Ludvigia Oktovalvisning Drosophila Melanogaster va SAMP8 sichqonlariga qarishga qarshi ta'siri 1-qism

AbstraktBiz Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae) ning qarishga qarshi ta'sirini o'rganib chiqdik, u bir qancha mamlakatlarda sog'lom ichimlik sifatida keng iste'mol qilinadi. Drosophila melanogaster meva pashshasidan namunali organizm sifatida foydalanib, biz L. octovalvis ekstrakti (LOE) yuqori, ammo past kaloriyali dietada pashshaning umrini sezilarli darajada uzaytirishini ko'rsatdik, bu LOE dietani cheklash orqali umrini tartibga solishi mumkinligini ko'rsatadi ( DR) bilan bog'liq yo'l. LOE ham pashshalarda, ham qarilikka moyil bo'lgan 8 (SAMP8) sichqonchasida yoshga bog'liq kognitiv pasayishni susaytirdi, bu esa suv iste'moli, oziq-ovqat iste'moli, urug'lanish yoki o'z-o'zidan paydo bo'ladigan vosita faolligini o'z ichiga olgan sezilarli salbiy o'zgarishlarga olib kelmaydi. LOE tarkibida yuqori darajadagi polifenollar va flavonoidlar mavjud bo'lib, ular kuchli DPPH radikallarini tozalash faolligiga ega bo'lib, pashshalarda paraquatdan kelib chiqqan oksidlovchi zararni va o'limni susaytirishi ko'rsatilgan. Gaz xromatografiyasi - massa spektrometriyasi (GC-MS) tahlillari 17 ta ma'lum molekulani aniqladi, ulardan ikkitasi - sitosterol va skualen eng ko'p. Bundan tashqari, biz -sitosterol kattalar chivinlarining yog 'tanasida AMP bilan faollashtirilgan protein kinazni (AMPK) faollashtirish orqali umrini uzaytirishi mumkinligini ko'rsatdik. Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, LOE yoshga bog'liq kasalliklarni davolash uchun potentsialga ega kuchli qarishga qarshi vositadir.

Sistanx glikozidi, shuningdek, yurak va jigar to'qimalarida SOD faolligini oshirishi va har bir to'qimalarda lipofusin va MDA tarkibini sezilarli darajada kamaytirishi, turli xil reaktiv kislorod radikallarini (OH-, H₂O₂ va boshqalar) samarali tozalash va DNKning shikastlanishidan himoya qilishi mumkin. OH-radikallar tomonidan. Cistanche feniletanoid glikozidlari erkin radikallarni kuchli tozalash qobiliyatiga ega, S vitaminiga qaraganda yuqori darajada kamaytirish qobiliyatiga ega, sperma suspenziyasida SOD faolligini yaxshilaydi, MDA tarkibini kamaytiradi va sperma membranasi funktsiyasiga ma'lum bir himoya ta'siriga ega. Cistanche polisaxaridlari D-galaktoza sabab bo'lgan eksperimental qarigan sichqonlarning eritrotsitlari va o'pka to'qimalarida SOD va GSH-Px faolligini oshirishi, shuningdek o'pka va plazmadagi MDA va kollagen miqdorini kamaytirishi va elastin miqdorini oshirishi mumkin. DPPHga yaxshi tozalash ta'siri, qarigan sichqonlarda gipoksiya vaqtini uzaytirish, sarumdagi SOD faolligini yaxshilash va eksperimental qarigan sichqonlarda o'pkaning fiziologik degeneratsiyasini kechiktirish Hujayra morfologik degeneratsiyasi bilan tajribalar Cistanche yaxshi antioksidant qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi. va terining qarish kasalliklarini oldini olish va davolash uchun dori bo'lish potentsialiga ega. Shu bilan birga, Cistanchedagi echinacoside DPPH erkin radikallarini tozalashning muhim qobiliyatiga ega va reaktiv kislorod turlarini tozalashi, erkin radikallar keltirib chiqaradigan kollagen degradatsiyasini oldini olishi mumkin, shuningdek, timin erkin radikal anionining shikastlanishiga yaxshi ta'sir ko'rsatadi.

Cistanches herba ustiga bosing

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kalit so'zlarLudvigia oktovalvis. Oziqlanishni cheklash. Hayot davomiyligi. AMPK

Kirish

Demografik tendentsiyalar va keksa jamiyatning bashorat qilingan yuklarini hisobga olgan holda, qarishni tushunish bizning zamonamizning asosiy muammosidir. Neyrodegenerativ kasalliklar, saraton va yurak-qon tomir kasalliklari kabi yoshga bog'liq kasalliklarni o'rganish bo'yicha tadqiqotlar allaqachon insonning qarishi haqida muhim ma'lumotlarga ega bo'ldi. Oziqlanishni cheklash (DR), to'yib ovqatlanmasdan yoki parhez tarkibiy qismlarining muvozanatini o'zgartirmasdan kaloriya iste'molini kamaytirish, xamirturushdan pashshagacha, sutemizuvchilarga qadar sog'lom umr ko'rishni uzaytirish uchun eng samarali aralashuv ekanligi ma'lum (Lin va boshq. 2000; Wood va boshqalar 2004; Bonkowski va boshqalar 2006; Wu va boshqalar 2013). Kemiruvchilarda DR oddiy sichqonlarda va qisqa muddatli qarish tezlashtirilgan 8 (SAMP8) sichqonlarida umr ko'rish muddatini sezilarli darajada oshirishi mumkin (Weindruch va Walford 1982; Choi va Kim 2000; Simons va boshq. 2013). Chivinlarda umr ko'rishning sezilarli darajada uzaytirilishi ham kuzatilishi mumkin (Zheng va boshq. 2005; Soh va boshq. 2013). Primatlarda (rhesus maymun) o'tkazilgan tadqiqotlar DR ning o'limga ta'siri bo'yicha hali aniq natijalarni bermagan bo'lsa-da, maymunlarda DR kemiruvchilar va pashshalarda kuzatilganlarga o'xshash foydali fiziologik ta'sirlarni keltirib chiqarishi aniq (Colman va boshq. 2009; Mattison et al. bosh. 2012). DR bilan umr ko'rish davomiyligi insulin/IGF, sirtuinlar (Sir), SKN-1, rapamitsinning maqsadi va AMP bilan faollashtirilgan protein kinaz kabi ozuqa moddalarini sezish va metabolizmni o'z ichiga olgan bir qancha genetik yo'llar orqali vositachilik qilishi ko'rsatilgan. (AMPK) yo'llari (Lin va boshq. 2000; Kaeberlein va boshq. 2005; Bishop va Guarente 2007; Alcedo va Kenyon 2004; Stenesen va boshq. 2013). Ko'rinib turibdiki, Sir2/Sirt1 (Lin va boshq. 2004) va AMPK (Xiao va boshq. 2011) AMP/ATP, ADP/ATP yoki NAD/NADH nisbatlarining oshishi bilan faollashishi mumkin, bu esa hujayraning past energiya holatini aks ettiradi. Bular, o'z navbatida, hujayralarning metabolik holatini energiya iste'molidan energiyani saqlash va ishlab chiqarishgacha o'zgartiradigan bir qator quyi oqim signalizatsiya hodisalarini keltirib chiqaradi.

Kundalik hayotda DRni qo'llashda odamlar uchun amaliy chegaralarni hisobga olgan holda, DR mimetikasining rivojlanishi qarishga qarshi tadqiqotlar uchun qiziqarli soha sifatida paydo bo'ldi. Oziqlantiruvchi birikmalar yoki o'simlik ekstraktlarini o'z ichiga olgan xun qo'shimchalari sog'lom hayotni uzaytirish uchun xavfsiz va samarali choralar ko'rishi mumkin. Nektarin va olmadan olingan meva ekstraktlari, shuningdek, Rhodiola rosea va Curcuma longa o'simliklaridan olingan o'simlik ekstraktlari oksidlanish zararini kamaytirish orqali meva chivinlarining umrini uzaytirishi allaqachon ko'rsatilgan (Boyd va boshq. 2011; Peng va boshq. 2011; Schriner va boshq. 2009; Li va boshq. 2010; Schriner va boshq. 2013). Ushbu salomatlikni rag'batlantiruvchi o'simliklarning umrini uzaytiruvchi ta'sirga nomzod sifatida aniqlangan asosiy komponentlar polifenollar bo'lib, ular erkin radikallarni tozalash yoki redoks-aktiv metall xelatatorlari sifatida harakat qilish potentsialiga ega (Galleano va boshq. 2010). Resveratrol, asosan, qizil uzumning terisida joylashgan polifenol birikma, bu molekulalar sinfining eng mashhur namunasi bo'lib, Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster va Noth kabi evolyutsion jihatdan uzoq turlarning umrini uzaytirishi ko'rsatilgan. furzeri (Howitz va boshq. 2003; Wood va boshq. 2004; Valenzano va boshq. 2006). Resveratrolning oksidlanishga qarshi xususiyatlari isbotlangan bo'lsa-da, to'plangan dalillar ushbu birikma yuqorida aytib o'tilgan Sir2/Sirt1 kabi uzoq umr ko'rish bilan bog'liq bo'lgan bir nechta genlar uchun kuchli faollashtiruvchi sifatida ham harakat qilishi mumkinligini ko'rsatadi (Hubbard va boshq. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae) dunyoning ko'plab mamlakatlarida tropik hududlarda keng tarqalgan. L. oktovalvisning toʻliq kimyoviy tarkibi toʻliq tavsiflanmagan boʻlsa-da, bu oʻsimlik uzoq vaqt davomida turli kasalliklarni, jumladan, shish, nefrit va gipotenziyani davolash uchun oʻsimlik dori sifatida qoʻllanilgan. Osiyodagi katta aholi L. octovalvis ekstraktini (LOE) har kuni foydali ichimlik sifatida iste'mol qiladi. Sichqonlarda toksikologik baholash shuni ko'rsatdiki, surunkali LOE davolash kuzatiladigan nojo'ya ta'sirlarsiz immunoregulyatsion, gepatoprotektiv va yurak-qon tomir himoya xususiyatlarini ta'minlashi mumkin (Kadum Yakob va boshq. 2012). Bundan tashqari, LOE antibakterial va saratonga qarshi faolliklarga ega ekanligi xabar qilingan (Chen va boshq. 1989; Chang va boshq. 2004). Ushbu tadqiqotda biz meva chivinlari va SAMP8 sichqonlarini namunali organizmlar sifatida ishlatib, LOE ning qarishga qarshi ta'sirini o'rgandik. Bizning topilmalarimiz shuni ko'rsatadiki, LOE qarishga qarshi vosita sifatida rivojlanishi mumkin.

Usullari

LOE tayyorlash

L. octovalvisning butun o'simliklari odatda yoz mavsumida to'plangan va quritilgan o'simliklar mahalliy qishloq xo'jaligini yaxshilash stantsiyasidan va Tayvandagi Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. L. octovalvis uchun sifat nazorati Tayvan Herbal Biopharma Company Ltd. tomonidan nazorat qilingan va vaucher namunasi (№ 034) Hsiehyu Biotech Company Ltd gerbariysiga yotqizilgan. LOE tayyorlash uchun 100 g L. octovalvis kukuni 400 ga namlangan. ml 95 foizli etanol kechasi 4 gradusda, so'ngra 30 daqiqa davomida 55 gradusda ikki marta ekstrakte qilinadi. Supernatant santrifüj qilindi (8, 000 × g 5 daqiqa davomida) va filtrdan o'tkazildi (TOYO № 1) qoldiqlarni olib tashlash uchun. LOE dekompressiya jarayonidan keyin olingan.

Gaz xromatografiyasi-mass spektrometriyasi (GC-MS)

LOE ning GC-MS tahlili HP- 6890 gaz xromatografi va HP-5MS kapillyar gaz xromatografiyasi ustuni bilan jihozlangan HP-5973 massa-selektiv detektori (MSD, Agilent Technologies) yordamida amalga oshirildi. (12,5 m×0,2 mm ID, 0,33 mkm plyonka qalinligi) (J&W Scientific). Splitsiz rejimda inyeksiya hajmi 2 ul, kirish harorati esa 290 daraja edi. Tashuvchi gaz sifatida geliy ishlatilgan (oqim tezligi 0,6 ml/min) va pechning harorati quyidagicha dasturlashtirilgan: dastlabki harorat: 35 daraja, 5 daraja/min 90 daraja, keyin 10 daraja/min dan 200 darajaga ko‘tarilgan. , va nihoyat, 20 daraja / min dan 290 darajagacha, bu erda 8 daqiqa ushlab turildi. Tahlil EI rejimida amalga oshirildi, ionlanish kuchlanishi 70 eV da o'rnatildi. MSD ni skanerlash (m/z 45-550) HP Chemistation dasturi yordamida amalga oshirildi.

2,2-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) radikalni tozalash faolligi va polifenollar va flavonoidlarning umumiy tarkibi

DPPH radikallarini tozalash faolligi ilgari tasvirlangan o'zgartirilgan usul yordamida o'lchandi (Brand-Williams va boshq. 1995). Qisqacha aytganda, yakuniy konsentratsiyaga erishish uchun 200 ul 100 mkM DPPHga 1{7}}0 ul LOE, askorbin kislota, resveratrol, skualen yoki - sitosterol (Sigma) qo'shildi. 0, 1, 5, 10 va 50 ug/ml. Reaksiya aralashmasi qorong'i joyda xona haroratida 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Absorbansning pasayishi 520 nm da mikroplata o'quvchi (AccuReader 965) da o'lchandi. LOE ning umumiy fenolik tarkibiy qismlari Folin-Ciocalteu reagenti bilan standart sifatida gallik kislotadan foydalangan holda aniqlandi (Slinkard va Singleton 1977). Butun flavonoid tarkibi alyuminiy xlorid kolorimetrik tahlili bilan o'lchandi, rutin standart sifatida ishlatilgan (Shih va boshq. 2010).

Hujayra madaniyati va Western blot tahlillari

Drosophila Schneider (S2) hujayralari Shnayderning Drosophila muhitida (Invitrogen) 25 darajada o'stirildi, 10% issiqlik bilan inaktivlangan homila sigir zardobi (Gibco) bilan to'ldiriladi. Hujayralar normal (1 × o'rta, yuqoridagi kabi) o'sish sharoitida yoki DR sharoitida (0,5 × o'rta, 1 × muhitni fosfat-buferli sho'r suvda 1: 1 suyultirish) turli xil LOE va -sitosterol (Sigma) kontsentratsiyasi bilan ishlov berilgan. PBS)) 12 soat davomida. Fosfor-AMPK va -tubulin (Hujayra signalizatsiya texnologiyasidan antikorlar) oqsil darajasi yuqorida tavsiflanganidek Western blot tomonidan tahlil qilindi (Vang va boshq. 2005).

Chivinlar va umr ko'rish testlari

Canton-S (CS), w1118, semiz tanasi GeneSwitch drayveri S106 (Bloomington Stock Center #8151) va UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) standart saxaroza/xamirturush/makkajo'xori unidan tayyorlangan oziq-ovqat mahsulotlarida ko'tarildi. . S106 bokira qizlari AMPK nokdaunlash tajribalarida UASAMPK.RNAi erkaklari bilan kesishgan. Hayot davomiyligini tahlil qilish uchun 48 soat ichida yopilgan pashshalar (taxminan 100 ta erkak va 100 urgʻochi) 1- l populyatsiya qafasiga koʻchirildi va namlangan, harorat boshqariladigan inkubatorda 12-soat davomida saqlangan. yopiq yorug'lik aylanishi 25 daraja (Vang va boshq. 2009). Har kuni yangi ovqat berilardi va o'lik chivinlarning soni va jinsi baholandi. Yuqori kaloriya va past kaloriyali ovqatlar mos ravishda dekstroz va xamirturushning 15 yoki 5 foizini o'z ichiga oladi. Barcha ovqatlarga ikki foizli agar va 0,23 foiz Tegosept (Apex) qo'shildi. Har bir tajribada tasvirlangan oziq-ovqatlarga LOE, skualen, -sitosterol, RU486 (Mifepriston, Sigma) yoki avtomobil nazoratining turli konsentratsiyasi qo'shilgan.

Pashshalarning oziqlanishi, unumdorligi va spontan motor faolligi

Turli xil konsentratsiyali LOE bo'lgan yuqori kaloriyali oziq-ovqatda saqlanadigan o'n kunlik chivinlar 0,5 foiz FD&C no. qo'shilgan holda bir xil oziq-ovqatning yangi flakonlariga o'tkazildi. 1 ko'k rangli oziq-ovqat bo'yoqlari. 24 soatdan so'ng, 10 chivin PBS o'z ichiga olgan bitta naychada bir hil holga keltirildi va yutilgan bo'yoq miqdori 625 nm da bo'yoq absorbsiyasi uchun spektrofotometr yordamida aniqlandi. Ayollarning unumdorligi uchta juftlashuvchi juftlik tomonidan ishlab chiqarilgan tuxumlarning kunlik hisoblanishi bilan aniqlandi. Chivinlar har kuni tegishli oziq-ovqat bo'lgan yangi flakonlarga o'tkazildi va kattalar hayotining dastlabki 20 kunida qo'yilgan tuxumlar soni hisoblandi va qayd etildi. Faoliyat darajasini kuzatish uchun tegishli oziq-ovqat manbasida bitta erkak pashshani o'z ichiga olgan shisha flakonlar infraqizil yorug'lik manbalarining dumaloq halqalari bo'lgan lokomotor qayd kameralariga joylashtirildi; nurlarning uzilishlari faoliyat sifatida qayd etiladi (TriKinetics). Maʼlumotlar 72-soatlik davr mobaynida har 20 soniyada yozib olindi. Faoliyat monitorlari yuqorida tavsiflangan inkubatorga joylashtirilgan.

Pavlovning xushbo'y assotsiativ qisqa muddatli pashsha xotirasi

Turli yoshdagi chivinlar 60 soniya davomida bitta hid bilan bog'langan elektroshok (70 V) ta'sirida o'qitildi. Keyinchalik, chivinlar 60 soniya davomida elektroshoksiz ikkinchi hidga duchor bo'lishdi. Chivinlarga 45 soniya dam olishga ruxsat berildi va keyin 2 daqiqa davomida T-labirint sinovidan o'tkazildi, unda ular ikkita hiddan birini tanlashlari kerak edi. Foydalanilgan hidlar metil siklogeksanol (1:1,{8}} mineral moyda suyultirish) va yoki oktanol (1,5:1,000 mineral moyda suyultirish). Barcha eksperimentlar uchun har bir hid va elektroshok juftligi uchun kamida beshta seans o'tkazildi. Barcha ma'lumotlar o'rtacha hisoblangan va ular har bir guruh uchun xotira indeksining foizi sifatida ko'rsatilgan. Ishlash ko'rsatkichi hid elektroshok bilan bog'langan qo'lga kirgan chivinlar sonini qarama-qarshi qo'ldan kiruvchi raqamdan, hid elektroshok bilan bog'lanmagan sondan ayirish va chivinlarning umumiy soniga bo'lish yo'li bilan hisoblanadi.

Paraquat tufayli oksidlovchi stress va 4-gidroksi{2}}nominal (HNE) aniqlash

Har xil konsentratsiyali LOE ni o'z ichiga olgan yuqori kaloriyali oziq-ovqatda saqlanadigan o'n kunlik chivinlar 0 yoki 20 mM paraquat va 6 foiz dekstroz eritmasiga namlangan filtr qog'ozli flakonlarga o'tkazildi. O'lgan pashshalar soni har 3-4 soatda hisoblangan. 12 soatda paraquat bilan ishlov berilgan pashshalarning bir qismi yig'ildi va HNE ishlab chiqaruvchi tomonidan taqdim etilgan protokolga muvofiq OxiSelect™ HNE Addduct ELISA to'plami (Cell Biolabs) yordamida o'lchandi.

Hayvonlar

Barcha eksperimental protokollar mahalliy hayvonlar etikasi qoidalariga amal qilgan. SAMP8 sichqonlari Modular Animal Caging System® (alternativ dizayn) da yetishtirildi va parvarish qilindi va ularning oziq-ovqatlari gamma nurlanishi bilan sterilizatsiya qilindi. Xonada 12-soat yoqish/oʻchirish davri boʻlgan, qorongʻu faza soat 20.00 da boshlangan. Sichqonlar uchun LOE ichimlik suviga oxirgi konsentrasiyalarda 0, 50 va 100 ug/ qoʻshilgan. ml. Oziq-ovqat iste'moli, suv iste'moli va tana vaznining o'zgarishi muntazam ravishda nazorat qilinadi.

RNK tayyorlash, cDNK sintezi va miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (qPCR)

Jami RNK RNeasy Mini Kit (Qiagen) yordamida kamida 30 chivindan tayyorlangan. RNK DNase bilan ishlov berildi va ilgari tavsiflanganidek oligo-d (T) 15 (Invitrogen) va SuperScript III teskari transkriptaza (Invitrogen) yordamida cDNK ga aylantirildi (Chou va boshq. 2013). qPCR reaktsiyalari StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) yordamida amalga oshirildi va genga xos primerlar AMPKGACTAGATACAG va GAGCTATCAGG va GAGCTATCAGG uchun CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA va CACATTTCGA AAAACTCCATGGT edi. GAPDH uchun G AAGAAGTC. Ikki bosqichli PCR reaktsiyasi 95 gradusda 15 s davomida denatürasyon, tavlanish va 60 gradusda 1 daqiqa davomida jami 40 tsiklda birlashtirilgan uzaytirish bilan amalga oshirildi. GAPDH bilan solishtirganda har bir maqsadli genning mRNK ifoda darajasi olib tashlash yo'li bilan aniqlandi: Cttarget − CtGAPDH=DCt. Bitta PCR siklidagi farq mRNK ifoda darajasining ikki barobar o'zgarishiga teng. Amplikonlarning o'ziga xosligi dissotsiatsiya egri chiziqlari yordamida tasdiqlangan.

Yangi ob'ektni aniqlash, baland T labirint va ochiq maydon sinovlari

Yangi ob'ektni tanib olish testi uchun sichqonlar birinchi navbatda ochiq qutiga (50 sm × 25 sm × 50 sm) kuniga 10 daqiqa davomida ketma-ket ikki kun davomida, hech qanday ob'ekt bo'lmagan holda o'rganildi. Uchinchi kuni sichqonlar qutiga 2 daqiqaga joylashtirildi va keyin har bir sichqonga ikkita o'xshash narsa taqdim etildi. Har bir ob'ektni o'rganishga sarflangan vaqt keyingi 5-daqiqalik davrda (mashq mashg'uloti sifatida belgilangan) qayd etilgan. Keyin sichqonlar uy qafasiga qaytarildi. Bir, ikki yoki uch soatdan so'ng, xuddi shu hayvonlar tanish va yangi ob'ekt bilan qutida 5 daqiqa davomida qayta sinovdan o'tkazildi (xotira sinovi sessiyasi sifatida belgilangan). Ob'ektni kamsitish indeksi tanish ob'ektni o'rganish uchun sarflangan vaqtni yangi ob'ektni o'rganish uchun sarflangan vaqtdan ayirish va uni ikkala ob'ektni o'rganish uchun sarflangan umumiy vaqtga bo'lish yo'li bilan hisoblab chiqilgan.

Ko'tarilgan T labirintasi oldingi tadqiqotlardan o'zgartirildi (Cruz-Morales va boshq. 2008; De-Mello va Carobrez 2002; Maia va boshq. 2010; Santos va boshq. 2006; Takahashi va boshq. 2005). U 15 sm balandlikdagi devorlar bilan o'ralgan, ikkita qarama-qarshi ochiq qo'llarga perpendikulyar bo'lgan bir qo'ldan iborat edi. Uchta qo'lning o'lchamlari bir xil edi (30 sm × 5 sm) va butun apparat poldan 50 sm balandlikda ko'tarilgan. O'quv kunida har bir sichqonchani yopiq qo'lning distal uchiga, qo'llarning kesishgan joyiga qaratib qo'yildi va yopiq qo'lni o'rganishga ruxsat berildi. Sinov sichqoncha ochiq qo'llarga kirganida (to'rtta panjasi ochiq qo'l sohasida) yoki yopiq qo'lda 300 soniya qolganda tugadi. O'quv mashg'ulotlari davomida sichqonlarning o'rganish qobiliyatini baholash uchun qochish mezoniga erishish uchun zarur bo'lgan sinovlar soni ishlatilgan. Mashg'ulotlardan yigirma to'rt soat o'tgach, sichqonlar yopiq qo'l bilan qayta ta'minlandi va ularning yopiq qo'lda qolgan vaqti xotirani saqlashni baholash sifatida qayd etildi.

Ochiq maydon sinovi ochiq qutida (50 sm × 25 sm × 50 sm) amalga oshirildi. Har bir sichqonchani ochiq maydonning o'rtasiga qo'yib, 1 soat davomida apparatni erkin o'rganishga ruxsat berildi. Har bir sichqonchaning yo'nalishi va harakat tezligi avtomatlashtirilgan kuzatish (Diagnostika va tadqiqot asboblari) orqali qayd etilgan.

Natijalar

LOE bilan bog'liq umr ko'rish davomiyligi DR bilan bog'liq

LOE ning in vivo jonli ravishda qarishga qarshi ta'siri bor yoki yo'qligini tekshirish uchun biz birinchi navbatda turli konsentratsiyali LOE ni o'z ichiga olgan oziq-ovqatlarda ko'tarilgan CS pashshalarining umrini ko'rib chiqdik. Yuqori kaloriyali oziq-ovqatlarda erkaklar CS pashshalarining o'rtacha umr ko'rish muddati 41,5 kun edi va chivinli ovqatlarga 50, 100 va 1000 ug/ml LOE qo'shilishi erkak chivinlarning umrini 8,9 ga uzaytirdi. 16,1 va 9,6 foizni tashkil etdi (1a-rasm va 1-jadval). Ayol CS pashshalari yuqori kaloriyali ovqatda o'rtacha umr ko'rish muddati bor-yo'g'i 32,2 kun edi, bu erkaklarnikiga qaraganda qisqa. Shu bilan birga, LOE urg'ochi CS pashshalarida umr ko'rish davomiyligini yanada ko'proq uzaytirdi, bunda 100 ug/ml LOE eng katta ta'sir ko'rsatdi (24,2 foizga uzaytirildi; 1b-rasm va 1-jadval) va 100 ug/ml LOE ham erkaklarda, ham erkaklarda umrini uzaytirdi. ayol w1118 uchadi, bu LOE-uzaygan umr ko'rish CS genetik fonida cheklanmaganligini ko'rsatadi (1c, d va 1-jadval).

DR umrni uzaytirish uchun yaxshi hujjatlashtirilgan aralashuv bo'lganligi sababli, biz LOE ning uzoq umr ko'rish effektlari DR tomonidan o'zgartirilishini sinab ko'rmoqchi edik. Past kaloriyali ovqatlarda o'stirilgan erkak va urg'ochi CS pashshalari yuqori kaloriyali ovqatlarda o'stirilgan CS pashshalariga nisbatan o'rtacha umr ko'rish davomiyligi mos ravishda 17,8 va 49,4 foizga oshganini ko'rsatdi (1e, f va 1-jadval). Biroq, LOE, past kaloriyali oziq-ovqatlarda pashshalarni nazorat qilish uchun ko'rilganidan yuqoriroq umr ko'rishni keltirib chiqarmadi (1e, f va 1-jadval), bu LOE va DR tufayli umr ko'rish davomiyligi o'rtasidagi bog'liqlikni ko'rsatadi, bu esa bu aralashuvlar hech bo'lmaganda qisman xuddi shu yo'llar orqali harakat qiling.

Surunkali LOE davolash salbiy o'zgarishlarni keltirib chiqarmaydi

LOE sabab bo'lgan umr ko'rish davomiyligi DR yo'li bilan potentsial ravishda bog'langanligi sababli, biz LOE chivinlarning oziq-ovqat iste'molini kamaytirishi va DRga o'xshash holatga olib kelishi mumkinligini tekshirdik. Biz chivinlarning oziq-ovqat iste'molini ularning ovqatiga bo'yoq qo'shishning standart tizimidan foydalangan holda kuzatdik (Vang va boshq. 2009). O'rtacha, urg'ochi CS pashshalari yoshi mos keladigan erkaklarga qaraganda ancha ko'proq ovqat iste'mol qiladilar, ammo har ikkala jins uchun ham nazorat va LOE bilan davolash qilingan chivinlar o'rtasida oziq-ovqat iste'molida farq kuzatilmadi (2a-rasm).

Oziq-ovqat iste'molini kamaytirishga qo'shimcha ravishda, umr ko'rish muddatini uzaytiradigan aralashuvlar unumdorlikning pasayishi va jismoniy faollik kabi salbiy o'zgarishlarni o'z ichiga olishi mumkin (Flatt va boshq. 2008; Wang va boshq. 2009; Sohal va Buchan 1981). Biz LOE bilan davolash qilingan CS chivinlari kattalar hayotining dastlabki 20 kunida tuxum ishlab chiqarishda hech qanday farq ko'rsatmasligini aniqladik (2b-rasm). LOE bilan davolash qilingan va nazorat qiluvchi CS pashshalari ham yuqorida aytib o'tilganidek, normal sirkadiyalik ritm va spontan motor faolligini ko'rsatdi (2c-rasm).

LOE meva chivinlari va SAMP8 sichqonlarida yoshga bog'liq xotira etishmovchiligini kamaytiradi

Neyronlarning funktsional pasayishi qarish jarayonining umumiy belgisidir. Pavlov hid bilish assotsiativ qisqa muddatli xotira testi yordamida pashshalarning funksional xotirasini tekshirdik. CS yuqori kaloriyali oziq-ovqat bilan uchadi kattalar hayotining dastlabki 20 kunida asta-sekin kognitiv pasayish ko'rsatdi (3a-rasm). Ushbu xotiraning pasayishi DR tomonidan zaiflashdi, statistik jihatdan muhim farq 20-kunga kelib ko'rindi (3a-rasm, b). LOE, shuningdek, yoshga bog'liq xotiraning pasayishini dozaga bog'liq ravishda kamaytirdi, 100 ug/ml LOE dagi chivinlar DR chivinlari uchun ko'rinadigan darajada plato darajasiga erishdi (3b-rasm).

Biz SAMP8 sichqonlarida LOE ning prokognitiv ta'sirini qo'shimcha ravishda o'rganib chiqdik, ular o'rganish va xotirada nuqsonlarning erta boshlanishini rivojlantiradi va Altsgeymer kasalligining asosiy mexanizmlarini o'rganish uchun mos model ekanligi ko'rsatilgan (Flood and Morley 1992, 1993). Chan va boshq. 2006; Takeda 2009). Yangi ob'ektni aniqlash testlarida 3-oylik SAMP8 sichqonlari mashg'ulotdan so'ng 3 soatgacha barqaror tanib olish xotirasini ko'rsatdi va tanish ob'ektga nisbatan yangi ob'ektga ko'proq vaqt sarfladi (3c, d-rasm). Biroq, bu xotira saqlanishi 8-oylik SAMP8 sichqonlarida kuzatilmadi (3c, d-rasm). 5 oy davomida (3 oylikdan boshlab) ichimlik suviga LOE (100 ug / ml) qo'shilishi SAMP8 sichqonlarining tanib olish xotirasini saqlab qolishni, hatto mashg'ulotdan 3 soat o'tgach ham sezilarli darajada oshirdi (3d-rasm). 50 ug / ml LOE suv qo'shimchasi kamroq foydali ta'sirga ega edi, ammo xotirani 2 soatgacha saqlashni yaxshilashga muvaffaq bo'ldi (3d-rasm).

Yuqori T labirint testlarida sichqonlarning barcha guruhlari qochish mezoniga erishish uchun bir xil miqdordagi o'quv sinovlarini talab qildi, bu barcha sichqonlarning o'rganish qobiliyatiga ega ekanligini ko'rsatdi (3e-rasm). 24-soatlik xotirani qayta tiklash testlarida, faqat 8-oylik, lekin 3-oylik emas, SAMP8 sichqonlari xotirani saqlashda sezilarli kamomadni ko'rsatdi (3f-rasm). SAMP8 sichqonlarida yoshga bog'liq qo'rquv xotirasi etishmovchiligini ichimlik suviga 5-oylik LOE qo'shish orqali ham qutqarish mumkin (3f-rasm). Yuqorida kuzatilgan LOE ning pro-kognitiv ta'sirini sichqonlarning umumiy motor faolligidagi har qanday o'zgarish bilan bog'lash mumkin emas, chunki ochiq maydon sinovlarida sayohat tezligi yoki masofada hech qanday farq kuzatilmagan (3g-rasm va ma'lumotlar ko'rsatilmagan). 5-oylik LOE davosini olgan SAMP8 sichqonlari oziq-ovqat yoki suv iste'moliga ta'sir ko'rsatmadi va tana vaznida hech qanday o'zgarish kuzatilmadi (3h-j-rasm).

【Batafsil ma'lumot uchun:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】