Neyroinfamatsiyaning in vitro modelida izotiyosiyanatlarning neyroprotektiv potentsiali
Mar 27, 2022
Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Tiziana Latronico1 · Marilena Larocca2 · Serafna Milella1 · Anna Fasano1 · Rocco Rossano2 · Gracia Mariya Liuzzi1
Qabul qilingan sana: 10 iyul 2020 yil / Qabul qilingan sana: 25 oktyabr 2020 yil / Onlayn chop etilgan sana: 16 noyabr 2020 yil
© Muallif(lar) 2020
Cistanche o'simlik kukuni funktsiyasi: juda yaxshineyroprotektiv ta'sir
Abstrakt
Xochga mixlangan sabzavotlarda glyukozinolat prekursorlari sifatida mavjud bo'lgan izotiyosiyanatlar (ITCs) ko'rsatdi.yallig'lanishga qarshi, antioksidant va antikarsinogen faollik. Bu erda biz uch xil ITC ning ROS ishlab chiqarishga va turli nevrologik kasalliklarning muhim patogenetik omillarini ifodalovchi matritsa metalloproteinaza (MMP)-2 va -9 ifodasiga ta'sirini solishtirdik. Kalamush astrositlarining birlamchi kulturalari LPS tomonidan faollashtirildi va bir vaqtning o'zida Allil izotiosiyanat (AITC), 2- Fenetil izotiosiyanat (PEITC) va 2- Sulforafan (SFN) ning turli dozalari bilan ishlov berildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, SFN va PEITC H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan ROS ishlab chiqarishga qarshi tura oldi. Hujayra madaniyati supernatantlarining zimografik tahlili shuni ko'rsatdiki, PEITC va SFN MMP-9 ning eng samarali ingibitorlari bo'lgan, holbuki faqat SFN MMP-2 faolligini sezilarli darajada inhibe qilgan. PCR tahlili shuni ko'rsatdiki, ishlatilgan barcha ITClar MMP-2 va MMP-9 ifodalarini sezilarli darajada inhibe qilgan. Mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) signalizatsiya yo'li bo'yicha tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ITClar hujayradan tashqari boshqariladigan protein kinaz (ERK) faolligini inhibe qilish orqali MMP transkripsiyasini modulyatsiya qiladi. Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatadiki, ITClar MMP bilan bog'liq nevrologik kasalliklarning oldini olish va qo'shimcha davolash uchun istiqbolli ozuqaviy vositalar bo'lishi mumkin.
Kalit so'zlarAntioksidant · Yallig'lanishga qarshi · Izotiyosiyanat · Matritsa metalloproteinazalari · Neyrodegenerativ kasalliklar
Kirish
Neyroyallig'lanish - bu markaziy asab tizimining (CNS) rezident hujayralarining faollashishiga olib keladigan biokimyoviy hodisalar kaskadini o'z ichiga olgan miya shikastlanishiga murakkab javob. Astrositlarning aberrant faollashuvi ularning neyroprotektiv rolini buzadi, bu reaktiv kislorod turlari (ROS), azot oksidi (NO), sitokinlar, kimokinlar va matritsali metalloproteinazalar kabi yallig'lanish vositachilarining chiqarilishiga olib keladi.
(MMP).
MMPlar neytral, Zn2 plyusga bog'liq bo'lgan endopeptidazalarning katta oilasi bo'lib, ular asosiy maqsad sifatida fibronektin, kollagen, elastin va laminin kabi hujayradan tashqari matritsaning (ECM) tarkibiy qismlariga ega (Latronico and Liuzzi 2017).
Tiziana Latroniko
tiziana.latronico@uniba.it
Bari Aldo Moro universiteti biofanlar, biotexnologiyalar va biofarmatsevtika bo'limi,
Bari, Italiya
Fanlar bo'limi, Bazilikata universiteti, Potenza,
Italiya
CNSda MMPlar turli xil fiziologik reaktsiyalarda ishtirok etadi, masalan, morfogenez, aylanish va ECM ning qayta tuzilishi, embriogenez va yaralarni tiklash; ammo, MMPlar tartibga solish mexanizmlaridan qochganda, ular zararli bo'ladi (Rosenberg 2009; Agrawal va boshq. 2008).
Shu nuqtai nazardan, MMP ifodasi va faoliyatidagi o'zgarishlar bir nechta nevrologik kasalliklarda asosiy patogenetik hodisalar ekanligi ma'lum (Latronico and Liuzzi 2017; Mastroianni and Liuzzi 2007; Brkic et al. 2015). Eksperimental dalillar shuni ko'rsatadiki, MMPlar orasida jelatinaza A (MMP-2) va B (MMP-9) ayniqsa neyroyallig'lanishda ishtirok etadi, chunki ularning ko'tarilishi qon-miya to'sig'ining (BBB) yaxlitligini buzishi mumkin. Bu neyronlarning progressiv yo'qolishiga va neyron funktsiyasining buzilishiga olib keladigan yallig'lanish jarayonini davom ettiradigan miya parenximasiga immun periferik qon hujayralarining to'planishi va infiltratsiyasining kuchayishiga olib keladi (Rivest 2009). Bir qator in vitro va in vivo tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ROS ishlab chiqarilishi mitogen bilan faollashtirilgan protein kinaz (MAPK) signalizatsiya yo'liga bog'liq mexanizmlar (Hsieh va Yang 2013).
Ushbu dalillarga asoslanib, neyrotoksik omillarning regulyatsiyasi, natijada neyroinflamatuar reaktsiyalarning pasayishi miya kasalliklarining boshlanishini oldini olish yoki rivojlanishini engillashtirish uchun samarali terapevtik strategiya bo'lishi mumkinligi aniq.
So'nggi yillarda nevrologik sohadagi biotibbiyotga bo'lgan qiziqish neyroinflamatuar reaktsiyalar bilan bog'liq jarayonlarni modulyatsiya qila oladigan tabiiy birikmalarni tadqiq qilishga tobora ko'proq e'tibor qaratmoqda. Shu nuqtai nazardan, bir nechta tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, polifenollar, izotiosiyanatlar (ITC) va boshqalar kabi fitokimyoviy birikmalar neyroprotektiv potentsialga ega bo'lib, ular MMPlarning ekspressiyasini inhibe qilish va ROS ishlab chiqarishga qarshi turish qobiliyatidan kelib chiqadi (Dinkova-Kostova va Kostov). 2012; Liuzzi va boshqalar 2007, 2011).
Izotiyosiyanatlar patogenlar hujumidan himoya qilish tizimi sifatida Brassicaceae oilasiga mansub bir nechta o'simliklar tomonidan ishlab chiqarilgan metabolitlardir (Bones and Rossiter 2006). Ular glyukozinolatlarning (GSL) mirozinaza fermenti tomonidan fermentativ parchalanishidan kelib chiqadi. ITClar brokkoli, Bryussel gullari, karam, sholg'om, xren, kolrabi, xantal, turp, suv teresi va karam kabi keng tarqalgan iste'mol qilinadigan xochga mixlangan sabzavotlarda mavjud. Oziq-ovqat tarkibidagi ularning miqdori juda o'zgaruvchan va oziq-ovqat mahsulotlarini qayta ishlash va tayyorlashga bog'liq.
So'nggi paytlarda ITClar antioksidant, antibakterial, yallig'lanishga qarshi va kimyoviy profilaktika ta'sirini o'z ichiga olgan turli xil terapevtik ta'sirga ega ekanligini ko'rsatmoqda (Dufour va boshq. 2015; Marzocco va boshq. 2015).
ITClarning himoya faoliyati detoksifikatsiya, yallig'lanish, apoptoz va hujayra siklini tartibga solishda ishtirok etadigan turli signal yo'llarini modulyatsiya qilish orqali amalga oshiriladi. Bir nechta dalillar shuni ko'rsatadiki, ITClarning antikanserogen va yallig'lanishga qarshi xususiyatlari asosan ularning eritroid yadro omili 2-bog'liq 2 (Nrf2) yo'lini faollashtirish qobiliyatiga bog'liq bo'lishi mumkin. Nrf2 - oksidlanish-qaytarilishga sezgir transkripsiya omili bo'lib, elektrofil moddalar va oksidlovchi stress sharoitlari mavjudligida yadroga o'tadi, u erda antioksidant javob elementlarini (ARE) bog'laydi, detoksifikatsiya va oksidlanish sharoitlarini modulyatsiya qilishda ishtirok etadigan sitoprotektiv genlarning ekspressiyasini keltirib chiqaradi. yallig'lanish jarayonlari (Heiss va boshq 2001). Shu nuqtai nazardan, ITClar II fazani detoksifikatsiya qiluvchi fermentlarning ekspressiyasini qo'zg'atish va GSH ishlab chiqarishni tartibga solish orqali inson hujayralarining antioksidant qobiliyatini oshirishi mumkinligi haqida xabar berilgan (Vagner va boshq. 2010). Bundan tashqari, Nrf2 va yadro omili (NF) -kB yo'li o'rtasida o'zaro bog'liqlik mavjudligi haqida xabar berilgan, bu yallig'lanishning modulyatsiyasiga olib keladi (Sturm va Vagner 2017; Li va Jonson 2004). Shu nuqtai nazardan, turli xil eksperimental in vitro va in vivo neyroinflamasyon modellari ITClar proinflamatuar sitokinlar va MMPlarning inhibisyonu bilan NF-kB translokatsiyasini sezilarli darajada kamaytirishi mumkinligini ko'rsatdi (Lee va boshq. 2015; Subedi va boshq. 2017).
Ushbu maqolada biz uchta ITC, ya'ni Allil izotiosiyanat (AITC), 2-Fenetil izotiosiyanat (PEITC) va 2-Sulforafan (SFN) ning MMP-2 chiqarilishiga ta'sirini o'rgandik. -9, shuningdek, LPS bilan faollashtirilgan astrositlar tomonidan ROS ishlab chiqarishda. Natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, PEITC, SFN va AITC in vitro LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda MMP-9 va MMP-2 ifodasini inhibe qilishi va H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan ROS ishlab chiqarishiga qarshi turishi mumkin. Bundan tashqari, biz ITClar hujayradan tashqari tartibga solinadigan protein kinaz (ERK) faolligini inhibe qilish bilan bog'liq mexanizmlar bilan MMPlarning haddan tashqari ekspressiyasini modulyatsiya qilishini ko'rsatdik. Ushbu natijalar xochga mixlangan sabzavotlarga boy parhez nevrologik kasalliklarning oldini olish va qo'shimcha davolash uchun potentsial foyda keltirishi mumkinligini ko'rsatadi.
Materiallar va uslublar
Kimyoviy moddalar va reagentlar
Dulbekkoning modifikatsiyalangan Eagle muhiti (DMEM), homila sigir zardobi (FBS), penitsillin va streptomitsin GIBCO (Peysli, Shotlandiya) tomonidan taqdim etilgan. Jelatin, DNaz 1, poli-L-lizin
(PLL), tripsin, lipopolisakkarid (LPS), Tripan Blue va 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2.5-difeniltetrazolium bromid (MTT) ), Allil izotiosiyanat (AITC) [cod. 377,430, tozaligi 95 foiz (HPLC)], 2-Fenetil izotiosiyanat (PEITC) [kod. 253,731, tozaligi 99 foiz )], 2-Sulforafan (SFN) [kod. S6317, tozaligi 95 foizdan katta yoki unga teng (HPLC)] Sigma (Sent-Luis, MO, AQSh) kompaniyasidan taqdim etilgan. 2',7'-diklorofluoresein diasetat (DCFH-DA) Calbiochem'dan sotib olindi. Standart oqsillar va R-250 Coomassie Brilliant Blue Bio-Raddan (Hercules, CA, AQSH) olingan. Anti-glial fibrilyar kislotali oqsil (GFAP) antikorlari (RRID: AB_2294571) Serotec (Oksford, Buyuk Britaniya) dan sotib olingan. Hujayradan tashqari boshqariladigan protein kinazlarga (ERK) 1/2 va fosforlangan ERK 1/2 (p-ERK 1/2) ga qarshi antikorlar Santa Cruz Biotexnologiyasidan (Santa Cruz, CA) olingan. Hybond-P PVDF membranalari, kengaytirilgan xemiluminesans (ECL) Western Blotting tahlil tizimi va sichqonchaga qarshi HRP ikkilamchi antikorlari GEdan olingan.
Sog'liqni saqlash hayot fanlari (Little Chalfont, Bukingemshire,
Buyuk Britaniya). MMP-2, MMP-9 va 18S rRNK uchun maxsus primer juftlari Sigma Genosys (Cambs, Buyuk Britaniya) dan edi. RNeasy mini to'plami va QuantiTect teskari transkripsiya to'plami Qiagen'dan (Valensiya, CA, AQSh) sotib olingan. PCR uchun Econo-Taq PLUS GREEN 2X Master Mix reagentlari Lucigen korporatsiyasidan (Middleton, WI, AQSh) sotib olingan.
Etik bayonot
Hayvonlar ishtirokidagi tajribalar NIH laboratoriya hayvonlarini parvarish qilish va ulardan foydalanish boʻyicha qoʻllanmadagi tavsiyalarga muvofiq hamda Bari universiteti (Italiya) Hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish institutsional qoʻmitasining roziligi bilan oʻtkazildi (ruxsat raqami: 23-98- A).
Astrotsit kulturalarini tayyorlash
Astrositlar {0}} kunlik Wistar kalamushlarining neokortikal to'qimalaridan tayyorlangan (RRID: RGD_737960, Harlan Laboratories srl, Udine, Italiya). Astrositlarni tayyorlash uchun har ikkala jinsdagi 12 ta kuchukdan 6 litr foydalanilgan. Hayvonlar karbonat angidrid (CO2) ta'sirida evtanizatsiya qilindi va tezda dekapitatsiya orqali o'ldirilgan. Neokortikal to'qimalar ajratilgan va Latronico va boshqalar tomonidan xabar qilingan usul bo'yicha birlamchi glial hujayra madaniyatini tozalash uchun ishlatilgan. (2018). Qisqacha aytganda, parchalanishdan so'ng, kalamush miyasi meninges va qon tomirlaridan mahrum bo'lib, mexanik maydalangan va 0,25% tripsin bilan 0,01% DNase borligida hazm qilingan. Santrifüjdan so'ng va hujayra hayotiyligini baholashdan so'ng, hujayralar PLL bilan qoplangan kolbalarga (75 sm2) DMEM, 10% FBS, 100 IU ml -1 penitsillin, 100 mkg streptomitsin -1, 1,5 × 107 hujayra / kolba zichligida qo'yildi. , va 5 foiz CO2da 37 daraja saqlanadi. 7 kundan keyin oligodendrositlar va mikrogliyalarni olib tashlash uchun kolbalar chayqatiladi. Tripsinizatsiya (0,25 foiz tripsin/0,02 foiz EDTA) natijasida olingan astrositlarning tozaligi GFAP uchun immuno-bo'yoq bilan baholandi.
LPS bilan faollashtirilgan astrositlarni allil izotiosiyanat, fenetil izotiosiyanat yoki 2-sulforafan bilan davolash
96 ta quduq plastinkasiga ekilgan birlashgan astrositlar 10 mkg ml -1 LPS bilan stimulyatsiya qilindi va bir vaqtning o'zida allil izotiosiyanat (AITC), 2-fenetil izotiosiyanat (PEITC) yoki 2-sulforafan konsentratsiyasi bilan ishlov berildi. (SFN) sarumsiz DMEMda. Sarumsiz DMEM va LPS bilan faollashtirilgan astrositlardagi astrositlar mos ravishda salbiy va ijobiy nazoratni ifodalaydi. Bundan tashqari, AITC (100 mkM), PEITC (67 mkM) va SFN (56,4 mkM) eritmalari DMSO da tayyorlanganligi sababli, DMSO ga dozaga javob egri chizig‘i, madaniyat muhitida mavjud bo‘lgan bir xil erituvchi konsentratsiyasida suyultiriladi. Tahlil qilingan namunalar aralashmaning toksikligini baholash uchun ishga tushirildi. 37 daraja 20 soat inkubatsiyadan so'ng, 5 foiz CO2 supernatantlar to'planib, foydalanilgunga qadar -20 darajada saqlangan, hujayralar esa hujayra hayotiyligini baholash uchun MTT tahlilidan o'tkazilgan.
MTT hujayra hayotiyligini tahlil qilish
Astrositlarda AITC, PEITC va SFN ning sitotoksikligi MTT [{0}}(4,5-dimetiltiazol-2-yl)- 2,{{5} yordamida aniqlandi. }}difenil tetrazolium bromid] tahlili. Ushbu tahlil yashovchan hujayralardagi mitoxondrial suksinat dehidrogenaza tomonidan MTT ni spektrofotometrik tarzda o'lchanadigan erimaydigan ko'k formazan mahsulotiga kamaytirishga asoslangan. Qisqacha aytganda, AITC, PEITC yoki SFN bilan 20 soat davolashdan so'ng, madaniyat muhiti olib tashlandi va hujayralar 0,5 mg mL-1 MTT bilan yuklandi. 37 daraja 2 soat davomida inkubatsiyadan so'ng, 5 foiz CO2 muhiti olib tashlandi va hujayralardagi formazan kristallari 90 foiz etanol bilan eriydi. Kristallarning to'liq eruvchanligini olish uchun plitalarni 15 daqiqa davomida silkitgandan so'ng, formazan mahsulotining miqdori mos yozuvlar to'lqin uzunligi 690 nm bo'lgan 560 nm optik absorbans bilan aniqlandi. Hujayra hayotiyligi nazorat ulushi (CTRL) sifatida ifodalangan, ishlov berilmagan hujayralar tomonidan ifodalangan va 100 foiz qilib belgilangan. Har bir birikma uchun hujayra hayotiyligining doza-javob egri chizig'i olingan.
Reaktiv kislorod turlarini aniqlash
Reaktiv kislorod turlarini (ROS) aniqlash astrositlarni 30 daqiqa davomida fenol qizilsiz DMEMda 10 mkM 2',7'-diklorofloressein diasetat (DCFH-DA) bilan 37 darajada yuklash orqali amalga oshirildi. Keyin DCFH-DA quduqlardan olib tashlandi va hujayralar 1 soat davomida AITC (400 mkM), PEITC (10 mkM) yoki SFN (25 mkM) bilan fenol qizilsiz DMEMda 100 mkM yakuniy konsentratsiyada H2O2 mavjudligida davolandi. . Faqat DCFH-DA yoki H2O2 bilan ishlov berilgan hujayralar mos ravishda salbiy (CTRL) va ijobiy nazorat (H2O2) ni ifodalaydi. Inkubatsiyadan so'ng hujayralar PBS bilan yuviladi va lizislanadi
Tris–HCl 10 mM/NaCl 150 mM/Triton X-100 0,5 foiz, pH 7,5,
keyin 10,000×g, 4 daraja 10 daqiqa davomida sentrifugalanadi. Supernatantlar yig'ildi va ularning spektrofluorimetrik tahlili 485 nm da qo'zg'alish ostida 525 nm da amalga oshirildi. Natijalar umumiy protein tarkibiga normallashtirildi va ROS ishlab chiqarish ijobiy nazoratga nisbatan fotoluminesans (PL) intensivligining nisbiy foizi sifatida ifodalandi.
Jelatinazalarni aniqlash
Latronico va boshqalar tomonidan xabar qilinganidek, hujayra supernatantlarida (SN) jelatinaza faolligi zimografik tahlil orqali aniqlangan. (2013). Qisqacha aytganda, taxminan 10 mkg umumiy oqsilga to'g'ri keladigan SN miqdori -merkaptoetanolsiz 30 µl Laemmli namuna buferi bilan eritildi. Namunalar 0,1 foiz (vt/v) jelatin bilan kopolimerlangan 7,5 foizli poliakrilamid jelda o‘tkazildi. Elektroforezdan so'ng jellar ikki marta 2,5% Triton X-100/10 mM CaCl2 bilan 50 mM Tris-HCl, pH 7,4 bilan yuvildi va 1% Triton X-100 da 37 darajada 24 soat davomida inkubatsiya qilindi. /50 mM Tris–HCl/10 mM CaCl2, pH 7,4. Jellar Coomassie yorqin ko'k R-250 bilan bo'yalgan va metanol/sirka kislotasi/H2O (v/v 4:1:5)da bo'yalgan. Jelatinaza faolligi jelning ko'k fonida aniq hazm qilish chizig'i sifatida tasvirlangan va Image LabTM Software (Bio-Rad Laboratories) yordamida kompyuterlashtirilgan densitometrik tasvir tahlili orqali miqdori aniqlangan. Jelatinaza
faollik optik zichlik (OD) × mm2 sifatida ifodalangan bo'lib, u egri chiziqlar ostidagi skanerlash maydonini ifodalaydi, bu substrat lizis zonasining yorqinligi va kengligini hisobga oladi. Ma'lumotlar quyidagi tenglama yordamida ifodalangan: foiz inhibisyonu=[100 - (OD namunasi/OD musbat nazorati) × 100].
Teskari transkripsiya-polimeraza zanjiri reaktsiyasi (RT-PCR)
6 ta quduq plastinkasiga ekilgan astrositlar LPS (10 mkg mL-1) bilan faollashtirildi va bir vaqtning o'zida toksik bo'lmagan maksimal konsentratsiyada ITC bilan ishlov berildi. 20 soatlik inkubatsiyadan so'ng ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Qiagen RNeasy mini to'plami yordamida astrositlardan jami RNK ajratildi. Qo'shimcha DNK (cDNK) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq QuantiTect teskari transkripsiya to'plamidan foydalangan holda 500 ng RNKdan sintez qilindi. Muayyan primerlar yordamida 591 bp fragmentni kuchaytirish uchun jami 25 ng teskari transkripsiya mahsuloti ishlatilgan (sense 5′-GTC ACT CCG CTG CGC TTT TCT CG-3′; antisens 5′-GAC ACA TGG GGC ACC TTC TGA-3') kalamush MMP-2 ketma-ketligi va maxsus primerlardan foydalangan holda 541 bp fragmenti (sezuvchi 5′-CGG AGC ACG GGG ACG GGT ATC 3′; anti-sezuvchi 5′-AAG ACG AAG) GGG AAG ACG CAC ATC 3′) kalamush MMP-9 ketma-ketligi uchun. Bunga parallel ravishda, nisbatan oʻzgarmas ichki mos yozuvlar geni boʻlgan kalamush 18S rRNK (sezgi 5′-GCCTAGATA CCGCAGCTAGGA-3′; antisens 5′-TCATGGCCTCAG TTCCGAA-3′) ning 308 bp fragmentini kuchaytirish amalga oshirildi. . Boshqa tadqiqotlarda allaqachon tasdiqlangan primer to'plamlari (Latronico va boshq. 2013; Liuzzi va boshq. 2004; Gramegna va boshq. 2011) faqat PCRning kutilgan o'lchamining bitta bandini kuchaytirish orqali ko'rsatilgan qiziqish genlarini aniq taniydi. mahsulotlar. PCR amplifikasyonu har biri 94 daraja denatürasyon, 59 daraja tavlanish va 72 daraja uzaytirishdan iborat bo'lgan 25 tsikl uchun amalga oshirildi. Amplifikatsiyadan so'ng mahsulotlar 1,5 foizli agaroz jellarida tahlil qilindi. Jellarning densitometrik tahlilidan so'ng, maqsadli genlarning kuchayishi 18S rRNK ifodasigacha normallashtirildi va natijalar jelatinaza miqdorini aniqlash uchun xabar qilinganidek, ijobiy nazoratga nisbatan inhibisyon ulushi sifatida ifodalandi.
Vestern blot tahlili bilan ERK 1/2 fosforlanishni aniqlash
Latronico va boshqalarda xabar qilinganidek, ERK 1/2 immunoblot tahlili bilan aniqlangan. (2018). Qisqacha aytganda, birlashtirilgan boshlang'ich
{{0}}quduq plitalari bilan qoplangan, sarumsiz muhitda 24 soat davomida tinch holatga keltiriladigan astrositlar AITC (400 mkM), PEITC (10 mkM) bilan 1 soat davomida oldindan ishlov berildi, yoki fenol qizilsiz DMEMda SFN (25 mkM). 10 ug mL-1 LPS bilan 2 soat davomida stimulyatsiya qilinganidan so'ng, hujayralar 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 2,5 mM Na-pirofosfat, 1 mM - glitserofosfat 1 foiz Triton X-100, 19 mM bilan parchalandi. fenilmetilsulfonilfuorid, 20 ug/ml aprotinin, 1 mM EGTA, 1 mM Na-fuorid, 1 mM Na3VO4, pH 7,5. Har bir namunaning 60 ug umumiy oqsillari 10% SDS-poliakrilamid gel elektroforezi bilan hal qilindi va oqsillar poliviniliden diflorid membranalariga immunoblotatsiya qilindi. 0,05% Tween 20, 1% sut, 1% sigir zardobi albumini 150 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl (pH 7,5) bilan kechasi 4 gradusda bloklangandan so'ng, membranalar bir kechada monoklonal anti-p- bilan 4 darajada tekshirildi. ERK 1/2 antikor (1:500). Keyin membranalar uch marta 0,05% Tween 20 bilan Tris-buferli sho'r suvda yuvildi, sichqonchaga qarshi turp peroksidazaga qarshi ikkilamchi antikor (1:20,000) bilan 24 daraja 2- soat davomida tekshirildi va aniqlandi. kengaytirilgan xemiluminesans bilan. ERKning umumiy miqdorini baholash uchun membranalar tozalandi va fosforlanmagan ERK 1/2 (1:500) uchun xos bo'lgan antikor bilan inkubatsiya qilindi. Tarmoq intensivligi dog'larni densitometrik skanerlash orqali aniqlandi va ERK 1/2 fosforlanish darajasi fosforlanmagan ERK 1/2 ga normallashtirildi va ijobiy nazoratga (LPS bilan ishlov berilgan astrositlarga) nisbatan foiz sifatida ifodalandi. quyidagi tenglama:
foiz perERK 1/2=(ODsample/ODpozitiv nazorat) × 100.
Statistik tahlil
Maʼlumotlar tahlili GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., San-Diego, CA, AQSh) yordamida amalga oshirildi. Ma'lumotlar o'rtacha qiymatlar ± SD sifatida ifodalangan. Statistik tahlil bir tomonlama dispersiya tahlili (ANOVA) va Dunnettning bir nechta taqqoslash post hoc testi yordamida amalga oshirildi.
Natijalar
Izotiosiyanat birikmalarining astrositlar hayotiyligiga ta'siri
AITC, PEITC yoki SFN ning sitotoksikligini baholash uchun dastlabki tajribalar o'tkazildi. Shu maqsadda tozalangan astrositlar 20 soat davomida ITC birikmalari bilan 5 dan 400 mkM gacha bo'lgan konsentratsiyalarda yoki usul bo'limida tavsiflanganidek madaniy muhitda suyultirilgan DMSO bilan ishlov berildi. 1-rasmda ko'rsatilganidek, DMSO sinovdan o'tgan ITC eritmalari bilan mos keladigan barcha ishlatilgan konsentratsiyalarda zaharli emas edi. Tekshirilayotgan ITClar orasida AITC
1-rasm Izotiosiyanat birikmalari bilan ishlov berilgan astrositlarning hujayra hayotiyligi. Birlashtirilgan birlamchi astrositlar 20 soat davomida Allil izotiosiyanat (AITC), 2-Fenetil izotiosiyanat (PEITC) yoki 2-Sulforafan (SFN) bilan ko'rsatilgan konsentratsiyalarda davolandi, keyin MTT tahliliga o'tkazildi. Bundan tashqari, u dimetil sulfoksidda (DMSO) eritilganligi sababli, ITC namunalarida mavjud bo'lgan bir xil erituvchi konsentratsiyasida (foizda) madaniy muhitda suyultirilgan DMSO ga dozaga javob egri chizig'i har bir tajribada amalga oshirildi. ITC toksikligini ishonchli baholash. Boshqaruv (CTRL) takrorlandi
sarumsiz DMEMda ishlov berilmagan astrositlardan xushbo'y. Grafiklar nazorat bilan solishtirganda hujayra omon qolish foizi sifatida ifodalangan hujayra hayotiyligining doza-javob egri chiziqlarini ifodalaydi. Maksimal toksik bo'lmagan kontsentratsiyalar sifatida hujayra hayotiyligini 60 foizdan yuqori aniqlagan birikmalarning dozalari tanlangan. Qiymatlar turli hujayra populyatsiyalarida o'tkazilgan n=3 tajribaning o'rtacha ± SD. Mikrograflar turli birikmalar bilan ishlov berilgandan so'ng fazali kontrastli mikroskop (50X kattalashtirish) ostida kuzatilgan hujayra morfologiyasining vakillik natijalarini ko'rsatadi.
astrositlar uchun kamroq zaharli bo'lgan. Xususan, AITC 400 mkM gacha bo'lgan hujayralar uchun toksik emas edi, PEITC va SFN esa mos ravishda 10 va 25 mkM dan yuqori konsentratsiyalarda zaharli edi. Mikroskopik kuzatish MTT tahlilining natijalarini tasdiqladi, bu PEITC va SFN ning toksik kontsentratsiyasida astrositlar sonining kamayganligini va qolganlari sitoplazmasida sitotoksik o'zgarishlarni ko'rsatdi.
ITC birikmalarining vodorod periks bilan ishlov berilgan astrositlarda ROS ishlab chiqarishga himoya ta'siri
ITClarning oksidlovchi stressga qarshi himoya ta'sirini baholash uchun astrositlar maksimal toksik bo'lmagan konsentratsiyada PEITC, AITC va SFN bilan oldindan ishlov berildi, keyin H2O2 bilan stimulyatsiya qilindi. H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan hujayra ichidagi ROS ishlab chiqarilishi DCFH-DA tomonidan tekshirildi. 2-rasmda ko'rsatilganidek, H2O2 ta'sirida floresan signal kuchaytirildi
2-rasm ITClar bilan ishlov berilgan astrositlarda reaktiv kislorod turlarini (ROS) ishlab chiqarish. ROS mavjudligi Materiallar va usullar bo'limida xabar qilinganidek, 2',7'-diklorofloressein (DCFA) floresan signalidagi o'zgarishlarni o'lchash yo'li bilan tekshirildi. 6 ta quduq plastinkasiga ekilgan astrositlar 3{24}} daqiqa davomida DCFA bilan oldindan ishlov berildi, keyin 1 soat davomida 10 mkM PEITC, 400 mkM AITC yoki 100 mkM yakuniy konsentratsiyada H2O2 ishtirokida 25 mkM SFN bilan ishlov berildi. . Faqat DCFA (CTRL) yoki 100 mkM H2O2 bilan davolash qilingan astrositlar mos ravishda salbiy va ijobiy nazoratni ifodalaydi. Hujayra lizatlarida aniqlangan lyuminestsent signal 485 nm da qo'zg'alish ostida 525 nm da florometr bilan o'lchandi. ROS ishlab chiqarish ijobiy nazorat bilan solishtirganda fotoluminesans (PL) intensivligining foizi (foiz) sifatida ifodalangan. Qiymatlar turli hujayra populyatsiyalarida o'tkazilgan n=3 tajribaning o'rtacha ± SD. H2O2 bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli pasayish yulduzcha bilan ko'rsatilgan (bir tomonlama ANOVA, keyin Dunnetning post hoc testi; *p <>
nazorat bilan solishtirganda astrositlar (CTRL). DCF floresansi intensivligining pasayishidan dalolat beradiki, astrositlarni ITC birikmalari bilan oldindan davolash H2O2 tomonidan qo'zg'atilgan ROS hosil bo'lishiga qarshi turdi. Sinovdan o'tgan ITClar orasida faqat PEITC va SFN ijobiy nazoratga (H2O2) nisbatan ROS ishlab chiqarishni mos ravishda 20 va 24 foizga sezilarli darajada kamaytirishga muvaffaq bo'ldi.
Izotiosiyanat birikmalari LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda MMP‑2 va MMP‑9 darajasini inhibe qiladi.
ITC birikmalarining MMP{0}} va MMP-9 darajalariga ta'siri jelatinazalarning ekspressiyasini keltirib chiqarishi ma'lum bo'lgan LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda baholandi (Gottschall va Deb 1996) va bir vaqtning o'zida AITC bilan davolash, PEITC yoki SFN hujayralar uchun toksik bo'lmagan konsentratsiyalar oralig'ida. 3a-rasmda ko'rsatilganidek, MMP-2 va MMP-9 ga mos keladigan jelda 72 va 92 kDa bo'lgan ikkita aniq hazm qilish chizig'i mavjud edi. Astrositlarning LPS bilan faollashishi MMP-2 darajasini oshirdi va MMP-9 sintezini induktsiya qildi. AITC (3b-rasm), PEITC (3c-rasm) yoki SFN (3d-rasm) bilan davolash dozaga bog'liqligini aniqladi.
ishlatiladigan birikmaga qarab o'zgarib turadigan MMP-9 darajalarining pasayishi. Xususan, foydalanilgan ITClar orasida SFN MMP-9 ni inhibe qilishda eng samarali bo'ldi, chunki u 10 mkM dozada 70 foiz va 25 mkM dozada 100 foiz inhibisyonni aniqladi. Bundan tashqari, faqat maksimal toksik bo'lmagan konsentratsiyadagi SFN MMP-2 ni sezilarli darajada inhibe qila oldi (2d-rasm).
Izotiosiyanat birikmalari LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda MMP‑2 va MMP‑9 gen ekspressiyasini inhibe qiladi.
O'rganilgan ITC birikmalari MMP-2 va MMP-9 ifodasini inhibe qila oladimi yoki yo'qligini aniqlash uchun RT-PCR ITClarning maksimal toksik bo'lmagan kontsentratsiyasi bilan ishlov berilgan LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda o'tkazildi. 4a-rasmdagi vakil jellarda ko'rsatilganidek, LPS bilan faollashtirilgan astrositlarni individual ITClar bilan davolash MMP-2 va MMP-9 mRNKning ortib borayotgan ifodasini bartaraf etishga muvaffaq bo'ldi. 4b-rasmda ko'rsatilganidek, natijalarning miqdoriy tahlili shuni ko'rsatdiki, maksimal toksik bo'lmagan konsentratsiyada ITC birikmalari solishtirishda MMP-2 va MMP-9 ifodasining statistik jihatdan muhim inhibisyonini aniqladi. ijobiy nazoratga (LPS). Xususan, PEITC va SFN MMP-2 (85 foiz) va MMP-9 (100 foiz) ni bir xil darajada inhibe qiladi, holbuki AITC MMPni inhibe qilishda PEITC va SFNga qaraganda kamroq samarali bo'lgan{{17} } (65 foiz ) va MMP-9 (90 foiz ) ifodasi.
ERK 1/2 ITC tomonidan MMP ifodasini inhibe qilishda ishtirok etadi
ERK 1/2 LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda MMP-2 va MMP-9 ifodalarini tartibga solishda ishtirok etuvchi asosiy signal uzatish yo'li bo'lgani uchun (Li va boshq. 2003), ITC birikmalarining ta'siri hujayradan tashqari tartibga solinadigan protein kinazalarning (ERK) 1/2 faollashuvi sinovdan o'tkazildi.
5-rasmda ko'rsatilganidek, LPS fosforlangan ERK 1/2 (p-ERK) darajasining statistik jihatdan sezilarli o'sishiga olib keldi, bu ITC birikmalari bilan oldindan ishlov berish orqali qarshi ta'sir ko'rsatdi.
Munozara
Ko'pgina kasalliklarga qarshi asosiy himoya strategiyasi, asosan, xavf omillaridan qochish va to'g'ri turmush tarzini qabul qilishdan iborat, deb ishoniladi. Odatda turli xil meva va sabzavotlar tomonidan ishlab chiqariladigan ba'zi tabiiy metabolitlar saraton, nevrologik kasalliklar va boshqa multifaktorial kasalliklar kabi patologik hodisalarni modulyatsiya qilishga qodir degan gipotezani tasdiqlovchi ko'plab ilmiy dalillar mavjud. Ushbu stsenariyda izotiosiyanatlar (ITC) ularning antifungal, antibakterial ta'siri tufayli katta qiziqish uyg'otdi.
3-rasm. LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda izotiosiyanat birikmalarining MMP-2 va MMP-9 darajalariga ta'siri. a da LPS (10 ug mL-1) bilan faollashtirilgan va bir vaqtning o'zida AITC, PEITC yoki SFN bilan 20 soat davomida ko'rsatilgan konsentratsiyalarda (mkM) ishlov berilgan astrositlardan olingan madaniyat supernatantlarini tahlil qilishning vakili zimografik jeli xabar qilingan. Sarumsiz muhitda (CTRL) va LPS-da ogohlantirilmagan va davolanmagan astrositlardan salbiy va ijobiy nazoratlar olingan.
mos ravishda faollashtirilgan hujayralar (LPS). Gistogrammalar b-d turli hujayra populyatsiyalarida o'tkazilgan n {0}} tajriba natijalarini (o'rtacha ± SD) aks ettiradi, LPS bilan solishtirganda MMP inhibisyonining foizi sifatida ifodalanadi, skanerlash densitometriyasi va gellarning kompyuterlashtirilgan tahlilidan so'ng hisoblangan. . LPS bilan solishtirganda statistik jihatdan sezilarli pasayish yulduzcha bilan ko'rsatilgan (bir tomonlama ANOVA, keyin Dunnetning post hoc testi; *p < 0.05,="" **p=""><>
antikarsinogen, antimutagenik, antioksidant va yallig'lanishga qarshi biologik xususiyatlar (Dufour va boshq. 2015; Marzocco va boshq. 2015; Vig va boshq., 2009; Talalay va Fahey 2001). Izotiosiyanatlar glyukozinolatlarning (GSL) fermentativ parchalanishidan kelib chiqadi, ular ikkilamchi metabolitlar bo'lib, ular Capparales tartibining 15 botanika oilasida mavjud bo'lib, Brassicaceae oilasida juda ko'p uchraydi (Fahey va boshq. 2001). GSL mirozinaza (-tioglyukozid glyukohidrolaz e; EC 3.2.3.147) tomonidan ITC, nitritlar, tiosiyanatlar, epitionitrillar, SFGate, glyukoza va oksazolidinlar (Li va Kushad 220) kabi turli komponentlarda gidrolizlanadi. ITClar kimyoterapevtik sohada keng o'rganilgan bo'lsa-da (Grundemann va Huber 2018), SFN va AITC ning BBB ni kesib o'tish va miya parenximasida to'planish qobiliyatini ko'rsatgan bo'lsa-da, ularning nevrologik kasalliklarda terapevtik salohiyati haqida bir nechta tadqiqotlar o'tkazildi. (Clarke va boshq. 2011; Jazwa va boshq. 2011; Zhang 2010). Ushbu maqolada biz uchta ITC ta'sirini taqqosladik,
lipopolisakkarid (LPS) bilan faollashtirilgan yoki H2O2 bilan ishlov berilgan astrositlar bilan ifodalangan neyroinflamasyonning in vitro modelida reaktiv kislorod turlarini (ROS) ishlab chiqarish va matritsa metalloproteinazani (MMP) ifodalashda bir nechta tez-tez iste'mol qilinadigan xochga mixlangan sabzavotlarda mavjud. Astrositlar, markaziy asab tizimining eng ko'p tarqalgan glial hujayra turi, miya gomeostazini saqlashda hal qiluvchi rol o'ynaydi va turli nevrologik kasalliklarning belgilaridir (Cekanaviciute va Buckwalter 2016; Colombo va Farina 2016). Ular tug'ma immunitet reaktsiyasining hal qiluvchi regulyatorlari hisoblanadi va ularning oksidlovchi stress kabi zararli tajovuzlarga javobi yallig'lanish reaktsiyalarini va to'qimalarning shikastlanishini kuchaytirishi yoki to'qimalarning tiklanishiga yordam berishi mumkin. Ma'lumki, faollashtirilgan astrositlar MMP kabi neyrotoksik omillarni ishlab chiqaradi, ular nevrologik kasalliklarda neyroinflamasyon va progressiv neyron yo'qotilishini rag'batlantirishda asosiy rol o'ynaydi (Hsieh and Yang 2013). Shuning uchun, ning modulyatsiyasi
4-rasm ITC birikmalarining LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda MMP-2 va MMP-9 ifodasiga ta'siri. 6 ta quduq plastinkasiga ekilgan astrositlar LPS (10 µg ml-1) bilan faollashtirildi va bir vaqtning o‘zida 20 soat davomida AITC (400 mkM), PEITC (10 mkM) yoki SFN (25 mkM) bilan ishlov berildi, so‘ngra RT-PCR. MMP-2 va MMP-9 ifodasining reprezentativ agaroz jellari (a) da keltirilgan. (b) dagi gistogrammalar turli hujayralarda oʻtkazilgan n=3 ta tajriba natijalarini (oʻrtacha ± SD) aks ettiradi
astrositlar faollashganidan keyin sodir bo'ladigan hodisalar yallig'lanish reaktsiyasini va neyronlarning shikastlanishini yumshatishi mumkin.
Ushbu tadqiqot natijalari shuni ko'rsatdiki, o'rganilgan ITClar orasida AITC kamroq zaharli edi, chunki u barcha ishlatilgan konsentratsiyalarda hujayra hayotiyligining pasayishiga olib kelmadi. Aksincha, boshqa mualliflar tomonidan turli glial hujayra liniyalarida kuzatilganiga o'xshab, PEITC va SFN mos ravishda 10 va 25 mkM dan yuqori konsentratsiyalarda hujayra toksikligini ko'rsatdi (Lee va boshq. 2015; Eren va boshq. 2018; Su va boshq. 2015).
Hozirgi ilmiy adabiyotlarda ITC ning hujayra hayotiyligiga ta'siri ostida yotgan molekulyar mexanizmlar haqida juda ko'p bahsli ma'lumotlar mavjud. Shu nuqtai nazardan, ko'pgina tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, ITClar hujayra o'sishini qo'zg'atuvchi apoptozni, hujayra siklini to'xtatishni, saraton hujayralarida ROS hosil bo'lishini inhibe qiladi, ammo oddiy hujayralarda emas (Fofaria va boshq. 2015; Qin va boshqalar. al. 2018; Sestili va Fimognari 2015). Biz SFN va PEITC ning AITC emas, balki astrositlarda oksidlovchi stressdan himoya rolini o'ynashini aniqladik, haqiqatan ham maksimal toksik bo'lmagan konsentratsiyalarda ular H2O2 ta'siridan kelib chiqqan ROS ishlab chiqarishga qarshi tura oldilar. Markaziy asab tizimi kislorodning yuqori iste'moli, zaif antioksidant tizimlar va oksidlanishga moyil bo'lgan biomakromolekullarning yuqori miqdori tufayli oksidlovchi stressga ayniqsa zaifdir. ROS hosil bo'lishi va oksidlanish shikastlanishi Altsgeymer kasalligi (AD), Parkinson kasalligi (PD), amyotrofik lateral skleroz (ALS) va ko'p skleroz (MS) kabi nevrologik kasalliklarning patogenezida ishtirok etadi deb ishoniladi (Li va boshqalar. 2015). Shuning uchun, bizning in vitro tajribalarimizda SFN va PEITC ROS ishlab chiqarishga o'rtacha darajada qarshilik ko'rsatgan bo'lsa-da, biz in vivo jonli ravishda ITClarni uzoq muddat qo'llash ROSning sezilarli darajada pasayishiga olib kelishi mumkin, deb taxmin qilishimiz mumkin, bu vaqt o'tishi bilan mazmunli natijaga olib kelishi mumkin. skanerlash densitometriyasi va gellarning kompyuterlashtirilgan tahlilidan so'ng hisoblangan ijobiy nazorat (LPS) bilan solishtirganda MMP inhibisyonining foizi sifatida ifodalangan populyatsiyalar uchun. LPS bilan solishtirganda MMP-2 va MMP-9 ifodalarining statistik jihatdan sezilarli darajada kamayishi yulduzcha bilan ko'rsatilgan (bir tomonlama ANOVA, keyin Dunnetning post hoc testi; *p <>
miya kasalliklarining oldini olish va modulyatsiya qilish. ROS markaziy asab tizimiga yallig'lanish reaktsiyasining kaskadini qo'zg'atadigan muhim signalizatsiya molekulasi sifatida ishlaydi. Shu nuqtai nazardan, ROS yadro omili-kB (NF-kB) kabi yallig'lanishga qarshi transkripsiya omillarini faollashtirish orqali neyroinflamatsiyada ishtirok etadigan ko'plab genlarning ifodasini tartibga solishi yaxshi ma'lum (Li va boshq. 2015; Chiurchiù va boshq. 2016; Martorana va boshq. 2019). Ushbu stsenariyda NF-kB ni faollashtirish orqali ifodasi ROS tomonidan tartibga solinadigan MMPlar muhim rol o'ynaydi (Yan va Boyd 2007).
MMP disregulyatsiyasi ko'plab neyroinflamatuar va neyrodegenerativ kasalliklarning patogeneziga hissa qo'shganligi sababli, ularni inhibe qilish muhim terapevtik strategiya hisoblanadi. Shu sababli, so'nggi o'n yillikda MMPlarni inhibe qilish uchun dorilar va tabiiy birikmalarning salohiyatiga qiziqish ortib bormoqda. Ko'plab in vitro tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, sabzavotlar va dengiz organizmlarida mavjud bo'lgan bir nechta dori vositalari va bioaktiv birikmalarning yallig'lanishga qarshi va antioksidant ta'siri ularning MMPlarning ifodalanishini inhibe qilish qobiliyati bilan bog'liq (Latronico va boshq. 2016, 2018; Di Bari va boshq. 2015). Ushbu tadqiqotda biz sinovdan o'tgan ITClar orasida SFN va PEITC MMP-2 va MMP-9 darajalarini va LPS bilan faollashtirilgan astrositlarda ifodani inhibe qilishda eng samarali ekanligini ko'rsatdik. Boshqa in vivo va in vitro tadqiqotlarda MMPlarning ITC tomonidan inhibisyonu haqida xabar berilgan. Xususan, Li va boshqalar. (2013) SFN eksperimental otoimmun ensefalomielitning in vivo modelida MMP{8}} ifodasini inhibe qilish orqali BBB zararini yumshata olishini ko'rsatdi. Boshqa mualliflar SFN sichqonlarda o'murtqa shikastlanishdan keyin MMP -9 ifodasini susaytirishi mumkinligini xabar qilishdi (Mao va boshq. 2010a). Bundan tashqari, in vitro tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, hujayra migratsiyasining ITC tomonidan bostirilishi va
5-rasm Hujayradan tashqari signal bilan boshqariladigan kinaz 1/2 (ERK 1/2) ITC birikmalari tomonidan MMP ifodasini inhibe qilishda ishtirok etadi. 1 soat davomida AITC (400 mkM), PEITC (10 mkM) yoki SFN (25 mkM) bilan oldindan ishlov berilgan astrositlardan olingan lizatlarning western blot tahlilining avtoradiografik plyonkalari va keyin LPS (10 ug mL) bilan 2 soat davomida faollashtirilgan. 13}}). Ishlov berilmagan va ogohlantirilmagan hujayralar salbiy nazoratni (CTRL) ifodalaydi. (b) dagi gistogramma C6 glioma hujayralarida pERK1/2 darajali invaziyani ko'rsatadi, NF-kB vositachiligida MMP{17}} ifodasini inhibe qilish bilan bog'liq edi (Li va boshq. 2015).
ITC larning MMP ni inhibe qiladigan molekulyar mexanizmlari noaniq va birlamchi astrositlar madaniyatida ITC ning antioksidant va yallig'lanishga qarshi xususiyatlarini o'rganadigan tadqiqotlar yo'q. Bir nechta tadqiqotlar ITC ning inhibitiv ta'siri ularning Nrf2 signalizatsiya yo'li bilan NF-kB ni blokirovka qilish qobiliyatining natijasi ekanligi haqidagi gipotezani qo'llab-quvvatlaydi. Shu nuqtai nazardan, in vivo jonli tadqiqot shuni ko'rsatadiki, Nrf2 nokaut sichqonlari o'murtqa shnurning NF-kB vositachiligidagi yallig'lanish reaktsiyasiga va NFKB-ga bog'liq genlarning, shu jumladan MMP-9 ekspressiyasining ko'payishiga ko'proq moyil bo'lgan (Mao va boshq. 2010b. ). NF-kB va Nrf2 yo'llari o'zaro ta'sir qilishi mumkin bo'lsa-da, biz NF-kB ni tartibga solish Nrf2 tomonidan mustaqil bo'lgan molekulyar mexanizmlarning modulyatsiyasi orqali ham sodir bo'lishini ko'rsatdik. Haqiqatan ham, biz AITC, PEITC va SFN ERK1/2 faollashuvini inhibe qilganligini aniqladik, bu esa oxir-oqibat MMP gen transkripsiyasini tartibga soluvchi signal uzatish hodisalari kaskadida hal qiluvchi rol o'ynaydi.
Biroq, eksperimental dalillar, maksimal toksik bo'lmagan kontsentratsiyadagi SFN MMP-9 ifodasini ham, darajalarini ham to'liq inhibe qilgan, AITC va PEITC esa MMP-9 ifodasini maksimal darajada inhibe qilgan, lekin faqat MMP{{3}ni tushirgan. } darajalari taxminan 50% gacha bo'lsa, bu birikmalar MMP{5}} transkripsiyasini turli ta'sir mexanizmlari bilan modulyatsiya qilishini ko'rsatishi mumkin. Shu nuqtai nazardan, SFN NF-kB ning LPS tomonidan qo'zg'atilgan faollashuvini inhibe qilishdan tashqari, LPS ning TLR4 retseptorlari bilan bog'lanishiga xalaqit berishi haqida xabar berilgan (Koo va boshq 2013). SFN ning TLR4 ga inhibitiv ta'siri astrositlarning LPS tomonidan faollashishiga to'sqinlik qilishi mumkin va bu MMP-9 ifodasini yuqori oqimda inhibe qilishi va natijada MMP-9 ishlab chiqarilmasligiga olib kelishi mumkin.
avtoradiografik plyonkalarni densitometrik skanerdan o'tkazgandan so'ng va fosforlanmagan ERK 1/2 ga normalizatsiya qilingandan so'ng olingan. Ma'lumotlar turli hujayra populyatsiyalarida o'tkazilgan n=3 tajribaning o'rtacha ± SD ni ifodalaydi. Yulduzlar 100 foiz qilib belgilangan ijobiy nazoratdan (LPS bilan faollashtirilgan astrositlar) statistik jihatdan farq qiladigan qiymatlarni ifodalaydi (bir tomonlama ANOVA, keyin Dunnettning bir nechta taqqoslashdan keyingi testi; *p <>
Xulosa
Xulosa qilib aytganda, bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, astrositlarni ITC bilan davolash ROS hosil bo'lishini kamaytiradi va MMP-2 va MMP-9 chiqarilishini inhibe qiladi, bu esa ITClarning glialdagi antioksidant va yallig'lanishga qarshi xususiyatlari haqida yangi tushunchalar beradi. hujayralar. Ushbu natijalar shuni ko'rsatadiki, ITClar nevrologik kasalliklarning oldini olish va qo'shimcha davolash uchun sog'lom oziq-ovqatlardan foydalanishga asoslangan neyro-ovqatlanish aralashuvlarini rivojlantirish uchun istiqbolli ozuqaviy vositalar bo'lishi mumkin.
Moliyalashtirish CRUI-CARE kelishuvi doirasida Università Degli Studi di Bari Aldo Moro tomonidan taqdim etiladigan ochiq foydalanishni moliyalashtirish.
Axloqiy me'yorlarga rioya qilish
Manfaatlar to'qnashuvi Mualliflar manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilmaydi.
Open Access Ushbu maqola Creative Commons Attribution 4 boʻyicha litsenziyalangan.0 Asl muallifga tegishli huquqni bergan holda foydalanish, almashish, moslashtirish, tarqatish va koʻpaytirishga ruxsat beruvchi xalqaro litsenziya. (lar) va manba, Creative Commons litsenziyasiga havolani taqdim eting va o'zgartirishlar kiritilganligini ko'rsating. Ushbu maqoladagi tasvirlar yoki boshqa uchinchi tomon materiallari, agar materialning kredit liniyasida boshqacha ko'rsatilmagan bo'lsa, maqolaning Creative Commons litsenziyasiga kiritilgan. Agar material maqolaning Creative Commons litsenziyasiga kiritilmagan bo'lsa va sizning maqsadli foydalanishingiz qonun hujjatlarida ruxsat etilmagan bo'lsa yoki ruxsat etilgan foydalanishdan oshib ketgan bo'lsa, to'g'ridan-to'g'ri mualliflik huquqi egasidan ruxsat olishingiz kerak bo'ladi. Ushbu litsenziya nusxasini koʻrish uchun http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ saytiga tashrif buyuring.
