Echinacoside diabetik jigar shikastlanishini yaxshilaydi
Mar 28, 2022
Aloqa:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Luo Yang, Xiang Chjan, Min Liao, Yarong Xao *
ANTRACT
Maqsadlar:Echinacoside (ECH) Cistanche deserticola o'simligining poyasidan olingan tabiiy birikma bo'lib, muhim biologik xususiyatlarga ega, jumladan antioksidant, yallig'lanishga qarshi, neyroprotektiv, o'smaga qarshi, gepatoprotektiv va immunomodulyatsion xususiyatlarga ega. Ushbu tadqiqotda biz DB / DB sichqonlarida diabetik jigar shikastlanishiga ECH ning himoya ta'siri va mexanizmlarini o'rganishni maqsad qildik.
Asosiy usullar:Umuman olganda, 6-haftalik DB/DB sichqonlari (n=20) tasodifiy tarzda 2 guruhga ajratildi: diabetik model guruhi (DB/DB guruhi, me'daga oddiy sho'r suv yuborish, n=10 ) va ECH bilan ishlov berilgan guruh (DB/DB plus ECH guruhi, n=10). Bundan tashqari, oddiy nazorat guruhiga 6-haftalik db/m sichqoncha kiradi (db/m guruhi, me'da ichidagi normal tuzli eritma, n=10). ECH 10 hafta davomida kuniga bir marta o'tkazildi. Og'irlik va ochlikdagi qon glyukoza (FBG) ikki haftada bir marta o'lchanadi. Jigar to'qimalarining patologik o'zgarishlarini va lipidlar to'planishini baholash uchun HE bo'yash va Oil O bo'yashdan foydalanilgan. AMPK/SIRT1 signalizatsiya o'qi komponentlarining ifodasini aniqlash uchun immunofluoresans bo'yash, Western blot va RT-PCR tahlilidan foydalanilgan.
Asosiy topilmalar:Natijalar shuni ko'rsatdiki, echinacoside 1{1}} hafta davomida qo'llanilishi DB/DB sichqonlarida jigar shikastlanishi va insulin qarshiligini sezilarli darajada yaxshilashi mumkin (p < 0.01).="" shuningdek,="" echinacoside="" davolash="" qon="" lipidlari="" va="" qon="" glyukoza="" (p=""><0,01) kamaytirishga="" yordam="" berdi.="" bundan="" tashqari,="" ech="" faollashtirilgan="" ampk/sirt1="" signalizatsiyasi,="" yuqori="" tartibga="" solingan="" peroksizoma="" proliferatori="" bilan="" faollashtirilgan="" retseptorlari="" gamma-ko-aktivator="" 1="" alfa="" (pgc{9}}),="" proliferator="" bilan="" faollashtirilgan="" retseptorlari-="" (ppar),="" karnitin="" palmitoiltransferaza-1a="" (cpt1a)="" jb/db="" sichqonlarida="" (p=""><>
Ahamiyati:ECH ning ta'siri jigar AMPK/SIRT1 yo'lining faollashuvi va uning quyi oqim omillari bilan yog'lanish, insulin qarshiligi va dislipidemiyani yaxshilash uchun paydo bo'lishi mumkin.
cistanche reddityaxshilaydisemizlik, insulin qarshiligi va dislipidemiya.
1.Kirish
2-toifa qandli diabet (T2DM) surunkali metabolik kasallik bo'lib, insonning jismoniy va ruhiy salomatligiga jiddiy tahdid soladi. Bu ko'plab organlarga, shu jumladan jigar shikastlanishiga olib kelishi mumkin. Alkogolsiz yog'li jigar kasalligi (NAFLD) eng keng tarqalgan jigar shikastlanishidir [1,2]. Gepatotsitlarda lipidlarning ko'p to'planishi metabolik jarayonni buzadi va yallig'lanish, jigar fibrozi va hatto jigar saratonini keltirib chiqaradi [3,4]. Kasallikning patogenezi noma'lumligicha qolmoqda. T2DM bilan og'rigan bemorlarda klinik jihatdan ahamiyatli jigar asoratlari yuqori darajada tarqalgan bo'lsa-da, ular ko'pincha davolash sharoitida e'tibordan chetda qoladi. Qandli diabetni davolash uchun hozirda qo'llaniladigan vositalar orasida metformin, sulfoniluriya, tiazolidindion (TZD) va dipeptidil peptidaza-4 (DPP-4) inhibitörleri mavjud. Biroq, ushbu agentlarning aksariyati jigar disfunktsiyasini keltirib chiqaradi va jigar etishmovchiligi bo'lgan bemorlarga tavsiya etilmaydi, bu terapevtik samaradorlik va past nojo'ya ta'sir profiliga ega bo'lgan agentlarni tekshirish zarurligini anglatadi. Tadqiqotlar Cistanche deserticola ning asosiy komponenti bo'lgan echinacoside (ECH) ning antioksidant, yallig'lanishga qarshi, o'simtaga qarshi, gepatoprotektiv va immunomodulyatsion xususiyatlarini ko'rsatdi [5]. Bundan tashqari, AMP bilan faollashtirilgan protein kinaz (AMPK) yo'li jigarda lipidlarni tartibga solish bilan bog'liq bo'lgan asosiy hujayra energiya almashinuvi kaliti va NAFLD uchun terapevtik maqsad sifatida tan olingan. AMPK hujayralardagi NAD plyus darajasini oshirish orqali sutemizuvchilarning tinchlantiruvchi tartibga soluvchi protein-1(SIRT1) faolligini kuchaytiradi, natijada peroksisoma proliferatori bilan faollashtirilgan 1-retseptor-koaktivator (PGC{) ni o'z ichiga olgan quyi oqim SIRT1 maqsadlari faolligi deatsetilatsiya va modulyatsiyaga olib keladi. {20}} ) [6]. Alkogolli yog'li jigar kasalligi (YYQQ) va NAFLDda ko'plab ijobiy funktsiyalar tufayli SIRT1 SIRT oilasi orasida keng o'rganilgan. Protein lipid va glyukoza almashinuvining asosiy regulyatori bo'lib, jigar va boshqa to'qimalarning insulinga sezgirligini yaxshilaydi va jigar steatozini kamaytiradi [7]. PPAR- yadro gormonlari retseptorlarining pastki oilasi bo'lgan PPARlarga tegishli, PPAR- CPT1A vositasida mitoxondriyal va peroksidaza yog' kislotasi beta-oksidlanishi orqali lipid metabolizmini yaxshilaydi. Db/DB sichqonlari spontan semiz 2-toifa diabetik sichqonlardir. Ushbu sichqonlar o'sib ulg'aygan sari, bulimiya, semizlik, aniq giperglikemiya, giperlipidemiya va insulin qarshiligi kabi diabetik kasalliklarning bosqichma-bosqich namoyon bo'lishi mumkin [8]. Patogenez T2DM bilan og'rigan bemorlarda kuzatilganiga o'xshaydi. Ushbu tadqiqot ECH ning T2DM sabab bo'lgan jigar shikastlanishiga terapevtik ta'siri va AMPK / SIRT1 yo'lini va uning quyi oqim effektorlarini faollashtirish orqali ushbu ta'sir vositachiligini taxmin qildi. DB/DB sichqonlari T2DM jigar shikastlanishi modeli sifatida ishlatilgan va ECH intragastral tarzda qo'llanilgan.
2. Materiallar va usullar
2.1. Eksperimental hayvonlar
2-toifa diabetik DB/DB sichqonlarining jigari o'z-o'zidan T2DM jigar shikastlanishi uchun model sifatida ko'rib chiqildi, db / m sichqonchalar nazorat guruhi sifatida ishlatilgan va diabetik db / db sichqonlari model guruhi va ECH bilan davolash qilingan guruh (erkak) sifatida ishlatilgan. , 6 haftalik, SPF darajasi) har bir guruhda 10 ta sichqon. Barcha sichqonlar Nankin universitetidan sotib olingan (Nankin biotibbiyot instituti, Xitoy; Hayvonlar ishlab chiqarish sertifikati №: SCKK (Su) 2015–0001). Hayvonlar (har bir qafasda n=5) Vuxan universiteti (SPF) Renmin kasalxonasining markaziy laboratoriya hayvonlari xonasida standart harorat (22 ◦C ± 2 ◦C), nisbiy namlik (60 foiz) sharoitida joylashtirilgan. , va yorug'lik/qorong'i (12 soat/12 soat) sikl, 10 haftalik tajriba davrida ichimlik suvi va ozuqaga ad libitum kirish. Tajribalar Vuxan universitetining Renmin kasalxonasi tomonidan tavsiya etilgan eksperimental hayvonlar etikasi qoidalariga muvofiq amalga oshirildi.
2.2. Asosiy asboblar va reaktivlar
OneTouch Ultra qon glyukoza o'lchagichi va qon glyukoza test chiziqlari (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); quyon odamga qarshi monoklonal antikor SIRT-1 (#9475; Amerika Qo'shma Shtatlarining CST kompaniyasi); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934) va GAPDH (Ab37168; barchasi Abcam kompaniyasidan); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); BCA protein kontsentratsiyasini aniqlash to'plami (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); SDS-PAGE gel tayyorlash to'plami (Google Biotechnology Co., Ltd.); va RT-PCR teskari transkripsiya to'plami (Takara, Yaponiya) tajribalar uchun ishlatilgan.
2.3. Hayvonlarni guruhlash va boshqarish
Tajribani boshlashdan oldin, {0}}haftalik sichqonlar 1 hafta karantinda bo‘lib, 1 hafta davomida moslashgan holda oziqlantirildi. Db/DB sichqonlari tasodifiy raqamlangan va diabetik model guruhiga (db/db guruhi, n=10) yoki echinacoside bilan davolash qilingan guruhga (db/db plus ECH guruhi, n =10) va ajratilgan. Oddiy nazorat guruhiga 10 db/m sichqonlar ajratildi (DB/ m guruhi, n=10). 8 haftalik yoshda, normal nazorat va diabetik model guruhi sichqonlari intragastral ravishda normal sho'r suv (0,05 ml / 10 g) va ECH bilan davolash qilingan guruh sichqonlariga 300 mg / kg / kun ECH yuborildi. Bu davrda sichqonlarga 10 hafta davomida oziq-ovqat va suvdan ad libitum foydalanishga ruxsat berildi.
2.4. Umumiy holat va ochlikdagi glyukoza
Tajriba davomida salomatlik holati, oziq-ovqat va ichimlik suvi iste'moli, paltoning porloqligi kuzatildi. Tajribaning birinchi haftasidan boshlab sichqonlarning tana vazni har 2 haftada o'lchandi. Qon glyukozasini aniqlash uchun qon namunalari quyruq venasidan olingan. 10-haftalik ECH davolashdan so'ng og'iz orqali glyukoza bardoshlik testi (OGTT) o'tkazildi. Kechasi ro'za tutgandan so'ng, sichqonlarga glyukoza (2 g / kg tana vazni) berildi va qondagi glyukoza konsentratsiyasi (0 min.) oldin va 15, 30, 60 va 120 daqiqadan so'ng baholandi. glyukoza yuborish. Egri chiziq ostidagi maydon (AUC) GraphPad Prism 7.0 yordamida aniqlandi.
2.5. Namuna yig'ish
10 haftalik aralashuvdan so'ng, oziq-ovqat, lekin suv emas, balki 12 soat davomida to'xtatildi, hayvonlar retro-orbital pleksusdan qon namunalarini olish uchun anesteziya qilindi. Yig'ilgan qondan sarum tezda ajratildi va biokimyoviy indeksni aniqlash uchun -80 ◦C da saqlanadi. Qon namunalarini olgandan so'ng, sichqonlar o'ldirildi va oddiy sho'r suv bilan perfuziya qilindi. Jigar parchalanib, tortilgan. Jigar indeksi (LI) quyidagi formula yordamida hisoblangan: LI=[jigar vazni (g)/tana vazni (g)] × 100 foiz . Yangi jigar to'qimalarining bir qismi patologik tahlil uchun qoldirildi va jigar to'qimalarining qolgan qismi 1 soat davomida suyuq azotga joylashtirildi va keyin proteinni aniqlash va miqdoriy real vaqtda polimeraza zanjiri reaktsiyasi uchun - 80 ◦C da saqlanadi ( PCR).
cistanche tajribasiekstrakti
2.6. Jigarning gistopatologik tekshiruvi
Jigarning yangi to'qimalari tezda ajratildi va bir qism 24 soat davomida 4 foizli paraformaldegidda o'rnatildi, so'ngra suvsizlanib, kerosinga solingan. Bo'limlar ksilen bilan dewakslangan va gradient etanol orqali suvga regidratlangan. Yadro va sitoplazma gematoksilin va eozin (HE) bilan bo'yalgan va suvsizlanishdan keyin neytral gum bilan yopilgan. To'qimalarning yana bir qismi Oil Red-O binoni uchun optimal kesish harorati birikmasi (OTC) ko'milgan bo'laklardan foydalangan.
2.7. Sarum va jigar to'qimalarining biokimyoviy indekslarini aniqlash
Sarum namunalari avtomatik biokimyoviy tahlil qilish uchun Vuxan universitetining Renmin kasalxonasi laboratoriya bo'limiga yuborildi. Qon lipid indekslari triglitserid (TG), umumiy xolesterin (TC), yuqori zichlikdagi lipoprotein xolesterin (HDL-C), past zichlikdagi lipoprotein xolesterin (LDL-C) ni o'z ichiga oladi. Jigar funktsiyasi indekslariga glutamik piruvik transaminaza (ALT) va glutamik oksaloatsetik transaminaza (AST) kiradi. Ro'za insulin darajasi (FINS) ELISA to'plami (Meimian Biological Inc. China) yordamida aniqlandi. Standart namunaning konsentratsiyasi va optik zichligi (OD) asosida standart egri chizilgan; keyin namuna konsentratsiyasi standart egri chiziqdan hisoblab chiqilgan. Nihoyat, insulin sezuvchanlik indeksi (ISI) va insulin qarshiligi indeksi (HOMA-IR) quyidagicha hisoblandi: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22.5.
2.8. Jigar to'qimalarida AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1, PPAR- va CPT1A ifodalari western blot yordamida aniqlandi.
Muzlatilgan jigar to'qimalari bo'laklarga bo'lingan. Jami protein ekstraktsiyasi uchun 50 g qismga 1 ml RIPA lizat qo'shildi va 13,{3}} aylanish tezligida 5 daqiqa davomida 4 ◦C da santrifüjga topshirildi, so'ngra supernatant yig'ildi. Protein konsentratsiyasi BCA protein konsentratsiyasini aniqlash to'plami yordamida aniqlandi. Har bir guruhdan taxminan 40 ug protein namunasi olindi va poliviniliden ftorid (PVDF) membranasiga o'tkazildi. Membranalar xona haroratida 1 soat davomida ko'rsatilgan ikkilamchi antikorlar bilan etiketlangan va ishlab chiqilgan. Har bir protein bandining kulrang qiymatlari tahlil qilindi va GAPDH yarim miqdoriy tahlil uchun ichki ma'lumotnoma sifatida ishlatilgan.
2.9. Jigar to'qimalarida p-AMPK va SIRT1 ifodalari immunofluoresans bo'yash orqali aniqlangan.
Jigar to'qimalari 4 foizli paraformaldegidda mahkamlangan, kerosinga solingan va keyin 10-mkm qalinlikdagi jigar bo'laklariga bo'lingan. 30 daqiqa davomida 3 foiz BSA qo'shing. Slaydlarni birlamchi antikor bilan bir kechada 4 ◦C da inkubatsiya qiling. Ob'ektiv to'qimalarni ikkilamchi antikor bilan yoping, qorong'i holatda xona haroratida 50 daqiqa davomida inkubatsiya qiling. Keyin DAPI eritmasi bilan xona haroratida 10 daqiqa davomida inkubatsiya qiling, qorong'i joyda saqlang. 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilish uchun o'z-o'zidan floresan so'ndiruvchi reagent qo'shing. Floresan mikroskop yordamida mikroskopni aniqlash va tasvirlarni yig'ish.
2.10. RT-PCR yordamida jigar to'qimalarida SIRT-1, PGC-1, PPAR- va CPT1A mRNK ifodalari aniqlandi.
Har bir guruhdan − 80 ◦C da saqlangan taxminan 100 mg jigar to‘qimasi ishlatilgan. Jami RNK Trizol to'plami yordamida ekstraksiya qilingan; RNK sifatini aniqlash uchun ultrabinafsha (UV) yutilish usuli ishlatilgan va bu RNK keyin cDNKga teskari transkripsiya qilingan. SYBR yashil qPCR Bio-Rad CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, AQSh) da ishga tushirildi. SIRT-1, PGC-1, PPAR- va CPT1A primer ketma-ketliklari Primer Premier5.0 dasturiy ta'minoti tomonidan ishlab chiqilgan va Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd. tomonidan sintez qilingan va GAPDH uy bekasi geni bilan sintezlangan. ichki ma'lumotnoma sifatida. Kuchaytirish shartlari quyidagicha edi: 95 ◦C da oldindan denaturatsiya, 95 ◦C da denaturatsiya va 60 ◦C (30 s) da tavlanish, jami 40 tsikl. Reaksiya oxirida PCR kuchaytirilishining o'ziga xosligi erish egri chizig'i tahlili bilan aniqlandi, Ct qiymati o'qildi va maqsadli gen mRNKning nisbiy ifodasi 2-DDCt usuli bilan hisoblab chiqildi. Primer ketma-ketligi 1-jadvalda ko'rsatilgan.
2.11. Statistik usullar
Ma'lumotlarni qayta ishlash va statistik tahlil qilish uchun SPSS22.0 statistik dasturi, chizmachilik uchun GraphPad Prism7.0 dasturidan foydalanilgan. Oddiy taqsimlangan ma'lumotlar o'rtacha ± standart og'ish (diferans x ± s) sifatida taqdim etiladi. Guruhlar o'rtasida juftlik taqqoslash bir faktorli dispersiyani tahlil qilish orqali o'tkazildi. Guruhlar orasidagi farqlarning ahamiyati eng kam muhim farqlar (LSD) testi (diferanslarning bir xilligi) yoki bir nechta taqqoslash uchun Dunnett t-testi (bir hil bo'lmagan) bilan aniqlandi. Agar ma'lumotlar normal taqsimotga mos kelmasa, median va kvartil farq, shuningdek, parametrik bo'lmagan test (Kruskal-Wallis testi) ishlatilgan. AP qiymati<0.05 was="" considered="" statistically="">
cistanche erkaklar foydalariuchunbuyrak
3. Natijalar
3.1. ECH umumiy salomatlik holatini va db / db sichqonchaning LI ni yaxshilaydi
Tajriba davomida db/m guruhidagi sichqonlar sog'lom va faol bo'lib, palto porloqligini ko'rsatdi. Db/db guruhidagi sichqonlar haddan tashqari suv va ozuqa iste'mol qilish, semizlik, letargiya va cho'kish, qo'pol, qora sochlarni ko'rsatdi. JB / db guruhi sichqonlari bilan solishtirganda, db / db plus ECH guruhi sichqonlari barcha tadqiqotlarda yaxshilangan sharoitlarni ko'rsatdi. Bundan tashqari, ularning tana vazni va jigar indeksi diabetik model guruhidagi sichqonlarga qaraganda past edi (P < 0.05)="">
1-jadval RT floresan miqdoriy PCR primerlari.
2-jadval Har bir guruh sichqonlarida tana vazni, jigarning nam vazni va jigar indeksi.
3.2. ECH ochlikdagi glyukoza va insulin qarshiligini pasaytiradi va db/db sichqonlarda glyukoza bardoshliligi va insulinga sezgirligini oshiradi.
Tajriba davom etar ekan, db/m guruhi bilan solishtirganda, db/db guruhidagi ochlikdagi qon glyukozasi sezilarli darajada oshdi (P).< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">
3.3. ECH jigar strukturaviy buzilishlarini yaxshilaydi va db/db sichqonlarida lipid to'planishi kabi patologik o'zgarishlarni engillashtiradi.
HE bo'yalishida db/m guruxdagi gepatotsitlarning o'lchami va morfologiyasi normal, jigar bo'laklari va sinusoidlari strukturasi aniq ekanligi aniqlandi. Db/db guruhida gepatotsitlarning keng tarqalgan degeneratsiyasi, gepatotsitlar hajmining oshishi, yadro hajmining o'zgarishi, o'choqli hujayra nekrozi va portal hududida yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasi mavjud edi. JB / db plus ECH guruhida lipid tomchilari va yallig'lanish hujayralari sezilarli darajada kamaydi, nekrotik hujayra shikastlanishi engillashtirildi (2A-rasm). Jigar to'qimalarining yog'li qizil O ni bo'yash mikroskopik tahlili db/m guruhida lipid tomchilari yoki patologik o'zgarishlarsiz hujayralarning toza joylashishini aniqladi. Db/db guruhida hujayralar tartibsiz tartibga ega bo'lib, sitoplazmada turli o'lchamdagi ko'p miqdordagi yog 'zarralari mavjud edi. JB / db guruhi bilan solishtirganda, db / db plus ECH guruhidagi lipid tomchilarining soni sezilarli darajada past bo'lib, ECH ning jigarga mumkin bo'lgan himoya ta'sirini ko'rsatadi (2B, C-rasm).
1-rasm. ECH glyukoza bardoshliligini oshirdi va db/db sichqonlarining insulin qarshiligini susaytirdi.
3.4. ECH db/db sichqonlarida lipid metabolizmini va jigar faoliyatini yaxshilaydi
JB/m guruhi bilan solishtirganda TC, TG va LDL ning qon lipidlari darajasi sezilarli darajada oshdi va db/db guruhida HDL sezilarli darajada kamaydi (P < {0}}.{{4}="" }1).="" shu="" bilan="" birga,="" tc,="" tg="" va="" ldl="" darajalari="" kamaydi="" va="" hdl="" darajasi="" db/db="" plyus="" ech="" guruhida="" db/db="" guruhiga="" nisbatan="" oshdi="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (3a-rasm).="" db="" m="" guruhi="" bilan="" solishtirganda,="" alt="" va="" ast="" darajalari="" db="" db="" guruhida="" sezilarli="" darajada="" oshdi="" (p=""><0.05, p=""><0.01). ast="" va="" alt="" darajalari="" db="" db="" plus="" ech="" guruhida="" db="" db="" guruhiga="" qaraganda="" sezilarli="" darajada="" past="" edi="" (p=""><0,05, p=""><0,01) (3b,="">
2-rasm. NAFLD bo'lgan sichqonlarda ECH zaiflashgan jigar to'qimalarining strukturaviy buzilishi va lipid to'planishi.
3.5. Turli guruhlardagi sichqonlarda ECH ning AMPK/SIRT1 yo'lining faollashuviga ta'siri
Vestern blot natijalariga ko'ra, db/m guruhi bilan solishtirganda, jigar to'qimalarida p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR- va CPT1A oqsillari darajasi db/db guruhida sezilarli darajada past bo'lgan ( P < 0.01).="" shu="" bilan="" birga,="" protein="" darajasi="" db="" db="" plus="" ech="" guruhida="" db="" db="" guruhiga="" qaraganda="" sezilarli="" darajada="" yuqori="" edi="" (p=""><0,01) (4a,="" b-rasm).="" bundan="" tashqari,="" immunofluoresans="" bilan="" bo'yash="" shuni="" ko'rsatdiki,="" p-ampk="" va="" sirt1="" ifodasi="" ech="" bilan="" davolash="" qilingan="" sichqonlarning="" jigar="" to'qimalarida="" db="" db="" guruhiga="" qaraganda="" aniq="" topilgan="">
3.6. Ekinakozidning turli guruhlar sichqonlarining jigarida SIRT1 yo'li mRNKning ifodalanishiga ta'siri
RT-PCR natijalariga ko'ra, SIRT1, PGC-1, PPAR- va CPT1A darajalari db/db guruhida db/m guruhiga nisbatan sezilarli darajada kamaydi. Biroq, bu darajalar db / db plyus ECH guruhida db / db guruhiga nisbatan sezilarli darajada oshdi (5-rasm).
3-rasm. Har bir guruh sichqonlarida sarum bilan bog'liq indekslar.
4. Munozara
Qandli diabet dunyodagi asosiy tibbiy muammo bo'lib, 2035 yilga kelib diabetga chalinganlar soni 592 millionga ko'payishi kutilmoqda [9]. Xitoyda qandli diabetning, asosan, T2DMning tarqalish darajasi sezilarli o'sish tendentsiyasini ko'rsatadi [10,11]. T2DM va jigar kasalliklari o'rtasida murakkab bog'liqlik mavjud va jigarda ortiqcha yog 'birikishi bilan tavsiflangan NAFLD T2DM sabab bo'lgan eng keng tarqalgan jigar shikastlanishi va dunyodagi eng tez-tez uchraydigan surunkali jigar kasalligidir [12,13]. Klinik genetik test tadqiqotlari shuni ko'rsatadiki, T2DM bilan bog'liq gen BMI ortishi, giperkolesterolemiya va HDL-C ning pasayishi bilan bog'liq bo'lib, bu NAFLD xavfini oshiradi [14]. NAFLD insulin qarshiligi va dislipidemiya bilan chambarchas bog'liq va shuning uchun T2DM va / yoki semirib ketgan bemorlarda juda keng tarqalgan. Bir nechta metabolik omillar NAFLD rivojlanishi bilan bog'liq bo'lsa-da, uning patogenezi asosan noaniq va murakkab bo'lib qolmoqda [15]. Cistanche deserticola — qumtoshli oʻsimliklar ildizida oʻsadigan koʻp yillik parazit oʻsimlik. Xitoy farmakopeyasiga ko'ra, Cistanche deserticola buyrak kasalliklari va bepushtlikni davolash uchun an'anaviy tibbiyot sifatida ishlatiladi [16,17]. So'nggi yillarda olib borilgan tadqiqotlar Cistanche deserticola diabetik sichqonlarda ochlik va ovqatdan keyin qon glyukoza darajasining oshishiga sezilarli darajada to'sqinlik qilishi, insulin qarshiligini va dislipidemiyani yaxshilashi va vazn yo'qotishiga yordam berishi mumkinligini tasdiqladi [18]. Cistanche deserticola ning asosiy komponenti sifatida ECH DM bilan bog'liq jigar shikastlanishini yanada yaxshilashga hissa qo'shishi kutilmoqda. Bizning eksperimental natijalarimiz shuni ko'rsatdiki, semirish va diabet sichqonlarda jigar shikastlanishiga olib kelishi mumkin, bu qon zardobida ALT va AST darajasining sezilarli darajada oshishi va tipik gistopatologik o'zgarishlar bilan tavsiflanadi. ECH LI va qon glyukozasini sezilarli darajada kamaytirdi, TC, TG va LDL darajalarining pasayishi HDL darajasini oshirdi va insulin sezgirligini oshirdi. Gistopatologik tekshiruv ECH bilan davolash qilingan sichqonlarda gepatotsitlar steatozi degeneratsiyasini va yallig'lanish hujayralari infiltratsiyasini kamaytirdi, bu agent semiz, diabetik sichqonlarda jigar shikastlanishini yaxshilashi mumkinligini tasdiqladi.
AMPK organizmlarda keng tarqalgan va energiya almashinuvi retseptorlari deb ataladigan yuqori darajada saqlanib qolgan protein kinazidir. U oksidlovchi stress, yallig'lanish, proliferatsiya va apoptozni yumshatishda rol o'ynaydi [19]. Fermentning bilvosita faollashtiruvchilar tomonidan faollashishi diabet, semizlik, saraton va boshqa tegishli metabolik kasalliklarni davolash uchun ilmiy e'tiborni tortadi [20,21]. U yog 'kislotalari va triglitseridlar sintezini inhibe qilish, xolesterin sintezini inhibe qilish va yog' kislotalarining oksidlanishi va parchalanishini rag'batlantirish kabi bir necha yondashuvlar orqali lipid metabolizmini tartibga solishi mumkin [22]. Jigarda AMPK lipidlar almashinuvini fosforlanish orqali boshqaradi.
Hujayra ichidagi AMP-ATP nisbati oshganda, AMPK faollashadi, p-AMPK/AMPK ni oshiradi va uyali NAD plyus darajasini oshirish orqali SIRT1 ifodasini ko'taradi [23,24]. SIRT1, NADga bog'liq deasetilaz, yaqinda NAFLD patofiziologiyasi bilan bog'liqligi ko'rsatildi [25]. Ferment lipid va glyukoza gomeostazi va insulin sezuvchanligi kabi turli xil hujayra fiziologik jarayonlarida ishtirok etadi va metabolizmning asosiy regulyatori hisoblanadi [26]. Semirib ketgan bemorlar, ayniqsa insulin qarshiligi, diabet va NAFLD bilan og'rigan bemorlarda SIRT1 darajasi pastroq [27,28]. Price va boshqalar. SIRT1 ning jigar steatozining oldini olishdagi rolini o'rganib chiqdilar va NAFLD bilan og'rigan bemorlarda SIRT1 ifodasi kamayganligini aniqladilar [29]. Boshqa tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, SIRT1 ning gepatotsitlarga xos nokauti yog' kislotalarining oksidlanishini kamaytirishi va jigarda steatoz va yallig'lanishni keltirib chiqarishi mumkin, SIRT1 ning ortiqcha ekspressiyasi esa PGC{19}} yo'li orqali lipid metabolizmini yaxshilashi mumkin [30]. SIRT1 PGC-1 faoliyatini tartibga soladi va ularning ikkalasi ham hujayra energiya gomeostazini saqlash uchun juda muhimdir. Shuning uchun SIRT1 va quyi oqim omillari PGC-1 jigar shikastlanishining asosiy maqsadi bo'lishi mumkin. PGC koaktivatori transkripsiya faolligini oshirish uchun transkripsiya omillari yoki yadro retseptorlari bilan bog'lanishi mumkin bo'lgan oqsildir [31]. Ko'pgina transkripsiya omillari koaktivatorlarga, ayniqsa PPAR-ga, asosan jigar, miyokard va skelet mushaklari kabi oksidlangan to'qimalarda kerak. U yog 'kislotalarini tashish va oksidlanishni, keton ishlab chiqarishni va glyukoneogenezni rag'batlantiradigan gen transkripsiyasini faollashtirishi mumkin [32,33]. CPT1A yog 'kislotalari oksidlanishida asosiy tezlikni cheklovchi fermentdir. Uning ifodasi SIRT1, PGC-1 va PPAR [34] kabi bir nechta transkripsiya omillari va koaktivatorlarni o'z ichiga olgan murakkab transkripsiya mexanizmlari bilan tartibga solinadi. Ushbu tadqiqotda biz db / db guruhidagi qon glyukozasining yuqori konsentratsiyasi ostida gepatotsitlarda lipidlar to'planishi AMPK / SIRT1 signalizatsiya yo'li ifodasining quyi oqimi omillarining pastga regulyatsiyasi bilan kuchayganligini aniqladik; ECH bilan ishlov berilgan guruhda p AMPK/AMPK, SIRT1 va PGC-1 ifodalari sezilarli darajada oshdi va quyi oqim omillari PPAR va CPT1A ifodalari sezilarli darajada oshdi, bu AMPK/SIRT1 signal o'qi va uning quyi oqim omillari ekanligini ko'rsatadi. diabetik jigar shikastlanishini davolashda foydali rol o'ynaydi (6-rasm). Biroq, bu erda taqdim etilgan ma'lumotlar in-vivo tajribalarga asoslangan; Shunday qilib, ECH ning AMPK/SIRT1 signalizatsiya yo'llari va effektor oqsillariga ta'sirini tasdiqlash uchun qo'shimcha in-vitro tadqiqotlar kerak.
Umuman olganda, ECH qon glyukoza va lipid metabolizmini AMPK / SIRT1 va uning quyi oqim omillarining ifodasini tartibga solib, diabetik jigar shikastlanishini yaxshilashi mumkin.
ECH sistanchemumkinqon glyukozasini tartibga soladivalipidlar almashinuvi.
