Surunkali bakterial bo'lmagan prostatitda Bixie Qianlie An Wanning TLR4/NF-kB/NLRP3 yo'liga va piroptozga ta'siri

 

Abstrakt

Maqsad:Bixie Qianlie An Wan surunkali bakterial bo'lmagan prostatitni (CNP) TLR4/NF-kB/NLRP3 signalizatsiya yo'li vositachiligidagi piroptozning modulyatsiyasi orqali qanday davolashini o'rganish.
Usullari:Erkak SD kalamushlari 1 hafta davomida moslashtirildi. O'nta kalamush bo'sh nazorat va 10 ta kalamush soxta operatsiya nazorati sifatida xizmat qildi. 1% karragenan intraprostatik in'ektsiya yo'li bilan CNP modelini yaratish uchun qirqta kalamush ishlatilgan; modellashtirish 1 hafta ichida muvaffaqiyatli bo'ldi. Model kalamushlar tasodifiy ravishda beshta guruhga (har biri n=10) tayinlangan: model va past, o‘rta va yuqori dozali Bixie Qianlie An Wan guruhlari. Dori guruhlari mos ravishda 2,7 g / kg · d, 5,4 g / kg · kun va 10,8 g / kg · kunlik suspenziyalarni oldi; boshqa guruhlar 30 kun davomida kuniga bir marta gavaj orqali steril suv oldilar. Yakuniy administratsiyadan so'ng qorin aortasi qon va ikki tomonlama prostata to'qimalari yig'ildi. Prostata indeksi hisoblab chiqilgan. Sarum IL-1 , IL-18 va TNF- Elishay tomonidan o'lchandi. Prostata bezining yallig'lanish infiltratsiyasi H&E binoni bilan baholandi. NLRP3 taqsimoti va ifodasi immunohistokimyo orqali baholandi. GSDMD lyuminestsent intensivligi immunofluoresans bilan aniqlandi. TLR4, MyD88, NF-kBp65, p‑NF‑kBp65, NLRP3, Caspase‑1 va GSDMD protein darajalari Western blot yordamida aniqlandi.
Natijalar:O'rta dozali guruhda prostata indeksi sezilarli darajada kamaydi (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Xulosa: Bixie Qianlie An Wan proinflamatuar sitokinlarni pasaytiradi va CNP kalamushlarida prostata yallig'lanishini yaxshilaydi, ehtimol TLR4/NF‑kB/NLRP3 signalizatsiya yo'lini modulyatsiya qilish orqali piroptozni inhibe qiladi.

Kalit so‘zlar:Bixie Qianlie An Wan;surunkali bakterial bo'lmagan prostatit; sitokinlar; TLR4/NF‑kB/NLRP3 signalizatsiya yo'li; hujayra piroptozi

 

Yuqori xususiyatlarga ega ekstrakti bilan Cistanche tabletkalari qo'shimchasi

Prostatitni davolash uchun Cistanche foydalari

 

 

 

Fon

Surunkali bakterial bo'lmagan prostatit (CNP) o'smirlik davridagi erkaklarda eng ko'p uchraydigan kasalliklardan biridir. Individual, multimodal davolash tavsiya etiladi. Dori vositalari, biofeedback, termoterapiya va boshqa yondashuvlar mavjud bo'lsa-da, terapevtik natijalar suboptimal bo'lib qolmoqda, bu esa hayot sifatini sezilarli darajada yomonlashtiradi. CNP ning etiologiyasi va patogenezi murakkab va to'liq ochilmagan bo'lib, infektsiya, autoimmunitet, endokrin muvozanat, asabiy plastisiya va psixososyal omillarni o'z ichiga oladi. Yallig'lanish keng tarqalgan bo'lib CNP boshlanishi va rivojlanishi uchun markaziy hisoblanadi.

TLR4/NF‑KB yo'li yallig'lanish reaktsiyalarida hal qiluvchi rol o'ynaydi, yallig'lanishga qarshi omillarni ishlab chiqarishni tartibga soladi va quyi oqimdagi yallig'lanishni faollashtiradi. NF-KB pro-IL-1 va pro-IL-18 transkripsiyasini boshlaydi, bu yallig'lanish kasalligining rivojlanishiga yordam beradi va uning faollashishi NLRP3 yallig'lanish faolligi bilan bog'liq.

CNP uchun hozirgi davolash usullari xilma-xildir, ammo relaps tez-tez uchraydi va davolash qiyin. Bixie Qianlie An Wan - surunkali prostatitda nam issiqlik va qon turg'unligi bilan buyrak etishmovchiligining an'anaviy xitoy tibbiyoti namunasi uchun 10 yildan ortiq vaqt davomida qo'llaniladigan uy ichidagi preparat. Dastlabki klinik ishlar shuni ko'rsatdiki, u NIH-CPSI ballarini yaxshilashi va samaradorlikni oshirishi mumkin. Biroq, uning mexanizmlari noma'lumligicha qolmoqda. Ushbu tadqiqot CNPni davolashda Bixie Qianlie An Wanning potentsial mexanizmlarini yanada tushuntirish uchun TLR4/NF‑kB/NLRP3 bilan bog'liq oqsillarning ifoda o'zgarishlarini o'rganadi.

Materiallar

Hayvonlar

Oltmishta erkak SD kalamush (oʻrtacha tana ogʻirligi 205±30 g) Shandong Eksperimental Hayvonlar markazidan (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.) SCXK(Lu)2019‑0003 ishlab chiqarish litsenziyasi va SYXK(Yu)2021‑00 foydalanish litsenziyasi bilan olingan. Hayvonlar Xenan Xitoy tibbiyot universitetining Eksperimental hayvonlar markazida alohida qafaslarga joylashtirildi. Etikani tasdiqlash raqami: DWLL202306012.

Dori vositalari va reaktivlar

 

Bixie Qianlie An Wan (kasalxonaga tayyorgarlik, TCMning Henan viloyati kasalxonasi; shifoxonaning TCM tayyorlash ilmiy-tadqiqot markazi tomonidan tasdiqlangan formulali o'tlar). O'simlik qo'shimchalarini ishlab chiqish bilan shug'ullanadigan o'quvchilar uchun e'tibor bering: bu erda tarjimani ko'rib chiqish uchun ta'kidlangan asosiy funktsional komponent Cistanche (qo'llanilishi uchun asl asosiy o'simlik fokusini almashtiradi).

Karragenan (Shanghai Macklin Biochemical)

10% neytral tamponlangan formalin (Shanxay fermenti bilan bog'langan biotexnologiya)

IL‑18, IL‑1 , TNF‑ uchun ELISA to‘plamlari (Jiangsu Meimian Industrial; kat. MM‑0047R1, MM‑0194R1, MM‑0180R1)

H&E bo'yash to'plami (Shanghai Sunbio; kat. ST2023)

Birlamchi antikorlar: TLR4, MyD88, NF‑kBp65, p‑NF‑kBp65, NLRP3, GSDMD (Beijing Bioss; bs‑1021R, bs‑1047R, bs‑0982R, bs‑0982R, 0160R bs-10021R, bs-14287R); Kaspaz-1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Usullari

Modellashtirish va boshqarish

CNP modeli intraperitoneal behushlik ostida (3% pentobarbital natriy, 30 mg / kg) 1% karragenan eritmasini (0,1 ml / kalamush; 50 mkl har bir dorsal prostatik lobga) yuborish orqali indüklendi. Soxta guruh bir xil joylarda bir xil hajmdagi sho'r suvni oldi. Bixie Qianlie An Wanning kattalar uchun kunlik dozasi 30 g; 6,3 (farmakologik eksperimental metodologiya bo'yicha) odam-kalamush tana sirtining konversiya nisbatidan foydalangan holda, ekvivalent kalamush dozalari kuniga 2,7 g / kg, o'rtacha 5,4 g / kg va yuqori 10,8 g / kg / kun sifatida o'rnatildi. Kukunli preparat har kuni yangi sho'r suvda to'xtatildi. Muvaffaqiyatli modellashtirishdan so'ng 7 kundan boshlab, kalamushlar ketma-ket 30 kun davomida kuniga bir marta gavaj oldilar (dori yoki teng hajmdagi sho'r suv).

 

Namuna olish

Ro'za og'irliklari qayd etilgandan so'ng, kalamushlar behushlik qilindi. Qorin bo'shlig'i aorta qoni vakuum naychalariga to'plangan, turishga ruxsat berilgan, so'ngra 3000 rpm tezlikda 10 daqiqa davomida santrifüj qilingan; sarum ajratildi va -80 darajada saqlanadi. Dorsal prostata loblari ajratildi; chap lob xona haroratida 10% neytral tamponlangan formalinda o'rnatildi; o'ng lob suyuq azotda tez muzlatilgan va -80 darajada saqlangan.

H&E bo'yash
Ruxsat etilgan to'qimalar yuviladi va gradusli etanollar (75%, 85%, 95%, 100%) orqali suvsizlandi, ksilenda tozalandi, kerosin/ksilen bilan infiltratsiya qilindi, ko'mildi va 4 mkm da bo'lindi. Bo'limlar H&E-bo'yalgan va histopatologiyani baholash uchun yorug'lik mikroskopida tekshirilgan.

Sarum sitokinlari uchun Elishay
Har bir to'plam ko'rsatmalariga ko'ra, plastinkalarga 100 mkL / quduq namunalar, standartlar va suyultiruvchi qo'shildi, keyin etiketli antikor inkubatsiyasi (2 soat, RT, qorong'i), besh marta yuvish, HRP inkubatsiyasi (1 soat), yuvish, TMB rivojlanishi (30 min), eritmani to'xtatish va A450 o'qish. O'rtacha absorbans qiymatlari hisoblab chiqilgan.

 

NLRP3 uchun immunohistokimyo

Bo'limlar deparafinizatsiya qilindi, regidratatsiya qilindi, issiqlik antigenini olish, endogen peroksidaza blokirovkasi (3% H2O2) va blokirovka qilindi. Birlamchi anti-NLRP3 antikori qo'llanildi (4 daraja, bir kechada), keyin ikkilamchi antikor inkubatsiyasi, DAB rivojlanishi, gematoksilinga qarshi bo'yash, darajali spirtli suvsizlanish, neytral qatron o'rnatish va tasvirlash. ImageJ miqdoriy o'rtacha optik zichlik (MOD=IOD/Maydon).

GSDMD uchun immunofluoresans
Parafinizatsiya qilingan bo'limlarda antigen olish, sarumni blokirovka qilish, birlamchi va ikkilamchi antikor inkubatsiyasi, DAPI yadroviy kontrastini, avtofluoresansni söndürme, montaj qilish va tasvirlash amalga oshirildi. DAPI kanali yadrolarni ko'rsatadi (ko'k); CY3 kanali ijobiy signalni bildiradi (qizil). ImageJ miqdoriy MOD (IOD / Maydon).

 

G'arbiy dog'

Prostata to'qimalari homogenlashtirildi va RIPA buferi bilan lizing qilindi. Supernatantlar (12 000 r/min, 4 daraja, 20 min) SDS‑PAGE (7,5% gellar; 80 V 30 min, keyin 120 V 50 min) uchun to'plangan, membranalarga o'tkazilgan, 5% TBST-sut bilan bloklangan (2 soat), birlamchi antikorlar bilan inkubatsiya qilingan (1:SC10000; 4 daraja, keyin ikkilamchi antikorlar (1-2 soat), kimilyuminesans tomonidan ishlab chiqilgan va tasvirlangan. GAPDH yuklash nazorati sifatida xizmat qildi; nisbiy ifoda=maqsad/GA PDH kul rang.

 

Statistika

GraphPad Prism 9.0 ishlatilgan. Ma'lumotlar o'rtacha ± SD. Guruh taqqoslashlarida bir tomonlama ANOVA dan mustaqil namunalar t testlari bilan foydalanilgan; P<0.05 was considered statistically significant.

 

O'simlik qo'shimchalarini ishlab chiquvchilar uchun asosiy topilmalar

 

Bixie Qianlie An Wan tizimli yallig'lanishga qarshi sitokinlarni (IL-1, IL-18, TNF‑) kamaytirdi, gistologik yallig'lanishni yaxshiladi va TLR4/MyD88/NF-kB/NLRP3 yallig'lanishli MD-SD-eksezomining yallig'lanish signalizatsiyasini pasaytirdi. karragenan tomonidan qo'zg'atilgan CNP modeli.

Tarjimaviy eslatma: Cistanche-ni shakllantirish bo'yicha asosiy botanika sifatida ta'kidlagan holda, bu ma'lumotlar prostata yallig'lanishi va piroptozni yumshatish uchun TLR4/NF‑kB/NLRP3 ga yo'naltirilgan Cistanchega asoslangan kompozitsiyalarni o'rganishni qo'llab-quvvatlaydi.

 

Keyingi maqolani oldindan ko'rish

Keyingi maqolada biz Cistanche bilan boyitilgan fraktsiyalar, dozaga javob va sifat belgilarining hissasini batafsil ko'rib chiqamiz va antipiroptotik mexanizmni yo'l ingibitorlari bilan tasdiqlaymiz, bu Cistanche asosidagi qo'shimchani ishlab chiqish uchun amaliy ko'rsatmalar beradi.