikmalarga, masalan, 48/80 birikmasi va A23187 kaltsiy ionoforiga javoban degranulyatsiyaga uchraganligi ma'lum va bu birikmalar in vitro allergiya reaktsiyalari mexanizmlarini bevosita o'rganish uchun qulay reagentlar sifatida ishlatilgan [23, 24]. Natijalar faollashtiruvchi tomonidan faollashtirilmagan RBL-2H3 sitoplazmasi cheklangan sekretor granulalarni o'z ichiga olganligini ko'rsatdi.cistanche xolesterinFaqatgina (10 mkM) mos yozuvlar bilan ishlov berish RBL-2H3 faolligiga ta'sir qilmadi (2A, B-rasm). Shu bilan birga, turli xil faollashtiruvchi moddalar, jumladan 48/80, A23187 va anti-DNP / IgE plus DNP / HSA qo'shilishi sitoplazmani sekretor granulalar bilan to'ldirdi. Elektron mikroskop ostida sitoplazmada ko'p miqdorda sekretor granulalar mavjudligi, ba'zi sekretor granulalar esa hatto hujayra membranasi bilan birlashib, degranulyatsiyaga olib kelishini ko'rish mumkin (2C-E-rasm). 10 uM mos yozuvlar bilan oldindan ishlov berishdan so'ng, sitoplazmadagi sekretor granulalar sezilarli darajada kamaydi (2F-H-rasm). Bu natijalar shuni ko'rsatadiki, mos yozuvlar faollashtiruvchi tomonidan qo'zg'atilgan RBL-2H3 faollashuvi va degranulyatsiyasini samarali inhibe qilishi mumkin.

2.3.Neferin PMA/A23187-RBL-2H3 da induktsiya qilingan hujayra ichidagi kaltsiy ko'tarilishini inhibe qiladi.

Kaltsiy ionlari hujayra faollashuvi jarayonida ikkilamchi xabarchi rolini o'ynaydi. A23187 - kaltsiy ionlarining hujayra membranalari orqali kirib borishini oshirish va mast hujayralarining faollashuvini rag'batlantirishning eng samarali usuli. Phorbol miristat asetat (PMA) protein kinazni faollashtirishi va A23187 ta'sirini kuchaytirish uchun hujayra ichidagi kaltsiy ionlarini oshirishi mumkin. Mast hujayralarida kaltsiy ionlarining ko'payishi, shuningdek, mast hujayralarining degranulyatsiyasiga ta'sir qiladigan va ko'proq yallig'lanishli sitokinlar va kimyokinlarni chiqaradigan mast hujayralarining faollashuvini qo'zg'atuvchi muhim omil hisoblanadi.cistanche deserticolaning yon ta'siri,Shu sababli, ushbu tadqiqot havola yallig'lanishni inhibe qilganda RBL-2H3 dagi kaltsiy ioni kontsentratsiyasini inhibe qila oladimi yoki yo'qligini o'rganishga harakat qildi. Eksperimental guruh 20 daqiqa davomida mos yozuvlar bilan yoki oldindan ishlov berishsiz bo'lingan va RBL-2H3 ni rag'batlantirish va faollashtirish uchun 1 mM CaClz va PMA/A23187 qo'shilgan. Tajriba natijalari shuni ko'rsatdiki, RBL-2H3 ni turli konsentratsiyalar bilan davolash faqat hujayra ichidagi kaltsiy ionlari kontsentratsiyasining oshishiga ta'sir qilmagan. PMA/A23187-induktsiyali Ca2t oqimi guruhida hujayra ichidagi kaltsiy ioni kontsentratsiyasi sezilarli darajada oshdi. RBL-2H3 hujayralari 20 daqiqa davomida (3 mkM va 10 mkM) mos yozuvlar bilan oldindan ishlov berildi va kaltsiy ioni kontsentratsiyasi sezilarli darajada kamaydi (3-rasm).

2.4.Neferin RBL-2H3 tomonidan rag'batlantirilgan PMA/A23187 da yallig'lanishga qarshi sitokinlarning mRNK ifodasini pasaytirdi

Terining immun reaktsiyasi tanadagi mast hujayralari sonini ko'paytiradi va mast hujayralari keyinchalik yallig'lanishga qarshi sitokinlarni ishlab chiqaradi va kasallikning rivojlanishini tezlashtiradi. Yallig'lanishga qarshi sitokinlar, ayniqsa TNF-a, IL-6, IL-1 va IL-8 nafaqat yallig'lanishni keltirib chiqaradi, balki leykotsitlar infiltratsiyasini, granuloma shakllanishini va to'qimalarning fibrozini ham keltirib chiqaradi. PMA/A23187 mast hujayralariga ta'sir qiladi va ularni IL-16, IL-6, TSLP va TNF- ishlab chiqarishga undaydi, bu esa allergiya bilan bog'liq yallig'lanishni keltirib chiqaradi. Shuning uchun biz RBL{12}}H3 ni 20 daqiqa davomida mos yozuvlar bilan oldindan davolash qildik va havola IL-1 , IL{{ ning mRNK ifodasini pastga tartibga solishini aniqlash uchun PMA/A23187 bilan 6 soat davomida stimulyatsiya qildik. 19}}, TSLP va TNF-a. Natijalar shuni ko'rsatdiki, faqat mos yozuvlar bilan davolash qilingan guruhda sitokin mRNK ifodasi ta'sirlanmagan va PMA/A23187 tomonidan yallig'lanishni keltirib chiqaradigan guruhda mRNK ifodasi sezilarli darajada oshgan. Malumot bilan muomala qilingan guruhda IL-1, IL-6, TSLP va TNF-a ning mRNK ifoda darajalari sezilarli darajada bostirilganligi kuzatildi (4-rasm).

2.5.Neferin PMA/A23187-RBL-2H3 da MAPK yo‘lining induktsiyalangan fosforillanishini inhibe qiladi.

Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, mast hujayralari MAPK ni faollashtirish uchun hujayra ichidagi kaltsiy ionlarini chiqarishi kerak. Bundan tashqari, MAPK signalizatsiya yo'li monositlar, T-limfotsitlar, B limfotsitlar, sitokinlar va kimyokinlarning ifodasini tartibga soladi va otoimmunitetni keltirib chiqaradi. Ushbu mexanizm PMA/A23187 faollashtirish yo'liga o'xshaydi. Ushbu tadqiqotda biz ma'lumotnoma MAPK yo'llarini tartibga solishda ishtirok etishi mumkinligini o'rganib chiqdik. Biz 20 daqiqa davomida RBL{4}}H3 ga mos yozuvlarning turli konsentrasiyalarini (1,3 va 10 uM) davoladik, so'ngra yallig'lanishni qo'zg'atish uchun 30 daqiqa davomida PMA/A23187 bilan stimulyatsiya qildik. Natijalar shuni ko'rsatdiki, RBL{9}}H3 faqat turli konsentratsiyalar bilan ishlov berilganda, p38, JNK va ERK oqsillarining faollashuviga ta'sir qilmagan. Faqat PMA / A23187 bilan davolash qilingan guruhda biz p38, JNK va ERK oqsillari faollashtirilganligini va muhim fosforlanishga ega ekanligini aniqladik. Malumot bilan oldindan ishlov berilgan guruhda yuqori konsentratsiyali mos yozuvlar uchun p38, JNK va ERK oqsillarining fosforillanishi sezilarli darajada kamayganligi kuzatildi (5A-C-rasm).

2.6.Neferin PMA/A23187-RBL-2H3 da NF-B yo‘lining induktsiyalangan fosforillanishini inhibe qiladi.

Yallig'lanishga qarshi sitokinlarning namoyon bo'lishi mast hujayralarida NF-kB transkripsiya omilining faollashishiga bog'liq. IKB oqsili fosforlangan va parchalanganda, NF-kB ajralib chiqdi va yadroga ko'chib o'tdi, DNKga mos keladigan elementlar bilan bog'lanib, proinflamatuar vositachilarning transkripsiyasini rag'batlantirdi. Ko'pgina sitokinlar va kimokinlar ishlab chiqarildi, ular immunitet reaktsiyasini, differentsiatsiyasini va yallig'lanishini tartibga soladi. Shuning uchun biz mos yozuvlar bilan oldindan ishlov berish PMA/A23187 tomonidan qo'zg'atilgan protein fosforlanishiga ta'sir qiladimi yoki yo'qligini o'rganib chiqdik. Biz RBL-2H3 ga mos yozuvlarning turli konsentrasiyalarini (1,3 va 10 mkM) ko'rib chiqdik. 20 daqiqadan so'ng PMA/A23187 yallig'lanishni qo'zg'atish uchun RBL-2H3 ni 1 yoki 2 soat davomida rag'batlantirdi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, RBL{16}}H3 ni turli konsentratsiyalar bilan davolash faqat IKBa va NF-KB fosforlanishiga ta'sir qilmagan. PMA / A23187 rag'batlantirish uchun ishlatilganda, IkBo va NF-KB ning fosforillanishida sezilarli o'sish kuzatildi. Malumot bilan oldindan ishlov berilgan guruhda IkBa (6A-rasm) va NF-KB (6B-rasm) fosforillanishi sezilarli darajada kamayganligi aniqlandi.

2.7.Neferinning 2,4-Dinitroxlorbenzol (DNCB) bilan qo'zg'atilgan atopik dermatitga ta'siri

Kasalliklarni o'rganish uchun hayvonlar modeli, DNCB atopik dermatitni keltirib chiqaradigan tirnash xususiyati beruvchi vositadir [25]. Bizning tajribamiz sensibilizatsiya reaktsiyasining birinchi bosqichini qo'zg'atish uchun 75% spirtda erigan 1% dinitroklorobenzoldan (DNCB) foydalanadi. DMSOda eritilgan referent (3mg/kg va 10 mg/kg) va deksametazon (Dexa,{0}.2 mg/kg) beshinchi kuni o‘n kun davomida qorin bo‘shlig‘iga kiritildi. . 8, 1 va 14-kunlarda yallig'lanishni qo'zg'atuvchi ikkinchi bosqich sifatida 0,5 foiz DNCB qo'llanilgan. Sichqonlar to'rtta guruhga bo'lingan - nazorat guruhi, DNCB guruhi, mos yozuvlar bilan davolash qilingan guruh va deksametazon bilan davolash qilingan guruh - va keyin guruhlar o'rtasida taqqoslangandan so'ng, farqlar qayd etilgan. Biz DNCB sichqonlar terisida atopik teri yallig'lanish reaktsiyasini keltirib chiqarganini kuzatdik. DNCB ni qo'llaganidan so'ng, sichqonlarning terisida qizarish va miqyosi ko'payganligi aniqlandi. Bularning barchasi keratinotsitlarning anormal ko'payishi, infiltratsiyasi va immun hujayralarining to'planishi bilan bog'liq. To'rt kun davomida mos yozuvlar 3 mg / kg va deksametazon 0,2 mg / kg bilan davolangan guruh qizarishni engillashtirdi. Biz sichqonlarning dorsal terisining holatini 15-kungacha kuzatishni davom ettirdik. Nazorat guruhi bilan solishtirganda, DNCB guruhida terining qattiq qizarishi va shishishi, qichishish va og'riq tufayli paydo bo'lgan teri kasalliklari va yaralar bor edi. . Biz referent va deksametazonni davolashdan so'ng darajani pasaytirish tendentsiyasini topishimiz mumkin (7A-rasm). Birlashtirilgan mast hujayralari sonini kuzatish uchun toluidin ko'k rangi ishlatilgan. Mikroskop ostida kuzatilganda mast hujayralari binafsha rangda ko'rinardi. DNCB eksperimental guruhida ko'plab mast hujayralari infiltratsiyalangan va dermisda to'planganligini miqdoriy jihatdan ko'rsatish mumkin, nazorat guruhiga nisbatan sezilarli darajada oshgan. Yo'naltiruvchi va deksametazon bilan davolash qilingan guruhda infiltratsiya, agregatsiya va mast hujayralari soni kamaydi (7B, C-rasm).

2.8.Neferin DNCBni davolashdan keyin to'siq bilan bog'liq molekulalarning mRNK ifodasini yaxshilaydi.

ADdan kelib chiqqan teri bilan bog'liq yallig'lanish teri to'siqlarining anormal funktsiyasiga olib kelishi mumkin. Agar teri to'sig'i nuqsonli bo'lsa, antijenler yoki tirnash xususiyati beruvchi moddalar terining epidermisiga kirib, immunitet bilan bog'liq reaktsiyalarni qo'zg'atish uchun tanaga kirishi osonroq bo'ladi. Shu bilan birga, filagrin, lorikrin va involukrinni o'z ichiga olgan differentsiatsiya oqsillarini ishlab chiqarish bostiriladi. Shuning uchun shikastlangan teri to'sig'ini tiklash AD ning oldini olish va davolash uchun juda muhimdir [26]. Tadqiqotimizda biz DNCB tomonidan qo'zg'atilgan atopik dermatitning hayvon modeliga aralashish uchun havolalardan foydalandik. Sichqonlarni qurbon qilgandan so'ng, dorsal teri to'qimasi DNCB bilan davolashdan so'ng, mos yozuvlar filagrin, lorikrin va involukrindagi mRNK ifodasini kamaytirishni yaxshilashi mumkinligini baholash uchun RI-qPCR tahliliga asoslandi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, DNCB eksperimental guruhi nazorat guruhiga nisbatan filagrin, lorikrin va involukrinning mRNK ifodasini sezilarli darajada kamaytirdi. Filaggrin, lorikrin va involukrinning mRNK ifodasi DNCB guruhiga nisbatan mos yozuvlar va deksametazon bilan davolash qilingan guruhda sezilarli darajada oshdi (8-rasm).

Biz ma'lumotnomaning allergiyaga qarshi tirnalgan ta'siri borligini yana isbotladik. Biz BALB/c sichqonlarida tirnash xususiyati keltirib chiqarish uchun 48/80 birikmasi mast hujayra degranulyatsiya agentidan foydalandik. 9-rasmda ko'rsatilganidek, biz mos yozuvlar bilan ishlov berish 48/80 (50 ug/sayt) birikmasidan kelib chiqqan tirnash xususiyati harakatini inhibe qilganligini aniqladik. Pastki va yuqori dozalarni (3 va 10 mg / kg) ketma-ket 5 kun davomida takroriy qo'llash 48/80 birikmasidan kelib chiqadigan tirnalgan sonini sezilarli darajada kamaytirdi.