Airen uzum sharbati tarkibidagi kuersetin va katexinning yuqori miqdori uning funktsional oziq-ovqat ishlab chiqarishda qo'llanilishini qo'llab-quvvatlaydi.

Iltimos, murojaat qilingoscar.xiao@wecistanche.comqo'shimcha ma'lumot uchun

1.Kirish

Uzum sharbati uzum rezavorlaridan olingan mahsulotdir. O'rta er dengizi dietasida mashhur bo'lgan uzum suv va shakar, glyukoza va fruktoza, oz miqdordagi minerallar, vitaminlar va fitokimyoviy deb nomlanuvchi boshqa organik birikmalarni o'z ichiga oladi. Fenolik birikmalar inson salomatligi bilan bog'liq qiziqarli xususiyatlarni ko'rsatadigan o'simliklar va mevalarda mavjud bo'lgan organik molekulalarning ushbu guruhiga kiradi [1]. Ushbu birikmalarning antioksidant qobiliyati, xususan, ularning qarishga qarshi, yallig'lanishga qarshi, kardioprotektiv va immunomodulyatsion xususiyatlari bilan bog'liqligi sababli keng ko'lamda isbotlangan. Bundan tashqari, o'ziga xos polifenol birikmalarining antimikrobiyal va antikarsinogen xususiyatlari flavonoidlar va stilben oilalari bilan bog'liqligini ko'rsatadigan dalillar mavjud [7]. Bularning barchasi oziq-ovqat sifatini yaxshilash, xususan, bolalar, sportchilar va turli kasalliklardan aziyat chekadigan odamlar uchun mo'ljallangan funktsional oziq-ovqatlarni yaxshilash uchun ozuqaviy moddalar sifatida foydalanish bo'yicha ushbu bioaktiv molekulalarga bo'lgan qiziqishni kuchaytirdi.

Iltimos, ko'proq bilish uchun shu yerni bosing

Ispaniya uzum va vinochilik madaniyatida ajoyib an'anaga ega. Vitis viniferaning Airen navi (215546 gektar maydonni egallagan) asosiy oq o'simlik hisoblanadi va mamlakat umumiy uzumzorlari maydonining 23 foizini va oq navlarning 50 foizini tashkil qiladi [8]. Verdejo, Gewurztraminer va Sauvignon Blanc kabi Ispaniyada etishtirilgan boshqa oq uzumlar yetishtirilgan uzum yuzasining atigi 2 foizini tashkil qiladi. Kastilya-La-Mancha Ispaniyaning Airen navining uzumzorlari eng baland hududi bo'lib, u asosan vino ishlab chiqarish uchun ishlatiladi. Shu bilan birga, yetishtirilgan Airen uzumining taxminan 20 foizi sharob ishlab chiqarishda chaptalizatsiya jarayoni uchun zarur bo'lgan konsentrlangan uzum sharbatini ishlab chiqarishda, shuningdek, oziq-ovqat sanoatida bolalar ovqatlari va ichimliklar, shu jumladan sport ichimliklar ishlab chiqarish uchun ishlatiladi. .

Uzum sharbatining ichimliklar va oziq-ovqatlarga qo‘shilishi uning tarkibidagi polifenol va salomatlikni mustahkamlash va kasalliklar rivojlanishining oldini olish uchun foydali xususiyatlari tufayli qadrlanadi [9-11]. Uzum sharbatida mavjud bo'lgan fenolik birikmalarning miqdori va turi uzum naviga, iqlimga, uzumchilik sharoitiga va sharbat olish jarayoniga bog'liq. Bugungi kunga qadar bu birikmalar to'liq o'rganilmagan. Polifenollarning aksariyati uzum rezavorlarining urug'lari va po'stlog'ida joylashgan bo'lsa, pulpada bu birikmalar kamroq bo'ladi [3,12,13].cistanche salsa ekstraktiTeri va urug'lar achchiq va biriktiruvchi ta'mlar uchun mas'ul bo'lgan murakkab polifenollarga ega, bu xususiyatlar oziq-ovqat mahsulotlarida unchalik qadrlanmaydi. Muayyan uzum turlarining pulpasidan olingan uzum sharbati bioaktiv molekulalarga ega bo'lgan tabiiy mahsulotdir; bu sharbat alkogolsiz ichimliklar, masalan, sharbatlar, chaqaloqlar uchun ichimliklar, restorativ ichimliklar va energiya kokteyllari sifatida foydalanish uchun yuqori talabga ega [14,15].

O'tgan tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, polifenolga boy oziq-ovqatlarni iste'mol qilish ularning antioksidant xususiyatlari tufayli oksidlovchi stress bilan bog'liq kasalliklar xavfini kamaytiradi, neyrodegenerativ, yurak-qon tomir, yurak-qon tomir kasalliklari rivojlanishida muhim molekulalar bo'lgan hujayra ichidagi reaktiv kislorod turlarining (ROS) to'planishini kamaytiradi. va saraton kasalliklari [16,17]Uzum polifenollaridan foydalangan holda in vivo tadqiqotlar va klinik sinovlar saraton [18-20] va yurak-qon tomir kasalliklarini davolashda foydali ta'sirini ko'rsatdi [21,22]Bundan tashqari, o'ziga xos resveratrol kabi polifenollar ularning saraton va yurak-qon tomir kasalliklarining ayrim turlarining rivojlanishi bilan bog'liq ko'plab metabolik yo'llarga xalaqit berishini ko'rsatdi [23,24]. Uzumda mavjud bo'lgan boshqa polifenollar, masalan, quercetin va uning hosilalari yallig'lanish va og'riqni davolashda ishtirok etgan [25] va ayrim saraton turlarini davolashda ishlatilganda qiziqarli antikarsinogen va proapoptotik xususiyatlarni ko'rsatdi [19,26, 27].

Cistanche qarishga qarshi bo'lishi mumkin

So'nggi yillarda ko'plab tadqiqotlar vinolardagi polifenol tarkibini tavsifladi. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatdiki, qizil vinolardagi bu birikmalarning miqdori uzum navlari va ularni ishlab chiqarishdagi texnologik jarayonlar tufayli oq vinolarga qaraganda sezilarli darajada yuqori.cistanche umrini uzaytirishBiroq, yaqinda o'tkazilgan epidemiologik va in vitro tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, oq sharob qizil sharob bilan solishtirganda sog'liq uchun o'xshash foyda keltirishi mumkin [30-34]. Bundan tashqari, oq uzum navlarida mavjud bo'lgan polifenollarning antioksidant qobiliyati ahamiyatsiz emasligi ko'rsatildi, bu esa uzum sharbatini o'z ichiga olgan bunday navlardan olingan har qanday mahsulotga qo'shimcha qiymat beradi [35]. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, uzum sharbati va sharobda mavjud bo'lgan bioaktiv molekulalar ratsionga kiritilganda sog'liq uchun foydalar uchun javobgardir.cistanche nzShunga qaramay, vinolarda mavjud bo'lgan alkogol bolalar, keksa odamlar va turli xil patologiyalari bo'lgan odamlar uchun tavsiya etilmaydi [36] Bundan tashqari, uzum sharbatini iste'mol qilish vinoga o'xshash antioksidant ta'sirga ega ekanligi ma'lum bo'ldi, garchi u tarkibida polifenollar ko'p bo'lsa ham. sharob [37]. Uzum sharbatini iste'mol qilishning inson salomatligiga ijobiy ta'sirini ko'rsatadigan bir qator tadqiqotlar mavjud, jumladan tana massasi indeksining pasayishi, glikemiya, plazma lipidlarining peroksidlanishi, qon bosimi va umumiy xolesterin, shuningdek, qon zardobidagi antioksidant quvvati va plazmatik HDL darajasi. -c va apolipoprotein B [37-4]. Ushbu natijalar uzum sharbatining polifenol tarkibini va kundalik ratsionga kiritilganda sog'likka foydali ta'sirini yaxshiroq tushunishga qiziqishni kuchaytirmoqda [12,14,45].

Oq uzumdagi fenolik birikmalarning aksariyati flavonoid bo'lmagan guruhga tegishli bo'lib, ular asosan fenolik kislotalar (gallik, protokatechuik, shprits, vanil va ellagik kislotalar) va flavonoidlar, shu jumladan flavanollar (katexin, epikatexin, prosiyanidinlar va yuqori oligomerlar) dan iborat. flavonollar (quercetin va boshqa besh aglikon, asosan glikozidlar sifatida). Ushbu fenolik moddalarning barchasi kardioprotektiv, neyroprotektiv, saratonga qarshi, antioksidant, yallig'lanishga qarshi va mikroblarga qarshi xususiyatlarga ega ekanligi xabar qilingan [3,4,46], bu esa ushbu tadqiqotning Airen uzum sharbatining polifenol tarkibini aniqlash maqsadini qo'llab-quvvatlaydi. oziq-ovqat sanoatida yuqori talab. Ushbu ishning asosiy maqsadi Ispaniyaning Kastilya-La Mancha mintaqasida ishlab chiqarilgan tabiiy va konsentrlangan Airen uzum sharbatlari tarkibidagi polifenol tarkibini tavsiflash edi. Shu maqsadda to'rtta oq uzum navlari (Airen, Sauvignon Blanc, Verdejo va Gewurztraminer) va qizil Tempranillo navidan uzum sharbati namunalari tahlil qilindi.

2. Materiallar va usullar

2.1.Kimyoviy moddalar va reaktivlar

Polifenol ekstraktsiyasi va suyuq xromatografik-massa spektrometriyasi (LC-MS/MS) tahlili uchun ishlatiladigan erituvchilar, metanol, atsetonitril va chumoli kislotasi Merck (Darmshtadt, Germaniya) dan sotib olingan.2,2-difenil-lpikrilgidrazil Antioksidant quvvatini to'xtatish-- uchun ishlatiladigan (DPPH) Thermo Fisherdan (Kandel, Germaniya) sotib olingan. Standart sifatida ishlatiladigan polifenollar, aminobenzoy kislotasi, atsetilsalitsil kislotasi, kofein kislotasi, xlorogen kislotasi, ellagik kislota, gallik kislota, p-kumar kislotasi, protokatechuik kislota, salitsil kislotasi, transferul kislotasi, vanil kislotasi, apigenin, epikatexin, aesculetin. gidrat, izorhamnetin, kaempferol, luteolin, polidatin, quercetin, resveratrol, rutin, siringaldegid va viniferin, Sigma-Aldrichdan (Madrid, Ispaniya) sotib olindi. Barcha eritmalarda ishlatiladigan Mili-Q suvi Merck Millipore Milli-QTM Reference Ultrasof suvni tozalash tizimi Z00QSVC01 (Darmshtadt, Germaniya) bilan tozalandi.

2.2.Uzum sharbati namunalari va polifenol ekstraktsiyasi

Vitis oinifera (Airen, Sauvignon Blanc, Gewürztraminer va Verdejo) va qizil Tempranillo navining to'rt xil oq uzumidan olingan yangi sharbatlar tahlil qilindi. Barcha uzumzorlar Ispaniyaning Kastilya-La-Mancha shahrida joylashgan bo‘lib, sharbat namunalari 2017 va 2018-yillarda hosil yig‘im-terim davrida Vinicola de Tomelloso (Tomelloso, Ispaniya) vino zavodi tomonidan yetkazib berilgan. Sifat nazorati vino zavodining oenologi tomonidan amalga oshirilgandan so'ng, namunalar yig'ilib, laboratoriyada ishlov berilgunga qadar -20 darajada muzlatilgan.

Konsentrlangan uzum sharbati namunalari Ispaniyaning Tomelloso shahrida joylashgan Mostos Es-panioles SA kompaniyasidan olingan. Konsentratsiya jarayoni uzum sharbatini suvni bug'lash uchun 95 daraja qizdirishdan iborat bo'lib, shakar konsentratsiyasini 19 dan 65 Brix darajaga (100 ml sharbat uchun gramm shakar) oshirishdan iborat edi. Rangi oʻzgargan konsentrlangan uzum sharbatini olish uchun kontsentratsiyadan oldin teshik diametri 0.45-mikrometr (Permeare, Padova, Italiya) boʻlgan nitroselüloza quvurli membranasi orqali filtrlash bosqichi oʻtkazildi. Bu jarayon rang uchun mas'ul bo'lgan birikmalarni, minerallardan tashqari, temir, magniy, kaltsiy yoki kaliy kabi ionlarni va, ehtimol, sharbatda mavjud bo'lgan boshqa bioaktiv molekulalarni olib tashlashga imkon berdi [9,15]. Sanoat namunalari konsentratsiya jarayonining uch bosqichida ham normal, ham rangsizlangan konsentrlangan sharbatda (NCJ va DCJ mos ravishda) yig'ildi: boshlang'ich 19 Bx (NCJI9/DCJ19), oraliq 30 Bx (NCJao/DCJao) va yakuniy mahsulot 65 da Bx darajasi (NCJ65/DCJ65). Konsentrlangan sharbat yangi uzum sharbatidan 3,5 baravar ko'p shakarni o'z ichiga oladi.

Polifenollarni ekstraksiya qilish, avvalroq uzum shoxlari, po‘stlog‘i va urug‘laridan ushbu birikmalarni ajratib olish uchun tavsiflanganlarga asoslanib, quyida tavsiflangan protsedura bo‘yicha amalga oshirildi [10,11,47]. Usul tijoratda mavjud bo'lgan standart polifenollar bilan optimallashtirilgan. Bu birikmalar turli xil erituvchilar bilan ekstraksiya qilingan: metanol, etanol va aseton, ularning barchasi 100 foiz va 50 foiz Mili-Q suv bilan suyultirilgan. Shundan so'ng, polifenollar 280 nm da spektrofotometrik o'lchov bilan aniqlandi, bu sof metanol bilan ekstraktsiya muhim molekulyar yo'qotishlarga olib kelmasligini ko'rsatdi.

{0}}.2 ml yangi va konsentrlangan uzum sharbati namunalari liyofilizatsiya qilindi va qattiq quruq matritsa ekstraksiya uchun substrat sifatida ishlatilgan. Polifenol ekstraktsiyasi qattiq matritsaga 1,0 ml metanol qo'shilishi bilan amalga oshirildi (nisbati 15 v / va ekstraktsiya 2 soat davomida 4 darajada yumshoq aylantirilgan aralashtirish bilan amalga oshirildi.cistanche jinsiy olatni o'lchamiKeyin namunalar 13,000 aylanish/daqiqada va 4 darajada santrifüj qilindi va supernatant qayta tiklandi va Merck (Darmshtadt, Germaniya) tomonidan sotib olingan 0,45 umM politetrafloroetilen membran filtri (gidrofil PTFE) yordamida filtrlandi. . Olingan polifenol ekstraktlari LC-MS/MS tahliligacha -80 darajada muzlatilgan. Ushbu tadqiqotda har bir uzum sharbati namunasining o'n ikki xil ekstrakti tahlil qilindi.

2.3. Umumiy polifenollarni baholash

Ekstraktlar va uzum sharbati namunalaridagi umumiy polifenollar miqdori ma'lum konsentratsiyalarda (2 dan 20 mg/L gacha) gallik kislotadan foydalangan holda 280 nm spektrofotometriya orqali aniqlandi. Gallik kislotasi bilan kalibrlash egri chizig'i (y=0.0179x-0.0376;R2=0.9998) mg/l gallik kislota ekvivalentlarida (GAE) polifenol miqdorini aniqlash uchun ishlatilgan.

2.4.DPPH Radikallarni tozalash tahlili

Uzum sharbati namunalari va polifenol ekstraktlarining erkin radikallarni tozalash faolligi Brand-Williams [48] tomonidan ba'zi o'zgartirishlar bilan [49] tasvirlangan protsedura bo'yicha aniqlandi. Substrat sifatida oksidlovchi birikma DPPH ishlatilgan va IC50 qiymatlari DPPH radikalini 50 foizga olib tashlaydigan polifenol (yoki ekstrakt) kontsentratsiyasini (mg/L) ifodalash orqali hisoblangan. Tahlillar 96-quduq plastinkalarida (Nunc Delta Surface) metanolda erigan 200 mkl DPPH 60 mkM, uzum sharbati yoki polifenol ekstrakti (0-20 mkl) o‘zgaruvchan miqdorda o‘tkazildi. Aralashmalar qorong'ida xona haroratida 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi va reaktsiya TECAN Sunrise spektrofotometrida (Syurix, Shveytsariya) 562 nm da absorbans o'lchovlari bilan davom etdi. Gallik kislota nazorat sifatida tahlilga kiritilgan. Eng past ICso qiymatlari namunaning eng yuqori antioksidant qobiliyatini ko'rsatadi.

2.5.LC-MS/MS tahlili

Polifenol ekstraktlari Turbo V elektrospray ionlash manbai bilan jihozlangan QTrap 45{{10}}0 massa spektrometriya tizimida (Sciex, Darmshtadt, Germaniya) tahlil qilindi. Ma'lumotlar Analyst dasturi 1.6 (Sciex, Darmshtadt, Germaniya) yordamida olingan. Mass-spektrometriya operatsiyasi Agilent 1260 seriyali Infinity LC tizimi (Agilent, Las Rozas, Madrid, Ispaniya) to'rtlamchi nasosi, avtonamuna oluvchi va ustunli pech bilan birlashtirildi. Xromatografiya KromasilC18 ustuni (250 × 50 mm, id4,6 um) bilan 30 gradusda chumoli kislotasi 0,1 foiz (A) va asetonitril (B) dan tashkil topgan mobil faza yordamida amalga oshirildi. 400 mkL oqim tezligida gradient elyusiyasi. /min qo'llanildi∶0-5 min,0 foiz B;5-8 min,0-20 foiz B;8-11 min,20-27 foiz B;{{19} }min,27-35 foiz B;13-20min,35-45 foiz B;20-23min,45-55 foiz B;23-28min, {{ 26}} foiz B;28-32min,63-70 foiz B;32-37min,70-80 foiz B,37-40min,80 foiz B;va qaytib keldi boshlang'ich sharoitlar 5 daqiqada. Namunalarning in'ektsiya hajmi 5 mkL edi.

Elektrospray ionizatsiyasi 4500 V manfiy va 5500 V musbat rejimda amalga oshirildi. Harorat, parda gazi, ion manba gazi 1 va gaz 2 uchun o'rnatilgan parametrlar: 20 L/min oqimda 500 daraja, 20 psi, 20 psi . Ma'lumotlar MRM (ko'p reaktsiya monitoringi) rejimi yordamida olingan. MRM massa spektrometriyasi parametrlari DP (declustering potentsiali), CXP (to'qnashuv hujayradan chiqish potentsiali), CE (to'qnashuv energiyasi), EP (kirish potentsiali) Qo'shimcha materiallarning Sl jadvalida jamlangan. Xromatogrammalar MultiQuant dasturi 1.0.3. (Sciex, Darmshtadt, Germaniya) bilan birlashtirilgan.

Kalibrlash egri chiziqlari avval tavsiflanganidek (2.1. Kimyoviy moddalar va reagentlar) tijorat standartlari bo'yicha 1 ug/L-10mg/L oralig'ida, ichki standart ishchi eritma sifatida 5 mkl asetilsalitsil kislotasi qo'shilgan holda amalga oshirildi. （50 ug/L）. Ikki xil kunlarda kalibrlash egri namunalarining ikkita to'plami tayyorlangan. Individual signallar namunaning o'zgaruvchanligini va ichki standart uchun normallashtirilgan tepalik joylarini hisobga olish uchun umumiy og'irlik asosida normallashtirildi.

Barcha namunalar kun davomida uchta replikada tahlil qilindi va tahlil bir 6- oy davomida (bir kun ichida) uch marta takrorlandi. Chiziqlilikni aniqlash uchun aniqlash chegarasi (LOD) va miqdor chegarasi (LOQ) qo'llanildi. , va barcha ma'lumotlar qo'shimcha materiallarning S2-jadvalida jamlangan.

2.6.Statistik tahlil

Aniqlangan polifenollarni aniqlash uchun kontsentratsiyalarning statistik tahlili SPSS [50] va R [51] yordamida amalga oshirildi. Ta'riflovchi statistik ma'lumotlarga quyidagilar kiradi: o'rtacha, median, rejim va standart og'ish. Shapiro-Uilk va Bartlett testlari mos ravishda ma'lumotlarning normalligi va homosedastikligini tekshirish uchun o'tkazildi. Keyinchalik, turli xil uzum sharbatlaridagi polifenollar miqdorini solishtirish uchun ANOVA va post hoc Tukey (Welch tuzatish bilan) testlari qo'llanildi. LC-MS / MS o'lchovlarining yuqori aniqligi tufayli olingan standart og'ishlar shunchalik kichik ediki, statistik ahamiyatlilikni baholash uchun 0,01 kritik qiymatdan foydalanildi.

P-qiymati natijalari sharbat namunalaridagi polifenollar kontsentratsiyasi farqlarining funktsional ahamiyatini aniqlash uchun odatda metabolomikada [52] qo'llaniladigan o'zgarishlarning katlami bilan birlashtirildi. O'zgarish qiymati har xil uzum sharbatlarida aniqlangan har bir polifenol kontsentratsiyasi va Airen uzum sharbatidagi konsentratsiya o'rtasidagi nisbatdir, ikkinchisi mos yozuvlar sifatida ishlatilgan. Statistik testlar uchun funktsional ahamiyatga egalik darajalari p-qiymatlari < 0.01,="" 1-jadvalda="" ko'rsatilgan="" o'zgarish="" qiymatlari="" katlamidan="" tashqari="" aniqlandi.="" 3="" va="" 4-darajalar="" kontsentratsiya="" nuqtalaridan="" tegishli="" o'zgarishlarga="" ega="" bo'lganlar="" sifatida="" aniqlandi.="" oziq-ovqat="" va="" ozuqaviy="" funktsiyalarning="" ko'rinishi,="" 1="" va="" 2="" darajalari="" esa="" shunchalik="" kichik="" nisbiy="" o'zgarishlarni="" anglatadiki,="" ularni="" tegishli="" deb="" hisoblash="" mumkin="">

3. Natijalar

3.1. Ekstraktlarning umumiy fenolik tarkibi va tozalash faolligi

Spektrofotometrik tahlil yordamida polifenollarning umumiy miqdorini baholash shuni ko'rsatdiki, aralashmalarning eng yuqori konsentratsiyasi Tempranillo uzum sharbati va uning ekstraktlarida bo'lgan (2-jadval). Oq navlarni solishtirganda, Gewürztraminer uzum sharbati eng yuqori polifenol tarkibiga ega, keyin Sauvignon Blanc, Airen va Verdejo uzum sharbatlari. Airen uzum sharbatidagi umumiy polifenollarning taxminiy kontsentratsiyasi Sauvignon Blanc bilan o'xshash edi, bu Verdejoda taxmin qilingan konsentratsiyadan 35 foizga yuqori va Gewürztraminer uzum sharbatida aniqlangan miqdordan 33 foizga past.

Ekstraktlarda aniqlangan polifenollarning taxminiy miqdori yangi uzum sharbatiga qaraganda pastroq bo'lib, bu ekstraktsiya jarayonida polifenollarning yo'qolganligini ko'rsatadi (2-jadval). Polifenollarning yo'qolishi uzum naviga qarab o'zgarib turardi, Verdejoda 7,5 foiz, Airenda 15 foiz, Gewürztraminerda 19,4 foiz, Sauvignon blanda 24,7 foiz va Tempranilloda 33,2 foiz deb baholangan. Bu farqlar uzum sharbatlarining turli xil polifenol tarkibiga bog'liq bo'lishi mumkin. Aslida, qizil Tempranillo uzum sharbati proantosiyanidinlar va taninlarga boy ekanligi ma'lum bo'lib, ikkalasi ham metanolda yomon eriydigan murakkab polifenollardir. Oq uzum sharbatlarida Sauvignon Blanc-da aniqlangan yuqori yo'qotish foizi (24,7 foiz) hayratlanarli edi.

O'rganilgan uzum sharbati va ekstraktlarining antioksidant qobiliyati "Materiallar va usullar" bo'limida tavsiflangan DPPH usuli yordamida baholandi. Eng yuqori DPPH tozalash faolligi (pastki ICso qiymati) Tempranillo uzum sharbatida, undan keyin Gewürztraminer, Sauvignon Blanc, Airen va Verdejo (2-jadval) da aniqlandi. Polifenol ekstraktlari uchun aniqlangan tozalash faolligi oq uzum ekstraktida pastroq (o'rtacha 15 foizga pasayish) va Tempranillo ekstraktida o'rtacha 27 foizga past bo'lgan - bu umumiy polifenollar kontsentratsiyasining pasayishiga mos keladigan natija ( 2-jadval).

3.2. LC-MS/MS tahlili orqali polifenollarni aniqlash va miqdorini aniqlash

Uzum sharbati ekstraktidagi polifenollarning tavsifi LC-MS/MS tahlili orqali amalga oshirildi.cistanche kukuniLC orqali birikmalarni ajratish Materiallar va usullar bo'limida tasvirlangan elutsiya shartlariga rioya qilgan holda amalga oshirildi. MS tomonidan miqdorni aniqlash uchun avval chop etilgan [53-67] ma'lumotlaridan foydalangan holda, ularni aniqlash uchun zarur bo'lgan MS parametrlariga ega bo'lgan 56 ta uzum polifenollarining ma'lumotlar bazasi yaratilgan (Qo'shimcha materiallar, S3-jadval). Ushbu polifenollardan 23 tasi tadqiqot uchun tanlangan va 15 tasi ekstraktlarda aniqlangan (Qo'shimcha materiallar, S2-jadval). Ushbu polifenollar quyidagi oilalarga mansub: gidroksisinnamik kislotalar (kofein, xlorogen va kumarik), gidroksibenzoy kislotalar (digidroksibenzoy, gallik, protokatechuik, salitsil va vanil), stilbenlar (resveratrol va polidatin), flavonoidlar (kertsetin, epitexin, epitexin, epitekin). ), va fenilpropanoidlar (eskuletin). Miqdorni aniqlash hech qanday kimyoviy modifikatsiyasiz yoki izomerizatsiyasiz polifenollar bilan amalga oshirildi.

3.2.1.Uzum sharbati ekstraktidagi polifenollar

Har bir uzum sharbatining uchta biologik namunasi uch nusxada tahlil qilindi va LC-MS / MS tomonidan olingan o'rtacha konsentratsiya qiymatlari har xil uzum sharbati ekstraktidagi har bir polifenol uchun solishtirildi. Malumot sifatida Airen navining ekstrakti ishlatilgan. Uzum sharbatlari orasidagi kuzatilgan farqlar statistik jihatdan ahamiyatli yoki yo'qligini aniqlash uchun biz ANOVA va post hoc Tukey testlarini o'tkazdik. Ko'pgina hollarda, testlar statistik jihatdan sezilarli farqlarga olib keldi, garchi farqlarning kattaligi doimiy ravishda kichik bo'lsa ham. Buni o'lchovlar uchun ishlatiladigan LC-MS/MS texnologiyasining yuqori aniqligi va takrorlanuvchanligi tufayli kichik standart og'ishlar bilan izohlash mumkin (3-jadval). Airen ekstrakti bo'yicha o'rganilgan har bir polifenol uchun o'zgarish qiymati hisoblab chiqilgan va funktsional ahamiyati 1-jadvalga muvofiq aniqlangan.

Reproduktivlik va o'zgaruvchanlik kunlik tajribalar va 6 oy davomida (bir kun ichida) yana uch marta o'tkazilgan tajribalar bilan tasdiqlangan. Tasdiqlash parametrlarini yakunlab, analitik usulning LOD va LOQ chegaralari aniqlandi, ular LC-MS/MSga xos emas, balki to'liq analitik usul uchun.

Uchta gidroksisinnamik kislotalar o'rganildi. Tahlil qilingan barcha beshta uzum sharbati ekstraktida xlorogen kislota aniqlangan. Tempranillo eng yuqori konsentratsiyaga ega nav, Sauvignon Blan esa eng kam miqdorga ega bo'lib, ikkalasi ham funktsional ahamiyatga ega bo'lgan 1 darajasiga ega (3-jadval). Tahlil qilingan ikkita boshqa kislotalar Sauvignon Blancdan tashqari barcha navlarda aniqlangan kofe kislotasi va faqat Airen va Verdejo ekstraktlarida aniqlangan kumarik kislota edi. Ushbu birikmalarning ekstraktlardagi kontsentratsiyasi juda o'xshash edi va hech qanday funktsional ahamiyatga ega bo'lmagan.

Beshta gidroksibenzoy kislotasi o'rganildi. Gidroksibenzoy, protokatexik, salitsil va vanil kislotalarning aniqlangan kontsentratsiyasi barcha ekstraktlarda deyarli bir xil bo'lib, funksional ahamiyatga ega bo'lgan darajasi 1 ga teng edi. O'rganilgan uzum sharbatlari orasida gallik kislota konsentratsiyasining statistik ahamiyati yo'q (3-jadval).

Ko'rib chiqilgan stilbenlarga kelsak, resveratrol va polidatinning kontsentratsiyasi barcha uzum navlarida juda o'xshash edi, ammo Sauvignon Blanc ekstraktida resveratrol kutilmaganda yo'q edi. Hech qanday holatda ekstraktlarda kuzatilgan konsentratsiyadagi farqlar funktsional ahamiyatga ega emas edi (1-daraja).

Eng kuchli farqlar flavonoidlar oilasida aniqlangan. Shuni ta'kidlash kerakki, izorhamnetin Sauvignon Blanc ekstraktida aniqlanmagan, ammo boshqa to'rtta uzum sharbatida kontsentratsiyalar taqqoslangan (3-jadval, 1-rasm). Epikatexinga kelsak, eng yuqori kontsentratsiya Gewurztraminerda, undan keyin Airenda, Sauvignon Blanc esa eng kam miqdorda uzum sharbatida aniqlangan (3-jadval). Funktsional moslik qiymati Tempranillodan tashqari barcha navlar uchun 2 ni tashkil etdi. Quercetin holatida eng yuqori konsentratsiya Airen va Gewürztraminer ekstraktlarida topilgan, Verdejo (funktsional ahamiyatga egalik darajasi 2) va Sauvignon Blanc va Tempranillo (funktsional ahamiyat darajasi 3) uchun past konsentratsiyalar (3-jadval, 1-rasm). Shunga qaramay, tahlil qilingan turli ekstraktlar orasida kontsentratsiyadagi eng katta farq katexin uchun aniqlandi. Katexinning eng yuqori kontsentratsiyasi Airen ekstraktida topilgan, undan keyin Gewürztraminer, Tempranillo, Verdejo va Sauvignon Blanc. Haqiqatan ham, konsentratsiyalardagi farqlar funktsional ahamiyatga ega bo'lgan Sauvignon Blancdan tashqari barcha navlar uchun 3 ga teng funktsional ahamiyatga ega ekanligini ko'rsatdi (3-jadval, 1-rasm). Esculetin fenilpropanoidlar oilasidan aniqlangan yagona polifenol edi. Ushbu birikma barcha namunalarda eng past konsentratsiyani va funktsional ahamiyatga ega bo'lgan qiymatni (1-daraja) ko'rsatdi, bu tegishli farqlarni ko'rsatmaydi (3-jadval).

Together, these results indicated that the global profiles of the 15 polyphenols analyzed in the Airen, Gewurztraminer, Sauvignon Blanc, Verdejo, and Tempranillo grape juice extracts were very similar. However, the statistical analyses indicated that the majority (>Namunalarda aniqlangan konsentratsiyadagi farqlarning 90 foizi statistik jihatdan ahamiyatli edi; natijada, avvalroq tushuntirilganidek, qo'llanilgan texnikaning aniqligi va takrorlanuvchanligi (LC-MS/MS) bilan bog'liq bo'lishi mumkin. mezon bo'lsa, statistik jihatdan ahamiyatli farqlarning atigi 17 foizi funktsional ahamiyatga ega deb hisoblanadi. Ushbu natija 2-rasmda ko'rsatilgan uzum sharbati ekstraktining global polifenol profilini sifatli tahlil qilish bilan mos keladi, bu Airen va Gewurztraminer uzum sharbatlarida faqat ikkita polifenol, quercetin va katexin boshqalardan ustun turishini aniq ko'rsatadi. Ushbu ikki uzum sharbatidagi quercetin miqdori juda o'xshash va qolgan uzum sharbatlarida aniqlangan miqdordan yuqori (o'sish 25 foizdan 65 foizgacha). namunalar, Gewurztraminerda aniqlangan miqdordan 30 foizga yuqori darajalarni va boshqa ekstraktlarda aniqlangan miqdordan 43 foizdan 68 foizgacha yuqori darajalarni ifodalaydi.

Ushbu maqola Foods 2021, 10, 1532 dan olingan. https://doi.org/10.3390/foods10071532 https://www.mdpi.com/journal/foods